Licht spot-gebaseerde assay voor analyse van Drosophila larval phototaxis

Samenvatting

Dit protocol introduceert een lichtvlek test om Drosophila larvale phototactische gedrag te onderzoeken. Bij deze test wordt een lichtvlek opgewekt als licht stimulatie en wordt het proces van het vermijden van larvale licht door een op infraroodlicht gebaseerd beeldvormings systeem vastgelegd.

Samenvatting

De larven van Drosophila melanogaster vertonen duidelijk licht-Vermijd gedrag tijdens de foerageren fase. Drosophila larvale foto taxi's kunnen worden gebruikt als een model om dier vermijding gedrag te bestuderen. Dit protocol introduceert een lichtvlek test om het larvale phototactische gedrag te onderzoeken. De experimentele opstelling bestaat uit twee hoofdonderdelen: een visueel stimulatie systeem dat de lichtvlek genereert, en een op infraroodlicht gebaseerd beeldvormings systeem dat het proces van larvale licht vermijding registreert. Deze test maakt het volgen van het gedrag van larve mogelijk voordat u, tijdens het ontmoeten, en na het verlaten van de lichtvlek. Details van de larvale beweging, inclusief vertraging, pauze, hoofd Casting en draaien kunnen worden vastgelegd en geanalyseerd met behulp van deze methode.

Inleiding

De larven van Drosophila melanogaster vertonen duidelijk licht-Vermijd gedrag tijdens de foerageren fase. Drosophila larvale phototaxis is onderzocht, vooral in de afgelopen 50 jaar^{1,2,3,4,5,6,7 ,8}. In de afgelopen jaren, ondanks het feit dat 1) vele neuronen bemiddelend larvale licht vermijding zijn geïdentificeerd^4,5,

Protocol

1. bereiding van de larven van Drosophila

1. Bereid standaard medium bestaande uit gekookte maïsmeel (73 g), agar (5,6 g), sojameel (10 g), gist (17,3 g), siroop (76 mL) en water (1000 mL).
2. Hef alle vliegen op 25 ° c op standaard medium in een kamer met een licht/donkere cyclus van 12 h/12 uur.

2. bereiding van de agar-platen

1. Bereid 1,0% agar oplossing. Weeg 3 g agar in een bekerglas van 500 mL met een balans en voeg vervolgens 300 mL gedistilleerd water toe. Plaats een folie papier over de BREEKHAMER om te voorkomen dat het water verdampte. Verwarm het bekerglas in een magnetron om te koken.
....

Resultaten

Volgens het protocol werd de lichtvlek test gebruikt om het licht vermijdings gedrag van de derde INSTAR larve te onderzoeken die op standaard medium op 25 °c werden verhoogd in een ruimte met een licht/donker cyclus van 12 uur/12 uur. Eén enkele w¹¹¹⁸ larve werd getest met behulp van de lichtvlek test bij 25,5 °c. De gemiddelde lichtintensiteit van de lichtvlek gegenereerd door een 460 nm LED was 0,59 μW/cm². Het hele proces van larvale in-en uitstappen van de lichtvlek werd opgenomen en .......

