Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Knaagdier Estrous Cycle Monitoring met behulp van vaginale lavage: niet zoiets als een normale cyclus

9K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/62884

⸱

30 augustus 2021

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Neurosurgery, Brain Injury Research Center, UCLA, David Geffen School of Medicine, 2Department of Psychology, Pepperdine University, Seaver College

In dit artikel

Samenvatting

Deze studie beschrijft de cruciale factoren waarmee rekening moet worden gehouden bij experimentele ontwerpen met vrouwelijke ratten. In bredere zin dienen deze gegevens om stigma te verminderen en te helpen bij de ontwikkeling van meer inclusieve diagnostische en interventietools.

Samenvatting

De huidige methodologie stelt een reproduceerbare, gestandaardiseerde en kosteneffectieve aanpak vast voor het monitoren van de oestruscyclus van vrouwelijke Sprague Dawley (SD) adolescente ratten. Deze studie toont de complexiteit van hormonale cycli en het brede spectrum van begrip dat nodig is om een betrouwbare en geldige monitoringtechniek te construeren. Door middel van een diepgaand onderzoek van de belangrijkste experimentele ontwerp- en procedurele elementen, biedt deze beschrijving van de cyclus en de fundamentele principes ervan een kader voor verder begrip en deconstrueert misvattingen voor toekomstige replicatie.

Samen met een overzicht van het monsterverzamelingsproces met behulp van vaginale lavage, beschrijft de procedure het mechanisme van gegevenscategorisatie in het viertrapsmodel van proestrus, oestrus, metestrus en diestrus. Deze stadia worden gekenmerkt door een nieuwe voorgestelde aanpak, waarbij gebruik wordt gemaakt van de 4 categoriserende determinanten van vaginale vloeistofconditie, aanwezige celtype (s), celschikking en celhoeveelheid op het moment van verzameling. Variaties van elke fase, gunstige en ongunstige steekproeven, het onderscheid tussen cycliciteit en acycliciteit en grafische afbeeldingen van de verzamelde categoriserende componenten worden gepresenteerd naast effectieve interpretatieve en organisatorische praktijken van de gegevens. Over het algemeen maken deze tools het mogelijk om voor het eerst kwantificeerbare gegevensbereiken te publiceren, wat leidt tot de standaardisatie van categorisatiefactoren bij replicatie.

Inleiding

Nieuwe bijdragen
De oestruscyclus van knaagdieren is geïdentificeerd als een essentiële indicator van welzijn. Onbewuste vooroordelen van onderzoekers en onnauwkeurige interpretaties met betrekking tot het vrouwelijk lichaam belemmeren echter de wetenschappelijke gemeenschap. De etymologie van het woord "oestrus" impliceert een gevoel van minderwaardigheid en negativiteit. Euripides gebruikte de term om een "razernij" of waanzin te beschrijven, Homerus om paniek te beschrijven en Plato om een irrationele drift te beschrijven. Deze studie benadrukt hoe deze oerperspectieven de huidige wetenschappelijke gemeenschap beïnvloeden en pakt deze zorgen aan door middel van een nieuw mozaïekparadigma - een bijgewerkte combinatie van eerder bestudeerde methoden, uitgebreid in reikwijdte voor een meer omvattende benadering.

De studie en het gebruik van deze techniek zijn ten eerste noodzakelijk, omdat er geen gestandaardiseerde en uitgebreide monitoringtechniek is en gegevensinterpretatiepraktijken onduidelijk kunnen zijn. Ten tweede, hoewel oestruscycluskenmerken afhankelijk zijn van individuele ratten die worden bestudeerd, zijn ze vaak universeel. Ten derde, hoewel hormonale cycli routinematige en nuttige processen zijn, worden ze omgeven door gevaarlijk stigma dat wordt onderzocht in de sectie 'Vertaling naar mensen'. Deze studie heeft tot doel deze drie problemen op drie manieren aan te pakken- (A) door een diepgaande oestruscyclusmonitoringtechniek te beschrijven en te verduidelijken hoe de resultaten kunnen worden geïnterpreteerd, (B) door methoden te schetsen die de integriteit en individualiteit van elke cyclus behouden, en (C) door de aandacht te vestigen op misvattingen die ongefundeerde praktijken in stand houden.

Deze studie is ook uniek in zijn focus op adolescente ratten, een periode die wordt gekenmerkt door cruciale ontwikkelingsveranderingen die licht werpen op verschillende gedrags-, anatomische en fysiologische manifestaties op volwassen leeftijd1. Het bouwen van een gestandaardiseerd experimenteel ontwerp om hormonale cycli in een onderbelichte populatie te monitoren en tegelijkertijd gemeenschappelijke vooroordelen te deconstrueren, zal de ontwikkeling van betrouwbare en geldige hormonale correlaties 2,3,4 en de bepaling van conditieafhankelijke cyclusverstoringen mogelijk maken 5,6,7,8,9,10 . Uiteindelijk dienen deze nieuwigheden om diagnostische criteria, behandelingen en interventies van verschillende welzijnsproblemen uit te breiden.

Fundamentele definities en toepassingen
De oestruscyclus is een verzameling dynamische fysiologische processen die optreden als reactie op de drie oscillerende vrouwelijke geslachtssteroïde hormonen: oestradiol, leuteiniserend hormoon (LH) en progesteron (figuur 1A, B). Interacties tussen het endocriene en centrale zenuwstelsel reguleren de cyclus, die meestal 4-5 dagen aanhoudt en terugkeert vanaf het begin van seksuele rijping tot reproductieve senescentie en / of stopzetting. Het is verdeeld in afzonderlijke categorieën op basis van hormoonspiegels - meestal in de 4 stadia van diestrus (DIE), proestrus (PRO), oestrus (EST) en metestrus (MET), die op een circulaire manier vorderen. Het aantal divisies kan variëren van 3 fasen11 tot 13 fasen12, afhankelijk van de aard van het onderzoek13. Het lagere aantal divisies sluit met als fase vaak uit en classificeert het als een kortdurende overgangsperiode. Het hogere aantal omvat meestal subsecties die een nadere inspectie mogelijk maken van verschijnselen zoals tumorontwikkeling of spontane pseudozwangerschap, de fysiologische toestand van zwangerschap zonder embryonale implantatie 12,14,15.

In deze studie werden de stadia geïdentificeerd door componenten van het vaginale kanaal, genaamd de 3 categoriserende determinanten - aanwezige celtype (s), celschikking en celhoeveelheid (figuur 2A-D). Hoewel de toestand van de vaginale vloeistof niet werd gecontroleerd in deze studie, wordt aanbevolen om het op te nemen als een vierde categoriserende component. Meer informatie over het onderzoeken van de vaginale vloeistof is te vinden in de referentielijst16. De categoriserende componenten kunnen worden onderzocht door cellen te extraheren via vaginale lavage, de primaire techniek die wordt aanbevolen in de hedendaagse oestruscyclusmonitoring. Hoewel de diepgaande fysiologische processen binnen elke fase buiten het bestek van deze studie vallen, is meer informatie te vinden in de literatuur17.

