Vasculaire reacties van arteriële pulmonale circulatie kunnen worden onderzocht met behulp van intrapulmonale slagader (IPA) en vasculaire gladde spiercellen (VSMC's). De huidige studie beschrijft de isolatie van IPA in detail en de protocollen die worden gebruikt voor het onderzoeken van vasorelaxatie als reactie op fysiologische stimuli.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Isolatie van intrapulmonale slagader en gladde spiercellen om vasculaire reacties te onderzoeken
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
De intrapulmonale slagader (IPA) en vasculaire gladde spiercellen (VSMC's) geïsoleerd uit rattenlongen kunnen worden gebruikt om de onderliggende mechanismen van vasoconstrictie en vasorelaxatie te bestuderen. Na het isoleren van de IPA en VSMC's kunnen de kenmerken van vasculaire reacties in fysiologische en pathologische omstandigheden worden beoordeeld in afwezigheid van extrinsieke factoren zoals zenuwsignalen, hormonen, cytokines, enz. De IPA en VSMC's dienen dus als uitstekende modellen voor het bestuderen van vasculaire fysiologie / pathofysiologie, samen met verschillende experimentele onderzoeken, zoals modulatie door farmacologische middelen, patch-clamp elektrofysiologische analyse, calciumbeeldvorming, enz. Hier hebben we een techniek gebruikt voor het isoleren van de IPA om vasculaire reacties in een orgaanbadopstelling te onderzoeken. IPA-segmenten werden via intraluminale draden op de orgelbadkamer gemonteerd en gestimuleerd door verschillende farmacologische middelen. De veranderingen in de IPA vasculaire tonus (d.w.z. vasoconstrictie en vasorelaxatie) werden geregistreerd met behulp van een isometrische krachttransducer en fysiologische data-analysesoftwareprogramma. We hebben verschillende experimentele protocollen geïmplementeerd, die kunnen worden aangepast om de mechanismen van vasorelaxatie / vasoconstrictie te onderzoeken voor het bestuderen van de farmacologische activiteiten van fytochemische of synthetische geneesmiddelen. De protocollen kunnen ook worden gebruikt om de rol van geneesmiddelen bij het moduleren van verschillende ziekten, waaronder pulmonale arteriële hypertensie, te evalueren. Het IPA-model stelt ons in staat om de concentratie-responscurve te onderzoeken, die cruciaal is bij het beoordelen van de farmacodynamische parameters van geneesmiddelen.
Inleiding
De pulmonale vasculatuur is een vasculair systeem onder lage druk waarbij de belangrijkste functie is om zuurstofarm bloed af te leveren aan het gasuitwisselingsgebied van de longen. De longslagaders in de longen zijn gerangschikt in takken parallel aan de bronchiale boom, waardoor uiteindelijk een uitgebreid netwerk van haarvaten wordt gevormd dat continu is over verschillende longblaasjes en uiteindelijk samenkomt in venules en aderen. De vasculaire tonus van de longslagader wordt gecontroleerd door verschillende factoren, waarbij de interactie tussen het endotheel en vasculaire gladde spiercellen (VSMC's)1 betrokken is.
