Methodenartikel

Letaliteit Bioassay met behulp van Artemia salina L.

DOI:

10.3791/64472

⸱

11 oktober 2022

 ,  ,  ,  ,  , 
1CBIOS - Lusófona University's Center for Research in Biosciences & Health Technologies, Universidade Lusófona de Humanidades e Tecnologias, 2Facultad de Farmacia, Departamento de Ciencias Biomédicas (Área de Farmacologia; Nuevos agentes antitumorales, Acción tóxica sobre células leucémicas), Universidad de Alcalá de Henares, 3Instituto de Investigação do Medicamento (iMed.ULisboa), Faculdade de Farmácia da Universidade de Lisboa

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit werk is gericht op het evalueren en herzien van de Artemia salina letaliteit bioassay procedure, ook geïdentificeerd als pekel garnalen letaliteit ashality assay. Deze eenvoudige en goedkope methode geeft informatie over de algemene toxiciteit (beschouwd als een voorlopige toxiciteitsevaluatie) van monsters, namelijk natuurlijke producten.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Natuurlijke producten worden al sinds de oudheid gebruikt om medicijnen te produceren. Tegenwoordig zijn er tal van chemotherapeutische geneesmiddelen verkregen uit natuurlijke bronnen en gebruikt tegen een overvloed aan ziekten. Helaas vertonen de meeste van deze verbindingen vaak systemische toxiciteit en bijwerkingen. Om de verdraagbaarheid van geselecteerde potentieel bioactieve monsters beter te evalueren, worden pekelgarnalen (Artemia salina) over het algemeen gebruikt als model in letaliteitsstudies. De A. salina-test is gebaseerd op het vermogen van de bestudeerde bioactieve stoffen om de microschaaldieren in hun larvale stadium (nauplii) te doden. Deze methode vormt een handig startpunt voor cytotoxiciteitsstudies, evenals voor de algemene toxiciteitsscreening van synthetische, semisynthetische en natuurlijke producten. Het kan worden beschouwd als een eenvoudige, snelle en goedkope test, vergeleken met veel andere assays (in vitro cellen of giststammen, zebravissen, knaagdieren) die over het algemeen geschikt zijn voor de bovengenoemde doeleinden; bovendien kan het gemakkelijk worden uitgevoerd, zelfs zonder specifieke training. Over het algemeen is de A. salina-test een nuttig hulpmiddel voor de voorlopige toxiciteitsevaluatie van geselecteerde verbindingen en de biogeleide fractionering van extracten van natuurlijke producten.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Natuurlijke producten van planten, dieren of micro-organismen zijn in de loop der jaren een groeiend interessegebied geweest in de ontwikkeling van nieuwe bioactieve moleculen vanwege hun gevarieerde scala aan biologische en farmacologische activiteiten1. De bijbehorende bijwerkingen, medicijnresistentie of onvoldoende specificiteit van de middelen, vooral wanneer ze worden gebruikt als geneesmiddelen tegen kanker, vertegenwoordigen echter de belangrijkste factoren die kunnen leiden tot een ineffectieve behandeling 1,2.

In de afgelopen decennia zijn verschillende van planten afgeleide cytotoxische middelen ontdekt, waarvan sommige worden gebruikt als middelen tegen kanker 1,2,3. In deze context wordt paclitaxel gerapporteerd als een van de bekendste en meest actieve chemotherapeutische geneesmiddelen van natuurlijke oorsprong 3,4. Momenteel wordt geschat dat meer dan 35% van alle geneesmiddelen op de markt afkomstig is van of geïnspireerd is op natuurlijke producten5. De potentiële hoge toxiciteit van deze verbindingen vereist aandacht tijdens alle onderzoeksfasen, omdat verschillende soorten verontreinigingen of zelfs metabole componenten van de plant zelf toxische effecten kunnen veroorzaken. Daarom moeten in de voorbereidende fase farmacologische en toxicologische profielen worden uitgevoerd om de biologische activiteit en veiligheid van nieuwe potentiële plantaardige behandelingen te beoordelen. Om de toxiciteit van nieuwe bioactieve monsters te evalueren, kunnen ongewervelde dieren worden beschouwd als de beste modellen om te bestuderen. Ze eisen minimale ethische vereisten en staan voorlopige in vitro assays toe, om prioriteit te geven aan de meest veelbelovende producten voor de volgende testronde bij gewervelde dieren 1,6.