Het gebruik en de verdere ontwikkeling van deze oestruscyclusmonitoringtechniek is geworteld in de verbanden tussen geslachtssteroïde hormonen en de functie van lichaamssystemen zoals het cardiovasculaire systeem18, endocriene systeem8 en het centrale zenuwstelsel 19,20,21. Tegelijkertijd is oestruscyclusmonitoring niet altijd nodig wanneer vrouwelijke knaagdieren 22,23,24,25 betrokken zijn. Integendeel, het is belangrijk om eerst te overwegen of sekseverschillen zijn gemeld in het specifieke studiegebied, dat verder kan worden onderzocht in gepubliceerde beoordelingen22,23. Hoewel estrouscyclusmonitoring van vitaal belang is in een breed spectrum van onderzoeken, moet het niet worden gezien als een obstakel voor het opnemen van vrouwelijke knaagdieren in experimenten. Hoewel deze techniek complex en tijdrovend kan lijken, kan de procedure zelf minder dan 15 minuten duren om te voltooien, afhankelijk van de onderzoeker, en is kosteneffectief. Over het algemeen is de opname van vrouwelijke knaagdieren in wetenschappelijke studies gunstig voor het begrip van lichaamssystemen, verschillende aandoeningen en pathologieën en algemeen welzijn, omdat deze ontwikkelingen voornamelijk zijn gebaseerd op de mannelijke lichaamssjabloon.

Universele parameters en natuurlijke variabiliteiten bij het knaagdier
Het vaststellen van bereiken voor aspecten die als "typisch" worden beschouwd, is noodzakelijk om standaardcycluspatronen te definiëren, parameters in te stellen voor vergelijkende en analytische doeleinden en afwijkingen en uitschieters te detecteren. Tegelijkertijd is het ook belangrijk om te erkennen dat de cyclus van elke rat uniek is en dat afwijkingen op basis van dierlijke stam, fysiologische processen en omgevingsomstandigheden worden verwacht. In feite is een van de meest "normale" aspecten van de oestruscyclus variabiliteit. Dit is te zien in de totale cycluslengte, met een bereik van 3-38 dagen26,27; de leeftijd van seksuele rijping die kan variëren van 32-34 dagen tot meerdere weken 28,29,30; wat wordt beschouwd als acyclisch11, en de categoriserende determinante patronen11,13. Over het algemeen is er geen universeel sjabloon voor de oestruscyclus, en het vertalen daarvan naar zowel de wetenschappelijke gemeenschap als het grote publiek is een belangrijk onderdeel van het experimentele proces.

Experimentele tijdspunten en ontwikkelingsleeftijd
Het herkennen van dit principe van variabiliteit helpt bij het bouwen van een betrouwbaar en geldig experimenteel ontwerp. Het begin van oestruscyclusmonitoring is bijvoorbeeld afhankelijk van de anatomische en fysiologische ontwikkeling van de ratten, die varieert op basis van omgevings- en fysiologische factoren. Monitoring kan niet beginnen tot de ontwikkeling van de vaginale opening (VO), de externe vaginale opening omringd door de vulva die naar het inwendige deel van het vaginale kanaal leidt (figuur 3A-D). Hoewel de VO zich vaak volledig ontwikkelt tussen de leeftijd van 32 en 34 dagen, blijft het geïndividualiseerd voor elk onderwerp en veel over het proces blijft onbekend. Deze opening is gebruikt om het begin van seksuele rijping te identificeren, wat in verband is gebracht met de toename van oestradiol31, de rijping van de hypothalamus-hypofyse-ovariële as32 en de eerste ovulatie bij ratten 17,33,34,35. Recente publicaties hebben echter aangetoond dat het slechts een indirecte marker van reproductieve ontwikkeling is, omdat het kan worden losgekoppeld van hormonale en ontwikkelingsgebeurtenissen in ongunstige omgevingen31 en veranderingen in oestradiolniveaus kan vertegenwoordigen in plaats van seksuele rijping33. Daarom wordt aanbevolen om niet alleen op de VO te vertrouwen om de ontwikkelingsleeftijd te bepalen en als een kwalificatie voor oestruscyclusmonitoring36, maar ook om het uiterlijk van de eerste EST-fase en de cornificatie van de epitheelcellen30 te gebruiken om het begin van seksuele rijping te markeren.

Het lichaamsgewicht is met name gecorreleerd met de ontwikkelingsleeftijd tijdens de adolescentieperiode bij knaagdieren30,37 en kan daarom ook helpen bij het bepalen van de ontwikkelingsleeftijd in deze periode. Voorgestelde mechanismen die verband houden met dit fenomeen omvatten de stimulatie van hormonen die nodig zijn voor de voortplantingsontwikkeling, zoals groeihormoon, en de remming van de hypothalamus-hypofyse bijnier (HPA) -as door de eetlustregulator, leptine30. Het wordt echter niet aanbevolen om deze maatregel te gebruiken als de enige indicator van ontwikkelingsleeftijd vanwege de grote variatie tussen ratten tussen soorten en leveranciers38. De variabiliteit die wordt gezien in de ontwikkeling van de VO en het lichaamsgewicht illustreren het belang van het concept in het algehele experimentele proces.

Vertaling naar de mens: culturele en wetenschappelijke contexten
De translationele relatie van dier-op-mens voortplantingsstudies is bidirectioneel. De resultaten van dierstudies beïnvloeden hoe de menselijke processen worden beoordeeld, benaderd en geanalyseerd39. De perceptie van het menselijke voortplantingssysteem en de bijbehorende processen beïnvloeden hoe dieren worden bestudeerd. In feite komt een van de luidste aanwijzingen voor verder onderzoek op dit gebied voort uit bevooroordeelde sociaal-culturele overtuigingen met betrekking tot hormonale cycli die het wetenschappelijke proces beïnvloeden. Veel van deze conventies zijn afgeleid van een algemene culturele afkeer van het bespreken van menstruatie, wat heeft geleid tot een datakloof in goed onderbouwde kennis 40,41. Dit heeft een spectrum van gevolgen die zich uitstrekken van klein tot dodelijk - van plankhoogte en smartphonegrootte tot het passen van kogelvrije vesten door de politie en gemiste kankerdiagnoses42.

De beschrijving van menstruatie als onhygiënisch, destructief en giftig - gezien in gerespecteerde teksten, media, woordenboeken en medische leringen - wordt bewaard door wetenschappelijke publicaties. Dit gebeurt door onnauwkeurige en bevooroordeelde beschrijvingen van hormonale cycli, de isolatie van het voortplantingssysteem van zijn neuro-endocriene tegenhangers en omgevingsinvloeden, en het reductionistische perspectief van de voltooiing van een cyclus als een 'falen om zwanger te worden'43,44. Dit leidt tot het creëren van ondeugdelijke experimentele praktijken, zoals het weglaten van externe variabelen die hormonale cycli beïnvloeden, het bepalen van start en eindpunten uitsluitend op basis van anatomische ontwikkelingen en het meten van cyclusvoortgang op een lineaire in plaats van circulaire manier. Ondanks de directe correlatie tussen sociaal-culturele factoren en biologische gevolgen, wordt het niet vaak overwogen in de wetenschappelijke literatuur. Door de inspectie van meer holistische publicaties 43,44,45, kunnen onderzoekers deze stigma's deconstrueren en betrouwbaardere en valide experimentele ontwerpen maken.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Alle behandelings- en proceduremethoden die in dit protocol worden beschreven, komen overeen met de richtlijnen voor dierverzorging en -gebruik van de National Institutes of Health (NIH) en zijn goedgekeurd door de Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) van Pepperdine University en de UCLA Chancellor's Animal Research Committee (ARC).

