Methodenartikel

Transmissie-elektronenmicroscopie: een chirurgisch pathologiehulpmiddel voor neuroblastoom

DOI:

10.3791/63994

⸱

6 juli 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Anatomic Pathology Division of EORLA, Children's Hospital of Eastern Ontario, University of Ottawa, 2Department of Laboratory Medicine and Pathology, University of Alberta, 3Department of Pediatrics, University of Alberta, Stollery Children's Hospital, 4Department of Orthopedics, Tianyou Hospital, Wuhan University of Science and Technology, 5Institute of Pathology, Medical University of Innsbruck

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Pediatrische kleine ronde blauwecellige tumoren zijn een intrigerende en uitdagende verzameling neoplasmata. Daarom kunnen transmissie-elektronenmicroscopie (TEM) en professionele kennis van pediatrische tumoren uiterst waardevol zijn bij chirurgische pathologie. Hier presenteren we een protocol om TEM uit te voeren voor het diagnosticeren van neuroblastoom, een van de meest voorkomende solide tumoren in de kindertijd.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Pediatrische kleine ronde blauwebloedige tumoren (PSRBCT) zijn een intrigerende en uitdagende verzameling neoplasmata. Lichtmicroscopie van kleine ronde blauwecellige tumoren identificeert kleine ronde cellen. Ze herbergen over het algemeen een hyperchromatische kern en een relatief schaars basofiel cytoplasma. Pediatrische kleine ronde blauwbloedige tumoren omvatten verschillende entiteiten. Meestal bevatten ze onder andere Wilms-tumor, neuroblastoom, rhabdomyosarcoom, Ewing-sarcoom, retinoblastoom, lymfoom en kleincellig osteosarcoom. Zelfs met behulp van immunohistochemie kan de differentiële diagnose van deze neoplasmata controversieel zijn bij lichtmicroscopie. Een vage kleuring of een dubbelzinnige achtergrond kan pathologen ervan weerhouden de juiste diagnostische beslissing te nemen. Bovendien kan de moleculaire biologie een overweldigende hoeveelheid gegevens opleveren die het moeilijk is om ze te onderscheiden, en sommige translocaties kunnen in meer dan één categorie worden gezien. Transmissie-elektronenmicroscopie (TEM) kan dus zeer waardevol zijn. Hier leggen we de nadruk op het moderne protocol voor TEM-gegevens van het neuroblastoom. Tumorcellen met klitten van cytoplasmatische processen die neurosecretoire korrels bevatten, kunnen neuroblastoom diagnosticeren.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Het werk van een patholoog kan behoorlijk uitdagend zijn, zowel in de klinische diagnostiek als op het gebied van onderzoek. De evolutie van de lichtmicroscopie in de 18een 19eeeuw was opmerkelijk. De kracht van een elektronenmicroscoop berust voornamelijk op de golflengte van de elektronen, die korter is dan licht 1,2,3. Vóór de komst van de polyklonale en monoklonale antilichamen en hun toepassing in de immunohistochemie, speelde TEM een invloedrijke rol bij het diagnosticeren van kleine ronde blauwbloedige tumoren.

Vanaf de jaren 90 van de vorige eeuw heeft de immunohistochemische benadering het morfologische instrument in de diagnostiekvervangen 4. Momenteel zijn er duizenden nieuwe polyklonale en monoklonale antilichamen gericht tegen antigenen van de kleine ronde blauwcellige tumorgroep 4,6,7,8. In het laatste decennium van de zeer productieve 20eeeuw en het eerste decennium van het begin van de 21eeeuw lijkt de moleculaire biologie, inclusief fluorescentie in situ hybridisatie, van genomische sondes tot sequencing van de volgende generatie, de belangrijke toepassingsrol van immunohistochemie in verschillende laboratoria te hebben vervangen4. De Food and Drug Administration (FDA) in de Verenigde Staten van Amerika, de Canadian Food Inspection Agency (CFIA) van Canada, de Environmental Protection Agency (EPA) of soortgelijke overheidsinstanties in andere landen keuren moleculair biologische protocollen niet altijd goed9. Het lijkt erop dat er veel informatie is die een hele uitdaging is om in te voegen in een pathologierapport dat voor therapeutische doeleinden kan worden gebruikt, en de keuze van het oculaat voor een goed gefinancierd en draaiend laboratoriuminformatiesysteem is van cruciaal belang10. In de tussentijd heeft immunohistochemie tal van valkuilen aan het licht gebracht, waarbij epitheeltumoren mesenchymale markers vertonen en vice versa11. De epitheel-mesenchymale overgang heeft enkele grenzen in pathologiegroepen verward12,13. In de afgelopen jaren is duidelijk geworden dat elektronenmicroscopie in verschillende laboratoria over de hele wereld floreerde14. In het bijzonder is de doorlooptijd van de weefselmonsters afgenomen van weken tot slechts 3 dagen of zelfs minder met behulp van verschillende protocollen die de kleuring met monoklonale of polyklonale antilichamen benaderen 4,10.