In deze studie richten we ons op de endotheelafhankelijke en -onafhankelijke vasorelaxatie van de intrapulmonale slagader (IPA). Met betrekking tot de endotheelafhankelijke vasorelaxatie kunnen verschillende mechanismen die optreden op het oppervlak van endotheelcellen de intracellulaire Ca2+ concentratie verhogen (bijv. acetylcholine [ACh] bindt met muscarinereceptor [M3]), wat leidt tot de vorming van stikstofmonoxide (NO), prostacycline (PGl2) en van endotheel afgeleide hyperpolarisatiefactor (EDHF) (figuur 1 ). NO is de belangrijkste van endotheel afgeleide ontspannende factor gesynthetiseerd uit L-arginine door endotheel stikstofmonoxidesynthase (eNOS)2, die vervolgens uit de endotheelcellen dissocieert naar VSMC's (figuur 1) en het oplosbare guanylcyclase (sGC) enzym stimuleert; dit enzym verandert guanosinetrifosfaat (GTP) in cyclisch guanosinemonofosfaat (cGMP), dat eiwitkinase G (PKG) activeert en cytosolische Ca2+ niveaus verlaagt, waardoor vasorelaxatie ontstaat (figuur 1). PGl2 wordt gesynthetiseerd door endotheelcellen via de cyclo-oxygenase (COX) route 3,4. Het bindt met de prostacyclinereceptor (IP) op VSMC's en stimuleert het adenylcyclase (AC) enzym, dat vervolgens adenosinetrifosfaat (ATP) omzet in cyclisch adenosinemonofosfaat (cAMP) (figuur 1)3,4. cAMP activeert eiwitkinase A (PKA), waardoor cytosolische Ca2+ niveaus worden verlaagd en vasorelaxatie5 wordt veroorzaakt (figuur 1). De EDHF-route neemt ook deel aan endotheelafhankelijke vasorelaxatie via verschillende endotheelmediatoren en elektrische gebeurtenissen. De activering van de EDHF-route leidt tot de hyperpolarisatie van VSMC's, waardoor spanningsgestuurde Ca2+ kanalen (VOCCs) worden gesloten, intracellulaire Ca2+ niveaus worden verlaagd en vasorelaxatie6 wordt geïnduceerd. De endotheelonafhankelijke vasorelaxatie vindt direct op VSMC's plaats via verschillende mechanismen, zoals de verlaging van het intracellulaire Ca2+ niveau, de remming van myosine light chain kinase (MLCK), de activering van myosine light chain phosphatase (MLCP) en de vermindering van Ca2+ gevoeligheid voor de contractiele machinerie van VSMC's. In deze studie richten we ons op de vasorelaxatie veroorzaakt door het openen van verschillende K + -kanalen, de blokkade van VOCC's en de remming van Ca2 + -afgifte van het sarcoplasmatisch reticulum7, wat leidt tot de vermindering van intracellulaire Ca2 + -niveaus, waardoor VSMC-myosine lichte ketenfosforylering en myosine-actinebinding of dwarsbrugvorming respectievelijk afnemen, uiteindelijk resulterend in vasorelaxatie.
De techniek voor het evalueren van vasoconstrictie- en vasorelaxatiemetingen in geïsoleerde IPA is goed ingeburgerd voor knaagdieren, maar de gegevens varieerden afhankelijk van de experimentele protocollen. De huidige studie beschrijft de methode die wordt gebruikt om de vasculaire reactiviteit van IPA-preparaten van ratten in vitro te evalueren, die werden gemaakt in afwezigheid van externe factoren die de vasculaire respons in vivo moduleren, zoals zenuwsignalen, hormonen, cytokines, bloeddruk, enz.
We gebruikten verschillende experimentele protocollen met het plantenextract als voorbeeld voor het bestuderen van de vasculaire reactiviteit van IPA. Verschillende blokkers (figuur 1) werden gebruikt om de mechanismen van endotheelafhankelijke en -onafhankelijke vasorelaxatie geïnduceerd door het plantenextract te identificeren. Niettemin kunnen dezelfde protocollen worden aangepast om de vasculaire reacties van IPA op geneesmiddelen, extracten of fytochemicaliën te evalueren die worden gebruikt voor de behandeling van verschillende pulmonale pathologieën.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
De experimenten die in deze studie zijn uitgevoerd, zijn goedgekeurd door de Ethische Commissie van de Naresuan University Animal Care and Use Committee (NUACUC), protocolnummer NU-AE620921, voor de verzorging en het gebruik van dieren voor wetenschappelijke doeleinden.
