We hebben de routines getest op ABR-golfvormresponsen op een klikreeks, beginnend bij 75 dB en aftredend in stappen van 5 dB naar 5 dB. Deze gegevens zijn verkregen zoals eerder beschreven19. We hebben de tool ook getest op toon pip-gegevens en vergelijkbare resultaten verkregen. ABR-gegevens van de meeste ABR-systemen kunnen worden geëxporteerd als ASCII-bestanden (.txt). We laadden ABR ASCII-bestanden op een computer en openden ze in RStudio zoals beschreven in het protocol. Na het uitvoeren van de FindPeaks.R-routine in batchvorm, verkregen we sample waveforms met geautomatiseerde labeling (Figuur 1) en een .csv bestand met de resultaten. De resultaten werden beoordeeld om irrelevante pieken te verwijderen. Om de geautomatiseerde etikettering te valideren, hebben we ook de mogelijkheid van het ABR-programma gebruikt om de eerste vijf pieken en dalen handmatig te labelen op elke golfvorm die is verkregen met de hierboven beschreven klikreeks. De experimentator die deze taak uitvoerde, had 2 jaar ervaring met het vastleggen en analyseren van ABR-gegevens. Figuur 2 toont deze vergelijking, met de geautomatiseerde FindPeaks.R-gegevens in het rood en de handmatig verkregen gegevens in het zwart. Elke trace vertegenwoordigt de gegevens van een enkele muis. Het gemiddelde voor beide methoden met één standaarddeviatie wordt ook weergegeven. De resultaten verkregen door FindPeaks.R correleren sterk met resultaten die handmatig worden verkregen (zie aanvullende figuur S4).

Figuur 1: Representatieve golfvormrespons op een klikstimulus van 75 dB voor een jonge F1-muis. Latentie in milliseconden wordt uitgezet op de x-as en amplitude in microvolts wordt uitgezet op de y-as. De pieken werden automatisch geïdentificeerd met FindPeaks.R en zijn gelabeld in rood, terwijl de dalen in blauw zijn gelabeld. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figuur 2: Vergelijking van de gegevens verkregen uit de handmatig geïdentificeerde pieken met de gegevens die worden verstrekt door de FindPeaks.R-analyse. (A, C, E, G, I) Amplitudes in microvolts en (B, D, F, H, J) latenties in milliseconden worden uitgezet voor geluidsniveaus tussen 5 dB en 75 dB (x-as, alle grafieken) voor pieken I-V in de golfvormen die worden verkregen voor klikstimuli gepresenteerd aan 12 muizen. De handmatig verkregen waarden (zwart) worden vergeleken met dezelfde datasets geanalyseerd met FindPeaks.R (rood). De gemiddelden worden uitgezet als zware lijnen, waarbij het gearceerde gebied één standaarddeviatie vertegenwoordigt. Er werden geen verschillen gezien tussen de methoden bij beoordeling met de Kruskal-Wallis rangsomtest (A, verschil = 0,0547977 ± 0,0010028, max = 0,96, p = 0,9216; B, verschil = −0,0001734 ± 0,0001214, max = 0,04, p = 0,8289; C, verschil = −0,0212209 ± 0,0006806, max = 0,92, p = 0,9687; D, verschil = −0,0011047 ± 0,0001556, max = 0,06, p = 0,771; E, verschil = −0,0323077 ± 0,0006169, max = 0,66, p = 0,899; F, verschil = −0,0072189 ± 0,0001460, max = 0,04, p = 0,8644; G, verschil = 0,201754 ± 0,0007407, max = 0,64, p = 0,9312; H, verschil = −0,0007018 ± 0,0001717, max = 0,09, p = 0,8013; I, verschil = 0,0347561 ± 0,0007343, max = 1,05, p = 0,8856; J, verschil = −0,0078049 ± 0,0002762, max = 0,16, p = 0,886), en de resultaten waren sterk gecorreleerd (chi-kwadraatwaarden: A, 0,009696; B, 0,046684; C, 0,0015395; D, 0,084742; E, 0,016102; F, 0,029153; G, 0,0074604; H, 0,063322; I, 0,020699; J, 0,020544; verschillen gepresenteerd als gemiddelde ± SEM; max = absoluut maximaal verschil). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Aanvullende figuur S1: Analyse met FindPeaks.R. (A) Het selecteren van de werkmap (zie protocol stap 3.2); (B) het laden van het programma (zie protocol stap 3.3). Klik hier om dit bestand te downloaden.
Aanvullende figuur S2: Scriptuitvoer en opdrachten voor de analyse van de golfvormen. Opdrachten voor (A) individuele bestanden en (B) batchverwerking. (C) Uitvoer PDF-bestand met golfvormen met gelabelde pieken en dalen. Zie protocol stap 3.4. Klik hier om dit bestand te downloaden.
Aanvullende figuur S3: Verificatie van de analyse. (A) Het laden van de golfvormgegevens (zie protocol stap 4.1). (B) Locatie van de knop App uitvoeren . Het voorbeeldgegevensbestand wordt ook aangegeven. (C) Glanzend venster met een golfvorm. In dit geval is het geluidsniveau 75 dB, zoals ingevoerd in het bovenste venster. Door op een gewenste piek te klikken en de volgende trog worden de gegevens voor de amplitude en latentie in de tabel vastgelegd (protocolstap 4.6). Piek 3-gegevens worden weergegeven. Klik hier om dit bestand te downloaden.
Aanvullende figuur S4: Vergelijking van de individuele gegevens verkregen uit de handmatig geïdentificeerde pieken met de gegevens die worden verstrekt door de FindPeaks.R-analyse. (A,C,E,G,I) Amplitudes in microvolts en (B,D,F,H,J) latenties in milliseconden worden uitgezet voor geluidsniveaus tussen 5 dB en 75 dB (x-as, alle grafieken) voor pieken I-V in golfvormen verkregen voor klikstimuli gepresenteerd aan 12 muizen. Elk dier is gelabeld met een unieke kleur, zoals weergegeven in de legende. De gegevens die zijn verkregen met FindPeaks.R zijn gelabeld met effen kleuren, terwijl de gegevens die handmatig worden verkregen, worden gelabeld met minder verzadigde versies van dezelfde kleuren. Hoewel beide datasets in deze figuur worden uitgezet, is er slechts één regel zichtbaar wanneer ze identiek zijn. Klik hier om dit bestand te downloaden.