1. Verzorging en gebruik van dieren

  1. Verkrijg vrouwelijke ratten, in aantallen volgens krachtanalyse, en mannelijke ratten om het Whitten-effect of meer consistente cycluste bevorderen 46. Bepaal de stam op basis van het doel van het onderzoek in bekende databases47.
    OPMERKING: De huidige gegevens weerspiegelen die van vrouwelijke adolescenten SD International Genetic Standardization Program (IGS) in de aanwezigheid van mannelijke SD-ratten in zowel Pepperdine University als UCLA-laboratoria als onderdeel van een gezamenlijke studie. Deze ratten arriveerden in afzonderlijke groepen op de leeftijd van 28 dagen en de progressie van de oestruscyclus werd gedurende 10 of 20 dagen gevolgd om verschillen op acute en chronische niveaus aan te tonen, beginnend op de leeftijd van 34 dagen (na een acclimatisatieperiode van 7 dagen).
  2. Houd voordat u ermee omgaat rekening met een quarantaine en / of een acclimatisatieperiode voor fysiologische stabilisatie na transport en aanpassing aan de nieuwe omgeving.
    OPMERKING: Er is een minimumperiode van 3 dagen genoemd, met een aanbevolen periode van 7 dagen 48,49,50,51,52. Over het algemeen is dit afhankelijk van de transportomstandigheden, de dierlijke stam en de onderzoeksdoelstellingen.
  3. Zorg ervoor dat stress wordt verminderd met het gebruik van een acclimatisatieperiode, omdat stress een goede werking van het voortplantingssysteem kan verstoren53. Overcompenseer echter niet door te proberen het te elimineren, omdat een matige hoeveelheid stress gunstig is voor het welzijn van de dieren51.
  4. Host ratten in een temperatuur- (68-79 ° F, d.w.z. 20-26 ° C) en vochtigheidsgecontroleerde (30-70%) omgeving door contact op te nemen met de vivarium- of laboratoriummanagers en deze functies te waarborgen. Distribueer water en chow ad libitum met voedingscomponenten die op de website van het bedrijf worden vermeld en maak eenmaal per week kooien schoon.
    OPMERKING: In deze studie werden de ratten gehuisvest in groepen van 2 gescheiden door geslacht in 19 "x 10" x 8 "doorzichtig herbruikbare plastic kooien en hadden ze toegang tot maïskolf beddengoed dat eenmaal per week werd vervangen. De temperatuur werd gehandhaafd op 70 ° F en de luchtvochtigheid op 35-79%, met een gemiddelde van 62%.
  5. Controleer op de ontwikkeling van ringstaart of ischemische necrose van de staart en tenen op bewijs van lage relatieve vochtigheidsniveaus en extreme temperaturen, die de afwisseling van biologische reacties kunnen veroorzaken.
    OPMERKING: Temperatuur en vochtigheid zijn belangrijk voor het voortplantingssysteem, seksuele rijping en oestrus cycliciteit 54,55,56,57,58.
  6. Zorg voor een goede en uitgebalanceerde verlichting in de hele behuizing door gelijke hoeveelheden lichtbronnen in de laboratoriumruimte af te zetten die werken op een tijdgestuurd licht:donker-systeem.
    OPMERKING: Hier werd een 12:12-h light:dark-cyclus, met lichten aan van 06:00-18:00 uur, bestuurd door lineaire LED-lampen van 2.550 lumen.
  7. Volg lux-vereisten52 op basis van variaties van de pigmentatie, leeftijd, stam, geslacht en hormonale status van dieren.
    OPMERKING: Wanneer onderzoekers de verzamelde celmonsters categoriseren, zorgt consistente verlichting voor een goede visuele detectie en betrouwbare enscenering59. De duur en intensiteit van het licht zijn direct gerelateerd aan het voortplantingssysteem, seksuele rijping en oestruscyclus 54,55,56,57,60,61.

2. Uitrusting en experimentvoorbereiding

  1. Bekijk de categoriserende determinanten (zie figuur 2A): hoe elke fase van de oestruscyclus te identificeren en hoe de microscoop en camera-apparatuur te bedienen.
  2. Zorg ervoor dat elk te controleren onderwerp seksuele rijping heeft bereikt en de juiste indicatoren van ontwikkeling vertoont - VO, lichaamsgewicht en leeftijd. Weeg de ratten en onderzoek ze elke dag op hetzelfde tijdstip op VO voor nauwkeurige vergelijkingen en breng ze over met een goedgekeurde behandelingsmethode. Raadpleeg de aan de universiteit gelieerde dierenarts als een dier meer dan 20% van zijn vorige lichaamsgewicht verliest.
    OPMERKING: De VO blijft caudaal voor de urethrale opening en craniaal voor de anus, gelegen tussen de twee, zoals afgebeeld in figuur 3.
  3. Aangezien deze factoren afhankelijk zijn van de stam, neemt u contact op met de leverancier voor specificaties en houdt u rekening met omgevingsfactoren die specifiek zijn voor het laboratorium62.
    OPMERKING: Over het algemeen zal dit gebeuren tussen de leeftijd van 32-34 dagen en een gemiddeld lichaamsgewicht variërend van 75-150 gram63 voor SD-ratten en wordt aangegeven door een cirkelvormige opening die eerder werd bedekt door een vliezige schede.
  4. Selecteer een bemonsteringsperiode die geschikt is voor de groep ratten die wordt gecontroleerd om te voorkomen dat overgangsmonsters worden verzameld. Bemonster eerst een paar dieren op 2 of 3 verschillende tijdstippen gedurende de dag om de tijd te bepalen waarop de meeste cyclusstadia aanwezig zijn (bijvoorbeeld bemonstering om 12:00 uur, 13:00 uur en 14:00 uur voor verschillende dieren). Voltooi de vaginale lavage elke dag op hetzelfde tijdstip voor een consistente en betrouwbare stadiëring.
    OPMERKING: Er is gemeld dat de uren tussen 12:00 en 14:00 uur het beste zijn voor het vastleggen van alle etappes. In dit onderzoek vond estrouscyclusmonitoring plaats tussen 12:00 en 14:00 uur, afgehandeld met de compressie-achtige hold (zie stap 3.4). Het belang van de timing van oestruscyclusmonitoring ten opzichte van andere experimentele interventies (bijv. Gedragsconditionering, medicatie) is een zich ontwikkelend onderzoeksgebied en kan verder worden onderzocht11. Het bepalen van de duur van de oestruscyclusmonitoring is studieafhankelijk en kan verder worden onderzocht in gepubliceerde studies11,33.
  5. Verwijder de beschermkap van de microscoop en bevestig de camera aan de computer door de beschermklep van de cameralens te verwijderen en de lens over het oculair van de microscoop te plaatsen.
  6. Open vervolgens de vooraf geselecteerde software op de computer. Als u de software wilt gebruiken die in dit onderzoek is geselecteerd, selecteert u de camera die is aangesloten op de USB aan de linkerkant van het scherm, onder het tabblad Cameralijst. Zorg ervoor dat de USB-camera correct is aangesloten op de computer, die Geen apparaat leest op het tabblad Met het label Cameralijst, zo niet.
  7. Zodra de USB-camera onder het tabblad is geselecteerd, schakelt u de microscooplichtschakelaar op de basis in.
  8. Maak een map op de computer die is aangewezen voor de voorbeeldfoto's van de cel. Maak een bestandsmap voor elke afzonderlijke dag dat gegevens worden verzameld, voorbereid voordat afbeeldingen worden gemaakt.
  9. Met de apparatuur voorbereid, haalt u de kooi van de proefpersoon uit de wachtplaats en brengt u deze naar het monsterverzamelstation.