1. Samenstelling van fysiologische oplossingen
- Formuleer Krebs-oplossing door chemicaliën op te lossen in gedestilleerd water om de uiteindelijke concentraties als volgt te bereiken: 122 mM NaCl, 10 mM HEPES, 5 mM KCl, 0,5 mM KH2PO4, 0,5 mM NaHPO4, 1 mM MgCl2, 1,8 mM CaCl2 en 11 mM glucose8. Stel de pH van de oplossing in op 7,3 met 1 M NaOH en verwarm voor op 37 °C voor gebruik.
- Bereid koude Krebs-oplossing op dezelfde manier als vermeld in stap 1.1. voor gebruik als isolatiemedium van IPA, zoals beschreven in stap 2.
2. Isolatie van de intrapulmonale slagader (IPA)
- Verdoof 8 weken oude mannelijke Wistar-ratten met een intraperitoneale injectie van natriumthiopental (100 mg/kg)9. Controleer de ratten op hun reactie op pijnlijke stimuli in de diepe slaap door een tang te gebruiken die aan hun voeten is geklemd, zorg er vervolgens voor dat de ratten geen terugtrekreactie hebben voordat ze in stap 2.2 worden geëuthanaseerd.
- Knip de middelste thorax van de rat en de hartterminal open met een schaar (maat 14 cm). Lokaliseer vervolgens de wortel van de long met een schaar (maat 14 cm). Oogst de hele long door met een schaar te knippen en dompel deze onder in koude Krebs oplossing 10,11.
- Snijd een enkele kwab van de long met een schaar (maat 11 cm) en leg op een petrischaaltje (maat 9 cm) met de mediale zijde/wortel van de long naar boven gericht (figuur 2A, B). Observeer en identificeer de uitlijning van de ader, bronchia en slagader van boven naar beneden (figuur 2B).
- Knip de bronchus in de lengterichting open met een schaar (maat 11 cm). Gebruik vervolgens de tang (maat 11 cm) om de punt van de bronchus te pakken. Ontleed en verwijder voorzichtig de bronchus en aderen uit de long. Merk op dat de IPA altijd anatomisch is uitgelijnd onder de bronchus.
- Daarna kan de belangrijkste IPA worden gevisualiseerd (figuur 2C). Gebruik de tang (maat 11 cm) om de punt van de IPA te pakken en deze voorzichtig met een schaar (maat 11 cm) uit het longweefsel te ontleden.
- Bewaar de geïsoleerde IPA in koude Krebs-oplossing totdat het orgaanbad is ingesteld (pH 7,3 en temperatuur 4 °C)11.
3. Isolatie van vasculaire gladde spiercellen (VSMC's)
- Isoleer IPA zoals eerder beschreven in stap 2. Knip de hoofdtak van de IPA in de lengterichting open met een schaar (maat 11 cm) en knip in kleine stroken (2 mm) (figuur 3A).
- Dompel de IPA-strips onder in een dissociatiemedium (DM)10,12 met 110 mM NaCl, 5 mM KCl, 0,5 mM KH2PO4, 0,5 mM NaH2PO4, 10 mM NaHCO3, 10 mM HEPES, 0,03 mM fenolrood, 10 mM taurine, 0,5 mM EDTA, 2 mM MgCl2, 11 mM glucose en 0,16 mM CaCl2, en stel de pH in op 7,0 met 1 M NaOH. Incubeer de strips gedurende 1 uur bij 4 °C in DM met 1 mg/ml papaïne, 0,04% runderserumalbumine (BSA) en 0,4 mM 1,4- dithiothreitol (DTT) en incubeer verder bij 37 °C gedurende 15 minuten. Voeg 1 mg/ml collagenase type 1A toe aan DM en incubeer verder bij 37 °C gedurende 5 min.
