Methodenartikel

Inductie van oculaire oppervlakteontsteking en verzameling van betrokken weefsels

DOI:

10.3791/63890

⸱

4 augustus 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Internal Medicine 3-Rheumatology and Immunology, Friedrich-Alexander-University Erlangen-Nürnberg and Universitätsklinikum Erlangen, 2Deutsches Zentrum für Immuntherapie, Friedrich-Alexander-University Erlangen-Nürnberg and Universitätsklinikum Erlangen

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Oculaire oppervlakteontsteking schaadt de oculaire oppervlakteweefsels en compromitteert vitale functies van het oog. Het huidige protocol beschrijft een methode om oogontsteking te induceren en gecompromitteerde weefsels te verzamelen in een muismodel van Meibomian gland dysfunction (MGD).

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Oculaire oppervlakteziekten omvatten een reeks aandoeningen die de functies en structuren van het hoornvlies, het bindvlies en het bijbehorende oculaire oppervlaktekliernetwerk verstoren. Meibomklieren (MG) scheiden lipiden af die een bedekkende laag creëren die de verdamping van het waterige deel van de traanfilm voorkomt. Neutrofielen en extracellulaire DNA-vallen bevolken MG en het oculaire oppervlak in een muismodel van allergische oogziekte. Geaggregeerde neutrofiele extracellulaire vallen (aggNETs) formuleren een mesh-achtige matrix bestaande uit extracellulair chromatine dat MG-uitgangen afsluit en MG-disfunctie conditioneert. Hier wordt een methode voor het induceren van oculaire oppervlakteontsteking en MG-disfunctie gepresenteerd. De procedures voor het verzamelen van organen die verband houden met het oculaire oppervlak, zoals het hoornvlies, bindvlies en oogleden, worden in detail beschreven. Met behulp van gevestigde technieken voor het verwerken van elk orgaan, worden ook de belangrijkste morfologische en histopathologische kenmerken van MG-disfunctie getoond. Oculaire exsudaten bieden de mogelijkheid om de ontstekingstoestand van het oculaire oppervlak te beoordelen. Deze procedures maken het onderzoek mogelijk naar actuele en systemische ontstekingsremmende interventies op preklinisch niveau.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Elke oogwenk vult de gladde traanfilm aan die over het hoornvlies is verspreid. De oculaire oppervlakte epithelia vergemakkelijkt de verdeling en juiste oriëntatie van de traanfilm op het oculaire oppervlak. Mucines worden geleverd door het hoornvlies en conjunctiva-epitheelcellen om het waterige deel van de traanfilm afkomstig van de traanklieren op het oogoppervlak te helpen positioneren. Ten slotte scheidt MG lipiden af die een bedekkende laag creëren die de verdamping van het waterige deel van de traanfilmvoorkomt 1,2,3. Op deze manier beschermen de gecoördineerde functies van alle oogorganen het oculaire oppervlak tegen binnendringende pathogenen of letsel en ondersteunen ze kristalhelder zicht zonder pijn of ongemak.

In een gezond oculair oppervlak veegt de oculaire vloeiende afscheiding of oogreum stof, dode epitheelcellen, bacteriën, slijm en immuuncellen weg. Geaggregeerde neutrofiele extracellulaire vallen (aggNETs) formuleren een mesh-achtige matrix bestaande uit extracellulair chromatine en nemen deze componenten op in het oogreum. AggNETs lossen ontstekingen op door de proteolytische afbraak van pro-inflammatoire cytokines en chemokines4. Wanneer ze echter disfunctioneel worden, drijven deze afwijkende aggNETs de pathogenese van ziekten zoals vasculaire occlusies in COVID-195, galstenen6 en sialolithiasis7. Evenzo spelen aggNETs op het oculaire oppervlak een beschermende rol en dragen ze bij aan het oplossen van ontstekingen van het sterk blootgestelde oppervlak8. Ofwel een overdreven vorming of gebrek aan aggNETs in het oogoppervlak kan de stabiliteit van de traanfilm aantasten en / of hoornvlieswonden, cicatriserende conjunctivitis en droge ogen veroorzaken. De obstructie van MG is bijvoorbeeld een belangrijke oorzaak van droge ogen9. Van AggNETs is ook bekend dat ze de stroom van lipidesecretie uit de kanalen van MG dichten en Meibomian gland dysfunction (MGD) veroorzaken. De congestie van MG-openingen door aggNETs veroorzaakt een gebrek aan vetvocht dat het oculaire oppervlak omhult en retrograde opgekropte vloeistof, wat resulteert in disfunctie van de klierfunctie en acinaire schade. Deze disfunctie kan leiden tot traanfilmverdamping, fibrose van de marges op de oogleden, oogontsteking en schadelijke schade aan de MG10,11.

