Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Orale gecombineerde antiretrovirale behandeling bij hiv-1 geïnfecteerde gehumaniseerde muizen

2.5K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/63696

⸱

6 oktober 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Division of Hematology and Oncology, David Geffen School of Medicine, University of California, Los Angeles

In dit artikel

Samenvatting

Dit protocol beschrijft een nieuwe methode om orale gecombineerde antiretrovirale geneesmiddelen te leveren die met succes hiv-1-RNA-replicatie bij gehumaniseerde muizen onderdrukken.

Samenvatting

De pandemie van het humaan immunodeficiëntievirus (HIV-1) blijft zich wereldwijd onverminderd verspreiden en momenteel is er geen vaccin beschikbaar tegen HIV. Hoewel gecombineerde antiretrovirale therapie (cART) succesvol is geweest in het onderdrukken van virale replicatie, kan het het reservoir van HIV-geïnfecteerde personen niet volledig uitroeien. Een veilige en effectieve genezingsstrategie voor HIV-infectie vereist multipronged methoden, en daarom zijn de vooruitgang van diermodellen voor HIV-1-infectie cruciaal voor de ontwikkeling van hiv-genezingsonderzoek. Gehumaniseerde muizen recapituleren de belangrijkste kenmerken van hiv-1-infectie. Het gehumaniseerde muismodel kan worden geïnfecteerd door HIV-1 en virale replicatie kan worden gecontroleerd met cART-regimes. Bovendien resulteert cART-onderbreking in een snelle virale rebound bij gehumaniseerde muizen. Toediening van cART aan het dier kan echter ineffectief, moeilijk of toxisch zijn en veel klinisch relevante cART-regimes kunnen niet optimaal worden gebruikt. Naast het feit dat het potentieel onveilig is voor onderzoekers, veroorzaakt toediening van cART door een veelgebruikte intensieve dagelijkse injectieprocedure stress door fysieke beperking van het dier. De nieuwe orale cART-methode voor de behandeling van HIV-1 geïnfecteerde gehumaniseerde muizen die in dit artikel worden beschreven, resulteerde in onderdrukking van viremie onder het detectieniveau, verhoogde snelheid van CD4 + -herstel en verbeterde algehele gezondheid bij HIV-1 geïnfecteerde gehumaniseerde muizen.

Inleiding

De levensverwachting van personen die met chronisch humaan immunodeficiëntievirus (HIV) zijn geïnfecteerd, is aanzienlijk verbeterd met combinatie antiretrovirale behandeling (cART)1,2. cART vermindert met succes de HIV-1-replicatie en verhoogt het aantal CD4 + T-cellen tot normaliteit bij de meerderheid van hiv-1 chronisch geïnfecteerde deelnemers3, wat resulteert in een verbeterde algehele gezondheid en dramatisch verminderde ziekteprogressie4. Het latente HIV-1-reservoir wordt echter zelfs vastgesteld wanneer ART wordt geïnitieerd tijdens acute infectie 5,6,7. Reservoirs blijven jarenlang bestaan tijdens ART en snelle virale rebound na ART-onderbreking is goed gedocumenteerd 8,9. Mensen met hiv op ART zijn ook vatbaar voor een hoger risico op comorbiditeiten zoals hart- en vaatziekten, kanker en neurostoornissen 10,11,12. Daarom is een functionele remedie voor HIV nodig. Diermodellen voor HIV-1-infectie bieden duidelijke voordelen bij het ontwikkelen en valideren van nieuwe HIV-genezingsstrategieën 13,14,15. Gehumaniseerde muizen, als een klein diermodel, kunnen multilineage menselijke immuuncelreconstitutie in verschillende weefsels bieden, wat de nauwkeurige studie van HIV-infectie mogelijk maakt 16,17,18,19. Onder gehumaniseerde modellen recapituleert het gehumaniseerde beenmerg-lever-thymus (BLT) -model met succes chronische HIV-1-infectie en functionele menselijke immuunresponsen op HIV-1-infectie 20,21,22,23,24. Daarom is het gehumaniseerde BLT-muismodel op grote schaal gebruikt om verschillende aspecten op het gebied van HIV-onderzoek te onderzoeken. Gehumaniseerde BLT-muizen zijn niet alleen gevestigde modellen voor de recapitulatie van persistente HIV-1-infectie en pathogenese, maar ook consequente hulpmiddelen voor de evaluatie van op celtherapie gebaseerde interventiestrategieën. De huidige auteurs en anderen hebben aangetoond dat het gehumaniseerde BLT-muizenmodel persistente HIV-1-infectie en pathogenese 25,26,27 samenvat en hulpmiddelen biedt om op celtherapie gebaseerde interventiestrategieën te evalueren 28,29,30,31,32,33.