Bovendien hielp het toepassen van een elektronische camera in combinatie met de elektronenmicroscoop de pathologen om een snel beeld te krijgen, dat veelzijdig is in verschillende besturingssystemen. Ten slotte is het een uitdaging om sommige antilichamen, zelfs na het ophalen van antigeen, te onthullen in sommige gebieden van necrose of autofagie/ischemie-gerelateerde veranderingen. Tegelijkertijd kan elektronenmicroscopie in veilige handen nog steeds uitstekende resultaten en tips opleveren voor de juiste classificatie van onbekende pathologische tumoren15.

De pediatrische kleine ronde blauwe-bloedige tumorgroep omvat verschillende tumoren, voornamelijk neuroblastoom, Wilms-tumor of nefroblastoom, rhabdomyosarcoom en Ewing-sarcoom. De moleculair-biologische gegevens met betrekking tot de pediatrische groep van kleine ronde blauwe-celtumoren kunnen overweldigend zijn vanwege de toegepaste technieken. De kleine ronde blauwe bloedcellen verschillen mogelijk niet veel van routinematige kleuringen (hematoxyline- en eosinekleuring), en sommige tumoren kunnen afwijkende immunofenotypische kenmerken hebben. De vooruitgang in de moleculaire biologie is enorm geweest sinds de ontdekking van TEM. In de groep van kleine ronde blauwbloedige tumoren kunnen sommige neoplasmata vaker worden aangetroffen dan andere, maar ze moeten worden overwogen. Hoewel het papillaire niercelcarcinoom in wezen geen kleine ronde blauwecellige tumor is, maar voornamelijk papillen bevat, kan het enkele ronde celgebieden vertonen die mogelijk moeten worden onderscheiden van andere bekende kleine ronde blauwecellige tumoren (bijv. Wilms-tumor) met behulp van verschillende ondersteunende technieken16. Uiteindelijk moeten metanefrische stromale tumoren mogelijk ook worden meegenomen in de differentiële diagnose17. De rhabdoïde tumor is een bijzonder kwaadaardige pediatrische tumor die zich onderscheidt van het nier- en extrarenale subtype18.

Neuroblastoom is een van de meest voorkomende solide maligniteiten in de kindertijd en de kindertijd. Neuroblastoomcellen zijn de kwaadaardige cellen van deze solide tumor die verraderlijk ontstaan uit afgeleiden van de primordiale neurale lijst. De diagnose en differentiële diagnose kunnen moeilijk zijn. De natuurlijke biologie heeft de afgelopen decennia opmerkelijke vooruitgang geboekt. De forkhead-familie van transcriptiefactoren wordt gekenmerkt door een duidelijk "forkhead"-domein (FOXO3/FKHRL1). Deze transcriptiefactoren fungeren als een trigger voor apoptose (geprogrammeerde celdood) door de expressie van genen die nodig zijn voor celdood. FOXO3/FKHRL1 wordt geactiveerd door 5-aza-2-deoxycytidine en induceert gedempt caspase-8, en dit complex speelt een cruciale rol bij neuroblastoom. Nucleaire FOXO3 voorspelt ongunstige klinische resultaten en bevordert tumorangiogenese bij neuroblastoom 7,19. Ondanks de vooruitgang op het gebied van moleculaire pathologie blijft de Shimada-classificatie de standaard voor elke patholoog en kinderoncoloog. Het is van cruciaal belang bij het maken van onderscheid tussen gunstige en ongunstige histologie 20,21,22,23.

De grondgedachte voor het ontwikkelen van een eenvoudig protocol voor de elektronenmicroscopie van tumoren die verdacht worden van neuroblastoom houdt verband met de haalbaarheid en soliditeit van het ultrastructureel onderzoek van het weefselmonster. Het wordt zelden veranderd door problemen die vaak worden aangetroffen bij het gebruik van immunohistochemie. De grondgedachte en het protocol zijn de basis geweest van verschillende leerboeken en wetenschappelijke bijdragen aan pediatrische pathologie en elektronenmicroscopie 4,24,25. Dit protocol omvat de ervaring van drie decennia van de auteur en zal zich richten op enkele PSRBCT, met de nadruk op de persoonlijke ervaring en het literatuuronderzoek.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Alle procedures die werden uitgevoerd in studies waarbij menselijke deelnemers betrokken waren, waren in overeenstemming met de ethische normen van de institutionele en/of nationale onderzoekscommissie en met de Verklaring van Helsinki van 1964 en de latere wijzigingen daarvan of vergelijkbare ethische normen. Het elektronenmicroscopieonderzoek maakt deel uit van de normale routine voor microscopisch onderzoek van de ontvangen monsters voor diagnostische doeleinden en vereist geen goedkeuring van het Comité voor Bio-ethiek. Deze studie is retrospectief en respecteert de volledige anonimiteit van de monsters.