OPMERKING: DM is een oplossing die wordt gebruikt om de levensvatbaarheid van cellen te behouden. Papaïne en collagenase type 1A zijn enzymen die de extracellulaire matrixeiwitten afbreken om enkele cellen te isoleren. BSA is een serumalbumine-eiwit dat wordt gebruikt voor de stabilisatie van enzymen tijdens opslag en enzymatische reacties. DTT is een reductiemiddel dat wordt gebruikt om de activiteit van enzymen tijdens het celisolatieproces te stabiliseren en te bevorderen. Taurine is aminozwavelzuur dat wordt gebruikt voor het stabiliseren van het celmembraan en de celintegriteit. - Breng de weefsels over in verse DM en dispergeer door zachte trituratie met behulp van een glazen Pasteur-pipet (figuur 3B). Blijf tritureren totdat geïsoleerde VSMC's zichtbaar worden in de badoplossing onder de microscoop (figuur 3C).
OPMERKING: Vers geïsoleerde VSMC's kunnen worden gebruikt voor het bestuderen van vasculaire fysiologie / pathofysiologie, samen met verschillende experimentele onderzoeken, zoals modulatie door farmacologische middelen, patch-clamp elektrofysiologische analyse, calcium beeldvorming, enz. De huidige studie richt zich echter alleen op de vasorelaxatie van geïsoleerde IPA met behulp van de orgelbadtechniek.
4. Orgelbad techniek
- Isoleer IPA zoals eerder beschreven in stap 2. Snijd de hoofdtak van de IPA in ringen van ~2 mm lengte (figuur 2D)13.
- Bevestig de IPA-ringen in orgaanbadkamers (figuur 4) door ze op twee roestvrijstalen draden met een diameter van 40 μm te rijgen (figuur 2E)11,13,14.
- Bevestig roestvrijstalen draden gemonteerd met IPA-ringen aan de isometrische krachtomvormers die zijn aangesloten op het gegevensacquisitieapparaat en het computersysteem dat is geïnstalleerd met de geschikte fysiologische software voor gegevensregistratie en -analyse, en verhoog vervolgens voorzichtig de spanning van de IPA-ring tot 1 g11.
- Laat de segmenten van het vat gedurende ongeveer 45 minuten in evenwicht zijn bij een rustspanning van 1 g. Zorg er tijdens de evenwichtsperiode voor dat de Krebs-oplossing regelmatig om de 15 minuten wordt vervangen. Test na deze periode van equilibratie de levensvatbaarheid van de vaten door hun vasoconstrictie te meten tot een hoge extracellulaire K+ (80 mM) oplossing die 47,4 mM NaCl, 80 mM KCl, 10 mM HEPES, 0,5 mM KH2PO4, 0,5 mM NaHPO4, 1,8 mM CaCl2, 1 mM MgCl2 en 11 mM glucose10,11 bevat.
- Beoordeel de aan- of afwezigheid van endotheel door de ontspanningsrespons op acetylcholine (1 x 10−5 M) te berekenen in ringen die vooraf zijn samengetrokken met fenylefrine (PE, 1 x 10−5 M) (Merk op dat vasculaire contracties stabiel blijven gedurende 1 uur na toevoeging van PE). Beschouw de ringen als endotheel-intact als ze kwantificeren voor meer dan 70% ontspanning (figuur 5A). Als ze minder dan 10% ontspanning hebben, beschouw de ringen dan als endotheel-denuded13 (figuur 5B). Verwijder het endotheel mechanisch door voorzichtig met een kleine draad in het vat te wrijven om denudatie te induceren.
- Nogmaals de arteriële ringen gedurende 30 minuten in evenwicht brengen voordat de testexperimenten beginnen.
5. Vasorelaxante reactie op plantenextract
- Onderzoek het relaxerende effect van het plantenextract door IPA-ringen vooraf samen te trekken met PE (1 x 10−5 M).
