Methodenartikel

Dubbele etikettering van immunofluorescentie met behulp van antilichamen van dezelfde soort om gastheer-pathogeeninteracties te bestuderen

DOI:

10.3791/62219

⸱

10 juli 2021

 ,  , 
1Laboratory of Cell and Molecular Biology of Trypanosomatids, Department of Cellular and Molecular Biology and Pathogenic Bioagents, Ribeirao Preto Medical School, University of Sao Paulo, Ribeirao Preto, SP, Brazil

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hier beschrijft het protocol hoe dubbele labeling immunofluorescentie kan worden uitgevoerd met behulp van primaire antilichamen die in dezelfde soort zijn grootgebracht om gastheer-pathogeeninteracties te bestuderen. Ook kan het het derde antilichaam van een andere gastheer in dit protocol opnemen. Deze aanpak kan worden gemaakt in elk celtype en pathogenen.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tegenwoordig is het mogelijk om een breed scala aan moleculaire hulpmiddelen te vinden die beschikbaar zijn om parasiet-gastheer celinteracties te bestuderen. Er zijn echter enkele beperkingen om commerciële monoklonale of polyklonale antilichamen te verkrijgen die specifieke celstructuren en eiwitten in parasieten herkennen. Bovendien zijn er weinig commerciële antilichamen beschikbaar om trypanosomatiden te labelen. Meestal worden polyklonale antilichamen tegen parasieten in eigen huis bereid en kunnen ze moeilijker te gebruiken zijn in combinatie met andere antilichamen die in dezelfde soort worden geproduceerd. Hier demonstreert het protocol hoe polyklonale en monoklonale antilichamen die in dezelfde soort zijn gekweekt, kunnen worden gebruikt om dubbele etikettering van immunofluorescentie uit te voeren om gastheercel- en pathogeeninteracties te bestuderen. Om de dubbele labeling immunofluorescentie te bereiken, is het cruciaal om eerst het polyklonale antilichaam van de muis te incuberen en vervolgens de incubatie te volgen met het secundaire muis IgG-antilichaam geconjugeerd aan elk fluorochroom. Daarna is een extra blokkerende stap nodig om te voorkomen dat sporen van het primaire antilichaam worden herkend door het volgende secundaire antilichaam. Vervolgens worden een monoklonaal antilichaam van de muis en zijn specifieke IgG-subklasse secundair antilichaam geconjugeerd aan een ander fluorochroom op de juiste tijdstippen aan het monster toegevoegd. Bovendien is het mogelijk om drievoudige etikettering van immunofluorescentie uit te voeren met behulp van een derde antilichaam dat in een andere soort is opgewekt. Ook kunnen structuren zoals kernen en actine vervolgens worden gekleurd met hun specifieke verbindingen of labels. Deze hier gepresenteerde benaderingen kunnen dus worden aangepast voor elke cel waarvan de bronnen van primaire antilichamen beperkt zijn.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Het bestuderen van de interactie van de ziekteverwekker met de gastheercel op cellulair niveau biedt essentiële informatie over de onderliggende oorzaken van de ziekte, aangezien verschillende groepen, zoals virussen, bacteriën en protozoa, de meeste gastheerceltypen kunnen infecteren1,2,3,4. Het kan ook helpen bij het ontwikkelen en identificeren van potentiële therapeutische doelen die de groei van de ziekteverwekker kunnen vertragen of remmen. In levende omstandigheden zijn de geproduceerde antilichamen verantwoordelijk voor het herkennen van zelfcomponenten, antigenen van virussen, bacteriële componenten of producten, schimmels, parasieten en anderen5.

Voor dit doel zijn antilichamen veel gebruikte hulpmiddelen, voornamelijk voor het begrijpen van de locatie en functie van cellulaire structuren en eiwitten. Verschillende studies met behulp van meervoudige antilichaametikettering tonen aan dat extra blokkerende stappen bijdragen aan de specificiteit van de immunolokalisatie. Bovendien gebruiken de meeste beschreven protocollen specifieke commerciële monoklonale antilichamen, waaronder antilichamen van dezelfde gastheersoort6,7,8,9,10,11,12,13,14.

