Chronische pancreatitis (CP) is een ziekte die wordt gekenmerkt door ontsteking en fibrose van de alvleesklier, vaak geassocieerd met hardnekkige buikpijn. Dit artikel richt zich op het verfijnen van de techniek om een muismodel van CP te genereren via galweginfusie met 2,4,6 -trinitrobenzeensulfonzuur (TNBS).
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Een muismodel voor chronische pancreatitis via galweg TNBS-infusie
* These authors contributed equally
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Chronische pancreatitis (CP) is een complexe ziekte waarbij alvleesklierontsteking en fibrose, glandulaire atrofie, buikpijn en andere symptomen betrokken zijn. Verschillende knaagdiermodellen zijn ontwikkeld om CP te bestuderen, waarvan het galkanaal 2,4,6 -trinitrobenzeensulfonzuur (TNBS) infusiemodel de kenmerken van neuropathische pijn repliceert die bij CP worden gezien. Galweg medicijninfusie bij muizen is echter technisch uitdagend. Dit protocol demonstreert de procedure van galweg TNBS-infusie voor het genereren van een CP-muismodel. TNBS werd toegediend in de alvleesklier via het ampulla van Vater in de twaalfvingerige darm. Dit protocol optimaliseerde het medicijnvolume, chirurgische technieken en medicijnbehandeling tijdens de procedure. Met TNBS behandelde muizen vertoonden kenmerken van CP zoals weerspiegeld door gewichtsverminderingen van het lichaamsgewicht en de alvleesklier, veranderingen in pijngerelateerd gedrag en abnormale pancreasmorfologie. Met deze verbeteringen was de mortaliteit geassocieerd met TNBS-injectie minimaal. Deze procedure is niet alleen van cruciaal belang bij het genereren van pancreasziektemodellen, maar is ook nuttig bij de lokale toediening van pancreasgeneesmiddelen.
Inleiding
Chronische pancreatitis (CP) is een chronische ontstekingsziekte die wordt gekenmerkt door de atrofie van de alvleesklier, fibrose, buikpijn en uiteindelijk verlies van zowel exocriene als endocriene functies1. De huidige medische en chirurgische behandelingen zijn niet curatief, maar worden uitgevoerd om symptomen te verlichten die het gevolg zijn van de ziekte: refractaire buikpijn, endocriene en exocriene disfunctie. Daarom zijn effectievere behandelingen dringend nodig2. Diermodellen bieden een essentieel hulpmiddel voor het ontwikkelen van een beter begrip van de ziekte en het onderzoeken van potentiële therapieën
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle procedures werden uitgevoerd met de goedkeuring van de Institutional Animal Care and Use Committees aan de Medical University of South Carolina en het Ralph H. Johnson Medical Center. C57BL/6J mannelijke muizen tussen de 8-10 weken oud werden gebruikt in deze studie. Muizen werden gehuisvest onder een standaard 12 licht / 12 donkere cyclus met ad libitumtoegang tot voedsel en water.
1. Bereiding van TNBS oplossing voor injectie
- Bereid 10% ethanol in 0,9% zoutoplossing. Los voorraad TNBS (zie Tabel met materialen) op in 10% ethanol tot een eindconcentratie van 7,5 mM door 7,5 μL TNBS toe te voegen aan 1 ml 10%....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
De galweginfusieprocedures werden geoptimaliseerd om de sterfte bij muizen geassocieerd met deze procedure te verminderen10. TNBS werd eerst gegeven in een totaal volume van 35 μL of 50 μL. Injectie van TNBS in een volume van 50 μL kan de hele alvleesklier bereiken en een homogener ziektefenotype induceren(figuur 1B). Bovendien kan injectie van TNBS met behulp van insulinespuit met 31G-naald de infusiesnelheid beter regelen in vergelijking met gewone spuiten en naaldf.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Galweginfusie van TNBS om chronische pancreatitis te induceren is technisch uitdagend bij muizen, omdat tot 22,5% van de muizen binnen 3-4 dagen na medicijninfusie kan sterven10. Hier verfijnde dit rapport de procedure op basis van eerdere studies en verminderde de vroege muizensterfte tot <10%. Het verhoogde medicijnvolume (van 35 μL tot 50μL) kan er bijvoorbeeld voor zorgen dat de medicijnen de hele alvleesklier bereiken. Het gebruik van een insulinespuit en een kleinere naaldgrootte (31G) vermi.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
Alle auteurs verklaren dat ze geen belangenverstrengeling hebben.
Dankbetuigingen
Deze studie werd ondersteund door het Department of Veterans Affairs (VA-ORD BLR & D Merit I01BX004536) en het National Institute of Health grants # 1R01DK105183, DK120394 en DK118529 aan HW. We bedanken Dr. Hongju Wu voor het delen van technische ervaring.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 10% Neutral buffered formalin v/v | Fisher Scientific | 23426796 | |
| Alcohol prep pads, steriel | Fisher Scientific | 22-363-750 | |
| Animal Anesthesia systeem | VetEquip, Inc. | 901806 | |
| Buprenorfine hydrochloride, injectie | Par Sterile Products, LLC | NDC 42023-179-05 | |
| Centrifuge tubes, 15 mL | Fisher Scientific | 0553859A | |
| Ethanol, absoluut (200 proof), moleculaire biologie kwaliteit | Fisher Scientific | BP2818500 | |
| Extra fijne micro dissectiescharen 4” rechte scherpe | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5882 | |
| Graefe pincet 4” extra delicate tip | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5136 | |
| Verwarmd kussen | Amazon | B07HMKMBKM | |
| Hegar-Baumgartner Naaldhouder 5.25” | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-7850 | |
| Insuline spuit met 31-gauge naald | BD | 324909 | |
| Jodium prep pads | Fisher Scientific | 19-027048 | |
| Isofluraan | Piramal Critical Care | NDC 66794-017-25 | |
| Micro clip aanbrengforceps 5.5” | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5410 | |
| Micro clip, recht, sterk gebogen 1x6mm | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5433 | |
| Micro clip, recht, 0.75mm clipbreedte | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5420 | |
| Picrylsulfonzuur oplossing, TNBS, 1M in H2O | Millipore Sigma | 92822-1ML | |
| Polypropyleen Naad 4-0 | Med-Vet International | MV-8683 | |
| Polypropyleen Naad 5-0 | Med-Vet International | MV-8661 | |
| Natriumchloride, 0.9% intraveneuze oplossing | VWR | 2B1322Q | |
| Chirurgisch doek, steriel | Med-Vet International | DR1826 | |
| Weefsel cassette | Fisher Scientific | 22-272416 | |
| Von Frey filamenten | Bioseb | EB2-VFF |
Referenties
- Klauss, S., et al. Genetically induced vs. classical animal models of chronic pancreatitis: a critical comparison. The Federation of American Societies for Experimental Biology Journal. 32, 5778-5792 (2018).
- Liao, Y. H., et al.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