- Voeg vervolgens voorzichtig het plantenextract (1-1.000 μg / ml) cumulatief toe aan endotheel-intacte ringen en endotheel-gedenudeerde ringen om vasorelaxatie te induceren (figuur 6A, B) en om een concentratieafhankelijke responscurve te verkrijgen (figuur 6C).
- Zorg ervoor dat het effect van dimethylsulfoxide (DMSO) dat als oplosmiddel wordt gebruikt, ook op dezelfde manier wordt geëvalueerd om als negatieve controle te dienen (figuur 6C).
6. Mechanisme van door plantenextract geïnduceerde vasorelaxatie via het endotheel
- Evalueer het vasorelaxant werkingsmechanisme van het plantenextract via endotheel stikstofmonoxidesynthase (eNOS), cyclo-oxygenase (COX)13 en van endotheel afgeleide hyperpolariserende factor (EDHF) routes door de endotheel-intacte IPA-ringen gedurende 30 minuten te incuberen met de volgende remmers (figuur 7A): 1 x 10−4 M NG-nitro-L-arginine methylester (L-NAME, een eNOS-remmer)9, 1 x 10−5 M indomethacine (een COX-remmer)9, of een combinatie van 1 x 10−7 M apamin (een kleine calcium-geactiveerde kaliumkanaalblokker) en 1 x 10−7 M charybdotoxine (een intermediaire en grootgeleidende calciumgeactiveerde kaliumkanaalblokker), voorafgaand aan het induceren van contracties van IPA met 1 x 10−5 M PE.
- Voeg vervolgens, nadat de samentrekkingen tot PE stabiliseren, cumulatieve concentraties (0,1-1.000 μg / ml) van het plantenextract toe.
- Presenteer de effecten van plantenextract als procentuele ontspanning van de IPA-ringen in aanwezigheid van remmers in vergelijking met de respons van de IPA-ringen zonder remmers (figuur 7B-D) en construeer de concentratie-responscurve.
7. Mechanisme van door plantenextract geïnduceerde vasorelaxatie via vasculaire gladde spieren K + - kanalen
- Voorinfabeer endothelium-gedenudeerde IPA-ringen gedurende 30 minuten met 1 x 10−3 M 4-aminopyridine (4-AP), een blokker van spanningsafhankelijk kaliumkanaal (KV) (figuur 8A), 1 x 10−5 M glibenclamide, een blokker van ATP-gevoelig kaliumkanaal (KATP), of 1 x 10−7 M iberiotoxine, een blokker van grote geleiding Ca2+-geactiveerde K+ kanalen (KCa), voorafgaand aan het induceren van weeën van IPA met 1 x 10−5 M PE.
- Voeg vervolgens cumulatieve concentraties van het plantenextract toe.
- Presenteer de effecten van plantenextract als procentuele ontspanning van de IPA-ringen met remmer in vergelijking met de IPA-ringen zonder remmer (figuur 8B-D) en construeer de concentratie-responscurve.
8. Mechanisme van door plantenextract geïnduceerde vasorelaxatie via remming van extracellulaire calcium (Ca2+) instroom in VSMC's
- Pre-incubeer endothelium-denuded IPA-ringen gedurende 30 minuten in Ca2+-vrije Krebs-oplossing met 1 mM ethyleenglycol-bis (2-aminoethylether)-N,N,N',N'-tetraazijnzuur (EGTA) (figuur 9A).
- Vervang vervolgens de badoplossing door Ca2+ vrije-80 mM K+ oplossing gedurende 10 minuten om de VSMC's te depolariseren, die vervolgens de VOCCs openen (figuur 9A).
- Voeg cumulatief CaCl2 (0,01-10 mM) toe om vasoconstrictie van de IPA te induceren en construeer de concentratie-responscurve (figuur 9A).
- Herhaal dit protocol in dezelfde IPA-ringen, maar incubeer ze vooraf met plantenextract of 1 μM nicardipine (L-type Ca2+ kanaalblokker) in Ca2+ met 80 mM K+ oplossing gedurende 10 minuten gevolgd door de cumulatieve toevoeging van CaCl28.