1. TEM-protocol voor FFPE (formaline-gefixeerd en in paraffine ingebedd) en glutaaraldehyde-gefixeerde weefselmonsters

  1. Haal de laatste met hematoxyline en eosine bevlekte objectglaasjes en het FFPE-weefselblok op.
  2. Selecteer met een permanente marker het interessegebied op het weefselglaasje en vergelijk dit met het gebied op het weefselblok.
  3. Knip het geselecteerde gebied met een nieuw scheermesje uit het blok en snijd het nauwkeurig in blokjes van 5 mm op filterpapier.
  4. Plaats het filtreerpapier met het opgehaalde weefsel in een geëtiketteerd petrischaaltje. Zet de petrischaal gedurende 15 minuten in een oven van 60-70 °C, d.w.z. totdat de paraffine smelt (paraffinewas bestaat uit een mengsel van vaste koolwaterstoffen met een rechte keten in een smeltpunt van 48 °C-66 °C (120-150 °F)) en wordt geabsorbeerd door het filtreerpapier.
  5. Breng het gewonnen weefsel vrij van paraffine over in een scintillatieflacon gevuld met 4 ml 100% tolueen (methylbenzeen) v/v [100% tolueen betekent 100 ml tolueen]. Zorg ervoor dat de monsters continu door het deparaffinisatieproces draaien (rotatiesnelheid: 24 rotaties/min).
  6. Doorloop twee verversingen van tolueen, elk 1 uur, en één verversing van 4 ml 100% tolueen elk 30 minuten, met behulp van een schuin draaiend apparaat.
  7. Ga door met één verversing in 4 ml 100% absolute ethanol (C2H5OH) gedurende 1 uur, en vervolgens twee verversingen van 4 ml 100% absolute ethanol gedurende elk 30 minuten. Dan nog een verandering van 30 minuten in 4 ml 70% ethanol.
  8. Ga door met een verversing van 4 ml 0,1 M natriumcacodylaatbuffer, 30 min. Breng de monsters over in 4 ml 2,5% glutaaraldehyde en bewaar ze op 4 °C tot verwerking.
  9. Gebruik de volgende stappen in een geautomatiseerde weefselverwerker om de verwerking te standaardiseren: 0,1 M natriumcacodylaatbuffer gedurende 5 min, 2% osmiumtetroxide gedurende 1 uur en 50 min, dH2O gedurende 5 min, 50% ethanol gedurende 15 min, 70% ethanol gedurende 30 min, 100% ethanol gedurende 15 minuten (drie keer), 100% ethanol gedurende 30 minuten (drie keer), 100% ethanol gedurende 45 minuten, aceton gedurende 50 minuten, hars gedurende 1 uur (twee keer) en verse hars 's nachts. Het volume van alle oplossingen is 15 ml.
  10. Inbedden met verse hars direct uit de weefselverwerker.
    1. Plaats polyethyleen capsules in een houder met genummerde stroken papier. Laat verse hars in de capsules vallen, breng het monster over naar de daarvoor bestemde blokken en bewaar de blokken een nacht in een oven van 60 °C (140 °F).
  11. Vlek halfdunne (500 nm) secties met 1% toluïdine blauw op de kookplaat, minimale warmte-instelling gedurende 30 s, spoel af met dH2O en plaats vervolgens een dekglaasje.
  12. Hier wordt de Ultracut-microtoom (UCM) gebruikt voor het doorsnijden van halfdunne secties.
    1. Neem een in hars ingebed blok en installeer het in de blokhouder van de UCM. Installeer vervolgens de blokhouder op de tafel van de UCM en draai deze vast.
    2. Snijd overtollige hars rond het monster met behulp van een scheermesje met één rand bedekt met behulp van de oculairs. Snijd de voorkant van het blok in een trapeziumvorm.
    3. Verwijder de blokhouder van het podium en installeer deze stevig in de UCM-arm. Installeer vervolgens de meshouder op de UCM-tafel. Draai ten slotte een glazen mes vast op de meshouder.
    4. Schuif met behulp van de oculair en het licht van de UCM de rand van het glasmes langzaam, zo dicht mogelijk, zo dicht mogelijk bij het oppervlak van het te snijden harsblok. Draai de meshouder vast op zijn plaats op de objecttafel.
    5. Stel de snijdikte van de UCM in op 500 nm en snijd het harsblok af tot 75% volledig aangesneden.
    6. Vervang het glazen mes door een nieuw exemplaar. Voeg steriel water toe aan het reservoir van het glazen mes.
    7. Label een microscoopglaasje met het kastnummer en doe vier afzonderlijke druppels steriel water op het glasplaatje.