cART-regimes bestaande uit combinaties van antiretrovirale geneesmiddelen die dagelijks worden ingenomen, onderdrukken hiv-1-replicatie tot het punt dat de virale lading bij succesvol behandelde personen op lange termijn niet detecteerbaar blijft34. De resultaten van de behandeling van hiv-geïnfecteerde gehumaniseerde muizen met klinisch relevante cART-regimes lijken op die waargenomen bij hiv-1 geïnfecteerde art-behandelde personen22: HIV-1-niveaus worden onderdrukt onder de detectiegrenzen en onderbreking van cART resulteert in een rebound van HIV-replicatie uit het latente reservoir35. Subcutane (SC)27,36,37 of intraperitoneale (IP)37,38,39 injectie is de route die vaak wordt gebruikt voor cART-behandeling bij gehumaniseerde muizen. Intensieve dagelijkse injectie veroorzaakt echter stress bij dieren door fysieke terughoudendheid40. Het is ook arbeidsintensief en potentieel onveilig voor onderzoekers vanwege verhoogde blootstelling aan HIV tijdens het gebruik van scherpe voorwerpen. Orale toediening is ideaal om de absorptie, distributie en uitscheiding na te bootsen van cART-geneesmiddelen die worden ingenomen door HIV-1-geïnfecteerde personen. Orale toediening omvat meestal aangepaste en vaak moeizame procedures om de antiretrovirale geneesmiddelen in gesteriliseerd (noodzakelijk vanwege de immunodeficiëntie van de muizen) voedsel 24,37,41 of water 42,43,44,45,46 , die al dan niet chemisch compatibel zijn met veel antiretrovirale geneesmiddelen, of resulteren in iets dat de muizen niet gemakkelijk zouden eten of drinken (wat de dosis- en medicijnniveaus in het lichaam zou beïnvloeden). De nieuwe perorale cART-toedieningsmethode die hier wordt voorgesteld, overtreft eerdere toedieningspogingen vanwege de compatibiliteit met verschillende soorten antiretrovirale geneesmiddelen, de veiligheid en het gemak van voorbereiding en toediening, en de vermindering van stress en angst bij dieren als gevolg van de dagelijkse injectie.

Tenofovirdisoproxilfumaraat (TDF), Elvitegravir (ELV) en Raltegravir (RAL) zijn slecht in water oplosbare geneesmiddelen. Interessant is dat een verhoogde biologische beschikbaarheid van TDF wordt waargenomen met vet voedsel, wat suggereert dat competitieve remming van lipasen door vet voedsel een zekere bescherming voor TDF47 kan bieden. Daarom werden DietGel Boost-bekers geselecteerd om reguliere knaagdier chow te vervangen als de leveringsmethode op basis van hun bescheiden vetgehalte (20,3 g per 100 g) in vergelijking met gewone knaagdier chow (10 g per 100 g) en een typisch muis vetrijk dieet (40-60 g per 100 g)48. Het totale gewicht van één kopje is 75 g; dus elke beker bevat de hoeveelheid voedsel en dus het medicijn, voldoende voor vijf muizen gedurende 3 dagen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Geanonimiseerd menselijk foetaal weefsel werd commercieel verkregen. Dieronderzoek werd uitgevoerd volgens protocollen die zijn goedgekeurd door de Universiteit van Californië, Los Angeles en (UCLA) Animal Research Committee (ARC) in overeenstemming met alle federale, staats- en lokale richtlijnen. In het bijzonder werden alle experimenten uitgevoerd in overeenstemming met de aanbevelingen en richtlijnen voor huisvesting en verzorging van proefdieren van de National Institutes of Health (NIH) en de Association for the Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care (AALAC) International onder UCLA ARC Protocol Number 2010-038-02B. Alle operaties werden uitgevoerd onder ketamine (100 mg /kg) / xylazine (5 mg / kg) en isofluraanane anesthesie (2-3 vol%) en alle inspanningen werden geleverd om pijn en ongemak bij dieren te minimaliseren.