3. Verzameling van vaginale cellen

  1. Haal een wegwerpspuit op en vul elk van de spuiten met 0,2 ml steriele 0,9% NaCl. Als er luchtbellen aanwezig zijn, veeg dan voorzichtig met de vatspuit totdat alle luchtbellen de open punt van de spuit hebben bereikt en verdrijf de lucht. Als er nog luchtbellen aanwezig zijn, verdrijft u de oplossing terug in de NaCl-recipiënt en vult u deze bij totdat er geen luchtbellen zijn.
    OPMERKING: Overmatig vegen kan leiden tot de vorming van meer luchtbellen.
  2. Breng elke spuit terug naar de plastic verpakking om een steriel veld te behouden, met de punt van de spuit in het verzegelde gedeelte van de verpakking.
  3. Open de kooi en til het onderwerp voorzichtig op aan de basis van de staart of de romp van het lichaam, waarbij het deksel van de kooi wordt gesloten om te voorkomen dat anderen naar buiten gaan. Selecteer een houderijmethode uit de onderstaande methoden op basis van persoonlijke voorkeur en dierlijke respons.
  4. Gebruik de compressie-achtige hold voor adolescente ratten door het onderwerp tegen het bovenste borstgebied te plaatsen, waarbij de neus van de proefpersoon naar de grond wijst. Voordat u met het wattenstaafje begint, moet u ervoor zorgen dat het onderwerp voldoende is samengedrukt om beweging te voorkomen, maar comfortabel en veilig in het ruim ligt. Stel het vaginale kanaal van de proefpersoon bloot door de staart voorzichtig te buigen voordat u de spuit inbrengt.
  5. Gebruik de Hind Leg Lift voor volwassen ratten door de voorpoten van het dier aan de bovenkant of zijkant van de kooi te plaatsen, terwijl de staart en achterpoten worden vastgehouden met een zachte houdgreep tussen de eerste en tweede vinger, waardoor de duim vrij blijft om de spuit te bedienen64.
  6. Laat de dieren wennen aan de hantering en monitoring. Behandel de dieren voorzichtig maar veilig om overtollige stress te verminderen en de onderzoeker te beschermen tegen agressie zoals bijten.
    OPMERKING: De eerste paar dagen van monitoring leveren mogelijk niet de gewenste resultaten op omdat de dieren aan hun omstandigheden wennen. Het hanteren van de dieren om lichaamsgewichten te verzamelen tijdens de acclimatisatieperiode kan deze overgang helpen33.
  7. Terwijl u de spuit stabiel houdt met de wijsvinger en middelvinger, plaatst u de punt van de spuit (niet meer dan 2 mm) in een hoek parallel aan het vaginale kanaal. Verdrijft de NaCl langzaam in het kanaal door de zuiger naar binnen te duwen. Steek de spuit niet verder in het kanaal, omdat dit de oestruscyclus kan verstoren.
  8. Haal de NaCl uit het vaginale kanaal door de zuiger van de spuit weg te trekken van de epitheliale voering (naar boven). Als het moeilijk is om het onderwerp tijdens dit proces in het ruim te houden, plaats ze dan terug in de kooi voor een korte rustperiode voordat je NaCl-extractie probeert.
  9. Zodra het celmonster is verzameld, plaatst u het onderwerp terug in de kooi en herhaalt u deze procedure voor elk dier voordat alle monsters onder de microscoop worden geëvalueerd.
    OPMERKING: Als alternatief kan elk monster worden verzameld en geëvalueerd voordat het naar het volgende dier gaat. Een dier kan een tweede lavage nodig hebben als het monster niet kan worden gecategoriseerd. Dezelfde spuit uit de eerste collectie kan worden hergebruikt als deze niet rechtstreeks in de container in contact komt met de zoutoplossing en alleen voor hetzelfde dier.

4. Evaluatie van een steekproef

  1. Begin de categorisatie door het vaginale vloeistofmonster te onderzoeken dat is geëxtraheerd. Noteer de viscositeit als viskeus of niet-viskeus en de kleuring als ondoorzichtig of transparant op het beschrijvingsdocument of een ander registratiesysteem.
    OPMERKING: Dit gedeelte van het protocol kan worden uitgevoerd op het moment van monsterverzameling of later.
  2. Verwijder 2-3 druppels van de vloeistof op een microscoopglaasje en plaats een microscoopdekselglas bovenop de dia. Plaats het afdekglas op de microscoopglaasje van de bovenkant van de dia naar de bodem of van de ene kant van de dia naar de andere om de vorming van luchtbellen te voorkomen. Laat indien mogelijk ongeveer de helft van het verzamelde monster in de spuit als verder onderzoek nodig is en om te voorkomen dat een teveel aan vocht op de dia wordt geplaatst.
  3. Lokaliseer de verzamelde cellen door de microscoopglaas over het podium te bewegen. Als er te weinig cellen of een grote hoeveelheid puin zijn, verdrijft u de resterende vloeistof op een nieuwe dia en onderzoekt u deze opnieuw. Als de hoeveelheid monster in de spuit onvoldoende is, of als de tweede druppel vergelijkbare problemen vertoont, verzamel dan een ander monster van de proefpersoon voordat u probeert de oestruscyclusfase te identificeren.
  4. Zodra de cellen zijn gelokaliseerd en voordat u de computer of het toetsenbord van de computer aanraakt, verwijdert u de ene handschoen om te voorkomen dat het toetsenbord bevuilt.
  5. Verkrijg afbeeldingen van de celmonsters door te klikken op de functie met het label Snap aan de linkerkant van het softwarepaneel.
  6. Sla het bestand vervolgens op door op Opslaan als te klikken onder het pictogram Bestand in de linkerbovenhoek van de pagina. Sla de foto op in een vooraf gelabelde map op de computer.
    OPMERKING: Voorbeeld labelsjabloon: #subjectnumber_date collected_estrous stage_objective gebruikte lens.
  7. Maak meer dan één foto bij elke objectieflens als er niet veel cellen in elk frame zijn.
    OPMERKING: Voorbeeldlabels voor meerdere afbeeldingen: #1_01/09/2021_EST_4x1 en #1_01/09/2021_EST_4x2.
  8. Herhaal de procedure voor elk verzameld monster onder meerdere objectieven. Neem ten minste één kleinere objectivering op, zoals 4x, en ten minste één grotere objectivering, zoals 20x.
  9. Upload de afbeeldingen naar een gedeelde schijf / map of een externe harde schijf, zodat alle betrokken onderzoekers toegang hebben tot de bestanden en er back-upkopieën beschikbaar zijn.