    8. Snijd nog steeds bij een instelling van 500 nm vier secties uit het blok. Breng met een fijne tang 1 sectie per keer over in een van de waterdruppels op de glasplaat. Elke druppel op de dia bevat één sectie. Droog de dia op een hete plaat op de laagste stand tot hij droog is (30 s).
  13. Beits met de Toluïdine blauwe methode. Spoel af met water en plaats een dekglaasje. Onderzoek toluïdine blauwe coupes onder een lichtmicroscoop. Als de gewenste weefselstructuren zichtbaar zijn, snijdt u ultradunne secties. Als de gewenste weefselstructuren niet zichtbaar zijn, snijdt u diepere secties en kleurt u ze met dezelfde stappen totdat de gewenste structuren worden blootgelegd en op het blauwe toluïdineglaasje worden weergegeven.
  14. Wanneer het gewenste gebied voor elektronenmicroscopie is geïdentificeerd uit de toluïdine blauwe secties, snijdt u de ultradunne secties op de koperen roosters. Snijd ultradunne plakjes met behulp van een ultramicrotoom (monsters die bestemd zijn om in de TEM te worden bekeken, moeten in zeer dunne plakjes (80 nm) worden gesneden).
    1. Neem een in hars ingebed blok en installeer het in de blokhouder van de UCM. Installeer vervolgens de blokhouder op de tafel van de UCM en draai deze vast.
    2. Snijd met behulp van de oculairs de hars rond het gewenste gebied voor elektronenmicroscopie met behulp van een enkelzijdig gecoat scheermesje. Snijd de voorkant van het blok in een trapezevorm, niet groter dan 1 mm in het vierkant. Als het gewenste gebied voor elektronenmicroscopie moeilijk te zien is vanwege de schittering van het licht, gebruik dan een beetje chloroform om de structuren in het harsblok te markeren.
    3. Verwijder de blokhouder van het podium en installeer deze stevig in de UCM-arm. Installeer vervolgens de meshouder op de UCM-tafel. Draai ten slotte een diamantmes vast op de meshouder.
    4. Gebruik de oculairs en het licht van de UCM om de rand van het diamantmes langzaam, zo dicht mogelijk, zo dicht mogelijk bij het oppervlak van het te snijden harsblok te schuiven. Draai de meshouder vast op zijn plaats op de objecttafel.
    5. Stel de verschillende hoeken van het diamantmes in met behulp van de schroeven van de UCM. Zorg ervoor dat de rand van het diamantmes zo perfect mogelijk is uitgelijnd met het oppervlak van het te snijden blok. Vul het reservoir van het diamantmes met steriel water.
    6. Stel de UCM in op een dikte van 80 nm en een snelheid van 1 mm/s. Hier wordt de geautomatiseerde functie gebruikt voor ultradunne secties. Stel het snijvenster in op de UCM (boven- en onderkant van het oppervlak van het blok).
    7. Druk op de Start-knop van de UCM om te beginnen met secties. De secties zullen drijven op het steriele reservoir van het diamantmes.
    8. Als er voldoende secties zijn gesneden, gebruik dan chloroformdampen om de secties recht te trekken. Dompel een wattenstaafje in chloroform en haal het boven de secties zonder ze aan te raken.
  15. Dompel een koperen rooster in 100% alcohol en vervolgens steriel water met een fijne tang. Maak elk rooster schoon voordat u het gebruikt. Kies de secties op een paar rasters.
  16. Laat de roosters met secties op gelabeld filterpapier liggen. Leg dit filtreerpapier in een petrischaaltje en zet het 30 min in de oven van 60 °C om de partjes op de roosters te laten drogen.
  17. Voer vervolgens de contrastkleuring uit.
    1. Beits de roosters gedurende 1 minuut met uranylacetaat of een ander milieuvriendelijk alternatief alternatief. Spoel ze vervolgens af in steriel water voor injectie (40 dips in vier verschillende watercontainers voor elke spoeling na uranylacetaat en loodcitraat). Loodcitraat stap is ook 1 min.
  18. Plaats het rooster in de TEM, zodat een hoogspanningselektronenbundel kan worden uitgezonden door een kathode en kan worden gecreëerd door magnetische lenzen. De straal die gedeeltelijk door het dunne (elektron-semitransparante) monster is doorgelaten, vormt de TEM-informatie op het scherm (zie hieronder).