Gewoonlijk gebruikt dubbele labeling immunofluorescentie twee antilichamen die in verschillende soorten zijn grootgebracht om de celstructuren van belang of de pathogenen en de gastheercellen te kleuren om de interactie tussen hen te zien. Dit kan echter een probleem zijn wanneer er geen commerciële monoklonale of polyklonale antilichamen specifiek voor sommige pathogenen beschikbaar zijn om de dubbele etikettering uit te voeren. Ook zijn er in de handel verkrijgbare antilichaamconjugatiekits en is het mogelijk om de primaire antilichamen rechtstreeks aan de fluorofoor te conjugeren door een succinimidylesterreactie15. Het probleem is dat deze kits vaak duur zijn en dat het noodzakelijk is om voldoende antilichamen te hebben om ze te labelen. Dit wetende, hebben we met succes een dubbele immunofluorescentiemethode ontwikkeld met behulp van twee verschillende antilichamen die in dezelfde soort zijn gekweekt om eiwitlokalisatie in Trypanosoma brucei16 te bestuderen. Voor intracellulaire parasieten, waaronder Trypanosoma cruzi, is deze aanpak echter niet aangetoond. Hier laten we zien hoe dubbele labeling immunofluorescentie kan worden uitgevoerd om intracellulaire T. cruzi-parasieten en de gastheercel te bestuderen met behulp van primaire antilichamen die in dezelfde soort zijn opgewekt zonder kruisreacties. Naast deze methode is een drievoudige immunofluorescentie-etikettering vastgesteld met toevoeging van het derde antilichaam van een andere soort. Deze benaderingen helpen wanneer de bron van antilichamen beperkt is en kunnen in elk celtype worden gebruikt.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Cel- en parasietculturen

  1. Kweek LLC-MK2 (Rhesus Monkey Kidney Epithelial) cellen uit de American Type Culture Collection (CCL-7) in een celkweekkolf van 25 cm2 met in RPMI medium aangevuld met 10% warmte-geïnactiveerde FBS (Fetal Bovine Serum) en antibiotica (100 E/ml penicilline en 100 μg/ml streptomycine) bij 37 °C in 5% CO2 17.
  2. Infecteer LLC-MK2 cellen met Trypanosoma cruzi (Y stam) volgens een eerder protocol 18.
  3. Verzamel het supernatant van de LLC-MK2 geïnfecteerde cellen (5 ml) in een 15 ml celkweek conische centrifugebuis en centrifugeer bij 500 x g gedurende 10 minuten en 22 °C om celresten te verlagen. Houd de buis gedurende 10 minuten op 37 °C om trypomastigoten naar het supernatant te laten zwemmen.
  4. Verzamel het supernatant in een nieuwe conische buis en centrifugeer bij 2500 x g gedurende 15 minuten bij 22 °C. Gooi het supernatant weg en resuspend de pellet met de parasieten in volledig RPMI-medium om de celdichtheid te bepalen door cellen in een Neubauer-kamer te tellen.

2. Controle immunofluorescentie protocol

OPMERKING: Eenmaal bevestigd, is het mogelijk om platen met coverslips bij 4 °C in 1x PBS (pH 7,2) gedurende één week te bewaren. Om te worden opgeslagen, is het belangrijk dat de cellen de permeabilisatiestap niet hebben doorlopen.