1. Gehumaniseerde muizen geïnfecteerd met HIV-1

OPMERKING: Gehumaniseerde muizen werden geconstrueerd zoals eerder beschreven in 30,31,49. Het protocol wordt hieronder kort beschreven.

  1. Zuiver CD34 + hematopoietische voorlopercellen uit de menselijke foetale lever via anti-CD34 microbeads volgens het protocol van de fabrikant.
  2. Anesthetiseer 6-8 weken oude NOD/SCID/IL2Rγ−/− (NSG) mannelijke en vrouwelijke muizen en bestraling subletaal (2,7 Gy) vóór de operatie.
  3. Implanteer thymus, afgeleid van dezelfde donor als de foetale lever, onder de niercapsule samen met de lever.
  4. Na implantatie injecteert u muizen intraveneus met 0,5 miljoen tot een miljoen CD34+ cellen.
  5. Verzamel na 8-10 weken 100 μL muizenbloed via retro-orbitale bloeding50 in microcentrifugebuizen met 5 μL EDTA en centrifugeer bij 350 x g gedurende 3 minuten.
  6. Bewaar het plasma bij -80 °C om de virale lading te controleren nadat de muis is geïnfecteerd met HIV-1. Voeg 2 ml 83% NH4C-oplossing toe en incubeer gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur om rode bloedcellen te lyseren.
  7. Voeg 10 ml RPMI toe met 10% foetaal runderserum (FBS) om de lysis te stoppen. Draai op 300 x g gedurende 5 min.
  8. Aspirate supernatant. Kleur cellen met antilichaampaneel (zie Tabel van materialen) en analyseer door flowcytometrie om de entransplantatie van menselijke immuuncellen te controleren.
  9. Infecteer muizen die meer dan 50% van de circulerende CD45+ cellen vertonen door retro-orbitale aderinjectie51,52 met ten minste 200 ng p24 van een HIV-1 stam (d.w.z. NFNSXSL9 30,53,54) met behulp van een insulinespuit. Verzamel tweewekelijks bloed voor flowcytometrie-analyse en om de virale lading te meten.

2. Bereiding van ART-medicijnen

  1. Weeg individuele medicijnen; als u bijvoorbeeld 10 voedselbekers met cART wilt maken, gebruikt u steriele celschrapers om 250 mg FTC (Emtricitabine), 375 mg TDF en 500 mg RAL of ELV af te wegen in individuele steriele centrifugebuizen van 15 ml in een bioveiligheidskast.
  2. Voeg 1 ml DMSO toe aan de FTC-buis van 250 mg (eindconcentratie van 250 mg/ml), voeg 1,5 ml DMSO toe aan de buis van 375 mg TDF (eindconcentratie van 250 mg/ml) en voeg 1 ml DMSO toe aan de buis van 500 mg RAL of ELV (eindconcentratie van 500 mg/ml). Roer of pipetteer het medicijnmengsel totdat het volledig is opgelost en een heldere oplossing is verkregen.
  3. Gebruik een hydrofiel PVDF-membraanfilter van 0,22 μM om oplossingen te steriliseren met een steriele spuit. Individuele geneesmiddeloplossingen kunnen gedurende 12 weken bij -20 °C worden bewaard.
  4. Wanneer u klaar bent voor gebruik, ontdooit u vers één aliquot van elke geneesmiddeloplossing bij 37 °C totdat de oplossing helder wordt. Meng goed met een pipet.
  5. Combineer medicijnen en meng goed om mastermix te maken: 1 ml FTC in DMSO, 1,5 ml TDF in DMSO en 1 ml ELV of RAL in DMSO.
    OPMERKING: Dit bedrag maakt 10 voedselbekers.
  6. Voeg 350 μL cART master mix oplossing toe aan één kopje om één DietGel Boost cART cup te maken.
  7. Voeg 0,75 ml Trimethoprim-Sulfamethoxazol (0,48 mg / ml eindconcentratie) toe aan de cup.
  8. Roer grondig met behulp van 1 ml steriele pipetpunten.
  9. Plaats de voedselbeker met cART uit de originele beker met een microspatel op een petrischaal van 60 mm als dat nodig is. Weeg het voedsel op een weegschaal om de hoeveelheid voedselbeker met cART voor elke kooi te berekenen op basis van het aantal muizen.

