Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Beoordeling van thermische schade door robotgeboorde craniotomie voor craniale raamchirurgie bij muizen

2.3K weergaven

DOI:

10.3791/64188

11 november 2022

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

Craniale vensters zijn een alomtegenwoordig geïmplementeerde chirurgische techniek geworden om intravitale beeldvorming bij transgene muizen mogelijk te maken. Dit protocol beschrijft het gebruik van een chirurgische robot die semi-geautomatiseerde botboringen van schedelvensters uitvoert en kan helpen de variabiliteit van chirurg tot chirurg te verminderen en thermische schade aan de bloed-hersenbarrière gedeeltelijk te verminderen.

Samenvatting

Craniale raamchirurgie maakt het mogelijk om hersenweefsel in levende muizen in beeld te brengen met behulp van multifotonen of andere intravitale beeldvormingstechnieken. Bij het uitvoeren van een craniotomie met de hand is er echter vaak thermische schade aan hersenweefsel, wat inherent variabel is van chirurgie tot operatie en afhankelijk kan zijn van de individuele chirurgtechniek. Het implementeren van een chirurgische robot kan de operatie standaardiseren en leiden tot een afname van thermische schade in verband met chirurgie. In deze studie werden drie methoden van robotboren getest om thermische schade te evalueren: horizontaal, punt voor punt en puntsgepulseerd punt voor punt. Horizontaal boren maakt gebruik van een continu boorschema, terwijl puntsgewijs verschillende gaten worden geboord die het schedelvenster omvatten. Gepulseerd puntsgewijs voegt een "2 s aan, 2 s uit" boorschema toe om koeling tussen het boren mogelijk te maken. Fluorescerende beeldvorming van Evans Blue (EB) kleurstof die intraveneus wordt geïnjecteerd, meet schade aan hersenweefsel, terwijl een thermokoppel dat onder de boorlocatie is geplaatst thermische schade meet. De resultaten van het thermokoppel wijzen op een significante afname van de temperatuurverandering in de gepulste punt-voor-punt (6,90 °C ± 1,35 °C) groep in vergelijking met de horizontale (16,66 °C ± 2,08 °C) en punt-voor-punt (18,69 °C ± 1,75 °C) groepen. Evenzo vertoonde de gepulseerde puntsgewijze groep ook significant minder EB-aanwezigheid na craniale raamboringen in vergelijking met de horizontale methode, wat wijst op minder schade aan bloedvaten in de hersenen. Een gepulseerde punt-voor-punt boormethode lijkt dus het optimale schema om thermische schade te verminderen. Een robotboor is een handig hulpmiddel om training, variabiliteit en thermische schade te minimaliseren. Met het toenemende gebruik van multifotonbeeldvorming in onderzoekslaboratoria is het belangrijk om de nauwkeurigheid en reproduceerbaarheid van resultaten te verbeteren. De methoden die hier worden behandeld, zullen anderen helpen informeren over hoe deze chirurgische robots beter kunnen worden gebruikt om het veld verder te ontwikkelen.

Inleiding

Craniale vensters zijn alomtegenwoordig geworden op het gebied van neurowetenschappen, neurale engineering en biologie om directe visualisatie en beeldvorming van de cortex bij levende dieren mogelijk te maken 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11 . De krachtige combinatie van transgene muizen en multifotonenbeeldv....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Alle procedures en dierverzorgingspraktijken werden beoordeeld, goedgekeurd door en uitgevoerd in overeenstemming met het Louis Stokes Cleveland Department of Veterans Affairs Medical Center Institutional Animal Care and Use Committee.

1. Installatie van chirurgische robothardware

  1. Volg vóór de operatie de handleiding en handleiding van de chirurgische robot (zie Materiaaltabel) om de hardware en software in te stellen. Voer framekalibratie uit zoals beschreven in de handleiding. Als de boor of het frame wordt verplaatst, wordt aanbevolen om de boor opnieuw te kalibreren om de nauwkeurigheid te gar....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Thermische evaluatie
Het potentieel voor thermische schade werd geëvalueerd door de temperatuurverandering ten opzichte van de basislijn te meten als gevolg van boringen met behulp van horizontale (figuur 2A), puntsgewijze (figuur 2B) en gepulseerde puntsgewijze (figuur 2C) methoden. Figuur 2D toont de experimentele opstelling voor het verkrijgen van thermische gegevens. Voor thermis.......

