Detectie van polyfunctionele T-cellen bij kinderen die zijn gevaccineerd met japans encefalitisvaccin via de flowcytometrietechniek

Linlin Zhang; Meng Zhang; Mengjia Liu; Junhong Ai; Jiao Tian; Huizheng Ge; Ran Wang; Zhengde Xie

doi:10.3791/64671

Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Detectie van polyfunctionele T-cellen bij kinderen die zijn gevaccineerd met japans encefalitisvaccin via de flowcytometrietechniek

1.9K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/64671

⸱

23 september 2022

Linlin Zhang^*¹^,² , Meng Zhang^*¹^,²^,³ , Mengjia Liu¹^,² , Junhong Ai¹^,² , Jiao Tian¹^,² , Huizheng Ge⁴ , Ran Wang¹^,² , Zhengde Xie¹^,²

¹Beijing Key Laboratory of Pediatric Respiratory Infectious Diseases, Key Laboratory of Major Diseases in Children, Ministry of Education, National Clinical Research Center for Respiratory Diseases, Laboratory of Infection and Virology, Beijing Pediatric Research Institute, Beijing Children’s Hospital, Capital Medical University, National Center for Children’s Health, ²Research Unit of Critical Infection in Children, 2019RU016, Chinese Academy of Medical Sciences, ³Department of Pediatric Rehabilitation, Beijing Boai Hospital, School of Rehabilitation Medicine, Capital Medical University, China Rehabilitation Research Center, ⁴Center of Excellence (Beijing), Becton Dickinson Medical Devices (Shanghai) Co Ltd

^* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

Het huidige protocol combineert ex vivo stimulatie en flowcytometrie om polyfunctionele T-cel (T_PF) profielen te analyseren in perifere mononucleaire bloedcellen (PBMC's) binnen Japanse encefalitisvirus (JEV) -gevaccineerde kinderen. De detectiemethode en het flowcytometriekleurenschema van JEV-specifieke TPF's werden getest om een referentie te bieden voor vergelijkbare studies.

Samenvatting

T-cel-gemedieerde immuniteit speelt een belangrijke rol bij het beheersen van flavivirusinfectie, hetzij na vaccinatie of na natuurlijke infectie. De "kwaliteit" van een T-cel moet worden beoordeeld op functie en een hogere functie wordt geassocieerd met een krachtigere immuunbescherming. T-cellen die tegelijkertijd twee of meer cytokines of chemokines op eencellig niveau kunnen produceren, worden polyfunctionele T-cellen (T_PFs) genoemd, die immuunresponsen bemiddelen via een verscheidenheid aan moleculaire mechanismen om degranulatiemarkers (CD107a) tot expressie te brengen en interferon (IFN) -γ, tumornecrosefactor (TNF) -α, interleukine (IL) -2 of macrofaag ontstekingseiwit (MIP) -1α uit te scheiden. Er zijn steeds meer aanwijzingen dat T_PF'snauw samenhangen met het behoud van het langetermijnimmuungeheugen en de bescherming en dat hun verhoogde aandeel een belangrijke marker is van beschermende immuniteit en belangrijk is voor de effectieve bestrijding van virale infecties en reactivering. Deze evaluatie is niet alleen van toepassing op specifieke immuunresponsen, maar ook op de beoordeling van kruisreactieve immuunresponsen. Hier, met het Japanse encefalitisvirus (JEV) als voorbeeld, werden de detectiemethode en het flowcytometriekleurenschema van JEV-specifieke T_PF'sgeproduceerd door perifere mononucleaire bloedcellen van kinderen die waren gevaccineerd tegen Japanse encefalitis getest om een referentie te bieden voor vergelijkbare studies.

Inleiding

Japans encefalitisvirus (JEV) is een belangrijk door muggen overgedragen virus dat behoort tot het geslacht Flavivirus binnen de Flaviviridae-familie¹. Veel landen in Azië en de Stille Oceaan worden al lang geconfronteerd met enorme uitdagingen op het gebied van de volksgezondheid als gevolg van de enorme ziektelast veroorzaakt door Japanse encefalitis (JE), maar dit is dramatisch verbeterd met de toenemende beschikbaarheid van verschillende soorten vaccinaties². Adaptieve beschermende immuunresponsen die worden opgeroepen door natuurlijke infectie of vaccinatie dragen bij aan de preventie en antivirale regulati....