  1. Vereffen LLC-MK2-cellen (2 x 104) in 24 putplaten met UV-gesteriliseerde afgeronde coverslips in RPMI-media gedurende 16 uur.
  2. Voeg voor geïnfecteerde cellen een supernatant met T. cruzi (punt 1.4) toe aan elke put in verhouding (MOI 10:1) en laat deze gedurende 6 uur van infectie staan. Was coverslips met geïnfecteerde en niet-geïnfecteerde cellen vijf keer met PBS-oplossing en gefixeerd met 2% paraformaldehyde in 1x PBS (pH 7,2) gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur (RT).
  3. Was de dekenslips driemaal gedurende 5 minuten met elk 1x PBS (pH 7,2).
  4. Permeabiliseer de coverslips met 0,2% IGEPAL CA-630 in 1x PBS (PH 7.2) gedurende 10 minuten bij RT.
  5. Was de coverslips drie keer gedurende 5 minuten elk met 1x PBS.
  6. Incubeer coverslips gedurende 30 minuten bij RT met de blokkerende oplossing (2% BSA in 1x PBS, pH 7,2).
  7. Incubeer coverslips gedurende 30 minuten bij RT met monoklonale anti-hnRNPA1 bij muizen (verdunning 1:200) of met polyklonale anti-TcFAZ-antilichamen van muizen (verdunning 1:100) verdund in blokkerende oplossing.
  8. Was de coverslips drie keer gedurende 5 minuten elk met 1x PBS.
  9. Incubeer de coverslips gedurende 30 minuten bij RT met geiten-anti-muis IgG F (ab')2 (H + L) geconjugeerd naar Alexa Fluor 488 (1:600) samen met falloïdine geconjugeerd naar Alexa 594 (1:300) om actinefilamenten (F-actine) in de gastheercel verdund in de blokkerende oplossing te kleuren.
  10. Was drie keer met 1x PBS (pH 7,2) gedurende elk 5 minuten.
  11. Breng een kleine hoeveelheid ProLong Gold antifade montagereagens met DAPI medium aan op het oppervlak van de dia.
  12. Gebruik een tang om de afdekplaat voorzichtig in het montagemedium te kantelen om te voorkomen dat er bubbels ontstaan. Eenmaal droog, sluit de coverslip indien gewenst af.

3. Dubbel labeling immunofluorescentieprotocol met behulp van monoklonale en polyklonale antilichamen die in dezelfde gastheer zijn opgewekt

  1. Herhaal stap 2.1 tot en met 2.6 zoals hierboven beschreven.
  2. Incubeer coverslips die geïnfecteerde en niet-geïnfecteerde cellen bevatten met in-house muis polyklonaal anti-TcFAZ-antilichaam (1:100) verdund in blokkerende oplossing gedurende 30 minuten bij RT.
  3. Was de coverslips drie keer gedurende 5 minuten elk met 1x PBS.
  4. Incubeer coverslips gedurende 30 minuten bij RT met geiten-antimuis IgG F (ab')2 (H+L) geconjugeerd naar Alexa Fluor 647 (1:600) verdund in de blokkeringsoplossing.
  5. Was de coverslips drie keer gedurende 5 minuten elk met 1x PBS.
  6. Voer de tweede blokkeringsstap uit met AffiniPure konijn anti-muis IgG (H+L) verdund (0,12 mg/ml) in blokkerende oplossing gedurende 30 minuten bij RT.
  7. Was de coverslips drie keer met 1x PBS (pH 7,2) gedurende elk 5 minuten. Incubeer vervolgens met muis monoklonaal anti-hnRNP A1 IgG2b-antilichaam (1:200) gedurende 30 minuten bij RT.
  8. Was de coverslips drie keer gedurende 5 minuten elk met 1x PBS.
  9. Incubeer de coverslips gedurende 30 minuten met geiten-antimuis IgG2b-antilichaam geconjugeerd aan Alexa Fluor 488 (1:600) en met falloïde geconjugeerd aan Alexa 594 (1:300) verdund in de blokkerende oplossing.
  10. Was de coverslips drie keer gedurende 5 minuten elk met 1x PBS.
  11. Herhaal stap 2.8 tot en met 2.10 zoals hierboven beschreven.