3. Toediening van ART-geneesmiddelen aan hiv-1-geïnfecteerde muizen

  1. Haal gewone chow uit de kooi en vervang deze door een voedselbeker met cART.
    OPMERKING: Gemiddeld eet een muis tot 5 g voedsel per dag. Ongeveer één voedselbeker kan gedurende 2 dagen aan vijf muizen worden toegediend.
  2. Ververs cART-voedsel drie keer per week.
  3. Weeg gebruikte bekers om de inname te controleren. Weeg muizen wekelijks om de consumptie te bevestigen.

4. Monitor viral load door real-time PCR

  1. Beoordeel menselijke immuuncellen (CD4- en CD8 T-celniveaus) en HIV-1-replicatie in BLT-muizen elke 2 weken door retro-orbitale bloedingen. Oogst plasma door de instructies in stap 1.5-1.8 te volgen.
  2. Controleer plasma virale ladingen van muizen geïnfecteerd met HIV-1 voor en tijdens orale cART toediening gedurende 8 weken. Extraheer plasmaviraal RNA uit plasma met behulp van een virale RNA-extractiekit en kwantificeer het door real-time PCR met behulp van de primers en sondes (zie Tabel van materialen) zoals eerder beschreven 27,30,31. Gebruik het volgende fietsprotocol: 48 °C (15 min), 95 °C (10 min), dan fietsen 95 °C (15 s), 60 °C (1 min) gedurende 45 cycli.

5. Beoordeel CD4/CD8-verhoudingen door middel van flowcytometrie

  1. Bereid eencellige suspensies voor uit perifeer bloed van tweewekelijkse bloedingen volgens stappen 1.5-1.8.
  2. Kleur cellen met oppervlaktemarkers en analyseer door flowcytometrie. Gebruik de volgende oppervlaktemarkerantistoffen 27,30,43,49 in flowcytometrie: CD45 (kloon HI30), CD8 (kloon SK1), CD3 (kloon OKT3), CD4 (kloon RPA-T4)27,30,42,49.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Ervan uitgaande dat een gemiddelde muis met een gewicht van 25 g 4 g voedsel per dag consumeert, komt de dagelijkse geneesmiddeldosis via orale inname overeen met 2,88 mg / kg TFV, 83 mg / kg FTC en 768 mg / kg RAL. Om te testen of het geoptimaliseerde voedselregime giftig is en de algehele gezondheid beïnvloedt in vergelijking met dagelijkse injectie van cART, werd het gewicht van muizen wekelijks vóór en tijdens cART gecontroleerd via orale of subcutane injectie. Er waren geen significante gewichtsverschillen vóór toed...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Een orale cART-toedieningsmethode wordt hier ontwikkeld voor HIV-1 geïnfecteerde gehumaniseerde muizen door drie antiretrovirale geneesmiddelen te combineren in voedsel met een hoog voedingsgehalte. In vergelijking met toediening door dagelijkse injecties is orale toediening gemakkelijker te gebruiken, beperkt de toedieningsfrequentie, vermindert de behandeling van dieren, minimaliseert stress en verbetert de veiligheid55. Tot nu toe hebben slechts een paar studies bij gehumaniseerde muizen

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

SK is een van de oprichters van CDR3 Inc. De overige auteurs verklaren dat het onderzoek is uitgevoerd bij afwezigheid van commerciële of financiële relaties die kunnen worden opgevat als een potentieel belangenconflict.