A. salina, algemeen bekend als pekelgarnalen, is een klein halofiel ongewervelde die behoort tot het geslacht Artemia (familie Artemiidae, orde Anostraca, subphylum Crustacea; Figuur 1). In mariene en aquatische zoute ecosystemen spelen pekelgarnalen een belangrijke voedingsrol omdat ze zich voeden met microalgen en bestanddelen zijn van het zoöplankton dat wordt gebruikt om vissen te voeden. Bovendien worden hun larven (bekend als nauplii) veel gebruikt bij de beoordeling van algemene toxiciteit tijdens voorbereidende studies 1,3,7.

Artemia spp. worden veel gebruikt in letaliteitsstudies en zijn ook een handig startpunt voor toxiciteitsbeoordelingen, door de toxiciteit van potentieel bioactieve stoffen te volgen op basis van hun vermogen om nauplii te doden die in het laboratorium zijn gekweekt 1,8. Om deze reden heeft het gebruik van A. salina aantrekkingskracht gewonnen in algemene toxiciteitsstudies, omdat het een zeer efficiënte en gebruiksvriendelijke methode is, in vergelijking met andere tests op diermodellen9.

Vanwege hun eenvoudige anatomie, kleine omvang en korte levenscyclus kan een groot aantal ongewervelde dieren in één experiment worden bestudeerd. Als zodanig combineren ze genetische aansprakelijkheid en goedkope compatibiliteit met grootschalige screenings1. In deze context toont het gebruik van pekelgarnalen in een algemene toxiciteitstest verschillende voordelen, zoals snelle groei (28-72 uur is nodig vanaf het uitkomen tot de eerste resultaten), kosteneffectiviteit en lange houdbaarheid van commerciële eieren, die het hele jaar door kunnen worden gebruikt 3,10. Aan de andere kant, omdat ongewervelde dieren een primitief orgaansysteem hebben en geen adaptief immuunsysteem hebben, vertegenwoordigen ze geen perfect en betrouwbaar model voor menselijke cellen1.

Het biedt echter een voorlopige evaluatiemethode voor de algemene toxiciteit van geselecteerde monsters. Omdat het veel wordt gebruikt als een letaliteitstest, kan het voorlopige aanwijzingen geven over de toxische effecten van potentiële middelen tegen kanker. Het wordt vaak ook gebruikt om feedback te krijgen over de algemene toxiciteit van verbindingen die zijn begiftigd met andere biologische activiteiten waarvoor het essentieel is om het laagst mogelijke sterftecijfer onder de Artemia-garnalen aan te tonen.

In een lopende studie van onze groep vertoonden verschillende extracten van Plectranthus-soorten antioxiderende en antimicrobiële activiteiten (ongepubliceerde resultaten). Tegelijkertijd werden geïsoleerde verbindingen verkregen door zuivering van de extracten en vervolgens chemisch gemodificeerd. De extracten, zuivere verbindingen en semisynthetische derivaten werden vervolgens getest in termen van algemene toxiciteit. In deze context beoogt dit werk een overzicht te geven van het gebruik van de Artemia letaliteitsbioassay voor de evaluatie van algemene toxiciteit en potentiële cytotoxische activiteit van bioactieve extracten en geïsoleerde verbindingen van verschillende planten van het geslacht Plectranthus11.

figure-introduction-1
Figuur 1: Artemia salina onder de microscoop. Nieuw uitgekomen nauplii van A. salina zoals gezien onder de microscoop (vergroting 12x). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Voorbereiding van de apparatuur

  1. Koop in de handel verkrijgbare broedapparatuur. Selecteer een geschikte plaats om de broedapparatuur in te stellen (figuur 2A). Plaats de trechtervormige container in de zwarte steun (inbegrepen in de set) en draai de trechter in een geschikte richting om de niveaumarkering en de tik te zien.
  2. Om handgemaakte migratieapparatuur te maken, snijdt u de bovenkant van twee plastic flessen met een diameter van 0,5 l (5,8 cm) om een uiteindelijke hoogte van 12 cm te verkrijgen. Maak een gat van 1,5 cm diameter aan één kant op 7 cm van de bodem in elke fles en steek een rubberen buis van 13 cm (1,3 cm buitendiameter en 0,9 cm binnendiameter) tussen de twee openingen. Sluit de openingen af met hete lijm (figuur 2B) en laat 15 minuten drogen; zet de flessen op een vlakke ondergrond en vul ze met water om te controleren of er geen lekkage is.