2. TEM-protocol voor het scannen en fotograferen van de specimens

  1. Nadat de secties op de roosters zijn gekleurd, zeef je ze met de elektronenmicroscoop. Zet bij de elektronenmicroscoop de ACC-spanning aan op een vooraf ingestelde instelling (200-300 kV), die afhankelijk is van de gebruikte elektronenmicroscoop.
  2. Schakel op de computer de software van de digitale camera in en voer het zaaknummer in. Dit is belangrijk omdat de microfoto's worden opgeslagen in het bijbehorende dossier.
  3. Laad het rooster in de elektronenmicroscoop, trek het pistoolmonster er half uit en zet de schakelaar op AIR om het vacuüm uit de pistoolkamer van het preparaat te laten vullen met omgevingslucht (kamerlucht).
  4. Zodra het vol lucht is, trekt u het pistoolmonster eruit. Plaats het pistoolmonster op de ontworpen houder. Klap vervolgens de roosterhouder aan de punt van het pistool open.
  5. Plaats het raster op zijn plaats. Sluit de roosterhouder en zorg ervoor dat het rooster goed vastzit.
  6. Plaats het pistoolmonster halverwege terug in de monsterkamer en zet de schakelaar op EVAC om een vacuüm in de monsterkamer te creëren.
  7. De groene lichtindicator gaat branden wanneer het vacuüm is bereikt in de monsterkamer. Duw vervolgens het pistoolmonster voorzichtig in de kolom van de elektronenmicroscoop en zorg ervoor dat het niet te snel gaat. Anders zou het het object aan de punt van het pistoolmonster beschadigen.
  8. Zodra het raster goed op zijn plaats zit in de kolom van de elektronenmicroscoop, zet u het filament aan op de tussenliggende (vooraf ingestelde) verzadigingsinstelling.
  9. Zet de camera aan via de AAN/UIT-schakelaar . Klik op de computer op Live Image in de beeldvormingssoftware.
  10. Druk op de elektronenmicroscoop op de knop Lage vergroting en open de objectiefopening. Dit maakt het mogelijk om het gewenste screeningsgebied te kiezen. Plaats vervolgens het gewenste gebied van de sectie in het midden van het computerscherm, met behulp van de twee controllers aan weerszijden van de kolom van de elektronenmicroscoop.
  11. Druk op de elektronenmicroscoop op de zoomknop en sluit de objectiefopening om een beter contrast te verkrijgen.
  12. Begin de screening van de sectie door microfoto's te maken met een vergroting van 2.500x. Pas vervolgens de scherpstelling aan met behulp van de wiebelknop en de helderheidsknop op de elektronenmicroscoop om de kwaliteit van de microfoto te garanderen.
  13. Klik op Final Image op de computer om de microfoto te maken. Als de kleuren niet egaal zijn, voert u een achtergrondcorrectie uit op de camerasoftware. Pas ook het contrast op de uiteindelijke afbeelding aan met behulp van de software voordat u de microfoto opslaat.
  14. Wanneer de microfoto wordt opgeslagen, controleert u het zaaknummer en de vergroting om er zeker van te zijn dat de gemaakte microfoto's correct worden geïdentificeerd.
    OPMERKING: In sommige gevallen kan de gebruiker ook extra bijschriften invoeren en worden ook de initialen van de elektronenmicroscopietechnoloog ingevoerd.
  15. Voer het microfotoproces uit door het hele gebied van de te screenen sectie. Na voldoende vergroting van 2.500x worden microfoto's opgeslagen om het interessegebied te bestrijken, microfoto's met een vergroting van 4.000x en 8.000x vast te leggen en deze op de computer op te slaan met de juiste identificatie van het casenummer.
  16. Maak een close-up van de sectie voor specifieke ultrastructurele details als er zeer specifieke screeningsinstructies worden gegeven. Sla vervolgens de metingen van specifieke ultrastructurele details op in de computer, rekening houdend met hogere vergrotingen indien nodig.
  17. Wanneer de screening van het sample is voltooid, schakelt u achtereenvolgens het filament, de camera, de hoogspanning en de camerasoftware uit. Verwijder vervolgens het rooster van de kolom van de elektronenmicroscoop, zodat er lucht in de monsterkamer van het pistool kan komen.
  18. Vijl het rooster in een gelatinecapsule en bewaar de capsule in een correct geëtiketteerde doos, samen met de harsblokken van hetzelfde doosje. Plaats het pistoolmonster terug in de pistoolkamer en bewaar het in een koele en droge omgeving om het gebruikte materiaal te behouden.
  19. Breng de digitale microfoto's over naar gangbare samenwerkingsplatforms (bijv. SharePoint) of interne servers zodat de patholoog ze kan bekijken.
  20. Voer de werkeenheden in het Laboratorium Informatie Systeem (LIS) in.
  21. Als er meer specifieke microfoto's nodig zijn, trek dan het veldraster eruit en hergebruik ze voor extra screening of specifieke vragen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De kenmerkende TEM-kenmerken van het neuroblastoom worden hier weergegeven. Hier zullen we de onderscheidende TEM-kenmerken van het neuroblastoom illustreren.