Dankbetuigingen

We willen Drs. Romas Geleziunas en Jeff Murry en de mensen van Gilead bedanken voor het verstrekken van de antiretrovirale geneesmiddelen die in deze studie worden gebruikt. Dit werk werd gefinancierd door NCI 1R01CA239261-01 (to Kitchen), NIH Grants P30AI28697 (de UCLA CFAR Virology Core, Gene and Cell Therapy Core en Humanized Mouse Core), U19AI149504 (PI's: Kitchen &Chen), CIRM DISC2-10748, NIDA R01DA-52841 (naar Zhen), NIAID R2120200174 (PI's: Xie & Zhen), IRACDA K12 GM106996 (Carrillo). Dit werk werd ook ondersteund door het UCLA AIDS Institute, de James B. Pendleton Charitable Trust en de McCarthy Family Foundation.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
60 mm petrischaalThermo Scientific Nunc150288Voor het verdelen van ART-voer
APC anti-human CD8 AntilichaamBiolegend344722Voor flowcytometrie
BD LSRFortessaBD biosciencesVoor het verzamelen van flow-data
CD34 microbeadsMiltenyi Biotec130-046-702Voor NSG-BLT muizen generatie
CentrifugebuizenFalcon14-432-22Voor het oplossen van ART
DietGel BoostClearH2O72-04-5022Voor het maken van ART-voer
ElvitegravirGileadGeschonken van Gilead
EmtricitabineGileadGeschonken van Gilead
FITC anti-human CD3 AntilichaamBiolegend317306Voor flowcytometrie
Flowjo softwareFlowJoVoor flowcytometrie-data-analyse
HIV-1 voorwaarts primer: 5′-CAATGGCAGCAATTTCACCA-3′;IDTAangepastVoor virale lading RT-PCR
HIV-1 sonde: 5′-[6-FAM]CCCACCAACAGGCGGCCT
TAACTG [Tamra-Q]-3′;		IDTAangepastVoor virale lading RT-PCR
HIV-1 omgekeerde primer: 5′-GAATGCCAAATTCCTGCTTGA-3′;IDTAangepastVoor virale lading RT-PCR
Menselijke foetale weefselAdvanced Bioscience Resources, Inc
Muizen, stam NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJThe Jackson Laboratory5557Voor het construeren van de gehumaniseerde muizen
Pacific Blue anti-human CD45Biolegend304022Voor flowcytometrie
PerCP anti-human CD4 AntilichaamBiolegend300528Voor flowcytometrie
QIAamp Viral RNA KitsQiagen 52904Voor het meten van virale lading
RaltegravirMerckGeschonken van Merck
Steriele celschrapersThermo Scientific179693Voor het verdelen van ART-voer
TaqMan RNA-To-Ct 1-Step KitApplied Biosystems4392653Voor plasma virale lading detectie
Tenofovir disoproxil fumaraatGileadGeschonken van Gilead
Trimethoprim-SulfamethoxazolePharmaceutical AssociatesNDC 0121-0854-16Voor het houden van ART-voer steriel. Elke 5mL theelepel bevat
200 mg Sulfamethoxazole, USP
40 mg Trimethoprim, USP
NMT 0.5% Alcohol