In de loop der jaren zijn er verschillende diermodellen ontwikkeld om het pathologische proces van MGD bij mensen te imiteren. C57BL/6-muizen van 1 jaar hebben bijvoorbeeld geholpen bij het bestuderen van leeftijdsgerelateerde effecten op droge ogen (DED) en MGD, wat de oculaire ziektepathologie weerspiegelt bij patiënten van 50 jaar en oudervan 12,13,14 jaar. Bovendien zijn konijnen geschikte modellen voor het onderzoeken van de effecten van farmacologische interventies. Daarom is het induceren van MGD bij konijnen gemeld door de topische toediening van epinefrine of de systemische introductie van 13-cis-retinoïnezuur (isotretinoïne)15,16,17,18,19.

Hoewel deze diermodellen geschikt waren voor het bepalen van de verschillende factoren die bijdragen aan de pathofysiologie van MGD, waren ze beperkt in hun gebruik. Het muizenmodel van leeftijdsgebonden MGD was bijvoorbeeld ideaal voor het ontcijferen van elementen bij alleen oudere volwassenen, en daarom leken konijnen het meest geschikte diermodel om oculaire oppervlakteziekten te bestuderen, omdat ze het onderzoek van meerdere pathofysiologische mechanismen mogelijk maken. Vanwege het ontbreken van uitgebreide analytische hulpmiddelen om eiwitten aan het oculaire oppervlak te detecteren en omdat veel delen van het konijnengenoom niet zijn geannoteerd, zijn ze echter beperkt voor onderzoeken 20,21.

Bovendien leverden deze diermodellen die werden gebruikt om de pathogenese van droge ogen te onderzoeken, geen adequate details om de immunologische arm van de aandoening te analyseren die de ontsteking van het oculaire oppervlak veroorzaakt. Dienovereenkomstig toonde het muizenmodel van MGD ontwikkeld door Reyes et al. een verband tussen allergische oogziekte bij muizen en MGD bij mensen en benadrukte de immuunetiologie die verantwoordelijk is voor obstructieve MGD21. Dit model associeert allergische oogziekte met een TH17-respons die neutrofielen rekruteert naar het bindvlies en het ooglid, waardoor MGD en chronische oogontsteking ontstaat21. De inductie van MGD en oogontsteking in dit muizenmodel is een waardevol hulpmiddel voor het onderzoeken van stroomopwaartse gebeurtenissen tijdens de ontwikkeling van lokale ontstekingen aangedreven door een voortdurende immuunrespons21. Het huidige protocol beschrijft de oculaire oppervlakteontsteking vergezeld van obstructieve MGD. Bij deze methode worden muizen geïmmuniseerd en na 2 weken gedurende 7 dagen uitgedaagd op het oculaire oppervlak met het immunogeen. Verder worden de stappen beschreven om oculair exsudaat en de bijbehorende oogorganen te isoleren tijdens acute ontsteking en de dissectie van het hoornvlies, bindvlies en oogleden.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Alle procedures met dieren werden uitgevoerd volgens de institutionele richtlijnen voor dierenwelzijn en goedgekeurd door de dierenwelzijnscommissie van de Friedrich-Alexander-Universiteit Erlangen-Neurenberg (FAU) (vergunningsnummer: 55.2.2-2532-2-1217). Vrouwelijke C57Bl/6 muizen in de leeftijd van 7-9 weken werden gebruikt voor deze studie. De muizen werden verkregen uit commerciële bronnen (zie Materiaaltabel) en gehouden in specifieke pathogeenvrije omstandigheden met cycli van 12 uur dag/nacht.