2. Bereiding van een kunstmatige zoutoplossing

  1. Bereid in een glazen bekerglas een kunstmatige zoutoplossing (pekelgarnalenzout) in een concentratie van 35 g/L. Voeg hiervoor 28 g van het zout toe aan 800 ml kraanwater, volgens de instructies van de fabrikant. Meng het met een roerstaaf tot al het zout goed is opgelost.
    OPMERKING: Pas het volume van de bereide zoutoplossing aan op basis van de grootte van de beschikbare containers.

3. Monstervoorbereiding

  1. Bereid alle monsters in een microcentrifugebuis door een geschikte hoeveelheid extracten op te lossen (Plectranthus-extracten , Pa- P. ambigerus; Pb- P. barbatus; Pc- P. cylindraceus; en Pe- P. ecklonii) of verbindingen 1-5 (twee natuurlijke verbindingen [1 en 2] verkregen uit Plectranthus spp. en drie semi-synthetische derivaten [3, 4, 5]; Figuur 3) in dimethylsulfoxide (DMSO)12, om een eindconcentratie van 10 mg/ml te verkrijgen (als het monster in water oplosbaar is, is het gebruik van DMSO niet nodig).
  2. Verdun 10 μL van elk monster (en DMSO voor de negatieve controle) in een nieuwe microcentrifugebuis met behulp van 990 μL kunstmatige zoutoplossing bereid in stap 2.1, om een eindconcentratie van 0,1 mg/ml te verkrijgen.
  3. Bereid onder een zuurkast in een erlenmeyer een oplossing van kaliumdichromaat (K 2Cr2O7) in gedestilleerd water in een concentratie van 1 mg/ml 13,14,15.

4. Pekelgarnalen letaliteit bioassay

OPMERKING: Deze test is ontwikkeld op basis van het werk van verschillende auteurs met wijzigingen 1,16,17,18,19.

  1. Vul het broedvat met het medium dat in stap 2.1 is voorbereid tot het niveaumerk (500 ml) (figuur 2C).
  2. Plaats een lepel (ongeveer 0,75 g) pekelgarnalencysten in de zoutoplossing en sluit vervolgens de container. Plaats een lamp (tafellamp, 40 W, 230 V, 50 Hz, met een LED-lamp van 8 W, 4.000 K, 830 lm) die rechtstreeks naar de apparatuur wijst (figuur 2A) en schakel deze in.
  3. Bevestig het luchttoevoersysteem (3 W uitgang, 50 Hz, 230 V) aan de connector die aan de bovenkant van de apparatuur is geplaatst en schakel de pomp in.
  4. Houd de kamertemperatuur op 25 ± 3 °C. Pekelgarnalencysten komen uit in de kunstmatige zoutoplossing, onder krachtige beluchting, continue verlichting en stabiele temperatuur, na 24 uur tot 48 uur.
    OPMERKING: Als alternatief kan een verticale incubator worden gebruikt.
  5. Zodra de eieren zijn uitgekomen, zet u de luchtpomp uit en wacht u tot de nauplii (die naar de onderkant van de trechter beweegt) is gescheiden van de lege eierdozen (drijvend aan de bovenkant).
  6. Om de niet-gehate eieren van levende nauplii te scheiden, opent u de uitlaatkraan aan de onderkant en ontlaadt u de inhoud van de trechter in een van de containers van de handgemaakte container voor migratieapparatuur (beschreven in stap 1.2). Zorg ervoor dat de oplossing die de nauplii en de resterende niet-gehate eieren bevat, zich onder het niveau van de buis bevindt. Voeg in de tweede container de resterende zoutoplossing uit stap 2.1 boven de hoogte van de buis toe.
  7. Bedek de container met de nauplii en de resterende niet-gehate eieren met aluminiumfolie. Plaats de lamp op de tweede container met alleen de zoutoplossing. De pekelgarnalen worden aangetrokken door het licht en migreren van de ene container naar de andere (oogstcontainer), wat leidt tot een efficiënte scheiding tussen eieren (langzaam bezinkt naar de bodem) en levende Artemia.
  8. Plaats de apparatuur vervolgens in de incubator onder dezelfde omstandigheden als in stap 4.4 gedurende 4 uur (figuur 2E). Verzamel uit de oogstcontainer 900 μL zoutoplossing met 10 tot 15 nauplii. Plaats de zoutoplossing met nauplii in elk putje van een 24-wellsplaat (figuur 2F); alle monsters worden getest in quadruplicaten.
  9. Voeg 100 μL elk van de negatieve controle (DMSO), de positieve controle (K2Cr2O7, kaliumdichromaat), de kunstmatige zoutoplossing en elk van de monsters toe aan de respectieve put (figuur 2F)13,14.
    OPMERKING: De monsters in elke put zullen in een concentratie van 0,01 mg / ml zijn. De uiteindelijke concentratie van de positieve controle in zoutoplossing zal 0,1 mg / ml zijn, om er zeker van te zijn dat alle nauplii in de put worden blootgesteld aan het toxische effect van kaliumdichromaat en sterven. De kunstmatige zoutoplossing zal als blanco werken.
  10. Incubeer de plaat bij 25 ± 3 °C onder verlichting gedurende 24 uur (figuur 2G). Registreer na 24 uur het aantal dode larven (niet-mobiele nauplii gedurende 5 s) in elke put onder een binoculaire microscoop (12x)20 (figuur 2H). U kunt ook een handlens gebruiken.
  11. Voeg 100 μL kaliumdichromaatoplossing toe om de dood van de resterende levende larven te induceren en wacht tot 6 uur. Tel de totale dode larven in elke put onder een microscoop. Bepaal het sterftecijfer volgens de volgende vergelijking.
    figure-protocol-1
  12. Voer alle testen in drievoud uit. Bereken standaarddeviaties (SD) en druk de resultaten uit als het gemiddelde van drie onafhankelijke experimenten, elk met interne quadruplicaten (n = 12), ± SD. Zoals vermeld door Meyer et al., beschouw ruwe extracten en zuivere verbindingen met LC50< 1.000 μg / ml als giftig; houd er ook rekening mee dat het sterftecijfer van pekelgarnalen evenredig is met de concentratie van de geteste monsters21.

