Dit protocol beschrijft een methode voor het monitoren van de progressie van morfologische veranderingen in de loop van de tijd in de baarmoeder in een induceerbaar muismodel van endometriumkanker met behulp van echografie met correlatie met grove en histologische veranderingen.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Niet-invasieve echografie van endometriumkankerprogressie bij Pax8-gerichte deletie van de tumoronderdrukkers Arid1a en Pten bij muizen
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Baarmoederkanker kan worden bestudeerd bij muizen vanwege het gemak van hantering en genetische manipulatie in deze modellen. Deze studies zijn echter vaak beperkt tot het beoordelen van pathologie post-mortem bij dieren die op meerdere tijdstippen in verschillende cohorten zijn geëuthanaseerd, waardoor het aantal muizen dat nodig is voor een studie toeneemt. Beeldvormende muizen in longitudinale studies kunnen de progressie van de ziekte bij individuele dieren volgen, waardoor het aantal benodigde muizen wordt verminderd. Vooruitgang in ultrasone technologie heeft de detectie van veranderingen op micrometerniveau in weefsels mogelijk gemaakt. Echografie is gebruikt om follikelrijping in eierstokken en xenograftgroei te bestuderen, maar is niet toegepast op morfologische veranderingen in de baarmoeder van de muis. Dit protocol onderzoekt de juxtapositie van pathologie met in vivo beeldvormingsvergelijkingen in een geïnduceerd endometriumkankermuismodel. De kenmerken waargenomen door echografie waren consistent met de mate van verandering waargenomen door grove pathologie en histologie. Echografie bleek zeer voorspellend te zijn voor de waargenomen pathologie en ondersteunde de opname van echografie in longitudinale studies van baarmoederziekten zoals kanker bij muizen.
Inleiding
Muizen blijven een van de belangrijkste diermodellen voor voortplantingsstoornissen 1,2,3. Er zijn verschillende genetisch gemodificeerde of geïnduceerde knaagdiermodellen van eierstok- en baarmoederkanker. Deze studies zijn meestal afhankelijk van meerdere cohorten die op verschillende tijdstippen worden geëuthanaseerd om longitudinale trends in morfologische en pathologische veranderingen vast te leggen. Dit voorkomt de mogelijkheid om continue gegevens over de ontwikkeling van kanker in een individuele muis te verkrijgen. Bovendien, zonder de individuele ziekteprogressieto....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle procedures en experimenten met muizen werden uitgevoerd volgens protocollen die zijn goedgekeurd door het Johns Hopkins Animal Care and Use Committee. Voor alle procedures werden geschikte PBM's gedragen, inclusief handschoenen en wegwerpisolatiejassen. Er werden voorzorgsmaatregelen genomen bij het hanteren van scherpe voorwerpen, die onmiddellijk na gebruik op de juiste manier werden weggegooid in rode doos scherpe containers. Zie de Materiaaltabel voor meer informatie over alle materialen en apparatuur die in dit protocol worden gebruikt.
1. Inductie van endometriumkanker bij iPAD (induceerbare Pten, Arid1....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Pax8-Cre-Arid1a-Pten double deletion (iPAD) transgene muizen werden gehandhaafd op een gemengde genetische achtergrond (129S, BALB/C, C57BL/6), zoals eerder beschreven14. De muizen kregen allemaal een doxycyclinevoer gedurende 2 weken om Cre-recombinase te induceren. In eerder werk van onze groep werd doxycycline gedoseerd door gavage14; In deze huidige studie werkte de doxycycline-voedingsinductiemethode echter efficiënt en verminderde de stress van de ma.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Dit protocol onderzoekt het nut van echografie voor het beoordelen van baarmoedermorfologische veranderingen in de progressie van adenocarcinoom in de baarmoeder bij muizen. In deze studie, door de inductie van endometriumkanker bij muizen longitudinaal te volgen, bleken de anatomische details gedetecteerd door echografie indicatoren te zijn van grove en histologische pathologie. Dit opent de deur voor het gebruik van longitudinale studies met kleinere aantallen muizen die op meerdere tijdstippen door echografie worden g.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben geen belangenconflicten bekend te maken.
