In dit experiment wordt een muis in zijn staartader geïnjecteerd met Rhodamine B isothiocyanaat-dextran die bloedvaten kan bevlekken. Nadat de lever is blootgesteld en gefixeerd, kan een specifiek deel van de lever worden geselecteerd om het diepe weefsel in het levende lichaam te observeren met behulp van multifotonenmicroscopie.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Multifotonen microscopische observatie van vaten in leverweefsel van muizen
* These authors contributed equally
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Het observeren van de intravasculaire dynamiek van leverweefsel van muizen stelt ons in staat om verdere diepgaande observaties en studies uit te voeren naar weefselgerelateerde ziekten van de muizenlever. Een muis wordt geïnjecteerd met een kleurstof die bloedvaten kan bevlekken. Om de muizenlever in vivo te observeren, wordt deze blootgesteld en in een frame bevestigd. Twee- en driedimensionale beelden van de bloedvaten in het leverweefsel worden verkregen met behulp van een multifotonenmicroscoop. Beelden van de weefsels op de geselecteerde locaties worden continu verkregen om veranderingen op lange termijn waar te nemen; de dynamische veranderingen van bloedvaten in de leverweefsels worden ook waargenomen. Multifotonenmicroscopie is een methode voor het observeren van cel- en celfunctie in diepe weefselsecties of organen. Multifotonenmicroscopie heeft gevoeligheid voor weefselmicrostructuur en maakt beeldvorming van biologische weefsels met een hoge ruimtelijke resolutie in vivo mogelijk, waardoor de biochemische informatie van de organisatie kan worden vastgelegd. Multifotonenmicroscopie wordt gebruikt om een deel van de lever te observeren, maar het fixeren van de lever om het beeld stabieler te maken is problematisch. In dit experiment wordt een speciale vacuümzuignap gebruikt om de lever te fixeren en een stabieler beeld van de lever onder de microscoop te verkrijgen. Bovendien kan deze methode worden gebruikt om dynamische veranderingen van specifieke stoffen in de lever waar te nemen door dergelijke stoffen met kleurstoffen te markeren.
Inleiding
Bloedvaten kunnen voedingsstoffen leveren voor verschillende orgaanweefsels van het menselijk lichaam en stoffen uitwisselen. Tegelijkertijd functioneren veel cytokinen, hormonen, medicijnen en cellen ook via vasculair transport naar specifieke locaties. Het observeren van vasculaire veranderingen in leverweefsel kan helpen bij het begrijpen van de verdeling van de bloedstroom in leverweefsel en het transport van stoffen, en helpen bij de analyse van bepaalde vasculaire gerelateerde ziekten1,2.
Er zijn veel manieren om de bloedvaten van de lever bij muizen te observeren. Onder hen h....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle dierenverzorging en procedures waren in overeenstemming met het beleid van het China Nanfang Hospital voor heide en welzijn (aanvraagnr: NFYY-2019-73).
1. Voorbereiding van de muis
- Verdoof de muis.
- Bereid natriumpentobarbital (50 mg/kg) voor in een spuit.
- Pak de muis (8 weken oude mannelijke C57BL/6) met de linkerhand zodat zijn buik naar boven is gericht en zijn hoofd lager is dan zijn staart. Desinfecteer de buikhuid met 75% alcohol.
- Houd de spuit in de rechterhand en doorboor de witte lijn van de buik met de naald iets naar de rechterkant van de huid met 3-5 mm. Zorg ervoor dat de spuitnaald e....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
De verdeling van bloedvaten in de lever is te zien in figuur 1, verkregen met behulp van multifotonenmicroscopie. Het bloedvat is verdeeld in een pluraliteit van takken die uit een stam komen en verdeeld naar de omringende ruimte. De buitenste omtrek van het bloedvat is rood, de binnenholte is donker en er zijn veel dingen binnenin. Hoe duidelijker het beeld, hoe dichter bij het observatievlak het is. Er zijn ook enkele rode vlekken in de buurt, waarschijnlijk omdat de kleurstof het omliggen.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Het observeren van een specifiek levend weefsel is een effectief middel om de veranderingen, lokalisatie en biologische effecten van het materiaal in het weefsel te begrijpen17. In dit experiment zijn de belangrijke stappen het fixeren van de lever met een orgaanbeeldvormingsarmatuur, dat het probleem van bewegingsartefacten als gevolg van ademhaling en hartslagen kan oplossen, en het gebruik van een multifotonmicroscoop voor observatie. Met behulp van deze methode worden de interne weefsels van d.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets bekend te maken.
Dankbetuigingen
Dit werk werd ondersteund door de National Natural Science Foundation of China (81772133, 81902444), het Guangdong Natural Science Fund (2020A1515010269, 2020A1515011367), het Guangzhou Citizen Health Science and Technology Research Project (201803010034, 2019030107).
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 1 mL spuit x 2 | Hunan Pinan Medical Devices Technology | YA0551 | |
| 5 W verwarmingskussentje | BiolinkOptics Technology | BL336 | |
| 75% absoluut ethanol | Guangdong Guanghua Sci-Tech | 1.17113.023 | |
| Absorbeerbare wattenbol | Healthy Sanitation Kingdom | ||
| Muis chirurgisch instrument | RWD Life Science | SP0001-G | Inclusief schaar en pincet |
| Multifotonmicroscopie | Olympus | FV1200MPE | |
| Orgaanbeeldbewerkingsbevestiging | BiolinkOptics Technology | BL336 | Inclusief zuignap, slang, negatief drukpompen en beugel |
| Rhodamine B isothiocyanate–Dextran | Sigma | R9379 | |
| Scheerapparaat | Lei Wa | RE-3201 | |
| Natrium pentobarbital | Sigma | P3761-25G |
Referenties
- Wu, Z., et al. Multi-photon microscopy in cardiovascular research. Methods. 130, 79-89 (2017).
- Zhou, M., Ling, W., Luo, Y. Intrahepatic mass-forming cholangiocarcinoma growing in a giant hepatic hemangioma: A case report. Medicine (Baltimore)
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