figure-protocol-2
Figuur 2: Artemia salina lethality bioassay methode. (A) In de handel verkrijgbare apparatuur voor het uitkomen van pekelgarnalencysten; B) handgemaakte migratieapparatuur; c) broedvat gevuld met zoutoplossing; D) verzameling van niet-gehate eieren en nauplii; (E) Handgemaakte apparatuur in de incubator tijdens de migratiestap. De container ver van de lamp moet worden bedekt met aluminiumfolie; voor een beter zicht op de ingestelde installatie hier werd deze echter verwijderd; (F) Het oogsten van Artemia in putten voorafgaand aan het uitvoeren van de test. De verbindingen moeten worden geplaatst zoals aangegeven: - verwijst naar de negatieve controle (DMSO), + naar de positieve controle (K2Cr2O7), zout naar de kunstmatige zoutoplossing en 1 tot 3 naar de te testen monsters (in dit geval verbindingen 1-3); G) Incubatie van de 24-wellsplaat met Artemia en de geselecteerde monsters; (H) Artemia telling onder de binoculaire microscoop. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figure-protocol-3
Figuur 3: Structuren van geselecteerde verbindingen. Structuur van verbindingen 1-2, geëxtraheerd uit Plectranthus-soorten , en verbindingen 3-5, verkregen door semi-synthese. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De algemene toxiciteit van sommige natuurlijke producten die onlangs door onze groep zijn bestudeerd, werd geëvalueerd door middel van de pekelgarnalen letaliteitsbioassay. Vier extracten (Pa- P. ambigerus; Pb- P. barbatus; PC- P. cylindraceus; en Pe-P. ecklonii) uit het geslacht Plectranthus , bekend om hun antioxiderende activiteit (ongepubliceerde resultaten), werden getest. Daarnaast twee natuurlijke verbindingen (1 en 2) verkregen uit Plectranthus spp., en drie s...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

In de afgelopen jaren heeft de wetenschappelijke gemeenschap haar aandacht voor alternatieve modellen voor toxiciteitsscreenings vergroot21. Naast A. salina letaliteit bioassay, worden andere methoden meestal uitgevoerd voor de evaluatie van de verdraagbaarheid van monsters en omvatten gewervelde bioassays (zoals knaagdieren), ongewervelde dieren (zoals zebravissen), in vitro methoden met behulp van giststammen of cellen, en in silico-methoden 22,23,24,25

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs verklaren geen belangenconflicten, financieel of anderszins.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ter nagedachtenis aan professor Amilcar Roberto.