- Vergelijk ten slotte de contractiele respons met de maximale krimp die eerder werd uitgelokt door controle CaCl2-uitdagingen (figuur 9B).
9. Mechanisme van door plantenextract geïnduceerde vasorelaxatie via remming van intracellulaire calcium (Ca2+) afgifte uit het sarcoplasmatisch reticulum (SR)
- Stel endotheel-gedenudeerde IPA-ringen bloot aan een K+ oplossing van 80 mM gedurende ongeveer 5 minuten, waarbij de VSMC's worden gedepolariseerd, de VOCCs worden geopend en uiteindelijk de Ca2+ belasting in de SR wordt gegenereerd (figuur 10A).
- Vervang de badoplossing gedurende 10 minuten door Ca2+-vrije Krebs-oplossing die 1 mM EGTA bevat (figuur 10A).
- Daag vervolgens de IPA-ringen uit met 1 x 10−5 M PE, die de fosfolipase C / IP3-route activeert, waardoor uiteindelijk Ca2 + van de SR wordt vrijgegeven en een voorbijgaande contractie van IPA wordt opgeroepen (figuur 10A).
- Herhaal hetzelfde protocol om eveneens voorbijgaande contracties naar PE vast te stellen.
- Daag de IPA-ringen opnieuw uit met 80 mM K+ oplossing gedurende ongeveer 5 minuten en vervang vervolgens de badoplossing door Ca2+-vrije Krebs-oplossing met 1 mM EGTA met of zonder het plantenextract gedurende 10 minuten.
- Nogmaals, daag de IPA-ringen uit met 1 x 10−5 M PE.
- Vergelijk de door PE geïnduceerde IPA-contracties tussen de conditie met en zonder het plantenextract (figuur 10B).
10. Statistische analyse
- Druk de resultaten uit als gemiddelde ± SEM. Vergelijk deze waarden met behulp van de Student's t-test of analyseer door een variantieanalyse (ANOVA) gevolgd door de Tukey-Kramer post hoc test met behulp van geschikte statistische software. Beschouw de verschillen op p < 0,05 als statistisch significant. Hier waren er n = 6 ratten/experimenteel protocol.
OPMERKING: De opname van vasoconstrictie en vasorelaxatie kan worden beoordeeld met geschikte software die op de computer is geïnstalleerd. Figuur 5A laat bijvoorbeeld zien dat, wanneer de bloedvaten worden gestimuleerd door de PE die contractie veroorzaakt, dit kan worden waargenomen aan de verhoogde spanning van de oorspronkelijke tracering. De tracering stabiliseert zich in 20-30 minuten, wat als een 100% krimp wordt beschouwd. Daarna stimuleert de ACh de bloedvaten, waardoor ontspanning ontstaat, wat kon worden waargenomen door de verminderde spanning van de oorspronkelijke tracering. De verminderde spanning wordt dus berekend als het percentage ten opzichte van 100% krimp.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Het protocol in deze studie is ontwikkeld om de optimale experimentele omstandigheden te bepalen voor het meten van fysiologische verschijnselen waargenomen in de vasculaire reacties van geïsoleerde IPA-preparaten. De proefexperimenten werden uitgevoerd om de mogelijke uitkomsten te beschrijven die helpen bij het begrijpen van de vasculaire effecten en de mechanistische basis van de vasorelaxante werking van het plantenextract, als volgt.
Vasorelaxant effect van het plantenextract
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
In dit manuscript beschrijven we de techniek voor de isolatie van ratten IPA en VSMC's. Verschillende experimentele protocollen zijn gebruikt om de vasculaire respons van IPA in vitro te onderzoeken, die kan worden gebruikt om het farmacologische effect en de mechanistische basis van IPA-vasorelaxatie geïnduceerd door plantenextract te karakteriseren.