Referenties

  1. Antiretroviral Therapy Cohort Collaboration. Life expectancy of individuals on combination antiretroviral therapy in high-income countries: a collaborative analysis of 14 cohort studies. Lancet. 372 (9635), 293-299 (2008).
  2. May, M. T., et al. Impact on life expectancy of HIV-1 positive individuals of CD4+ cell count and viral load response to antiretroviral therapy. AIDS. 28 (8), 1193-1202 (2014).
  3. Autran, B., et al. Positive effects of combined antiretroviral therapy on CD4+ T cell homeostasis and function in advanced HIV disease. Science. 277 (5322), 112-116 (1997).
  4. Palella, F. J., et al. Declining morbidity and mortality among patients with advanced human immunodeficiency virus infection. HIV outpatient study investigators. The New England Journal of Medicine. 338 (13), 853-860 (1998).
  5. Finzi, D., et al. Identification of a reservoir for HIV-1 in patients on highly active antiretroviral therapy. Science. 278 (5341), 1295-1300 (1997).
  6. Ananworanich, J., Dube, K., Chomont, N. How does the timing of antiretroviral therapy initiation in acute infection affect HIV reservoirs. Current Opinion in HIV and AIDS. 10 (1), 18-28 (2015).
  7. Whitney, J. B., et al. Rapid seeding of the viral reservoir prior to SIV viraemia in rhesus monkeys. Nature. 512 (7512), 74-77 (2014).
  8. Siliciano, J. D., et al. Long-term follow-up studies confirm the stability of the latent reservoir for HIV-1 in resting CD4 T cells. Nature Medicine. 9 (6), 727-728 (2003).
  9. Chun, T. W., Moir, S., Fauci, A. S. HIV reservoirs as obstacles and opportunities for an HIV cure. Nature Immunology. 16 (6), 584-589 (2015).
  10. Brothers, T. D., et al. Frailty in people aging with human immunodeficiency virus (HIV) infection. Journal of Infectious Disease. 210 (8), 1170-1179 (2014).
  11. D. A. D. Study Group. Use of nucleoside reverse transcriptase inhibitors and risk of myocardial infarction in HIV-infected patients enrolled in the D:A:D study: a multi-cohort collaboration. Lancet. 371 (9622), 1417-1426 (2008).
  12. Schouten, J., et al. Cross-sectional comparison of the prevalence of age-associated comorbidities and their risk factors between HIV-infected and uninfected individuals: the AGEhIV cohort study. Clinical Infectious Diseases. 59 (12), 1787-1797 (2014).
  13. Policicchio, B. B., Pandrea, I., Apetrei, C. Animal models for HIV cure research. Frontiers in Immunology. 7, 12(2016).
  14. Hessell, A. J., Haigwood, N. L. Animal models in HIV-1 protection and therapy. Current Opinion in HIV and AIDS. 10 (3), 170-176 (2015).
  15. Ambrose, Z., KewalRamani, V. N., Bieniasz, P. D., Hatziioannou, T. HIV/AIDS: in search of an animal model. Trends in Biotechnology. 25 (8), 333-337 (2007).
  16. Melkus, M. W., et al. Humanized mice mount specific adaptive and innate immune responses to EBV and TSST-1. Nature Medicine. 12 (11), 1316(2006).
  17. Lan, P., Tonomura, N., Shimizu, A., Wang, S., Yang, Y. G. Reconstitution of a functional human immune system in immunodeficient mice through combined human fetal thymus/liver and CD34+ cell transplantation. Blood. 108 (2), 487-492 (2006).
  18. Wege, A. K., Melkus, M. W., Denton, P. W., Estes, J. D., Garcia, J. V. Functional and phenotypic characterization of the humanized BLT mouse model. Current Topics in Microbiology and Immunology. 324, 149-165 (2008).
  19. Garcia, J. V. In vivo platforms for analysis of HIV persistence and eradication. The Journal of Clinical Investigation. 126 (2), 424-431 (2016).
  20. Carrillo, M. A., Zhen, A., Kitchen, S. G. The use of the humanized mouse model in gene therapy and immunotherapy for HIV and cancer. Frontiers in Immunology. 9, 746(2018).
  21. Abeynaike, S., Paust, S. Humanized mice for the evaluation of novel HIV-1 therapies. Frontiers in Immunology. 12, 636775(2021).