1. Inductie van murine oculaire oppervlakteontsteking

  1. Voer immunogeenvoorbereiding uit voor immunisatie.
    1. Bereid het immunogeen vers op de dag van immunisatie, meng ovalbumine (OVA, 50 mg / ml) en kinkhoesttoxine (100 μg / ml) in zoutoplossing en het adjuvante aluminiumhydroxide (40 mg / ml) (zie materiaaltabel) in een verhouding van 1: 1.
      LET OP: Voer de opening, reconstitutie en immunogeenpreparaat van kinkhoesttoxine uit in een laminaire veiligheidskast. Draag beschermende kleding en vermijd elk contact met de huid.
    2. Incubeer het immunogeen en het adjuvante mengsel bij kamertemperatuur gedurende 30 minuten en laad 100 μL in een spuit van 1 ml.
    3. Voer intraperitoneale injectie van de immunogeenoplossing uit in een niet-verdoofde muis.
      1. Houd de muis zachtjes bij de staart terwijl hij het kooirooster vastpakt. Houd de huid van de rug en het nekgebied tussen de duim en wijsvinger stevig vast en bevestig de staart en onderste ledematen tussen de ring en de pink tegen de palm van de hand.
      2. Houd de vaste muis met zijn kop naar beneden.
      3. Injecteer 100 μL van de bereide immunogeenoplossing in het rechter- of linkerkwadrant van de onderbuikholte.
  2. Voer oculaire oppervlakte-uitdaging uit 2 weken na immunisatie.
    1. Verdoof de muis met isofluraan (2,5%).
    2. Breng 5 μL OVA (50 mg/ml) of zoutoplossing (0,9 % NaCl) per oog aan op beide ogen en wacht tot de druppel door het oog wordt geabsorbeerd. Dit duurt ~5 min.
    3. Herhaal de procedure 1x daags gedurende 7 dagen.
      OPMERKING: De actuele toediening van medicijnen kan op dezelfde manier worden gedaan.

2. Verzameling van oculaire exsudaten

  1. Herstel de oculaire exsudaten gevormd tijdens de challenge fase door direct na de challenge 50 μL steriele zoutoplossing op het oog aan te brengen.
  2. Om een eencellige suspensie te verkrijgen, behandelt u de verzamelde oculaire afscheiding met recombinant MNase (2 x 106 gel U/ml, zie materiaaltabel) dat de cofactor calcium (5 mM) bij 37 °C bevat gedurende 20 minuten.
  3. Centrifugeer bij 400 x g gedurende 7 minuten bij kamertemperatuur.
  4. Isoleer het supernatant en meet de cytokines en chemokines met behulp van multiplexed ELISA volgens de instructies van de fabrikant (zie materiaaltabel).
    OPMERKING: Het verkregen supernatant kan worden gebruikt voor eiwitanalyse en de pellet voor functionele testen zoals immunofenotypering, fagocytose, degranulatie en genexpressie.

3. Excisie van oculaire oppervlakteweefsels

  1. Ontleed de oogleden en oogbol volgens de onderstaande stappen.
    1. Euthanaseer de muis door CO 2-verstikking en cervicale dislocatie.
    2. Plaats de muis op een egaal oppervlak.
    3. Desinfecteer het baangebied rond het oog met een wattenstaafje geïmpregneerd met 70% ethanol.
    4. Maak een incisie tussen het oor en de retro-orbitale sinus en langs het oppervlak boven het plaveiselbot verticaal, waarbij de incisie horizontaal onder het onderste ooglid langs het maxillaire bot en boven het bovenste ooglid langs het voorhoofdsbeen wordt verlengd. Dit vormt een incisie rond het oog (figuur 1).
    5. Houd het ontleedde weefsel voorzichtig rond het oog met behulp van een gebogen tang en trek het weefsel en de oogbol eruit.
    6. Plaats de weggesneden organen in steriel PBS.
    7. Trim overtollig gezichtsspierweefsel rond de weggesneden bovenste oogleden met behulp van een scalpel en onder de stereomicroscoop.
  2. Verzamel het bindvlies volgens de onderstaande stappen.
    1. Plaats het bovenste ooglid op een droge petrischaal onder de stereomicroscoop.
    2. Gebruik een fijn pincet en een scalpel om de witachtige slijmlaag heel voorzichtig uit het binnenoppervlak van het ooglid te pellen.
  3. Ontleed vervolgens het hoornvlies volgens de onderstaande stappen.
    1. Leg de oogbol op een nieuwe droge petrischaal op droogijs gedurende 3 minuten.
    2. Neem de petrischaal in een stabiele positie op het bankoppervlak.
    3. Maak een kleine incisie aan de rand van het hoornvlies naast de limbus met een fijne scherpe schaar.
    4. Verleng de incisie met het scalpel rond de oogbol en scheid de sclera van het hoornvlies.
    5. Verwijder resten van de iris en de lens van de achterkant van het hoornvlies door royaal te spoelen met zoutoplossing.

