Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

3D-printen van in vitro hydrogel microdragers door afwisselend viskeuze-traagheidskracht jetting

2.5K weergaven

DOI:

10.3791/62252

21 april 2021

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

Hier wordt een milde 3D-printtechniek gepresenteerd die wordt aangedreven door afwisselend viskeuze-traagheidskrachten om de constructie van hydrogel-microdragers mogelijk te maken. Zelfgemaakte nozzles bieden flexibiliteit, waardoor eenvoudige vervanging voor verschillende materialen en diameters mogelijk is. Celbindende microdragers met een diameter van 50-500 μm kunnen worden verkregen en verzameld voor verdere kweek.

Samenvatting

Microdragers zijn kralen met een diameter van 60-250 μm en een groot specifiek oppervlak, die vaak worden gebruikt als dragers voor grootschalige celculturen. Microcarrier-cultuurtechnologie is uitgegroeid tot een van de belangrijkste technieken in cytologisch onderzoek en wordt vaak gebruikt op het gebied van grootschalige celexpansie. Van microdragers is ook aangetoond dat ze een steeds belangrijkere rol spelen bij de bouw van in vitro weefselmanipulatie en klinische screening van geneesmiddelen. Huidige methoden voor het voorbereiden van microcarriers omvatten microfluïdische chips en inkjetprinten, die vaak afhankelijk zijn van een complex stroomkanaalontwerp, een incompatibele tweefasige interface en een vaste nozzle-vorm. Deze methoden worden geconfronteerd met de uitdagingen van complexe nozzleverwerking, ongemakkelijke nozzle-veranderingen en overmatige extrusiekrachten wanneer toegepast op meerdere bioink. In deze studie werd een 3D-printtechniek, alternating viscous-inertial force jetting genoemd, toegepast om de constructie van hydrogel microcarriers met een diameter van 100-300 μm mogelijk te maken. Cellen werden vervolgens gezaaid op microdragers om tissue engineering modules te vormen. In vergelijking met bestaande methoden biedt deze methode een vrije diameter van de spuitmondpunt, flexibele nozzle-omschakeling, vrije controle van afdrukparameters en milde afdrukomstandigheden voor een breed scala aan bioactieve materialen.

Inleiding

Microdragers zijn kralen met een diameter van 60-250 μm en een groot specifiek oppervlak en worden vaak gebruikt voor grootschalige kweek van cellen1,2. Hun buitenoppervlak biedt overvloedige groeiplaatsen voor cellen en het binnenste biedt een ondersteunende structuur voor ruimtelijke proliferatie. De bolvormige structuur biedt ook gemak bij het bewaken en regelen van parameters, waaronder pH, O2 en concentratie van voedingsstoffen en metabolieten. Bij gebruik in combinatie met bioreactoren met geroerde tanks kunnen microdragers hogere celdichtheden bereiken in een relatief klein volume in vergelij....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

1. Celkweek

  1. Supplement hoge glucose Dulbecco's gemodificeerde Minimum Essential Medium (H-DMEM) met 10% foetaal runderserum (FBS), 1% niet-essentiële aminozuuroplossing (NEAA), 1% penicilline G en streptomycine, en 1% glutaminesupplement als kweekmedium voor A549-cellen.
  2. Kweek A549-cellen in een CO2-incubator bij 37 °C en met 5% CO2
  3. Dissocieer cellen voor subcultuur met behulp van trypsine bij ongeveer 80% confluentie.
    1. Gebruik 3 ml trypsine om de cellen in de T75-kweekkolf gedurende 3 minuten bij 37 °C te behandelen en voeg vervolgens 6 ml kweekmedium toe om de trypsinisatie te stoppen.
    2. Pipetteer ....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Printkoppen met verschillende convergentiesnelheden en diameters werden vervaardigd om het afdrukken van meerdere soorten materialen te bereiken. De nozzles verkregen met toenemende trekkracht zijn weergegeven in figuur 1B. De nozzles waren verdeeld in drie gebieden: reservoir (III), contractie (II) en printkop (I). Het reservoir was het onbewerkte deel van het mondstuk, waarin de vloeistof statische druk en bioink-input leverde voor het afdrukken. Het krimpgebied was het belangrijkste onder.......

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Het hier beschreven protocol geeft instructies voor de bereiding van multi-types hydrogel microcarriers en daaropvolgende celzaaien. In vergelijking met microfluïdische chip- en inkjetprintmethoden biedt de AVIFJ-benadering voor het bouwen van microdragers meer flexibiliteit en biocompatibiliteit. Een onafhankelijk mondstuk maakt het mogelijk om een breed scala aan lichtgewicht nozzles, waaronder glazen micropipettes, te gebruiken in deze printsystemen. De zeer controleerbare verwerking maakt het mogelijk om parameters z.......

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

Dit werk werd ondersteund door de Beijing Natural Science Foundation (3212007), Tsinghua University Initiative Scientific Research Program (20197050024), Tsinghua University Spring Breeze Fund (20201080760), de National Natural Science Foundation of China (51805294), National Key Research and Development Program of China (2018YFA0703004) en het 111 Project (B17026).

....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
A549 cellenATCCCCL-185Humane niet-kleincellige longkankercellijn
LichtveldmicroscoopOlympusDP70
Confocale microscoopNikonTI-FL
Foetaal bovien serum, FBSBI04-001-1ACS
GelatineSIGMAG1890
Glazen micropipettensutter instrumentb150-110-10
GlutaMAXGIBCO35050-061
H-DMEMGIBCO11960-044Dulbecco's gemodificeerd arendsmedium
Meel van mierikswortelperoxidaseSIGMAP6782
Hydrofobe agent3MPN7026Volg de instructies van de fabrikant en gebruik na verdunning
Micro-smeedapparaatnarishigeMF-900
Niet-essentiële aminozuren, NEAAGIBCO11140-050niet-essentiële aminozuren
Penicilline G en streptomycineGIBCO15140-122
PetrischaalSIGMAP5731-500EA
Pullersutter instrumentP-1000
NatriumalginaatSIGMAA0682
TrypsineGIBCO25200-056
Type I collageenoplossing uit rattenstaartSIGMAC3867

Referenties

  1. Chen, A. K., Reuveny, S., Oh, S. K. W. Application of human mesenchymal and pluripotent stem cell microcarrier cultures in cellular therapy: Achievements and future direction. Biotechnol Advances. 31, 1032-1046 (2013).
  2. Li, B., et al.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Trefwoorden

Viskeus inerti le jettingmicrocarrier cultuurcelexpansieweefseltechnologiebio inktprintenalginaat microcarriersconfocale microscopiemicroflu dische chips