5. Fase categorisatie

  1. Stel het computerscherm in om tegelijkertijd de gemaakte foto's en het opnameblad te bekijken (figuur 4A-C).
    OPMERKING: Hierdoor kan de documentatie plaatsvinden tijdens het bekijken van het verzamelde monster. Dit deel van het protocol kan worden voltooid op het moment van monsterverzameling of later.
  2. Bepaal welke celtypen in het voorbeeld aanwezig zijn. Kies uit de vier opties in stap 5.2.1-5.2.4 met behulp van de criteria en noteer de bevindingen.
    1. Geanucleeerde verhoornde epitheelcellen (AKE)/verhoornde epitheelcellen
      1. Zoek naar gekartelde of hoekige cellen, zoals te zien in figuur 2B en figuur 5C, die ondanks het ontbreken van kernen lichtronde gebieden (kerngeesten) in de cel kunnen vertonen die vertegenwoordigen waar een kern ooit aanwezig was. Gebruik een hogere vergroting, zoals 20x en hoger, om onderscheid te maken tussen dergelijke nucleated en anucleated cellen.
      2. Gebruik een hogere vergroting om het verhoornde of verhoornde deel van de cel te onderscheiden - een dunne laag cellen zonder kernen en gevuld met keratine - indien gewenst.
        OPMERKING: Naast hun grillige uiterlijk, kunnen deze ook worden onderscheiden door hoe ze kunnen vouwen of demonteren, waardoor gekartelde en langwerpige structuren ontstaan die bekend staan als keratinestaven.
    2. Grote nucleated epitheliale (LNE) cellen
      1. Zoek naar deze typisch ronde tot veelhoekige cellen omhuld door onregelmatige, gekartelde of hoekige randen.
      2. Observeer hoe hun kernen verschillende vormen kunnen aannemen, variërend van intact tot gedegenereerd of pykontisch, met betrekking tot de onomkeerbare condensatie van chromatine in de kern van een cel die sterft of verslechtert, zoals te zien is in figuur 2B en figuur 5D1,2. Let op hoe deze kernen minder ruimte innemen dan het cytoplasma in de cel, met een lagere nucleaire tot cytoplasmatische (N: C) verhouding dan de kleine epitheelcellen. Kijk uit voor cytoplasmatische korrels die te zien zijn bij hogere vergrotingen13.
    3. Leukocyten (LEUs)/neutrofielen/polymorfonucleaire cellen
      1. Zoek naar deze compacte, bolvormige cellen met multilobulated kernen (vandaar bekend als polymorfonucleaire cellen), die verdwijnen naarmate de cel volwassen wordt (figuur 2B en figuur 5A). Hogere vergroting (bijv. 40x) kan worden gebruikt om de multilobulated kernen te observeren.
        OPMERKING: Bij het verzamelen en bereiden kunnen deze cellen condenseren, vouwen of scheuren.
    4. Kleine nucleated epitheliale (SNE) cellen
      1. Kijk uit voor deze ronde tot ovaalvormige cellen die groter zijn dan de hierboven beschreven neutrofielen.
      2. Observeer de ronde kernen van deze niet-gekeratiniseerde epitheelcellen (figuur 2B), die een grotere hoeveelheid ruimte innemen dan het cytoplasma in de cel, waardoor een hogere N: C-verhouding ontstaat ten opzichte van grote epitheelcellen.
        OPMERKING: Bij het verzamelen en voorbereiden kunnen deze cellen zich vouwen of overlappen om een vorm te creëren die lijkt op een tekenreeks of balk, zoals weergegeven in figuur 5B1.
  3. Onderzoek hoe de cellen in het monster zijn georganiseerd voor elke objectivering. Gebruik de onderste objectivering, zoals 4x, om een representatieve weergave van de algehele celindeling weer te geven. Noteer of de cellen samengeklonterd (C), gelijkmatig gedispergeerd (ED) of willekeurig gedispergeerd (RD) zijn (zie figuur 4C) en noteer de specifieke organisatie van elk celtype (bijvoorbeeld kleine epitheelcellen met kernen zijn samengeklonterd en neutrofielen zijn gelijkmatig verdeeld).
  4. Schat vervolgens visueel de totale celhoeveelheid (een smidge, matig, talrijk) en de individuele celhoeveelheden (percentage van elk aanwezig celtype).
    OPMERKING: Een smidge vertegenwoordigt het kleinste aantal aanwezige cellen dat kan worden gebruikt om de steekproefcategorisatie te bepalen, talrijke vertegenwoordigt de aanwezigheid van een ontelbaar aantal cellen die ofwel de meeste, zo niet alle ruimte op de dia vertegenwoordigen of op elkaar zijn gestapeld, en een matig aantal cellen vertegenwoordigt een relatief gemiddeld aantal cellen (voorbeelden gezien in figuur 5A-D en figuur 6A-D).
  5. Noteer of er afwijkingen zijn van de vermelde criteria of aspecten die typisch zijn voor het specifieke onderwerp in de categorie 'afwijkingen' en raadpleeg indien nodig een dierenarts.
  6. Bepaal welke oestruscyclusfase in het voorbeeld wordt gepresenteerd met behulp van de categoriserende componenten en de onderstaande beschrijvingen.
    1. Sterven
      1. Zoek naar LEUs als het dominante of enige aanwezige celtype, gerangschikt op een samengeklonterde manier aan het begin van DIE, maar meer verspreid in late stadia.
        OPMERKING: Tijdens de overgang naar DIE kan de hoeveelheid cellen afnemen naarmate de epitheelcellen beginnen af te breken, zoals te zien is in figuur 6D1. Tegelijkertijd begint het aantal LEUs toe te nemen en hebben ze de neiging om in eerste instantie op een samengeklonterde manier te worden gerangschikt en zich in de loop van de tijd te verspreiden.
      2. Merk op dat de totale hoeveelheid cellen relatief laag kan zijn, meestal in de latere stadia van de DIE-periode, op de tweede of derde dag.
      3. Let op de grote hoeveelheid slijm die in deze fase aanwezig kan zijn, die zich presenteert als geconcentreerde strengen LEUs (figuur 5A1). Let op kleine klonten of cellulaire strengen SNE-cellen die de LEUs vergezellen tijdens late fasen in de overgang naar PRO (figuur 5A1,2).
      4. Observeer het stroperige en ondoorzichtige uiterlijk van de vaginale vloeistof bij de overgang naar, volledig overgegaan in en overgang uit DIE.
        OPMERKING: De gemiddelde duur van deze fase is 48 uur tijdens een cyclus van 4 dagen en mogelijk 72 uur tijdens een cyclus van 5 dagen.
    2. PRO
      1. Zoek naar SNE-cellen als de dominante cellen en naar LEUs, LNE en / of AKE-cellen die in lage aantallen kunnen worden gezien. Gebruik hoge objectivering om het granulaire uiterlijk van de SNE-cellen waar te nemen die in deze fase doorgaans in clusters, vellen of strengen zijn gerangschikt (figuur 5B1,2).
      2. Observeer het stroperige en ondoorzichtige uiterlijk van de vaginale vloeistof bij het verplaatsen van DIE naar PRO, en hoe het niet-visueel en transparant wordt zodra het volledig is overgegaan in het PRO-stadium (gemiddelde duur van 14 uur bij ratten).
    3. Est
      1. Zoek naar dominantie van AKE-cellen, een afname van de SNE-cellen in EST en een toename van het aantal en de grootte van cellen naarmate EST11,13 blijft.
      2. Noteer het onderscheidende kenmerk van de vaak geclusterde rangschikking van AKE-cellen, in de vorm van keratinestaven of met spookkernen, die meer willekeurig kunnen worden verspreid in de overgang van PRO (figuur 6B) en naar MET (figuur 6C).
      3. Observeer de karakteristieke niet-visuele en transparante vaginale vloeistof, die kan worden verwacht als de ratten overgaan in, volledig overgegaan in en overgegaan uit EST.
        OPMERKING: De progressie van EST omvat veel diversificatie (figuur 5C en figuur 6B, C). De fase komt meestal voor gemiddeld 24 uur in een cyclus van 4 dagen of mogelijk 48 uur in een cyclus van 5 dagen.
    4. Ontmoette
      1. Zoek naar hogere aantallen SNE- en LNE-cellen terwijl de rat overgaat in MET, hetzij dominant in termen van celverhouding binnen het kanaal of bijna gelijke verhouding tot de LEUs11,13. Noteer verder de grotere hoeveelheid puin in MET en de overgangen dan in andere stadia als gevolg van het epitheelcelverval na EST en het overgaan naar DIE.
      2. Let op het gebrek aan consistente rangschikking zoals alle celtypen worden gezien en in verschillende hoeveelheden (figuur 5D1-3). Zoek echter naar de LEUs die in de beginfasen in de epitheelcellen zijn verpakt of samengeklonterd in de buurt van de epitheelcellen die kunnen terugkeren naar de samengeklonterde opstelling bij de overgang naar DIE.
      3. Observeer het niet-visuele en transparante uiterlijk van de vaginale vloeistof in deze fase en de verandering naar een meer viskeus en ondoorzichtig uiterlijk tijdens het bewegen in DIE.
        OPMERKING: De gemiddelde duur van deze fase is 6-8 uur.
  7. Label voorbeelden in overgangen met het stadium waar het onderwerp naartoe beweegt, met de overgang tussen haakjes om bij te houden wanneer deze worden verzameld. Meer informatie over hoe onderscheid te maken tussen deze 4 fasen en hun overgangen is te vinden in de representatieve resultaten.
    OPMERKING: Aangezien de verzamelde monsters statisch zijn en de cyclus dynamisch, kunnen de dia's overgangen tussen fasen weergeven (zie figuur 6A-D).
  8. Voltooi dit proces voor elk dier totdat de monitoringfase is voltooid.
  9. Op dag 11 (45 dagen oud) of 21 (55 dagen oud), euthanaseer de ratten met 5% isofluraan en 2% zuurstof voor een guillotine onthoofding. Deze tijdstippen kunnen variëren afhankelijk van de aard van het onderzoek.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