4. Documentatie van meibomklier (MG) obstructie

  1. Om de MG en zijn openingen te beoordelen, plaatst u de weggesneden oogleden rechtop onder de stereomicroscoop (figuur 2).
  2. Leg beelden vast met epiverlichting met wit licht volgens de belichtingstijd en ISO-instellingen van de camera.
    OPMERKING: Morfometrische analyse van deze beelden biedt betrouwbare kwantificering van de pluggrootte aan de uitlaat van de klieren. De kwantificering kan worden uitgevoerd door met het toverstokgereedschap de oogpluggen te schetsen en het commando "Deeltjes analyseren" van de Image J-software uit te voeren (zie Materiaaltabel).

5. Transilluminatie van oogleden (Meibomian gland morphology)

  1. Om het MG-gebied te beoordelen, plaatst u de weggesneden oogleden in een horizontale positie en schakelt u de achtergrondverlichting van de stereomicroscoop in die is uitgerust met een infraroodcamera (figuur 3).
  2. Maak foto's door de belichtingstijd aan te passen aan de ISO van de camera (zie Materiaaltabel).
    OPMERKING: Infraroodbeeldvorming van deze getransillumineerde oogleden onder de stereomicroscoop kan helpen bij het meten van de vorm en grootte van elke acini. Morfometrische analyse van deze beelden biedt een betrouwbare kwantificering van de grootte en het aantal MG. De kwantificering kan worden uitgevoerd door de MG te schetsen met de toverstoktool en het commando "Deeltjes analyseren" van de Image J-software uit te voeren.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Het huidige protocol beschrijft de opeenvolgende stappen voor het vaststellen van een muizenmodel van oogoppervlakontsteking. De protocollen zijn bedoeld om te laten zien hoe therapeutica lokaal kunnen worden toegepast, oculaire exsudaten kunnen worden verkregen en bijbehorende accessoire organen zoals gezonde en ontstoken oogleden (figuur 2), het hoornvlies en het bindvlies kunnen worden weggesneden. Aandacht moet worden besteed aan het ontleeden van de bovenste oogleden voor de isolatie va...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De olieachtige afscheiding van de Meibomklieren is van groot belang voor een gezond oog22. De obstructie van deze talgklieren door geaggregeerde neutrofiele extracellulaire vallen (aggNETs) die zich op een rij opstellen als parallelle strengen op de tarsale platen van beide oogleden, kan echter de traanfilm verstoren23. Deze verstoring resulteert in Meibomian gland dysfunction (MGD)1 en versnelde traanverdamping en conditioneert de schade aan het ocu...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs hebben geen belangenconflicten te onthullen.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit werk werd gedeeltelijk ondersteund door de Duitse Stichting voor Onderzoek (DFG) 2886 PANDORA Project-No.B3; SCHA 2040/1-1; MU 4240/2-1; CRC1181(C03); TRR241(B04), H2020-FETOPEN-2018-2020 Project 861878, en door de Volkswagen-Stiftung (Grant 97744) aan MH.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
1x PBSGibco
Aluminium HydroxideImject alum Adjuvant7716140 mg/ mL
Eindconcentratie: in vivo: 1 mg/ 100 µL
C57Bl/6 muizen, 7–9 weken oudCharles River Laboratories 
CalciumCarl rothCN93.11 M
Eindconcentratie: 5 mM
Gebogen pincetFST by Dumont SWITZERLAND5/45 11251-35
Fijn scherp schaarFST Roestvrij staal, Duitsland15001-08
Laminair veiligheidskabinetHerasafe
MacrofotografiecameraCanonEOS6D
Macrofotografiecamera (zonder IR-filter)NikonD5300
MnaseNew England biolabsM0247S2 x 106 gel U/mL
Multi-analyt flow assay-kit (Custom mouse 13-plex panel)BiolegendCLPX-200421AM-UERLAN
NaCl 0,9% (zoutoplossing)B.Braun
Ovalbumine (OVA)Endofit, Invivogen9006-59-110 mg/200 µL in zoutoplossing
Pertussis toxine ThermoFisher Scientific PHZ117450 µg/ 500 µL in zoutoplossing
Eindconcentratie: in vivo: 100 µg/ 100 µL
PetrischaalGreiner bio-one628160
SchaarFeather wegwerpschaarNr. 21 Eindconcentratie: in vivo:  300 ng/ 100 µL
StereomicroscoopZeissStemi508
Spuit (voor wassen van hoornvlies/iris)BD Microlane27 G x 3/4 - Nr.20 0,4 x 19 mm
Spuit (voor i.p. immunisatie)BD Microlane24 G1"-Nr 17, 055* 25 mm