Neuroblastoom is een van de meest voorkomende solide maligniteiten in de kindertijd en de kindertijd. Neuroblastoomcellen zijn de kwaadaardige cellen van deze solide tumor die verraderlijk ontstaan uit afgeleiden van de primordiale neurale lijst. Deze histogenese verklaart enkele biochemische en morfolog...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

In deze verhalende review met bijbehorend protocol belichtten we de kenmerkende ultrastructurele kenmerken van het neuroblastoom. Uiteindelijk suggereren we dat elektronenmicroscopie verre van een "dode" of oude techniek is, die de ontdekking van een nieuwe rol postuleert in combinatie met single-cell omics-technologieën. Deze bijdrage wil de nooit oude rol van elektronenmicroscopie in de pediatrische pathologie benadrukken 4,27....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De eerste auteur ontvangt royalty's van de volgende uitgevers: Springer (https://link.springer.com/book/10.1007/978-3-662-59169-7; ISBN: 978-3-662-59169-7) en Nova (https://novapublishers.com/shop/science-culture-and-politics-despair-and-hopes-in-the-time-of-a-pandemic/; ISBN: 978-1-53619-816-4). Alle royalty's gaan naar pediatrische liefdadigheidsinstellingen.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

We erkenden de expertise en genereuze steun van Dr. Richard Vriend, voorheen een medewerker van Alberta Health Services aan het University of Alberta Hospital, en Steven Joy (1972-2019), ook voorheen een medewerker van Alberta Health Services aan het University of Alberta Hospital. We dragen dit werk op aan de nagedachtenis van de heer Joy, een senior technoloog die gespecialiseerd is in ultrastructureel onderzoek en die een paar jaar geleden op tragische en voortijdige wijze is overleden. Mr. Joy was een steunpilaar voor de meeste elektronenmicroscopiestudies in Alberta, Canada. Onze gedachten en gebeden voor hem en zijn familie. We zijn ook dank verschuldigd aan mevrouw Lesley Burnet voor haar hulp en advies. Het onderzoek van Dr. C. Sergi is gefinancierd door de vrijgevigheid van het Children's Hospital of Eastern Ontario, Ottawa, Ontario, en de Stollery Children's Hospital Foundation en supporters van het Lois Hole Hospital for Women via het Women and Children's Health Research Institute (WCHRI, Grant ID #: 2096), Natural Science Foundation van de provincie Hubei voor de Hubei University of Technology (100-Talent Grant voor wervingsprogramma van buitenlandse experts Totale financiering: Digitale PCR- en NGS-gebaseerde diagnose voor infectie en oncologie, 2017-2022), Österreichische Krebshilfe Tirol (Krebsgesellschaft Tirol, Oostenrijks Tirools Kankeronderzoeksinstituut, 2007 en 2009 - "DMBTI en cholangiocellulaire carcinomen" en "Hsp70 en HSPBP1 bij carcinomen van de alvleesklier"), Oostenrijks Onderzoeksfonds (Fonds zur Förderung der wissenschaftlichen Forschung, FWF, Grant ID L313-B13), Canadian Foundation for Women's Health ("Early Fetal Heart-RES0000928"), Cancer Research Society (von Willebrand-factorgenexpressie in kankercellen), Canadian Institutes of Health Research (Omega-3-vetzuren voor de behandeling van darmfalen-geassocieerde leverziekte: een translationele onderzoeksstudie, 2011-2014, CIHR 232514), en het Saudi Cultural Bureau, Ottawa, Canada. De financiers hadden geen rol in de opzet van het onderzoek, het verzamelen en analyseren van gegevens, de beslissing om te publiceren of de voorbereiding van het manuscript.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Aceton, ACS ReagensElectron Microscopy Sciences10014Reagens zoals vastgesteld door de American Chemical Society (ACS Reagens).
Geautomatiseerde weefselprocessorElectron Microscopy SciencesL12600LYNX II geautomatiseerde weefselprocessor voor histologie en microscopie.
Software voor digitale cameraGatanL12600Digital Micrograph
Spurr's harsElectron Microscopy Sciences14300Inbeddingshars. Het biedt uitstekende penetratie voor het inbedden van weefsels en snelle infiltratie. De blokken hebben uitstekende trim- en snijkwaliteiten, terwijl dunne secties taaie eigenschappen onder de elektronenstraal onthullen.
EthylalcoholElectron Microscopy Sciences15058100% ethylalcohol met molecuulzeef, 50% en 70%.
Glutaraldehyde, 25% EM-graad Aqueous in Serum VialElectron Microscopy Sciences162142,5% gluteraldehyde in 0,1 M cacodylaatbuffer, pH 7,2-7,4 gemaakt van 25% gluteraldehyde, primaire fixatie voor TEM-weefselspecimens.
OsmiumtetraoxideElectron Microscopy Sciences19110Tweede fixatief tijdens TEM-weefselverwerking gebruikt als OsO4 in gedistilleerd water
PolyethyleencapsulesElectron Microscopy Sciences70021Vlakke bodem inbeddingscapsules, maat 00
ScintillatorElectron Microscopy Sciences82010Phillip Quad Detector
EénrandmesjeElectron Microscopy Sciences71952-10Mes voor schone ruimte, 10/Disp..
NatriumcacodylaatbufferElectron Microscopy Sciences11655Natriumcacodylaatbuffer, 0,4M, pH 7,2, bereid uit natriumcacodylaattrihydraat
Tanninezuur, Reagens, A.C.S., EM-graadElectron Microscopy Sciences21700Reagens zoals vastgesteld door de American Chemical Society (ACS Reagens).
Transmissie-elektronenmicroscoop (1)HitachiHitachi 7100We gebruiken het bij de HV 75-instelling
Transmissie-elektronenmicroscoop (2)JEOLJEM-1010We gebruiken het bij de HV 38-instelling
TolueenElectron Microscopy Sciences22030Reagens zoals vastgesteld door de American Chemical Society (ACS Reagens)
Ultracut-microtoomLeica11865766Ultramicrotoom
UranylacetaatElectron Microscopy Sciences22400Uranyless, vervanger voor uranylacetaat