  22. Marsden, M. D., Zack, J. A. Humanized mouse models for human immunodeficiency virus infection. Annual Review of Virology. 4 (1), 393-412 (2017).
  23. Brainard, D. M., et al. Induction of robust cellular and humoral virus-specific adaptive immune responses in human immunodeficiency virus-infected humanized BLT mice. Journal of Virology. 83 (14), 7305-7321 (2009).
  24. Nischang, M., et al. Humanized mice recapitulate key features of HIV-1 infection: a novel concept using long-acting anti-retroviral drugs for treating HIV-1. PLoS One. 7 (6), 38853(2012).
  25. Garcia-Beltran, W. F., et al. Innate immune reconstitution in humanized bone marrow-liver-thymus (HuBLT) mice governs adaptive cellular immune function and responses to HIV-1 infection. Frontiers in Immunology. 12, 667393(2021).
  26. Cheng, L., et al. Blocking type I interferon signaling enhances T cell recovery and reduces HIV-1 reservoirs. The Journal of Clinical Investigation. 127 (1), 269-279 (2017).
  27. Zhen, A., et al. Targeting type I interferon-mediated activation restores immune function in chronic HIV infection. The Journal of Clinical Investigation. 127 (1), 260-268 (2017).
  28. Khamaikawin, W., et al. Modeling anti-HIV-1 HSPC-based gene therapy in humanized mice previously infected with HIV-1. Molecular Therapy Methods & Clinical Development. 9, 23-32 (2018).
  29. Kitchen, S. G., et al. Engineering antigen-specific T cells from genetically modified human hematopoietic stem cells in immunodeficient mice. PLoS One. 4 (12), 8208(2009).
  30. Zhen, A., et al. Robust CAR-T memory formation and function via hematopoietic stem cell delivery. PLoS Pathogens. 17 (4), 1009404(2021).
  31. Zhen, A., et al. HIV-specific immunity derived from chimeric antigen receptor-engineered stem cells. Molecular Therapy. 23 (8), 1358-1367 (2015).
  32. Zhen, A., Kitchen, S. Stem-cell-based gene therapy for HIV infection. Viruses. 6 (1), 1-12 (2013).
  33. Mu, W., Carrillo, M. A., Kitchen, S. G. Engineering CAR T cells to target the hiv reservoir. Frontiers in Celluar and Infection Microbiology. 10, 410(2020).
  34. Arts, E. J., Hazuda, D. J. HIV-1 antiretroviral drug therapy. Cold Spring Harbour Perspectives in Medicine. 2 (4), 007161(2012).
  35. Denton, P. W., et al. Generation of HIV latency in humanized BLT mice. Journal of Virology. 86 (1), 630-634 (2012).
  36. Kovarova, M., et al. A long-acting formulation of the integrase inhibitor raltegravir protects humanized BLT mice from repeated high-dose vaginal HIV challenges. Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 71 (6), 1586-1596 (2016).
  37. Lavender, K. J., et al. An advanced BLT-humanized mouse model for extended HIV-1 cure studies. AIDS. 32 (1), 1-10 (2018).
  38. Denton, P. W., et al. Targeted cytotoxic therapy kills persisting HIV infected cells during ART. PLoS Pathogens. 10 (1), 1003872(2014).
  39. Marsden, M. D., et al. In vivo activation of latent HIV with a synthetic bryostatin analog effects both latent cell "kick" and "kill" in strategy for virus eradication. PLoS Pathogens. 13 (9), 1006575(2017).
  40. Stuart, S. A., Robinson, E. S. Reducing the stress of drug administration: implications for the 3Rs. Science Report. 5, 14288(2015).
  41. Halper-Stromberg, A., et al. Broadly neutralizing antibodies and viral inducers decrease rebound from HIV-1 latent reservoirs in humanized mice. Cell. 158 (5), 989-999 (2014).
  42. Daskou, M., et al. ApoA-I mimetics reduce systemic and gut inflammation in chronic treated HIV. PLoS Pathogens. 18 (1), 1010160(2022).
  43. Mu, W., et al. Apolipoprotein A-I mimetics attenuate macrophage activation in chronic treated HIV. AIDS. 35 (4), 543-553 (2021).
  44. Daskou, M., et al. ApoA-I mimetics favorably impact cyclooxygenase 2 and bioactive lipids that may contribute to cardiometabolic syndrome in chronic treated HIV. Metabolism. 124, 154888(2021).