4. Drievoudig etiketteringsprotocol voor immunofluorescentie met de toevoeging van het derde polyklonale antilichaam van verschillende gastheersoorten

OPMERKING: Let voor de aanvullende etikettering op de IgG-subklassen, antilichaamisotypen en volg de volgorde van antilichamen: 1. muispolyklonaal, 2. konijnpolyklonaal, 3. tweede blok en 4. muis monoklonaal. Overweeg het type lasers dat beschikbaar is in de confocale microscoop om het juiste fluorofoor-geconjugeerde secundaire antilichaam te kiezen.

  1. Herhaal stap 2.1 tot en met 2.6 zoals hierboven beschreven.
  2. Begin na stap 3.2 tot 3.5 (wasstap) een nieuwe incubatie met konijnpolyklonaal antilichaam in blokkerende oplossing gedurende 30 minuten bij RT.
  3. Was de dekenslips drie keer met 1x PBS (pH 7,2) gedurende 5 minuten elk.
  4. Incubeer de coverslips met geitenantilichaam IgG geconjugeerd aan Alexa 647 (1:600) in blokkeringsoplossing gedurende 30 minuten.
  5. Was de coverslips drie keer gedurende 5 minuten elk met 1x PBS.
  6. Voer een blokkeringsstap uit met AffiniPure konijn anti-muis IgG (H +L) verdund (0,12 mg / ml) in blokkerende oplossing gedurende 30 minuten bij RT.
  7. Was de coverslips driemaal met 1x PBS (pH 7,2) gedurende elk 5 minuten en incubeer met een monoklonaal IgG-subklasse antilichaam van de muis verdund in een blokkerende oplossing gedurende 30 minuten.
  8. Was de coverslips drie keer gedurende 5 minuten elk met 1x PBS.
  9. Incubeer de coverslips gedurende 30 minuten met een specifiek paar geiten anti-muis IgG subklasse antilichaam geconjugeerd aan Alexa 594 (1:600) in blokkeringsoplossing gedurende 30 minuten.
  10. Was de coverslips drie keer gedurende 5 minuten elk met 1x PBS.

5. Confocale beeldvorming acquisitie

  1. Analyseer de immunofluorescentiemonsters met behulp van een confocale microscoop, met een 63X olie-onderdompelingsobjectief en detecteer de fluorescentie met een fotomultiplicatorbuis (PMT) en hybride detector (HyD).
    OPMERKING: We gebruikten de opstelling van het Multiuser Laboratory of Confocal Microscopy - LMMC, Ribeirao Preto Medical School, Universiteit van Sao Paulo.
  2. Verkrijg alle confocale afbeeldingen met gescheiden kanalen. Voer beeldverwerking uit met Adobe Photoshop.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hier laten we zien hoe gastheer-parasietinteracties door immunofluorescentie kunnen worden bestudeerd wanneer de bron van antilichamen beperkt is vanwege de onbeschikbaarheid van commerciële antilichamen die specifieke structuren en eiwitten in trypanosomatiden herkennen.

