Een Murine Staart Lymfoedeem Model

Summary

Lymfoedeem is zwelling van de extremiteit veroorzaakt door lymfatische disfunctie. We beschrijven een chronisch muizenstaartmodel van lymfoedeem en het nieuwe gebruik van weefselnanotransfectietechnologie (TNT) voor genetische ladingafgifte aan de staart.

Abstract

Lymfoedeem is zwelling van de extremiteit veroorzaakt door lymfatische disfunctie. De aangedane ledemaat vergroot door ophoping van vocht, vetweefsel en fibrose. Er is geen remedie voor deze ziekte. Een muisstaartmodel dat een focale huidexcisie van volledige dikte gebruikt in de buurt van de basis van de staart, resulterend in staartzwelling, is gebruikt om lymfoedeem te bestuderen. Dit model kan echter resulteren in vasculaire omvattende en daaruit voortvloeiende staartnecrose en vroege staartzwelling, waardoor de klinische vertaalbaarheid ervan wordt beperkt. Het chronische murinestaartlymfedeemmodel induceert aanhoudend lymfoedeem gedurende 15 weken en een betrouwbare perfusie aan de staart. Verbeteringen van het traditionele murinestaartlymfedeemmodel omvatten 1) nauwkeurige excisie van volledige dikte en lymfatisch knippen met behulp van een chirurgische microscoop, 2) bevestiging van postoperatieve arteriële en veneuze perfusie met behulp van laserspikkel met hoge resolutie, en 3) functionele beoordeling met behulp van indocyaninegroene nabij-infraroodlaserlymfangiografie. We gebruiken ook weefsel nanotransfectietechnologie (TNT) voor nieuwe niet-virale, transcutane, focale levering van genetische lading aan de muizenstaart vasculatuur.

Introduction

Lymfoedeem is zwelling van de extremiteit veroorzaakt door lymfatische disfunctie. De aangedane ledemaat vergroot door de ophoping van vocht, vet en fibrose¹. Lymfoedeem treft wereldwijd 250 miljoen mensen^2,3,4. Geschat wordt dat 20-40% van de patiënten die een behandeling ondergaan voor solide maligniteiten, zoals borstkanker, melanoom, gynaecologische / urologische tumoren of sarcomen, lymfoedeem ontwikkelen^2,4,5. Morbiditeit van lymfoedeem omvat terugkerend....

Protocol

Het protocol volgt de richtlijnen van de ethische commissie voor dieronderzoek van de instelling. Alle dierproeven werden goedgekeurd door de Indiana University School of Medicine Institutional Animal Care and Use Committee. Dieren werden gehuisvest onder een 12-uur durende licht-donker cyclus met voedsel en water ad libitum.

1. Chirurgische verstoring van de lymfevaten van de muizenstaart

1. Gebruik acht weken oude C57BL/6 muizen met een gelijke geslachtsverdeling.
2. Plaats een muis onder algemene anesthesie in een inductiekamer met 3-4% isofluraan in 100% zuurstof gevolgd door onderhoudssedatie bij 1-3% tijdens de procedure....

Results

De techniek voor het muizenstaartmodel voor aanhoudend lymfoedeem is weergegeven in figuur 1. De figuur toont de relevante anatomie van het muisstaartmodel. Figuur 2 toont de progressieve zwelling en aanhoudend persistant lymfoedeem in de muizenstaart na lymfoedeeminductie. Het muisstaartvolume, zoals berekend door de afgeknotte kegelvergelijking, piekt in week 4 en plateaus naar week 6 gevolgd door een geleidelijke verbetering d.......

Discussion

Lymfoedeem wordt gecategoriseerd als een primaire (aangeboren) of secundaire (iatrogene lymfatische) verwonding^38,39. Secundair lymfoedeem omvat 99% van de gevallen³⁹. Secundair lymfoedeem wordt meestal veroorzaakt door infectie (filariasis) of post-oncologische behandeling met lymfadenectomie of straling^4,39. Een translationeel diermodel is een uitdaging voor secundair lymfoedeem,.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Tegaderm Film		1626W
Surgical Microscope	Leica, Wetzlar, Germany	MSV266
Adherent Dressing (Tegaderm)	3M, St. Paul, Minn.	1626W
Laser speckle (Pericam PSI System )	Perimed AB, Stockholm, Sweden)	PSIZ
Near-infrared laser (LUNA)	Stryker (Formerly Novadaq Technologies, Toronto, Canada)	LU3000
C57BL/6 mice	Jackson Laboratories	000664
Micro-Adson Forceps - 1x2 Teeth	Fine Science Tools (USA) Inc.	11019-12
V-Hook	Fine Science Tools (USA) Inc.	18052-12
Scalpel SS NO15	Fischer Scientific	29556
Disposable Needle 30GX1	Fischer Scientific	305128
Operating Scissors	Fischer Scientific	12-460-796
Surgi-Or Jeweler's Forceps, Sklar 4-1/2 in	Fischer Scientific	50-118-4255
Spring Scissors - Straight/Sharp-Sharp/8mm Cutting Edge	Fine Science Tools (USA) Inc.	15024-10
Cardiogreen	Sigma	I2633-25MG
IsosulfanBlue (Lymphazurin)  50 mg/5ml	Mylan	67457-220-05