Dit werk werd financieel ondersteund door Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT, Portugal) in het kader van de projecten UIDB/04567/2020 en UIDP/04567/2020 toegeschreven aan CBIOS en PhD-subsidie SFRH/BD/137671/2018 (Vera Isca).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
24-well platesThermo Fisher Scientific, Denmark174899Thermo Scientific Nunc Up Cell 24 multidish
Aluminium foilAlbal-Kan worden gekocht in de supermarkt
Artemio SetJBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Germany61066000Kan worden gekocht in dierenwinkels
Binocular microscopeCeti, Belgium 1700.0000Flexum-24AED, 220-240 V, 50 Hz
Bottles--0,5 L Diameter: 5,8 cm; Hoogte: 12 cm
Brine shrimp cystsJBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Germany3090700Kan worden gekocht in dierenwinkels
Brine shrimp saltJBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Germany3090600Kan worden gekocht in dierenwinkels
Dimethyl sulfoxide (DMSO)VWR chemicalsCAS: 67-68-5 99% zuiverheid
Discartable tipsDiamondF171500Volumebereik: 100 - 1000 µL
Eppendorf microtubesBRAND7,80,546Microtubes, PP, 2 mL, BIO-CERT PCR QUALITY
Erlenmeyer flaskVWR chemicals4,47,109volume: 100 mL
Glass beakerNormax3.2111654NVolume: 1000 mL
GlovesGuantes LunaGLSP3-
GraphPad PrismGraphPad Software, San Diego, CA, USA-GraphPad Prism versie 5.00 voor Windows, www.graphpad.com, benaderd op 5 februari 2021; commerciële statistische analysesoftware
Home-made A. salina Grower - -Zelf gemaakt: twee plastic flessen verbonden door een slang
Hot glueParksidePHP500E3230 V, 50 Hz, 25 W
IncubatorHeidolph Instruments, Denmark  -Een Heidolph Unimax 1010-apparaat en een Heidolph Inkubator 1006
LightRoblanSKYC3008FE14LED-lamp
MicropipettesVWR chemicals613-5265Volumebereik: 100 - 1000 µL
Potassium dichromate (K2Cr2O7)VWR chemicalsCAS: 7778-50-9 99% zuiverheid
Pump ProAir a50JBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Germany -Opgenomen in het Artemio Set+1-kit
Rubber tube--1,3 cm buiten en 0,9 cm binnendiameter
Stirring rodVWR chemicals441-0147figure-materials-1 6 mm, 250 mm
TermometerVWR chemicals620-08210 - 100 °C