De huidige gegevens weerspiegelen die van vrouwelijke adolescente SD International Genetic Standardization Program (IGS) in aanwezigheid van mannelijke SD-ratten. Deze dieren werden gelokaliseerd in zowel Pepperdine University als UCLA-laboratoria als onderdeel van een gezamenlijke studie. Figuur 5 toont meerdere variaties van de 4 cyclusfasen. Figuur 5A1 werd geïdentificeerd als een diestrusmonster met verschillende aanwezige celtypen. Dit voor...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Belangrijkste stappen en belangrijke overwegingen
Bepaalde kritische stappen in het verstrekte protocol vereisen nadruk, vooral binnen de verzameling vaginale cellen. Tijdens de vaginale vloeistofextractie is het zorgen voor de juiste hoek en diepte van het inbrengen van de spuit de sleutel tot het produceren van bevredigende resultaten en uiteindelijk het voorkomen van irritatie, letsel of cervicale stimulatie van het dier. De stimulatie van de baarmoederhals kan een bron van pseudozwaartekrachtinduc...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben geen belangenconflicten te onthullen.

Dankbetuigingen

Deze studie werd uitgevoerd door een door de NIH gefinancierde samenwerking tussen het University of California Los Angeles Brain Injury Research Center (BIRC).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
AmScope 40X-1000X LED Student Microscope + 5MP USB CameraAmScopePart Number: M150C-E5 EAN: 0608729747796 Model Number: M150C-E5https://www.amazon.com/AmScope-40X-1000X-Student-Microscope-Camera/dp/B00O9GNOTA/ref=sr_1_15?crid=2W9CHTG8YSOTV&
keywords=usb+camera+for+microscope&
qid=1572477663&s=industrial
&sprefix=USB+camera+for+micr%2Cindustrial%2C177&sr=1-15
BD PrecisionGlide Needle Pack, 20G x 1, Short BevelFischer Scientific14-815-526https://www.fishersci.com/shop/products/bd-precisionglide-single-use-needles-short-bevel-regular-wall-4/14815526#?keyword=BD%20PrecisionGlide%20Needle%20Pack,%2020G%20x%201
Bed O Cob 1/8NEWCO93009https://andersonslabbedding.com/cob-products/bed-ocobs-8b/
Corning™ Plain Microscope Slides Plain water-white glassFischer Scientific12-553-7Ahttps://www.fishersci.com/shop/products/corning-plain-microscope-slides-microscope-slides-75-x-25mm/125537a
Corning™ Rectangular Cover GlassesFischer Scientific12-553-464https://www.fishersci.com/shop/products/corning-square-rectangular-cover-glasses-rectangle-no-1-thickness-0-13-0-17mm-size-24-x-50mm/12553464#?keyword=true
Kimberly-Clark Professional™ Kimtech Science™ Kimwipes™ Delicate Task Wipers, 1-PlyFischer Scientific06-666https://www.fishersci.com/shop/products/kimberly-clark-kimtech-science-kimwipes-delicate-task-wipers-7/p-211240?crossRef=kimwipes
Labdiet Rodent Lab Chow 50lb, 15001 NEWCO Specialty and LabDiet5012https://www.labdiet.com/products/standarddiets/rodents/index.html
Linear LED Bulb, UL Type A, T8, Medium Bi-Pin (G13), 4,000 K Color Temperature, Lumens 2550 lmGrainger36UX10https://www.grainger.com/product/36UX10?gclid=CjwKCAjw_
LL2BRAkEiwAv2Y3SW1WdNdkf7
zdIxoT9R6n2DGnrToJHjv-pwCTca4ahQyExrrtWvbgwRoCi4
cQAvD_BwE&s_kwcid=AL!2966!3!335676016696
!p!!g!!led18et8%2F4%2F840&ef_id=
CjwKCAjw_LL2BRAkEiwAv2Y3SW
1WdNdkf7zdIxoT9R6n2DGnrToJ
Hjv-pwCTca4ahQyExrrtWvbgwRo
Ci4cQAvD_BwE:G:s&s_kwcid=AL!2966!3!335676016696!p!!g!!led18et8%2F4%2F840&cm_mmc=
PPC:+Google+PPC
Sodium Chloride Injection Bags, 0.9%Live Action SafetyABB079830939https://www.liveactionsafety.com/injection-iv-solution-9-sodium-chloride-1000ml-bags/
Syringe Sterile 1ml  with Luer Slip Tip - 100 Syringes by BH SuppliesBH SuppliesASIN: B07BQDRDC2 UPC: 638632928821https://www.amazon.com/1ml-Syringe-Sterile-Luer-Slip/dp/B07BQDRDC2/ref=sr_1_1_sspa?crid=13S8EGEUK90G7&
keywords=1ml+sterile+syringe&qid=
1572478649&s=industrial
&sprefix=1+ml+steri%2Cindustrial%2C187&sr=1-1-spons&psc=1&spLa=
ZW5jcnlwdGVkUXVhbGlmaWVy
PUEyRlo4NFdZWkJLWkxGJm
VuY3J5cHRlZElkPUEwMDEzODQ
yMjNWNzdWM0hTNzVBRCZlbmNy
eXB0ZWRBZElkPUEwNDI3NzAzM
0E5SzVKMkxaQVc2JndpZGdldE5h
bWU9c3BfYXRmJmFjdGlvbj1jbGlja
1JlZGlyZWN0JmRvTm90TG9nQ2
xpY2s9dHJ1ZQ==
Wire lids and floors Mouse Maternity Wire Bar LidUsed with Rat Cage (10" X 19" x 8"H )Overall dimenAllentownLV40326013https://www.labx.com/item/wire-lids-and-floors-mouse-maternity-wire-bar-lidused/LV40326013#description
Ultra Lightweight Tissue and Plastic 17' x 24' Disposable UnderpadMedlineEAN: 0480196288558
 Global Trade Identification Number: 40080196288558		https://www.amazon.com/Medline-Industries-MSC281224C-Lightweight-Disposable/dp/B00A2G67YU/ref=sr_1_4?keywords=medline+industries+surgical+pads&qid=1572475853&
sr=8-4

