Amputatie voorspellen met behulp van lokale circulerende mononucleaire voorlopercellen bij met Angioplastie behandelde patiënten met kritieke ledemaatischemie

Summary

Amputatie van de onderste ledematen kan zelfs optreden na angioplastiek van geblokkeerde vaten in Critical Limb Ischemia (CLI). Mononucleaire progenitorcellen (MPC's) weerspiegelen vasculair herstel. Het huidige protocol beschrijft de kwantificering van MPC's uit de circulatie dicht bij angioplastiek, en de relatie met endotheeldisfunctie en voorspelling van amputatie van de onderste ledematen.

Abstract

Kritieke limbischemie (CLI) vertegenwoordigt een vergevorderd stadium van de perifere arteriële ziekte. Angioplastiek verbetert de bloedtoevoer naar het onderste ledemaat; sommige patiënten gaan echter onomkeerbaar over op amputatie van ledematen. De omvang van vasculaire schade en de mechanismen van vasculaire reparatie zijn factoren die van invloed zijn op de uitkomst van post-angioplastiek. Mononucleaire voorlopercellen (MPC's) zijn reactief op vasculaire schade en herstel, met het vermogen om vasculaire ziekten te reflecteren. Het huidige protocol beschrijft de kwantificering van MPC's verkregen uit de bloedcirculatie van het bloedvat in de buurt van de angioplastiekplaats, evenals de relatie met endotheeldisfunctie en het voorspellende vermogen voor amputatie van ledematen in de komende 30 dagen na angioplastiek bij patiënten met CLI.

Introduction

Perifere arteriële ziekte (PAD) wordt gekenmerkt door een chronische en progressieve vasculaire obstructie met beperking van de bloedtoevoer¹. Op wereldschaal treft PAD van de onderste ledematen ongeveer 10% van de oudere bevolking, terwijl tot 7% van dergelijke gevallen worden onderworpen aan amputatie van ledematen^2,3.

Critical Limb Ischemia (CLI) vertegenwoordigt de ernstigste presentatie van PAD¹. Patiënten ervaren meestal pijn in rust, zweren of gangreen toe te schrijven aan verstopte slagaders; terwijl de klinische prognose ongun....

Protocol

De institutionele ethische onderzoekscommissie van Centro Médico Nacional "20 de Noviembre" ISSSTE keurde dit toekomstige protocol goed, alle ingeschreven patiënten gaven schriftelijke geïnformeerde toestemming.

1. Evaluatie van vasculair blok van onderste ledemaat, bloedafname en ballonangioplastiek

OPMERKING: De studiesteekproef die voor dit experiment werd gebruikt, bestond uit 20 diabetespatiënten van 68 jaar oud en 10 van de 20 mannen. De helft van de steekproef bestond uit rokers en de meest voorkomende co-morbiditeiten waren diabetes mellitus type 2, systemische arteriële hypertensie en/of dyslipidemie. Het ....

Results

Bloedmonsters van geblokkeerde slagaders, op de plaats gericht voor angioplastiek, werden verzameld bij 20 diabetespatiënten, 68 jaar oud en 10 van de 20 mannen. De helft van de steekproefpopulatie was roker. Vasculaire laesies werden voornamelijk gescoord als Rutherford klasse VI; overwegende dat patiënten een hogere prevalentie van type 2 Diabetes Mellitus (100%), hypertensie (70%) dyslipidemie (55%).

Een klinische follow-up van 30 dagen na angioplastiek van de onderste ledematen werd uitgev.......

Discussion

Bloedafname op de precieze plaats van het vasculaire blok kan technische problemen vertonen; daarom hebben we bloedafname uitgevoerd in de nabijheid van vasculair blok. Evenzo lijkt de hoeveelheid MPC's dicht bij de vasculaire plaque zeer dynamisch te zijn en kan variaties ontstaan voor en na angioplastiek. Volgens onze observaties wordt aanbevolen om baseline- en 30min-post-angioplastieveranderingen in het aantal MPC's te evalueren, omdat ze verschillende patofysiologische processen kunnen weerspiegelen die optreden bij.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
BSA	Roche	10735086001	Bovine Serum Albumin (BSA) as a buffering agent, stabilizer, standard and for blending.
Calibration Beads	Miltenyi Biotec / MACS	#130-093-607	MACQuant calibration beads are supplied in aqueous solution containing 0.05% sodium azide. 3.5 ml for up to 100 tests
CD133/1 (AC133)-PE	Milteny Biotec / MACS	#130-080-801	Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer
CD184 (CXCR4)-PE-VIO770	Miltenyi Biotec / MACS	#130-103-798	Monoclonal, Isotype recombinant human IgG1, conjugated
CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC	Miltenyi Biotec / MACS	#130-093-601	Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer
CD34-FITC	Miltenyi Biotec / MACS	#130-081-001	The monoclonal antibody clone AC136 detecs a class III epitope of the CD34
CD45- VioBlue	Miltenyi Biotec / MACS	#130-092-880	Monoclonal CD45 Antibody, human conjugated
Conical Tubes	Thermo SCIENTIFIC	#339651	15ml conical centrifuge tubes
Cytometry Tubes	FALCON Corning Brand	#352052	5 mL Polystyrene Round-Bottom Tube. 12x75 style. Sterile.
EDTA	BIO-RAD	#161-0729	Heavy metals, (as Pb) <10ppm, Fe<0.01%, As<1ppm, Insolubles<0.005%
Improved Neubauer	Without brand	Without catalog number	Hemocytometer for cell counting. (range 0.1000mm, 0.0025mm2)
K2 EDTA Blood Collection Tubes	BD Vacutainer	#367863	Lilac plastic vacutainer tube (K2E) 10.8mg, 6 mL.
Lymphoprep	Stemcell Technologies	01-63-12-002-A	Sterile and checked on the presence of endotoxins. Density: 1.077±0.001g/mL
Paraformaldehyde	SIGMA-ALDRICH	#SZBF0920V	Fixation of biological samples, (powder, 95%)
Pipette Transfer 1,3mL	CRM Globe	PF1016, PF1015	The transfer pipette is a tool that facilitates liquid transfer with greater accuracy.
Test Tubes	KIMBLE CHASE	45060 13100	Heat-resistant test tubes. SIZE/CAP 13 x 100 mm