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Gilbard, J. P., Rossi, S. R., Heyda, K. G. Tear film and ocular surface changes after closure of the meibomian gland orifices in the rabbit. Ophthalmology. 96 (8), 1180-1186 (1989).
  2. Mishima, S., Maurice, D. M. The oily layer of the tear film and evaporation from the corneal surface. Experimental Eye Research. 1, 39-45 (1961).
  3. Gipson, I. K. The ocular surface: The challenge to enable and protect vision: The Friedenwald lecture. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 48 (10), 4391-4398 (2007).
  4. Hahn, J., et al. Aggregated neutrophil extracellular traps resolve inflammation by proteolysis of cytokines and chemokines and protection from antiproteases. The FASEB Journal. 33 (1), 1401-1414 (2019).
  5. Leppkes, M., et al. Vascular occlusion by neutrophil extracellular traps in COVID-19. EBioMedicine. 58, 102925(2020).
  6. Munoz, L. E., et al. Neutrophil extracellular traps initiate gallstone formation. Immunity. 51 (3), 443-450 (2019).
  7. Schapher, M., et al. Neutrophil extracellular traps promote the development and growth of human salivary stones. Cells. 9 (9), 2139(2020).
  8. Mahajan, A., et al. Frontline science: Aggregated neutrophil extracellular traps prevent inflammation on the neutrophil-rich ocular surface. Journal of Leukocyte Biology. 105 (6), 1087-1098 (2019).
  9. DEWS Definition and Classification Subcommittee. The definition and classification of dry eye disease: Report of the Definition and Classification Subcommittee of the International Dry Eye Workshop. The Ocular Surface. 5 (2), 75-92 (2007).
  10. Nichols, K. K., et al. The international workshop on meibomian gland dysfunction: Executive summary. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 52 (4), 1922-1929 (2011).
  11. Mahajan, A., et al. Aggregated neutrophil extracellular traps occlude Meibomian glands during ocular surface inflammation. The Ocular Surface. 20, 1-12 (2021).
  12. Jester, B. E., Nien, C. J., Winkler, M., Brown, D. J., Jester, J. V. Volumetric reconstruction of the mouse meibomian gland using high-resolution nonlinear optical imaging. The Anatomical Record. 294 (2), 185-192 (2011).
  13. Nien, C. J., et al. Age-related changes in the meibomian gland. Experimental Eye Research. 89 (6), 1021-1027 (2009).
  14. Parfitt, G. J., Xie, Y., Geyfman, M., Brown, D. J., Jester, J. V. Absence of ductal hyper-keratinization in mouse age-related meibomian gland dysfunction (ARMGD). Aging. 5 (11), 825-834 (2013).
  15. Lambert, R. W., Smith, R. E. Pathogenesis of blepharoconjunctivitis complicating 13-cis-retinoic acid (isotretinoin) therapy in a laboratory model. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 29 (10), 1559-1564 (1988).
  16. Jester, J. V., Nicolaides, N., Kiss-Palvolgyi, I., Smith, R. E. Meibomian gland dysfunction. II. The role of keratinization in a rabbit model of MGD. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 30 (5), 936-945 (1989).
  17. Jester, J. V., et al. In vivo biomicroscopy and photography of meibomian glands in a rabbit model of meibomian gland dysfunction. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 22 (5), 660-667 (1982).
  18. Lambert, R., Smith, R. E. Hyperkeratinization in a rabbit model of meibomian gland dysfunction. American Journal of Ophthalmology. 105 (6), 703-705 (1988).
  19. Knop, E., Knop, N., Millar, T., Obata, H., Sullivan, D. A. The international workshop on meibomian gland dysfunction: Report of the subcommittee on anatomy, physiology, and pathophysiology of the meibomian gland. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 52 (4), 1938-1978 (2011).
  20. Huang, W., Tourmouzis, K., Perry, H., Honkanen, R. A., Rigas, B. Animal models of dry eye disease: Useful, varied and evolving (Review). Experimental and Therapeutic Medicine. 22 (6), 1394(2021).
