Immunofluorescentie kleuring met behulp van IBA1 en TMEM119 voor Microgliale dichtheid, morfologie en perifere myeloïde Celinfiltratie analyse in Muizenhersenen

Fernando González Ibanez; Katherine Picard; Maude Bordeleau; Kaushik Sharma; Kanchan Bisht; Marie-Ève Tremblay

doi:10.3791/60510

Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Immunofluorescentie kleuring met behulp van IBA1 en TMEM119 voor Microgliale dichtheid, morfologie en perifere myeloïde Celinfiltratie analyse in Muizenhersenen

34.6K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/60510

⸱

27 oktober 2019

Fernando González Ibanez¹^,² , Katherine Picard¹^,² , Maude Bordeleau¹^,³ , Kaushik Sharma¹^,²^,⁴ , Kanchan Bisht¹^,²^,⁴ , Marie-Ève Tremblay¹^,²

¹Axe Neurosciences, Centre de Recherche du CHU de Québec-Université Laval, ²Département de Médecine Moléculaire, Faculté de Médecine, Université Laval, ³Integrated Program in Neuroscience, McGill University, ⁴Center for Brain Immunology and Glia (BIG), University of Virginia

In dit artikel

Erratum-melding

Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice

Samenvatting

Dit protocol beschrijft een stapsgewijze workflow voor immunofluorescerende cokleuring van IBA1 en TMEM119, naast de analyse van microgliale dichtheid, distributie en morfologie, evenals perifere myeloïde celinfiltratie in muizen hersenweefsel.

Samenvatting

Dit is een protocol voor de dubbele visualisatie van Microglia en infiltrerende macrofagen in muis hersenweefsel. TMEM119 (welke labels Microglia selectief), in combinatie met IBA1 (die een uitzonderlijke visualisatie van hun morfologie biedt), maakt onderzoek mogelijk van veranderingen in dichtheid, distributie en morfologie. Het kwantificeren van deze parameters is belangrijk om inzicht te geven in de rollen die worden uitgeoefend door Microglia, de ingezeten macrofagen van de hersenen. Onder normale fysiologische omstandigheden worden Microglia regelmatig verdeeld in een mozaïek achtig patroon en presenteren ze een klein SOMA met vertakte processen. Niettemin, als reactie op omgevingsfactoren (dat wil zeggen, trauma, infectie, ziekte, of letsel), microgliale dichtheid, verdeling, en morfologie worden gewijzigd op verschillende manieren, afhankelijk van de belediging. Bovendien maakt de beschreven methode voor dubbele kleuring visualisatie mogelijk van infiltrerende macrofagen in de hersenen op basis van hun expressie van IBA1 en zonder colokalisatie met TMEM119. Deze aanpak maakt het mogelijk discriminatie tussen Microglia en infiltrerende macrofagen, die nodig is om functionele inzichten in hun duidelijke betrokkenheid bij hersenen homeostase over verschillende contexten van gezondheid en ziekte te bieden. Dit protocol integreert de nieuwste bevindingen in Neuro immunologie die betrekking hebben op de identificatie van selectieve markers. Het fungeert ook als een nuttig hulpmiddel voor zowel ervaren neuro immunologen als onderzoekers die Neuro immunologie willen integreren in projecten.

Inleiding

Of acute of chronische, neuro ontsteking wordt nauw beïnvloed door Microglia, de ingezeten macrofagen van de hersenen. Het visualiseren van Microglia door middel van immunokleuring is waardevol voor de studie van neuro ontsteking met het gebruik van lichte microscopie, een zeer toegankelijke techniek. In homeostatische omstandigheden worden Microglia meestal verdeeld in een niet-overlappend, mozaïek achtig patroon. Ze vertonen kleine soma's die vertakte processen uitbreiden¹, die soms contact met elkaar². Microglial vertakte processen dynamisch onderzoek van de hersen parenchym, interactie met neuronen, andere gliacellen....