Onder trypanosomatiden heeft T. cruzi een van de meest complexe levenscycli met verschillende ontwikkelingsstadia tussen gewervelde en ongewervelde gastheren 19. Tijdens de T. cruzi-levens...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hier presenteren we een protocol om dubbele immunolabeling uit te voeren in trypanosoma cruzi geïnfecteerde cellen met behulp van twee verschillende antilichamen van dezelfde gastheersoort. Om, met meer detail, de implicaties van de infectie te bestuderen, kunnen structuren in de gastheercel zoals de kern of cytosolische organellen worden gelabeld met behulp van dit protocol. Het kan ook worden gebruikt in de post-embedding dunne sectie immunogold labeling methode. Deze aanpak helpt om het obstakel te overwinnen...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs verklaren geen tegenstrijdige of financiële belangen te hebben.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit werk werd ondersteund door Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP 2010/19547-1; 2018/03677-5) aan MMAB, door Fundação de Apoio ao Ensino, Pesquisa e Assistência- FAEPA aan MMAB en door Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior- Brasil (CAPES) - financieringscode 001. CG-C ontving een master- en doctoraatsbeurs van CAPES en LAMT-S ontving een doctoraatsbeurs van CNPq. We bedanken Elizabete R. Milani voor confocale microscopie-assistentie en Dr. Dario Zamboni voor het leveren van LLC-MK2-cellen (Ribeirao Preto Medical School, USP).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

```html

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Alexa Fluor 488 - IgG2b-antilichaamLife technologies, USAA21141Geit anti-muis
AffiniPure Konijn anti-muis IgG (H+L)Jackson Immunoresearch, USA315-005-003Anti-muis antilichaam
Alexa Fluor 488 - IgG F (ab')2 (H+L) antilichaamLife technologies, USAA11017Geit anti-muis
Alexa Fluor 594 IgG1 antilichaamLife technologies, USAA21125Geit anti-muis
Alexa Fluor 647 - IgG F (ab')2 (H+L) antilichaamLife technologies, USAA21237Geit anti-muis
Anti-hnRNPA1 antilichaam IgG2bSigma-Aldrich, USAR4528Muis antilichaam
anti-TcFAZ (T. cruzi FAZ-eiwit) antilichaamOns labIn-houseMuis antilichaam
Bos Serum Albumine (BSA)Sigma-Aldrich, USAA2153-10GAlbumine-eiwit
Detergent Igepal CA-630Sigma-Aldrich, USAI3021Niet-ionogene Detergent
Foetaal Rund Serum (FBS)Gibco, Thermo fisher scientific, USA12657-029Serum
Penicilline StreptomycineGibco, Thermo fisher scientific, USA15140-122Antibioticum
Phalloidin Alexa Fluor 594Life technologies, USAA12381Actine marker
ProLong Gold antifade met DAPILife technologies, USAP36935Reagens voor montagemedium
RPMI 1640 1X met L-glutamineCorning, USA10-040-CVCelcultuurmedium
Trypsine-EDTA oplossingSigma-Aldrich, USAT4049-100MLBioreagens
```