Dankbetuigingen
We zijn dankbaar voor de financiering van het NCI Ovarian Cancer SPORE Program P50CA228991, postdoctoraal trainingsprogramma 5T32OD011089 en de Richard W. TeLinde Endowment, Johns Hopkins University. Het project werd ook gedeeltelijk gefinancierd door de subsidies voor lopende uitgaven aan particuliere instellingen voor hoger onderwijs van de Promotion and Mutual Aid Corporation for Private Schools of Japan.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Reagenten en apparatuur gebruikt voor dierverzorging | |||
| Rodent Diet (2018, 625 Doxycycline) | Envigio | TD.01306 | Muizenvoer |
| Reagenten en apparatuur gebruikt voor echografie | |||
| 10 mL injecteerbare 0,9% NaCl | Hospira, Inc | RL-7302 | Isotone vloeistof |
| Absorbtion Pad met plastic onderzijde | Daigger | EF8313 | Absorberende Pads |
| Anesthesie Inductiekamers | Harvard Apparatus | 75-2029 | Inductiekamer |
| Anesthesie absorber kit met absorber canister, houder, slangen en adapters | CWE, Inc | 13-20000 | Neuskoker en slangen |
| Aquasonic Clear Ultrasound Gel (0,25 Liter) | Parker Laboratoies | 08-03 | Ultrasound Gel |
| BD Plastipak 3 mL Spuit | BD Biosciences | 309657 | Spuit |
| F/Air Scavenger Koolstof Canister | OMNICON | 80120 | Scavenging Systeem voor Anesthesie |
| Isoflurane, USP | Vet One | 502017 | Anesthesiemiddel |
| M1050 Non-Rebreathing Mobiele Anesthesie Apparatuur | Scivena Scientific | M1050 | Anesthesie Verdamper |
| MX550S, 25-55 MHz Transducer, 15mm, Lineair | VisualSonics | MX550S | Ultrasound Transducer (Probe) |
| Nair Hair Aloe & Lanolin Hair Removal Lotion - 9.0 oz | Nair | Ontharingscrème | |
| Philips Norelco Multigroomer All-in-One Trimmer Series 7000 | Philips North America | MG7750 | Scheermachine |
| PrecisionGlide 25 G 1" Naald | BD Biosciences | 305125 | Naald |
| Puralube Ophthalmic Zalf | Dechra | 17033-211-38 | Smerende Oogdruppels |
| Vevo 3100 Imaging Systeem | VisualSonics | Vevo 3100 | Ultrasound Apparaat |
| Vevo LAB 5.6.1 | VisualSonics | Vevo LAB 5.6.1 | Ultrasound Analyse Software |
| Vinyl Verwarmingspad met cover, 12 x 15" | Sunbeam | 731-500-000R | Verwarmingspad |
| Wd Elements 2TB Basis Opslag | Western Digital Elements | WDBU6Y0020BBK-WESN | Data Opslag |
| Reagenten en apparatuur gebruikt voor Immunohistochemische analyse | |||
| 10% w/v Formalin | Fischer Scientific | SF98-4 | Weefsel Fixatie Buffer |
| Animal-Free Blocker en Diluent, R.T.U. | Vector Laboratories Inc. | SP5035 | Antilichaam Blocker |
| Charged Super Frost Plus Glas Slides | VWR | 4831-703 | Weefsel Montage Slides |
| Citraat Buffer | MilliporeSigma | C9999-1000ML | Epitope Retrival Buffer (pTEN) |
| Cytoseal – 60 | Thermo Scientific | 8310-4 | Hars voor Slide Sealing |
| Gold Seal Dekglas | Thermo Scientific | 3322 | Dekglas |
| Harris Gemodificeerd Hematoxyline | MilliporeSigma | HHS32-1L | Counterstain Buffer |
| Hybridisatie Incubator (Dubbele Kamer) | Fischer Scientific | 13-247-30Q | Oven om Parraffin te smelten |
| ImmPACT DAB Substraat, Peroxidase (HRP) | Vector Laboratories Inc. | SK-4105 | Signaal Ontwikkeling Substraat |
| ImmPRESS HRP Goat Anti-Rabbit IgG Polymeer Detectie Kit, Peroxidase | Vector Laboratories Inc. | MP-7451 | Secundaire IHC Antilichaam |
| Oster 5712 Digital Food Steamer | Oster | 5712 | Groentestomer voor Epitope Retrival |
| rabbit mAB anti-ARID1a | abcam | ab182560 | Primaire IHC Antilichaam (1:1.000) |
| rabbit mAB anti-PTEN | Cell Signaling | 9559 | Primaire IHC Antilichaam (1:100) |
| Scotts Tap Water Substitute | MilliporeSigma | S5134-100ML | "Blueing" Buffer |
| Tissue Path IV Cassette | Fischer Scientific | 22272416 | Weefsel Fixatie Cassette |
| Trilogy Buffer | Cell Marque | 920P-10 | Epitope Retrival Buffer (ARID1a) |
Referenties
- Ajayi, A. F., Akhigbe, R. E. Staging of the estrous cycle and induction of estrus in experimental rodents: an update. Fertility Research and Practice. 6, 5(2020).
- Kim, S. W., Kim, Y. Y., Kim, H., Ku, S. Y. Animal models closer to intr....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
