De larven van Drosophila melanogaster vertonen duidelijk licht-Vermijd gedrag tijdens de foerageren fase. Drosophila larvale phototaxis is onderzocht, vooral in de afgelopen 50 jaar1,2,3,4,5,6,7 ,8. In de afgelopen jaren, ondanks het feit dat 1) vele neuronen bemiddelend larvale licht vermijding zijn geïdentificeerd4,5,9,10,11,12 en 2) de volledige aansluiting van het larvale visuele systeem bij de resolutie van synapsen is vastgesteld13, de neurale mechanismen onderliggende larvale foto taxi's blijven grotendeels onduidelijk.
Een aantal gedragstesten zijn gebruikt in het bestuderen van larvale phototaxis. Ze kunnen grotendeels onderverdeeld worden in twee klassen: een met betrekking tot ruimtelijke licht gradiënten en de andere met tijdelijke licht gradiënten. Voor ruimtelijk licht gradiënt assays, is de Arena verdeeld in gelijk aantal secties in licht en donker. De Arena kan worden onderverdeeld in lichte en donkere helften2,4 of lichte en donkere kwadranten14,15, of kan zelfs worden gescheiden in alternatieve lichte en donkere pleinen zoals op een dambord7. Meestal worden agar-platen gebruikt voor ruimtelijke licht gradiënt Assay, maar buizen die zijn onderverdeeld in alternatieve lichte en donkere secties kunnen ook worden gebruikt10,14.
In de oudere versie van de assays komt licht verlichting meestal van onder de larven. De verlichting in nieuwere versies komt echter grotendeels van bovenaf, aangezien larvale ogen (bijv. de organen van de Bolwig die gevoelig zijn voor licht intensiteiten met lage of middelzware sterkte16) zijn opgenomen in het ondoorzichtige kopopharyngeale skelet met openingen naar het bovenste front. Dit maakt larven gevoeliger voor licht uit de bovenste voorkant richtingen dan van onderen achter aanwijzingen7. Bij tijdelijke licht gradiënt is de lichtintensiteit ruimtelijk uniform in de Arena, maar de intensiteit verandert in de loop van de tijd. Naast temporaal vierkant Golf licht (d.w.z. knipperen aan/uit of sterk/zwak licht3,7), wordt ook tijdelijk wisselend licht dat voldoet aan een lineaire helling in intensiteit8 gebruikt om de gevoeligheid van larven te meten met een tijdelijk veranderende licht stimulus.
Een derde type fototaxis test is de directionele lichtscape navigatie, waarbij de verlichting van bovenaf onder een hoek van 45 °7plaatsvindt. Voor het werk van Kane et al.7werden alleen Grove parameters zoals het aantal larven in lichte en donkere gebieden, de frequentie van draaien en de lengte van de Trail berekend in de assays van larvale phototaxis. Sinds het werk van deze zelfde groep, met de analyse van hoge temporele resolutie video record voor larvale foto taxi's, gedetailleerde dynamiek van larvale beweging tijdens foto taxi's (dat wil zeggen, directe snelheden van verschillende delen van larvale lichaam, richting, draaihoek en de corresponderende hoeksnelheid) zijn geanalyseerd7. Dus, meer details van larvale phototaxis gedrag hebben kunnen worden ontdekt. In deze assays worden larven getest in groepen, zodat groeps effecten niet worden uitgesloten.
Dit protocol introduceert een lichtvlek test voor het onderzoeken van larvale gedrags responsen op individuele licht stimulatie. De belangrijkste experimentele opstelling bestaat uit een visueel stimulatie systeem en een op infraroodlicht gebaseerd beeldvormings systeem. In het visuele stimulatie systeem genereert een LED-lichtbron een ronde lichtvlek van 2 cm diameter op een agar-plaat, waar de larve wordt getest. De lichtintensiteit kan worden aangepast met behulp van een LED-driver. Het imaging systeem bevat een infraroodcamera die het gedrag van de larve vastlegt naast de 3 850 nm infrarood Led's die verlichting bieden voor de camera. De lens van de camera wordt bedekt door een 850 nm band-pass filter om het licht van het visuele stimulatie systeem van het betreden van de camera te blokkeren, terwijl het infraroodlicht de camera mag betreden. Interferentie van visuele stimulatie op beeldvorming wordt dus voorkomen. In deze test worden de gedrags Details van de snelle reacties van individuele larven binnen een periode, inclusief voor, tijdens en na het invoeren van licht, geregistreerd en geanalyseerd.