  21. Reyes, N. J., et al. Neutrophils cause obstruction of eyelid sebaceous glands in inflammatory eye disease in mice. Science Translational Medicine. 10 (451), (2018).
  22. Knop, E., Korb, D. R., Blackie, C. A., Knop, N. The lid margin is an underestimated structure for preservation of ocular surface health and development of dry eye disease. Developments in Ophthalmology. 45, 108-122 (2010).
  23. Knop, N., Knop, E. Meibomian glands. Part I: anatomy, embryology and histology of the Meibomian glands. Ophthalmologe. 106 (10), 872-883 (2009).
  24. Nien, C. J., et al. Effects of age and dysfunction on human meibomian glands. Archives of Ophthalmology. 129 (4), 462-469 (2011).
  25. Lio, C. T., Dhanda, S. K., Bose, T. Cluster analysis of dry eye disease models based on immune cell parameters - New insight into therapeutic perspective. Frontiers in Immunology. 11, 1930(2020).
  26. Nguyen, D. D., Luo, L. J., Lai, J. Y. Thermogels containing sulfated hyaluronan as novel topical therapeutics for treatment of ocular surface inflammation. Materials Today Bio. 13, 100183(2022).
  27. Lin, P. H., et al. Alleviation of dry eye syndrome with one dose of antioxidant, anti-inflammatory, and mucoadhesive lysine-carbonized nanogels. Acta Biomaterialia. 141, 140-150 (2022).
  28. Yu, D., et al. Loss of beta epithelial sodium channel function in meibomian glands produces pseudohypoaldosteronism 1-like ocular disease in mice. American Journal of Pathology. 188 (1), 95-110 (2018).
  29. Mauris, J., et al. Loss of CD147 results in impaired epithelial cell differentiation and malformation of the meibomian gland. Cell Death & Disease. 6 (4), 1726(2015).
  30. Ibrahim, O. M., et al. Oxidative stress induced age dependent meibomian gland dysfunction in Cu, Zn-superoxide dismutase-1 (Sod1) knockout mice. PloS One. 9 (7), 99328(2014).
  31. McMahon, A., Lu, H., Butovich, I. A. A role for ELOVL4 in the mouse meibomian gland and sebocyte cell biology. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 55 (5), 2832-2840 (2014).
  32. Miyake, H., Oda, T., Katsuta, O., Seno, M., Nakamura, M. Meibomian gland dysfunction model in hairless mice fed a special diet with limited lipid content. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 57 (7), 3268-3275 (2016).
  33. Schaumberg, D. A., et al. The international workshop on meibomian gland dysfunction: Report of the subcommittee on the epidemiology of, and associated risk factors for, MGD. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 52 (4), 1994-2005 (2011).
  34. Lee, S. Y., et al. Analysis of tear cytokines and clinical correlations in Sjogren syndrome dry eye patients and non-Sjogren syndrome dry eye patients. American Journal of Ophthalmology. 156 (2), 247-253 (2013).
  35. Nakae, S., et al. Antigen-specific T cell sensitization is impaired in IL-17-deficient mice, causing suppression of allergic cellular and humoral responses. Immunity. 17 (3), 375-387 (2002).
  36. von Vietinghoff, S., Ley, K. IL-17A controls IL-17F production and maintains blood neutrophil counts in mice. Journal of Immunology. 183 (2), 865-873 (2009).
  37. Langrish, C. L., et al. IL-23 drives a pathogenic T cell population that induces autoimmune inflammation. Journal of Experimental Medicine. 201 (2), 233-240 (2005).
  38. Chen, Y., et al. Anti-IL-23 therapy inhibits multiple inflammatory pathways and ameliorates autoimmune encephalomyelitis. Journal of Clinical Investigation. 116 (5), 1317-1326 (2006).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Meibomklierdysfunctieneutrofiele extracellulaire trapsoogexudaatverzamelingdissectie van het hoornvliesisolatie van het bindvliesexcisie van het ooglidinfraroodbeeldvorminghistologische analysesingle cell sequencing

Gerelateerde artikelen