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lloyd, R. E. Nuclear proteins hijacked by mammalian cytoplasmic plus strand RNA viruses. Virology. 479-480, 457-474 (2015).
  2. Casadevall, A., Pirofski, L. A. Host-pathogen interactions: basic concepts of microbial commensalism, colonization, infection, and disease. Infection and Immunity. 68 (12), 6511-6518 (2000).
  3. Sidik, S. M., Salsman, J., Dellaire, G., Rohde, J. R. Shigella infection interferes with SUMOylation and increases PML-NB number. PLoS One. 10 (4), 0122585(2015).
  4. Robert McMaster, W., Morrison, C. J., Kobor, M. S. Epigenetics: A New Model for Intracellular Parasite-Host Cell Regulation. Trends in Parasitology. 32 (7), 515-521 (2016).
  5. Casali, P., Schettino, E. W. Structure and function of natural antibodies. Current Topics in Microbiology and Immunology. 210, 167-179 (1996).
  6. Ansorg, A., Bornkessel, K., Witte, O. W., Urbach, A. Immunohisto-chemistry and multiple labeling with antibodies from the same host species to study adult hippocampal neurogenesis. Journal of Visualized Experiments. (98), e52551(2015).
  7. Tóth, Z. E., Mezey, E. Simultaneous visualization of multi-ple antigens with tyramide signal amplification using antibodies from the same species. Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 55 (6), 545(2007).
  8. Ma, B., Winkelbach, S., Lindenmaier, W., Dittmar, K. E. Six-colour fluorescent imaging of lymphoid tissue based on colour addition theory. Acta Histochemica. 108 (4), 243(2006).
  9. Buchwalow, I. B., Minin, E. A., Boecker, W. A multicolor fluorescence immunostaining technique for simultaneous antigen targeting. Acta Histochemica. 107 (2), 143(2005).
  10. Nakamura, A., Uchihara, T. Dual enhancement of triple immunofluorescence using two antibodies from the same species. Journal of Neuroscience Methods. 135 (1-2), 67(2004).
  11. McCormick, J., Lim, I., Nichols, R. Neuropeptide precursor pro-cessing detected by triple immunolabeling. Cell and Tissue Research. 297 (2), 197(1999).
  12. Shindler, K. S., Roth, K. A. Double immunofluorescent staining using two unconjugated primary antisera raised in the same species. Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 44 (11), 1331(1996).
  13. Wang, B. L., Larsson, L. I. Simultaneous demonstration of multiple anti-gens by indirect immunofluorescence or immunogold staining. Novel light and electron microscopical double and triple staining method employing primary antibodies from the same species. Histochemistry. 83 (1), 47(1985).
  14. Lewis Carl, S. A., Gillete-Ferguson, I., Ferguson, D. G. An indirect immunofluorescence procedure for staining the same cryosection with two mouse monoclonal primary antibodies. Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 41 (8), 1273-1278 (1993).
  15. Pranchevicius, M. C., et al. Myosin Va phosphorylated on Ser1650 is found in nuclear speckles and redistributes to nucleoli upon inhibition of transcription. Cell Motility and the Cytoskeleton. 65 (6), 441-456 (2008).
  16. Moreira, B. P., de Castro, C. G., Prado, L. C. dS., da Fonseca, C. K., Baqui, M. M. A. Use of antibodies from the same host species in double labeling immunofluorescence on trypanosome cytoskeleton. Microscopy and Imaging Science: Practical Approaches to Applied Research and Education. Méndez-Vilas, A. 7, 374-378 (2016).
  17. Hull, R. N., Cherry, W. R., Tritch, O. J. Growth characteristics of monkey kidney cell strains LLC-MK1, LLC-MK2, and LLC-MK2 (NCTC-3196) and their utility in virus research. Journal of Experimental Medicine. 115, 903-918 (1962).
  18. Stecconi-Silva, R. B., Andreoli, W. K., Mortara, R. A. Parameters affecting cellular invasion and escape from the parasitophorous vacuole by different infective forms of Trypanosoma cruzi. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz. 98 (7), 953-958 (2003).
  19. de Souza, W., de Carvalho, T. M., Barrias, E. S. Review on Trypanosoma cruzi: Host Cell Interaction. International Journal of Cell Biology. 2010, 295394(2010).
  20. Burleigh, B. A., Woolsey, A. M. Cell signalling and Trypanosoma cruzi invasion. Cellular Microbiology. 4 (11), 701-711 (2002).
  21. Baqui, M. M. A., Takata, C. S., Milder, R. V., Pudles, J. A giant protein associated with the anterior pole of a trypanosomatid cell body skeleton. European Journal of Cell Biology. 70, 243-249 (1996).
  22. Baqui, M. M., Milder, R., Mortara, R. A., Pudles, J. In vivo and in vitro phosphorylation and subcellular localization of trypanosomatid cytoskeletal giant proteins. Cell Motility and the Cytoskeleton. 47 (1), 25-37 (2000).
  23. Baqui, M. M., De Moraes, N., Milder, R. V., Pudles, J. A giant phosphoprotein localized at the spongiome region of Crithidia luciliae thermophila. Journal of Eukaryotic Microbiology. 47 (6), 532-537 (2000).
  24. Jean-Philippe, J., Paz, S., Caputi, M. hnRNP A1: the Swiss army knife of gene expression. International Journal of Molecular Sciences. 14 (9), 18999-19024 (2013).
  25. Vidarsson, G., Dekkers, G., Rispens, T. IgG subclasses and allotypes: from structure to effector functions. Frontiers in Immunology. 5, 520(2014).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Antilichamen van dezelfde soortpolyklonale antilichamenmonoklonale antilichamenconfocale microscopieTrypanosoma cruziblokkeringsstapactinekleuringDAPI kleuring

Gerelateerde artikelen