Referenties

  1. Schneider, M. Adolescence as a vulnerable period to alter rodent behavior. Cell and Tissue Research. 354 (1), 99-106 (2013).
  2. Camacho-Arroyo, I., Montor, J. M. Beyond reproductive effects of sex steroids. MiniReviews in Medicinal Chemistry. 12 (11), 1037-1039 (2012).
  3. Shah, S. I. A. Systemic non-reproductive effects of sex steroids in adult males and females. Human Physiology. 44, 83-87 (2018).
  4. Wierman, M. E. Sex steroid effects at target tissues: mechanisms of action. Advances in Physiology Education. 31 (1), 26-33 (2007).
  5. An, G., et al. Pathophysiological changes in female rats with estrous cycle disorder induced by long-term heat stress. BioMed Research International. 2020, 4701563(2020).
  6. Donato, J., et al. The ventral premammillary nucleus links fasting-induced changes in leptin levels and coordinated luteinizing hormone secretion. Journal of Neuroscience. 29 (16), 5240-5250 (2009).
  7. Fortress, A. M., Avcu, P., Wagner, A. K., Dixon, C. E., Pang, K. Experimental traumatic brain injury results in estrous cycle disruption, neurobehavioral deficits, and impaired GSK3β/β-catenin signaling in female rats. Experimental Neurology. 315, 42-51 (2019).
  8. Hatsuta, M., et al. Effects of hypothyroidism on the estrous cycle and reproductive hormones in mature female rats. European Journal of Pharmacology. 486 (3), 343-348 (2004).
  9. Jaini, R., Altuntas, C. Z., Loya, M. G., Tuohy, V. K. Disruption of estrous cycle homeostasis in mice with experimental autoimmune encephalomyelitis. Journal of Neuroimmunology. 279, 71-74 (2015).
  10. Tropp, J., Markus, E. J. Effects of mild food deprivation on the estrous cycle of rats. Physiology and Behavior. 73 (4), 553-559 (2001).
  11. Goldman, J. M., Murr, A. S., Cooper, R. L. The rodent estrous cycle: characterization of vaginal cytology and its utility in toxicological studies. Birth Defects Research. Part B, Developmental and Reproductive Toxicology. 80 (2), 84-97 (2007).
  12. Thung, P. J., Boot, L. M., Muhlbock, O. Senile changes in the oestrous cycle and in ovarian structure in some inbred strains of mice. Acta Endocrinologica. 23 (1), 8-32 (1956).
  13. Cora, M. C., Kooistra, L., Travlos, G. Vaginal cytology of the laboratory rat and mouse: Review and criteria for the staging of the estrous cycle using stained vaginal smears. Toxicologic Pathology. 43 (6), 776-793 (2015).
  14. Bosch, L. Biochemical and endocrinological studies of normal and neoplastic tissue: The metabolism of estrogen-producing ovarian tumors and other malignancies in the mouse. , Available from: https://www.translatetheweb.com/?from=nl&to=en&ref=SERP&dl=en&rr=UC&a=https%3a%2f%2frepository.tudelft.nl%2fislandora%2fobject%2fuuid%253A8776d58a-6695-4a38-99ca-0abf607480f0 109-111 (2021).
  15. Van Der Lee, S., Boot, L. M. Spontaneous pseudopregnancy in mice. Acta Physiologica Pharmacologica Neerlandica. 4 (3), 442-444 (1955).
  16. Paccola, C., Resende, C., Stumpp, T., Miraglia, S., Cipriano, I. The rat estrous cycle revisited: a quantitative and qualitative analysis. Animal Reproduction. 10 (4), 677-683 (2013).
  17. Knobil, E., Neill, J. D. Puberty in the rat. The Physiology of Reproduction. , Raven Press Ltd. New York. 363-409 (1994).
  18. Schallmayer, S., Hughes, B. M. Impact of oral contraception and neuroticism on cardiovascular stress reactivity across the menstrual cycle. Psychology, Health & Medicine. 15 (1), 105-115 (2010).
  19. Barreto-Cordero, L. M., et al. Cyclic changes and actions of progesterone andallopregnanolone on cognition and hippocampal basal (stratum oriens) dendritic spinesof female rats. Behavioural Brain Research. 379, 112355(2020).
  20. de Zambotti, M., Trinder, J., Colrain, I. M., Baker, F. C. Menstrual cycle-related variation in autonomic nervous system functioning in women in the early menopausal transition with and without insomnia disorder. Psychoneuroendocrinology. 75, 44-51 (2017).
  21. Maghool, F., Khaksari, M., Khachki, A. S. Differences in brain edema and intracranial pressure following traumatic brain injury across the estrous cycle: Involvement of female sex steroid hormones. Brain Research. 1497, 61-72 (2013).
  22. Bale, T. L., Epperson, C. N. Sex as a biological variable: Who, what, when, why, and how. Neuropsychopharmacology. 42 (2), 386-396 (2017).
  23. Becker, J. B., Prendergast, B. J., Liang, J. W. Female rats are not more variable than male rats: a meta-analysis of neuroscience studies. Biology of Sex Differences. 7, 34(2016).
  24. Prendergast, B. J., Onishi, K. G., Zucker, I. Female mice liberated for inclusion in neuroscience and biomedical research. Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 40, 1-5 (2014).
  25. Joel, D., McCarthy, M. M. Incorporating sex as a biological variable in neuropsychiatric research: where are we now and where should we be. Neuropsychopharmacology. 42 (2), 379-385 (2017).
  26. Long, J. A., Evans, H. M. The oestrous cycle in the rat and its associated phenomena. Memoirs of the University of California. 6, 1(1922).
  27. Westwood, F. R. The female rat reproductive cycle: A practical histological guide to staging. Toxicologic Pathology. 36 (3), 375-384 (2008).
  28. Lenschow, C., Sigl-Glöckner, J., Brecht, M. Development of rat female genital cortex and control of female puberty by sexual touch. PLoS Biology. 15 (9), 2001283(2017).
  29. Lewis, E. M., Barnett, J. F., Freshwater, L., Hoberman, A. M., Christian, M. S. Sexual maturation data for Crl Sprague-Dawley rats: Criteria and confounding factors. Drug and Chemistry Toxicology. 25 (4), 437-458 (2002).
  30. Spear, L. P. The adolescent brain and age-related behavioral manifestations. Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 24 (4), 417-463 (2000).
  31. Gaytan, F., et al. Development and validation of a method for precise dating of female puberty in laboratory rodents: the puberty ovarian maturation score (pub-score). Scientific Reports. 7, 46381(2017).
  32. da Silva Faria, T., da Fonte Ramos, C., Sampaio, F. J. Puberty onset in the female offspring of rats submitted to protein or energy restricted diet during lactation. Journal of Nutritional Biochemistry. 15 (2), 123-127 (2004).
  33. Caligioni, C. S. Assessing reproductive status/stages in mice. Current Protocols in Neuroscience. 48 (1), 1(2009).
  34. Engelbregt, M. J., et al. Delayed first cycle in intrauterine growth-retarded and postnatally undernourished female rats: follicular growth and ovulation after stimulation with pregnant mare serum gonadotropin at first cycle. Journal of Endocrinology. 173 (2), 297-304 (2002).
  35. Pescovitz, O. H., Walvoord, E. C. When puberty is precocious: Scientific and clinical aspects. , Humana Press. (2007).
  36. USEPA, Office of Chemical Safety and Pollution Prevention. Standard Evaluation Procedure Test Guidelines 890.1450: Pubertal development and thyroid function in intact juvenile/peripubertal female rats assay. , Available from: https://www.epa.gov/sites/production/files/2015-07/documents/final_890.1450_female_pubertal_assay_sep_8.24.11.pdf (2011).
  37. Kennedy, G. G., Mitra, J. Body weight and food intake as initiating factors for puberty in the rat. Journal of Physiology. 166 (2), 408-418 (1963).
  38. Sengupta, S., Arshad, M., Sharma, S., Dubey, M., Singh, M. M. Attainment of peak bone mass and bone turnover rate in relation to estrous cycle, pregnancy and lactation in colony-bred Sprague-Dawley rats: Suitability for studies on pathophysiology of bone and therapeutic measures for its management. Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology. 94 (5), 421-429 (2005).
  39. Iannaccone, P. M., Jacob, H. J. Rats. Disease models & Mechanisms. 2 (5-6), 206-210 (2009).