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Nitta, R., Imasaki, T., Nitta, E. Recent progress in structural biology: lessons from our research history. Microscopy (Oxford). 67 (4), 187-195 (2018).
  2. Moser, T. H., et al. The role of electron irradiation history in liquid cell transmission electron microscopy. Science Advances. 4 (4), (2018).
  3. Gordon, R. E. Electron microscopy: A brief history and review of current clinical application. Methods in Molecular Biology. 1180, 119-135 (2014).
  4. Sergi, C. M. Pathology of Childhood and Adolescence. An Illustrated Guide. 1st edn. , Springer. Berlin, Heidelberg. (2020).
  5. Sergi, C., Dhiman, A., Gray, J. A. Fine needle aspiration cytology for neck masses in childhood. An illustrative approach. Diagnostics (Basel). 8 (2), 28(2018).
  6. Sergi, C., Kulkarni, K., Stobart, K., Lees, G., Noga, M. Clear cell variant of embryonal rhabdomyosarcoma: report of an unusual retroperitoneal tumor--case report and literature review). European Journal of Pediatric Surgery. 22 (4), 324-328 (2012).
  7. Hagenbuchner, J., et al. Nuclear FOXO3 predicts adverse clinical outcome and promotes tumor angiogenesis in neuroblastoma. Oncotarget. 7 (47), 77591-77606 (2016).
  8. Xu, X., Sergi, C. Pediatric adrenal cortical carcinomas: Histopathological criteria and clinical trials. A systematic review. Contemporary Clinical Trials. 50, 37-44 (2016).
  9. Khan, A., Feulefack, J., Sergi, C. M. Pre-conceptional and prenatal exposure to pesticides and pediatric neuroblastoma. A meta-analysis of nine studies. Environmental Toxicology and Pharmacology. 90, 103790(2022).
  10. Sergi, C. M. Implementing epic beaker laboratory information system for diagnostics in anatomic pathology. Risk Management and Healthcare Policy. 15, 323-330 (2022).
  11. D'Cruze, L., et al. The role of immunohistochemistry in the analysis of the spectrum of small round cell tumours at a tertiary care centre. Journal of Clinical Diagnostic Research. 7 (7), 1377-1382 (2013).
  12. Garcia, E., et al. Epithelial-mesenchymal transition, regulated by beta-catenin and Twist, leads to esophageal wall remodeling in pediatric eosinophilic esophagitis. PLoS One. 17 (3), 0264622(2022).
  13. Al-Bahrani, R., Nagamori, S., Leng, R., Petryk, A., Sergi, C. Differential expression of sonic hedgehog protein in human hepatocellular carcinoma and intrahepatic cholangiocarcinoma. Pathol and Oncology Research. 21 (4), 901-908 (2015).
  14. Taweevisit, M., Thorner, P. S. Electron microscopy can still have a role in the diagnosis of selected inborn errors of metabolism. Pediatric and Developmental Pathology. 22 (1), 22-29 (2019).
  15. Ghadially, F. N. Diagnostic Electron Microscopy of Tumours. , Butterworths. (1980).
  16. Geiger, K., et al. FOXO3/FKHRL1 is activated by 5-aza-2-deoxycytidine and induces silenced caspase-8 in neuroblastoma. Molecular Biology of the Cell. 23 (11), 2226-2234 (2012).
  17. Shimada, H. Transmission and scanning electron microscopic studies on the tumors of neuroblastoma group. Acta Pathologica Japonica. 32 (3), 415-426 (1982).
  18. Samardzija, G., et al. Aggressive human neuroblastomas show a massive increase in the numbers of autophagic vacuoles and damaged mitochondria. Ultrastructural Pathology. 40 (5), 240-248 (2016).