Met betrekking tot de endotheelafhankelijke vaatverwijdende werking van het plantenextract werden verschillende blokkers zoals L-NAME (...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
De auteurs willen graag de National Research Council of Thailand, het Center of Excellence for Innovation in Chemistry (PERCH-CIC) en het International Research Network (IRN61W0005) erkennen voor het verlenen van financiële steun, en de afdeling Fysiologie Faculteit medische Wetenschappen, Naresuan University, voor ondersteuning van onderzoeksfaciliteiten.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 1,4-dithiothreitol (DTT) | Sigma-Aldrich | D0632 CAS NO. 348-12-3 | |
| 4-aminopyridine (4-AP) | Aldrich Chemical | A78403 CAS NO. 504-24-5 | |
| Acetylcholine | Sigma-Aldrich | A6625 CAS NO. 60-31-1 | |
| Apamin | Sigma-Aldrich | A9459 CAS NO. 24345-16-2 | |
| Bovine serum albumin (BSA) | Sigma-Aldrich | A2153 CAS NO. 9048-46-8 | |
| Calcium choride | Ajax Finechem | AJA960 CAS NO. 1707055184 | |
| Charybdotoxin | Sigma-Aldrich | C7802 CAS NO. 95751-30-7 | |
| Collagenase type 1A | Sigma-Aldrich | C9891 CAS NO. 9001-12-1 | Van Clostridium histolyticum |
| D(+)-Glucose monohydrate | Millipore Corporation | K50876942 924 CAS NO. 14431-43-7 | |
| Dimethyl sulfoxide (DMSO) | Sigma-Aldrich | D4540 CAS NO. 67-68-5 | |
| Ethylene glycol-bis (2-aminoethylether)-N,N,N’,N’-tetraacetic acid (EGTA) | Sigma-Aldrich | E3889 CAS NO. 67-42-5 | |
| Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) | Sigma-Aldrich | E9884 CAS NO. 60-00-4 | |
| Forceps 11 cm. | Rustless Dumoxel | - | |
| Forceps 14 cm. | Rustless Dumoxel | - | |
| Glibenclamide | Sigma-Aldrich | G6039 CAS NO. 16673-34-0 | |
| GraphPad Prism program | Software version 5.0 (San Diego, CA, USA) | ||
| HEPES | Sigma-Aldrich | H3375 CAS NO. 7365-45-9 | |
| Iberiotoxin | Sigma-Aldrich | I5904 CAS NO. 1002546960 | recombinant van Mesobuthus tamulus |
| Indomethacin | Sigma-Aldrich | I7378 CAS NO. 53-86-1 | |
| Labchart Program | Software version 7.0 (A.D. Instrument, Castle Hill, Australia). | ||
| Magnesium chloride | Ajax Finechem | 296 CAS NO. 1506254995 | |
| Male Wistar rats | Nomura Siam International Co. Ltd., Bangkok, Thailand | ||
| NG-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME) | Sigma-Aldrich | N5751 CAS NO. 51298-62-5 | |
| Nicardipine | Sigma-Aldrich | N7510 CAS NO. 54527-84-3 | |
| Organ bath 15 mL. | - | - | Specifieke bestelling door de onderzoekers |
| Papain | Sigma-Aldrich | P4762 CAS NO. 9001-73-4 | VanPapaya Latex |
| Phenal red | Sigma-Aldrich | P5530 CAS NO. 34487-61-1 | |
| Phenylephrine | Sigma-Aldrich | P6126 CAS NO. 61-76-7 | |
| Potassium chloride | Kemaus | KA383 CAS NO. 7447-40-7 | |
| Potassium dihydrogenphosphate | Aldrich Chemical | EC231-913-4 CAS NO. 7778-77-0 | |
| S+A2:E36odium chloride | Kemaus | KA465 CAS NO. 7647-14-5 | |
| Scissors 11 cm. | Spall Stainless | - | |
| Scissors 14 cm. | Spall Stainless | - | |
| Sodium bicarbonate | Ajax Finechem | 475 CAS NO. 912466 | |
| Sodium dihydrogenphosphate | Aldrich Chemical | 33,198-8 CAS NO. 7558-80-7 | |
| Sodium hydroxide | Ajax Finechem | 482 CAS NO. 1506196602 | |
| Sodium thiopental | Anesthal | JPN3010002 CAS NO. 1C 314/47 | |
| Taurine | Sigma-Aldrich | T0625 CAS NO. 107-35-7 | |
| Waterbath WBU 45 | Memmert | 2766 CAS NO. - |
Referenties
- Lyle, M. A., Davis, J. P., Brozovich, F. V. Regulation of pulmonary vascular smooth muscle contractility in pulmonary arterial hypertension: Implications for therapy. Frontiers in Physiology. 8, 614(2017).