  40. Koff, E., Rierdan, J., Stubbs, M. L. Conceptions and misconceptions of the menstrual cycle. Women & Health. 16 (3-4), 119-136 (1990).
  41. Sahay, N. Myths and misconceptions about menstruation: A study of adolescent school girls of Delhi. Journal of Women's Health and Development. 3 (3), 154-169 (2020).
  42. Criado-Perez, C. The deadly truth about a world built for men - from stab vests to car crashes. , Available from: https://www.theguardian.com/lifeandstyle/2019/feb/23/truth-world-built-for-men-car-crashes (2019).
  43. Chrisler, J. C. The menstrual cycle in a biopsychosocial context. Women's Psychology. Psychology of Women: A Handbook of Issues and Theories. Denmark, F. L., Paludi, M. A. , Praeger Publishers/Greenwood Publishing Group. 193-232 (2008).
  44. Rea, H. H. Re-cycling the menstrual cycle: A multidisciplinary reinterpretation of menstruation. , Available from: https://scholarworks.wmich.edu/masters_theses/3942 (1998).
  45. Sato, J., Nasu, M., Tsuchitani, M. Comparative histopathology of the estrous or menstrual cycle in laboratory animals. Journal of Toxicologic Pathology. 29 (3), 155-162 (2016).
  46. Whitten, W. K. Modification of the oestrous cycle of the mouse by external stimuli associated with the male. Journal of Endocrinology. 13 (4), 399-404 (1956).
  47. Smith, J. R., et al. The year of the rat: The Rat Genome Database at 20: a multi-species knowledgebase and analysis platform. Nucleic Acids Research. 48 (1), 731-742 (2020).
  48. Capdevila, S., Giral, M., Ruiz de la Torre, J. L., Russell, R. J., Kramer, K. Acclimatization of rats after ground transportation to a new animal facility. Laboratory Animals. 41 (2), 255-261 (2007).
  49. Conour, L., Murray, K., Brown, M. Preparation of animals for research-issues to consider for rodents and rabbits. ILAR journal. 47 (4), 283-293 (2006).
  50. National Academies Press (US) Committee on Guidelines for the Humane Transportation of Laboratory Animals. Guidelines for the Humane Transportation of Research Animals. National Academies Press. , (2006).
  51. Obernier, J., Baldwin, R. Establishing an appropriate period of acclimatization following transportation of laboratory animals. ILAR Journal. 47 (4), 364-369 (2006).
  52. National Research Council (US) Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. US) . Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. 8th ed. , National Academies Press. US. (2011).
  53. Pantier, L. K., Li, J., Christian, C. A. Estrous cycle monitoring in mice with rapid data visualization and analysis. Bio-protocol. 9 (17), 1-17 (2019).
  54. Cohen, I., Mann, D. Seasonal changes associated with puberty in female rats: effect of photoperiod and ACTH administration. Biology of Reproduction. 20 (4), 757-776 (1979).
  55. Nelson, J. F., Felicio, L. S., Randall, P. K., Sims, C., Finch, C. E. A longitudinal study of estrous cyclicity in aging C57BL/6J Mice: I. cycle frequency, length and vaginal cytology. Biology of Reproduction. 27 (2), 327-339 (1982).
  56. Pennycuik, P. R. Seasonal changes in reproductive productivity, growth rate, and food intake in mice exposed to different regimens of day length and environmental temperature. Australian Journal of Biological Sciences. 25 (3), 627-635 (1972).
  57. Piacsek, B. E., Hautzinger, G. M. Effects of duration, intensity and spectrum of light exposure on sexual maturation time of female rats. Biology of Reproduction. 10 (3), 380-387 (1974).
  58. Rubinow, M. J., Arseneau, L. M., Beverly, J. L., Juraska, J. M. Effect of the estrous cycle on water maze acquisition depends on the temperature of the water. Behavioral Neuroscience. 118 (4), 863-868 (2004).
  59. JoVE Science Education Database. Lab Animal Research. Fundamentals of Breeding and Weaning. JoVE. , Cambridge, MA. (2020).
  60. Campbell, C., Schwartz, N. The impact of constant light on the estrous cycle of the rat. Endocrinology. 106 (4), 1230-1238 (1980).
  61. Nelson, J. F., Felicio, L. S., Osterburg, H. H., Finch, C. E. Altered profiles of estradiol and progesterone associated with prolonged estrous cycles and persistent vaginal cornification in aging C578L/6J mice. Biology of Reproduction. 24 (4), 784-794 (1981).
  62. Rivest, R. W. Sexual maturation in female rats: Hereditary, developmental and environmental aspects. Experientia. 47 (10), 1026-1038 (1991).
  63. Charles River Laboratories. CD® (Sprague Dawley) IGS Rat. Charles River Laboratories. , Available from: https://www.criver.com/products-services/find-model/cd-sd-igs-rat?region=3611 (2021).
  64. JoVE Science Education Database. Lab Animal Research. Rodent Handling and Restraint Techniques. JoVE. , (2020).
  65. Circulatory System. Biology Corner. , Available from: https://www.biologycorner.com/worksheets/rat_circulatory.html (2021).
  66. Urogenital System. n.d.). Biology Corner. , Available from: https://www.biologycorner.com/worksheets/rat_urogenital.html (2021).
  67. Kiernan, J. A. Anatomical foundations of neuroscience: Mini-atlas of rat's brain. Anatomy and Cell Biology 9535b. , University of Western Ontario. Available from: https://instruct.uwo.ca/anatomy/530/535downs.htm (2008).
  68. Byers, S. L., Wiles, M. V., Dunn, S. L., Taft, R. A. Mouse estrous cycle identification tool and images. PloS One. 7 (4), 1-5 (2012).
  69. Marcondes, F. K., Bianchi, F. J., Tanno, A. P. Determination of the estrous cycle phases of rats: some helpful considerations. Brazilian Journal of Biology. 62 (4), 609-614 (2002).
  70. Champlin, A. K., Dorr, D. L., Gates, A. H. Determining the stage of the estrous cycle in the mouse by the appearance of the vagina. Biology of Reproduction. 8 (4), 491-494 (1973).
  71. Ajayi, A. F., Akhigbe, R. E. Staging of the estrous cycle and induction of estrus in experimental rodents: an update. Fertility Research and Practice. 6 (5), (2020).
  72. Bartos, L. Vaginal impedance measurement used for mating in the rat. Laboratory Animals. 11 (1), 53-55 (1977).
  73. Belozertseva, I. V., Merkulov, D. D., Vilitis, O. E., Skryabin, B. V. Instrumental method for determining the stages of the estrous cycle in small laboratory rodents. Laboratory Animals for Scientific Research. (4), (2018).
  74. Ramos, S. D., Lee, J. M., Peuler, J. D. An inexpensive meter to measure differences in electrical resistance in the rat vagina during the ovarian cycle. Journal of Applied Physiology. 91 (2), 667-670 (2001).
  75. Singletary, S. J., et al. Lack of correlation of vaginal impedance measurements with hormone levels in the rat. Contemporary Topics in Laboratory Animal Science. 44 (6), 37-42 (2005).
  76. Bretveld, R. W., Thomas, C. M., Scheepers, P. T., et al. Pesticide exposure: the hormonal function of the female reproductive system disrupted. Reproductive Biology Endocrinology. 4 (30), (2006).
  77. MacDonald, J. K., Pyle, W. G., Reitz, C. J., Howlett, S. E. Cardiac contraction, calcium transients, and myofilament calcium sensitivity fluctuate with the estrous cycle in young adult female mice. American Journal of Physiology. Heart and Circulatory Physiology. 306 (7), 938-953 (2014).
  78. Koebele, S. V., Bimonte-Nelson, H. A. Modeling menopause: The utility of rodents in translational behavioral endocrinology research. Maturitas. 87, 5-17 (2016).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Meer artikelen verkennen

Sprague Dawley-rattencategorisering van cyclusstadiaidentificatie van celtypenanalyse van vaginaal vochtbeoordeling van de hormonale cyclusstadiering van de reproductieve cyclusadolescente vrouwelijke rattengestandaardiseerd cyclusprotocol
Knaagdier Estrous Cycle Monitoring met behulp van vaginale lavage: niet zoiets als een normale cyclus
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.