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Ntungwe, N. E., et al. Artemia species: An important tool to screen general toxicity samples. Current Pharmaceutical Design. 26 (24), 2892-2908 (2020).
  2. Cragg, G. M., Newman, D. J. Natural products: A continuing source of novel drug leads. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - General Subjects. 1830 (6), 3670-3695 (2013).
  3. Ntungwe, E., et al. General toxicity screening of Royleanone derivatives using an artemia salina model. Journal Biomedical and Biopharmaceutical Research. 18 (1), 114(2021).
  4. Seca, A., Plant Pinto, D. secondary metabolites as anticancer agents: Successes in clinical trials and therapeutic application. International Journal of Molecular Sciences. 19 (1), 263(2018).
  5. Calixto, J. B. The role of natural products in modern drug discovery. Anais da Academia Brasileira de Ciências. 91 (3), 1-7 (2019).
  6. Mandrell, D., et al. Automated zebrafish chorion removal and single embryo placement: optimizing throughput of zebrafish developmental toxicity screens. Journal of Laboratory Automation. 17 (1), 66-74 (2012).
  7. Zhang, Y., Mu, J., Han, J., Gu, X. An improved brine shrimp larvae lethality microwell test method. Toxicology Mechanisms and Methods. 22 (1), 23-30 (2012).
  8. Domínguez-Villegas, V., et al. antioxidant and cytotoxicity activities of methanolic extract and prenylated flavanones isolated from leaves of eysehardtia platycarpa. Natural Product Communications. 8 (2), 177-180 (2013).
  9. Hamidi, M. R., Jovanova, B., Panovska, T. K. Toxicological evaluation of the plant products using Brine Shrimp (Artemia salina L.) model. Macedonian Pharmaceutical Bulletin. 60 (01), 9-18 (2014).
  10. Libralato, G., Prato, E., Migliore, L., Cicero, A. M., Manfra, L. A review of toxicity testing protocols and endpoints with Artemia spp. Ecological Indicators. 69, 35-49 (2016).
  11. Mendes Hacke, A. C., et al. Cytotoxicity of cymbopogon citratus (DC) Stapf fractions, essential oil, citral, and geraniol in human leukocytes and erythrocytes. Journal of Ethnopharmacology. 291, 115147(2022).
  12. Thangapandi, V., Pushpanathan, T. Comparison of the Artemia salina and Artemia fransiscana bioassays for toxicity of Indian medicinal plants. Journal of Coastal Life Medicine. 2 (6), 453-457 (2014).
  13. Syahmi, A. R. M., et al. Acute oral toxicity and brine shrimp lethality of Elaeis guineensis Jacq., (Oil Palm Leaf) methanol extract. Molecules. 15 (11), 8111-8121 (2010).
  14. Sasidharan, S., et al. Acute toxicity impacts of Euphorbia hirta L extract on behavior, organs body weight index and histopathology of organs of the mice and Artemia salina. Pharmacognosy Research. 4 (3), 170(2012).
  15. Libralato, G. The case of Artemia spp. in nanoecotoxicology. Marine Environmental Research. 101, 38-43 (2014).
  16. Okumu, M. O., et al. Artemia salina as an animal model for the preliminary evaluation of snake venom-induced toxicity. Toxicon: X. 12, 100082(2021).
  17. Rajabi, S., Ramazani, A., Hamidi, M., Naji, T. Artemia salina as a model organism in toxicity assessment of nanoparticles. DARU Journal of Pharmaceutical Sciences. 23 (1), 20(2015).
  18. Svensson, B. -M., Mathiasson, L., Mårtensson, L., Bergström, S. Artemia salina as test organism for assessment of acute toxicity of leachate water from landfills. Environmental Monitoring and Assessment. 102 (1), 309-321 (2005).
  19. Banti, C., Hadjikakou, S. Evaluation of toxicity with brine shrimp assay. Bio-Protocol. 11 (2), 3895(2021).
  20. Pecoraro, R., et al. Artemia salina: A microcrustacean to assess engineered nanoparticles toxicity. Microscopy Research and Technique. 84 (3), 531-536 (2021).
  21. Lillicrap, A., et al. Alternative approaches to vertebrate ecotoxicity tests in the 21st century: A review of developments over the last 2 decades and current status. Environmental Toxicology and Chemistry. 35 (11), 2637-2646 (2016).
  22. Ribeiro, I. C., et al. Yeasts as a model for assessing the toxicity of the fungicides Penconazol, Cymoxanil and Dichlofulanid. Chemosphere. (10), 1637-1642 (2000).
  23. Armour, C. D., Lum, P. Y. From drug to protein: using yeast genetics for high-throughput target discovery. Current Opinion in Chemical Biology. 9 (1), 20-24 (2005).
  24. Modarresi Chahardehi, A., Arsad, H., Lim, V. Zebrafish as a successful animal model for screening toxicity of medicinal plants. Plants. 9 (10), 1345(2020).
  25. Fischer, I., Milton, C., Wallace, H. Toxicity testing is evolving. Toxicology Research. 9 (2), 67-80 (2020).
  26. de Araújo, G. L., et al. Alternative methods in toxicity testing: the current approach. Brazilian Journal of Pharmaceutical Sciences. 50 (1), 55-62 (2014).
  27. Toussaint, M., et al. A high-throughput method to measure the sensitivity of yeast cells to genotoxic agents in liquid cultures. Mutation Research/Genetic Toxicology and Environmental Mutagenesis. 606 (1), 92-105 (2006).
  28. Horzmann, K. A., Freeman, J. L. Making waves: New developments in toxicology with the zebrafish. Toxicological Sciences. 163 (1), 5-12 (2018).
  29. Avdesh, A., et al. Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: An introduction. Journal of Visualized Experiments. (69), e4196(2012).
  30. Cunliffe, V. T. Zebrafish: A Practical Approach. Nüsslein-Volhard, C., Dahm, R. , Oxford University Press. (2002).
  31. Sitarek, P., et al. Insight the biological activities of selected Abietane Diterpenes isolated from Plectranthus spp. Biomolecules. 10 (2), 194(2020).
  32. Matias, D., et al. Cytotoxic activity of Royleanone Diterpenes from Plectranthus madagascariensis Benth. ACS Omega. 4 (5), 8094-8103 (2019).
  33. Garcia, C., et al. Royleanone derivatives from Plectranthus spp. as a novel class of P-glycoprotein inhibitors. Frontiers in Pharmacology. 11, (2020).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Artemia salina bioassaypekelgarnaal lethalityalgemene toxiciteitsscreeningcytotoxiciteitstestextracten van natuurproductenmortaliteit van naupliikaliumdichromaatcontrolemonsterbereidingbinoculaire microscopieuitbroedprocedure

Gerelateerde artikelen