- Cyr, A. R., Huckaby, L. V., Shiva, S. S., Zuckerbraun, B. S. Nitric oxide and endothelial dysfunction. Critical Care Clinics. 36 (2), 307-321 (2020).
- Ruan, K. -H. Advance in understanding the biosynthesis of prostacyclin and thromboxane A2 in the endoplasmic reticulum membrane via the cyclo-oxygenase pathway. Mini Reviews in Medicinal Chemistry. 4 (6), 639-647 (2004).
- Del Pozo, R., Hernandez Gonzalez, I., Escribano-Subias, P. The prostacyclin pathway in pulmonary arterial hypertension: A clinical review. Expert Review of Respiratory Medicine. 11 (6), 491-503 (2017).
- Morgado, M., Cairrão, E., Santos-Silva, A. J., Verde, I. Cyclic nucleotide-dependent relaxation pathways in vascular smooth muscle. Cellular and Molecular Life Sciences. 69 (2), 247-266 (2012).
- Schmidt, K., de Wit, C. Endothelium-derived hyperpolarizing factor and myoendothelial coupling: The in vivo perspective. Frontiers in Physiology. 11, (2020).
- Fan, G., Cui, Y., Gollasch, M., Kassmann, M. Elementary calcium signaling in arterial smooth muscle. Channels. 13 (1), 505-519 (2019).
- Wisutthathum, S., et al. Extract of Aquilaria crassna leaves and mangiferin are vasodilators while showing no cytotoxicity. Journal of Traditional and Complementary Medicine. 9 (4), 237-242 (2019).
- Kamkaew, N., Paracha, T. U., Ingkaninan, K., Waranuch, N., Chootip, K. Vasodilatory effects and mechanisms of action of Bacopa monnieri active compounds on rat mesenteric arteries. Molecules. 24 (12), 2243(2019).
- Chootip, K., Kennedy, C., Gurney, A. Characterization of P2 receptors mediating contraction of the rat isolated pulmonary vasculature. British Journal of Pharmacology. 131, 167(2000).
- Paracha, T. U., et al. Elucidation of vasodilation response and structure activity relationships of N2, N4-disubstituted quinazoline 2, 4-diamines in a rat pulmonary artery model. Molecules. 24 (2), 281(2019).
- Chootip, K., Gurney, A. M., Kennedy, C. Multiple P2Y receptors couple to calcium-dependent, chloride channels in smooth muscle cells of the rat pulmonary artery. Respiratory Research. 6 (1), 1-10 (2005).
- Wisutthathum, S., et al. Eulophia macrobulbon extract relaxes rat isolated pulmonary artery and protects against monocrotaline-induced pulmonary arterial hypertension. Phytomedicine. 50, 157-165 (2018).
- Kruangtip, O., et al. Curcumin analogues inhibit phosphodiesterase-5 and dilate rat pulmonary arteries. Journal of Pharmacy and Pharmacology. 67 (1), 87-95 (2015).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