Discussie

Dit protocol presenteert de lichtvlek test om het vermogen van Drosophila larven te testen om te ontsnappen aan licht. Deze bepaling maakt het mogelijk om het gedrag van larven te volgen voordat u, tijdens het ontmoeten, en na het verlaten van een lichte vlek. Details van larvale beweging kunnen worden vastgelegd en geanalyseerd. De lichtvlek assay is zeer eenvoudig en heeft een sterke uitvoerbaarheid. De kosten van het hele apparaat zijn niet hoog. In het experiment wordt LED-licht gebruikt als lichtbron. Het k.......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
850 nm ± 3 nm infraroodlicht-genererende LED	Thorlabs, USA	PM100A	Compatibele sensoren: Fotodiode en Thermisch Optisch vermogensbereik: 100 pW tot 200 W Beschikbaar sensorgolflengtebereik: 185 nm-25 μm Weergaveverversingssnelheid: 20 Hz Bandbreedte: DC-100 kHz Fotodiode sensorbereik: 50 nA-5 mA Thermopile sensorbereik: 1 mV-1 V
AC naar DC-omzetter	Thorlabs, USA	S120VC	Openingsgrootte: Ø9,5 mm Golflengtebereik: 200-1100 nm Vermogensbereik: 50 nW-50 mW Detectortype: Si fotodiode (UV Extended) Lineairheid: ±0,5% Meetonzekerheidc: ±3% (440-980 nm), ±5% (280-439 nm), ±7% (200-279 nm, 981-1100 nm)
Banddoorlaatfilter	Thorlabs, USA	DC2100	LED-stroombereik: 0-2 A LED-stroomresolutie: 1 mA LED-stroomnauwkeurigheid: ±20 mA LED-doorlaatspanning: 24 V Modulatiefrequentiebereik: 0-100 kHz sinusgolf Modulatie: Willekeurig
Gecollimeerde LED blauw licht	ELP, China	USBFHD01M	Max. Resolutie: 1920X1080 F6.0 mm Sensor: 1/2.7" CMOS OV2710
Compacte vermogensmeterconsole	Ocean Optics, USA	USB2000+(RAD)	Afmetingen: 89,1 mm x 63,3 mm x 34,4 mm Gewicht: 190 g Detector: Sony ILX511B (2048-elementen lineaire silicium CCD-array) Golflengtebereik: 200-850 nm Integratietijd: 1 ms – 65 seconden (20 seconden typisch) Dynamisch bereik: 8,5 x 10^7 (systeem); 1300:1 voor een enkele verwerving Signaal-ruisverhouding: 250:1 (volledig signaal) Donkere ruis: 50 RMS-tellingen Tralies: 2 (250 – 800 nm) Spleten: SLIT-50 Detector-collectielenzen: L2 Order-sortering: OFLV-200-850 Optische resolutie: ~2,0 nm FWHM Verspreid licht: <0,05% bij 600 nm; <0,10% bij 435 nm Glasvezelconnector: SMA 905 naar 0,22 numerieke opening enkelstrengige glasvezel
High-Power LED-driver	Minhongshi, China	MHS-48XY	Werkspanning: DC12V Centrale golflengte: 850nm
Hogeresolutie webcamera	Thorlabs, USA	MWWHL4	Kleur: Warm wit Gecorreleerde kleurtemperatuur: 3000 K Teststroom voor typisch LED-vermogen: 1000 mA Maximumstroom (CW): 1000 mA Bandbreedte (FWHM): N/A Elektrisch vermogen: 3000 mW Kijkhoek (volledige hoek): 120? Zendergrootte: 1 mm x 1 mm Typische levensduur: >50 000 h Bedrijfstemperatuur (niet-condenserend): 0 tot 40 °C Opslagtemperatuur: -40 tot 70 °C Risicogroepa: RG1 – Lage risicogroep
LED Warm Wit	Mega-9, China	BP850/22K	Ø25,4(+0~-0,1) mm Bandbreedte: 22±3nm Piek doorlatendheid:80% Centrale golflengte: 850nm±3nm
Spectrometer	Noel Danjou	Amcap9.22	AMCap is een stille en video-opname-applicatie met geavanceerde voorbeeld- en opnamefuncties. Het is een desktop-applicatie ontworpen voor computers met Windows 7 SP1 of hoger. De meeste Video-for-Windowsen DirectShow-compatibele apparaten worden ondersteund, of het nu goedkope webcams of geavanceerde video-opnamekaarten zijn.
Standaard fotodiode-vermogensensor	Super Dragon, China	YGY-122000	Invoer: AC 100-240V~50/60Hz 0.8A Uitvoer: DC 12V 2A
Thermische vermogenssensor	Thorlabs, USA	M470L3-C1	Kleur: Blauw Nominale golflengte: 470 nm Bandbreedte (FWHM): 25 nm Maximumstroom (CW): 1000 mA Doorlaatspanning: 3,2 V Elektrisch vermogen (max.): 3200 mW Zendergrootte: 1 mm x 1 mm Typische levensduur: 100 000 h Bedrijfstemperatuur (niet-condenserend): 0 tot 40 °C Opslagtemperatuur: -40 tot 70 °C Risicogroep: RG2 – Matig risicogroep
Thermische vermogenssensor	Thorlabs, USA	S401C	Golflengtebereik: 190 nm-20 μm Optisch vermogensbereik:10 μW-1 W(3 Wb) Invoeropeningsgrootte: Ø10 mm Actieve detectoroppervlakte: 10 mm x 10 mm Max. optische vermogendichtheid: 500 W/cm2 (gemiddeld) Lineairheid: ±0,5%