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Het gebruik van EB-kleurstof en beeldvorming is eenvoudig, snel en nuttig voor het evalueren van vasculaire schade in de hersenen voor nieuwe methoden en technieken. Of het nu gaat om het gebruik van een chirurgische robot of het bevestigen van methoden die momenteel in het laboratorium worden gedaan, het is belangrijk om chirurgische methoden te valideren om de effecten van experimentele behandelingen versus chirurgische impact te isoleren en het dierenwelzijn te verbeteren. Een thermokoppelopstelling is ook nuttig bij .......

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben geen belangenconflicten te melden. De inhoud vertegenwoordigt niet de standpunten van het Amerikaanse ministerie van Veteranenzaken, de National Institutes of Health of de regering van de Verenigde Staten.

Dankbetuigingen

Deze studie werd gedeeltelijk ondersteund door Merit Review Awards GRANT12418820 (Capadona) en GRANTI01RX003420 (Shoffstall / Capadona), en Research Career Scientist Award # GRANT12635707 (Capadona) van het United States (US) Department of Veterans Affairs Rehabilitation Research and Development Service. Daarnaast werd dit werk ook gedeeltelijk ondersteund door het National Institute of Health, het National Institute of Neurological Disorders and Stroke GRANT12635723 (Capadona) en het National Institute for Biomedical Imaging and Bioengineering, T32EB004314, (Capadona / Kirsch). Dit materiaal is gebaseerd op werk dat wordt ondersteund door de National Science Foundati....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
1x Phosphate Buffered Saline
Type: Reagent
VWRMRGF-6235Voor Evans Blue verdunning
Aura Software
Type: Tool
Spectral Instruments ImagingOpen access beeldverwerkingssoftware voor Lumina beeldvormingssystemen
Buprenorfine
Type: Drug
Afkomstig van Animal Facility
Carbide Boortje, 0,6 mm (Robot Boor)
Type: Tool
Stoelting58640-1
Carprofen
Type: Drug
Afkomstig van Animal Facility
Cefazolin
Type: Drug
Afkomstig van Animal Facility
Evans Blue Kleurmiddel
Type: Reagent
Millipore SigmaE2129Gereconstitueerd in 1x fosfaatgebufferde zoutoplossing
Isofluraan
Type: Drug
Afkomstig van Animal Facility
IVIS Lumina II
Type: Tool
Perkin ElmerCLS136334IVIS Lumina III momenteel in de plaats van Lumina II op de markt
Jenco Lineariserende Thermometer
Type: Tool
Jenco765JFVoor Thermokoppel setup
Ketamine
Type: Drug
Afkomstig van Animal Facility
LivingImage
Type: Tool
Perkin ElmerSoftware voor IVIS Lumina III
Marcaine
Type: Drug
Afkomstig van Animal Facility
Neurostar Software
Type: Tool
StoeltingKomt bij aankoop van chirurgische robot
Physiosuite met MouseSTAT® Pulsoximeter & Hartslagmeter
Type: Tool
Kent ScientificPS-03Wordt gebruikt om vitale functies te controleren
PrismPlus muizen
Type: Animal
Jackson Labortory031478, RRID:IMSR_JAX:031478, Male, ~8 maanden oudDieren gebruikt voor het onderzoek
Stoelting Boor- en Injectierobot voor Gemotoriseerde Stereotaxische Instrumenten
Type: Tool
Stoelting58640Hoofdrobotische boor met stereotaxisch frame
Thermokoppel
Type: Tool
TC Direct206-557Voor Thermokoppel setup
USB-6008 Multifunctionele I/O DAQ
Type: Tool
National InstrumentsUSB-6008Voor Thermokoppel setup
Xylazin
Type: Drug
Afkomstig van Animal Facility

Referenties

  1. Kilic, K., et al. Chronic cranial windows for long term multimodal neurovascular imaging in mice. Frontiers in Physiology. 11, 612678(2020).
  2. Goldey, G. J., et al. Removable cranial windows for long-term imaging in awake mice. Nature Prot....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Tags

Beoordeling van thermische schadegepulseerd puntborenhorizontaal borenpunt voor punt borenmultifoton beeldvormingEvans Blue beeldvormingthermokoppelmetinghersenchirurgie bij muizen