  19. Suganuma, R., et al. Peripheral neuroblastic tumors with genotype-phenotype discordance: a report from the Children's Oncology Group and the International Neuroblastoma Pathology Committee. Pediatric Blood and Cancer. 60 (3), 363-370 (2013).
  20. Joshi, V. V. Peripheral neuroblastic tumors: pathologic classification based on recommendations of international neuroblastoma pathology committee (Modification of shimada classification). Pediatric and Developmental Pathology. 3 (2), 184-199 (2000).
  21. Schultz, T. D., Sergi, C., Grundy, P., Metcalfe, P. D. Papillary renal cell carcinoma: report of a rare entity in childhood with review of the clinical management. Journal of Pediatric Surgery. 46 (6), 31-34 (2011).
  22. Brisigotti, M., Cozzutto, C., Fabbretti, G., Sergi, C., Callea, F. Metanephric adenoma. Histology and Histopathology. 7 (4), 689-692 (1992).
  23. McKillop, S. J., et al. Adenovirus necrotizing hepatitis complicating atypical teratoid rhabdoid tumor. Pediatric International. 57 (5), 974-977 (2015).
  24. Kim, N. R., Ha, S. Y., Cho, H. Y. Utility of transmission electron microscopy in small round cell tumors. Journal of Pathology and Translational Medicine. 49 (2), 93-101 (2015).
  25. Iida, M., Tsujimoto, S., Nakayama, H., Yagishita, S. Ultrastructural study of neuronal and related tumors in the ventricles. Brain Tumor Pathology. 25 (1), 19-23 (2008).
  26. Erlandson, R. A., Nesland, J. M. Tumors of the endocrine/neuroendocrine system: an overview. Ultrastructural Pathology. 18 (1-2), 149-170 (1994).
  27. Sergi, C. Microscopy Science: Last Approaches on Educational Programs and Applied Research.Microscopy. Torres-Hergueta, E., Méndez-Vilas, A. , Formatex Research Center S.L. 101-112 (2018).
  28. Song, D., et al. FOXO3 promoted mitophagy via nuclear retention induced by manganese chloride in SH-SY5Y cells. Metallomics. 9 (9), 1251-1259 (2017).
  29. Chiu, B., Jantuan, E., Shen, F., Chiu, B., Sergi, C. Autophagy-inflammasome interplay in heart failure: A systematic review on basics, pathways, and therapeutic perspectives. Annals of Clinical and Laboratory Science. 47 (3), 243-252 (2017).
  30. Radogna, F., et al. Cell type-dependent ROS and mitophagy response leads to apoptosis or necroptosis in neuroblastoma. Oncogene. 35 (29), 3839-3853 (2016).
  31. Franchi, A., et al. Immunohistochemical and ultrastructural investigation of neural differentiation in Ewing sarcoma/PNET of bone and soft tissues. Ultrastructural Pathology. 25 (3), 219-225 (2001).
  32. Llombart-Bosch, A., et al. Soft tissue Ewing sarcoma--peripheral primitive neuroectodermal tumor with atypical clear cell pattern shows a new type of EWS-FEV fusion transcript. Diagnostic Molecular Pathology. 9 (3), 137-144 (2000).
  33. Parham, D. M., et al. Neuroectodermal differentiation in Ewing's sarcoma family of tumors does not predict tumor behavior. Human Pathology. 30 (8), 911-918 (1999).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Diagnose van neuroblastoompediatrische tumorenkleine ronde blauwe cellenimmunohistochemiedifferentiaaldiagnose van tumorenneurosecretorische korrelslichtmicroscopiemoleculaire biologie
Video binnenkort beschikbaar

Gerelateerde artikelen