  45. Satheesan, S., et al. HIV replication and latency in a humanized NSG mouse model during suppressive oral combinational antiretroviral therapy. Journal of Virology. 92 (7), 02118(2018).
  46. Llewellyn, G. N., et al. Humanized mouse model of HIV-1 latency with enrichment of latent virus in PD-1(+) and TIGIT(+) CD4 T cells. Journal of Virology. 93 (10), 02086(2019).
  47. Kearney, B. P., Flaherty, J. F., Shah, J. Tenofovir disoproxil fumarate: clinical pharmacology and pharmacokinetics. Clinical Pharmacokinetics. 43 (9), 595-612 (2004).
  48. Speakman, J. R. Use of high-fat diets to study rodent obesity as a model of human obesity. International Journal of Obesity (Lond). 43 (8), 1491-1492 (2019).
  49. Zhen, A., et al. Stem-cell based engineered immunity against HIV infection in the humanized mouse model. Journal of Visualized Experiments. (113), e54048(2016).
  50. Mopin, A., Driss, V., Brinster, C. A detailed protocol for characterizing the murine C1498 cell line and its associated leukemia mouse model. Journal of Visualized Experiments. (116), e54270(2016).
  51. Steel, C. D., Stephens, A. L., Hahto, S. M., Singletary, S. J., Ciavarra, R. P. Comparison of the lateral tail vein and the retro-orbital venous sinus as routes of intravenous drug delivery in a transgenic mouse model. Lab Animal (NY). 37 (1), 26-32 (2008).
  52. Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S. Retro-orbital injections in mice. Lab Animal (NY). 40 (5), 155-160 (2011).
  53. Shimizu, S., et al. A highly efficient short hairpin RNA potently down-regulates CCR5 expression in systemic lymphoid organs in the hu-BLT mouse model. Blood. 115 (8), 1534-1544 (2010).
  54. Ladinsky, M. S., et al. Mechanisms of virus dissemination in bone marrow of HIV-1-infected humanized BLT mice. Elife. 8, 46916(2019).
  55. Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 50 (5), 600-613 (2011).
  56. Lamorde, M., et al. Effect of food on the steady-state pharmacokinetics of tenofovir and emtricitabine plus efavirenz in Ugandan adults. AIDS Research and Treatment. 2012, 105980(2012).
  57. Watkins, M. E., et al. Development of a novel formulation that improves preclinical bioavailability of tenofovir disoproxil fumarate. Journal of Pharmaceutical Sciences. 106 (3), 906-919 (2017).
  58. Moccia, K. D., Olsen, C. H., Mitchell, J. M., Landauer, M. R. Evaluation of hydration and nutritional gels as supportive care after total-body irradiation in mice (Mus musculus). Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 49 (3), 323-328 (2010).
  59. Nair, A. B., Jacob, S. A simple practice guide for dose conversion between animals and human. Journal of Basic and Clinical Pharmacy. 7 (2), 27-31 (2016).
  60. Santos, N. C., Figueira-Coelho, J., Martins-Silva, J., Saldanha, C. Multidisciplinary utilization of dimethyl sulfoxide: pharmacological, cellular, and molecular aspects. Biochemical Pharmacology. 65 (7), 1035-1041 (2003).
  61. Kolb, K. H., Jaenicke, G., Kramer, M., Schulze, P. E. Absorption, distribution and elimination of labeled dimethyl sulfoxide in man and animals. Annals of the New York Academy of Sciences. 141 (1), 85-95 (1967).
  62. Yellowlees, P., Greenfield, C., McIntyre, N. Dimethylsulphoxide-incuded toxicity. Lancet. 2 (8202), 1004-1006 (1980).
  63. Swanson, B. N. Medical use of dimethyl sulfoxide (DMSO). Reviews in Clinical & Basic Pharmacology. 5 (1-2), 1-33 (1985).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Tags

Combinatietherapie met antiretrovirale middelengehumaniseerde HIV-1-muizenorale toediening van cARTonderdrukking van virale replicatieherstel van CD4diermodel voor HIVtoediening via dieetgelsubcutane injectieprotocol voor geneesmiddelenbereidingCD4 in perifeer bloed
Orale gecombineerde antiretrovirale behandeling bij hiv-1 geïnfecteerde gehumaniseerde muizen
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.