Er wordt een protocol gepresenteerd voor de handige en high-throughput isolatie en verrijking van glandulaire capitate stalked en sessiele trichomen van Cannabis sativa. Het protocol is gebaseerd op een droge, niet-bufferextractie van trichomen met alleen vloeibare stikstof, droogijs en nylonzeven en is geschikt voor RNA-extractie en transcriptomische analyse.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Niet-waterige isolatie en verrijking van glandulaire capitate gestalkte en sessiele trichomen van Cannabis sativa
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Dit artikel presenteert een protocol voor de handige en high-throughput isolatie en verrijking van glandulaire capitate stalked en sessiele trichomen van Cannabis sativa. De biosynthetische routes voor cannabinoïde en vluchtig terpeenmetabolisme zijn voornamelijk gelokaliseerd in de Cannabis trichomen, en geïsoleerde trichomen zijn gunstig voor transcriptoomanalyse. De bestaande protocollen voor het isoleren van glandulaire trichomen voor transcriptomische karakterisering zijn onhandig en leveren gecompromitteerde trichoomkoppen en een relatief lage hoeveelheid geïsoleerde trichomen. Bovendien vertrouwen ze op dure apparaten en isolatiemedia die eiwitremmers bevatten om RNA-afbraak te voorkomen. Het huidige protocol stelt voor om drie individuele modificaties te combineren om een grote hoeveelheid geïsoleerde glandulaire capitate stalked en sessiele trichomen te verkrijgen van respectievelijk C. sativa volwassen vrouwelijke bloeiwijzen en waaierbladeren. De eerste wijziging omvat het vervangen van vloeibare stikstof door het conventionele isolatiemedium om de doorgang van trichomen door de microzeven te vergemakkelijken. De tweede wijziging omvat het gebruik van droogijs om de trichomen los te maken van de plantenbron. De derde modificatie houdt in dat het plantmateriaal achtereenvolgens door vijf microzeven van afnemende poriegroottes wordt geleid. Microscopische beeldvorming toonde de effectiviteit van de isolatietechniek voor beide trichoomtypen. Bovendien was de kwaliteit van RNA geëxtraheerd uit de geïsoleerde trichomen geschikt voor downstream transcriptomische analyse.
Inleiding
Glandulaire trichomen zijn haarachtige structuren die aanwezig zijn in planten die veel secundaire metabolietenbevatten 1 en een waardevolle bank van nieuwe biosynthetische genen en enzymen2 vertegenwoordigen. In cannabis is de biosynthese van de belangrijke secundaire metabolieten, cannabinoïden3 en terpenen4, gelokaliseerd in de trichomen. Gezien de rol van trichomen bij het bepalen van de kwaliteit van cannabis, zowel voor medicinaal als recreatief gebruik, is de studie van trichomengenexpressie van belang. Om de expressie van trichomenspecifieke genen te karakteriseren, moeten de trichomen van belang eerst worden geïsoleerd. Trichoomisolatieprotocollen werden voor het eerst beschreven in 19925, en hun nieuwste ontwikkelingen zijn onlangs beoordeeld2. Over het algemeen kunnen protocollen voor het extraheren van glandulaire trichomen voor transcriptomische karakterisering worden onderverdeeld in twee verschillende opeenvolgende stappen. De eerste stap omvat een grondige fysieke scheiding van de trichomen van het plantenweefsel. Deze stap kan worden uitgevoerd met droogijs5, glasparels met een commercieel apparaat6,7, het vermalen van het plantmateriaal tegen een gaaszeef8, of het vortexen van het plantenweefsel in een isolatiebuffer9. De tweede stap omvat een meer verfijnde scheiding van de trichomen van belang van de microscopische plantenresten en / of andere trichoomsoorten. Deze stap kan worden uitgevoerd met behulp van dichtheidsgradiëntcentrifugatie 8,10 of zeven van verschillende groottes 7,9. Vanwege de extreme gevoeligheid van RNA in bewerkte weefsels voor afbrekende middelen, worden deze twee opeenvolgende stappen meestal uitgevoerd in het ijskoude isolatiemedium, vaak in aanwezigheid van eiwitremmers4.
Conventionele trichoomisolatieprotocollen vereisen, naast de ijskoude temperaturen, grote hoeveelheden isolatiemedium om een efficiënte extractieprocedure te garanderen. De combinatie van deze componenten resulteert in een moeizaam, tijdrovend isolatieproces dat een hoge doorvoer belemmert. Het presenteren van een eenvoudig, gebruiksvriendelijk alternatief trichome-isolatieprotocol is daarom waarschijnlijk gunstig voor verschillende aspecten die verband houden met trichoomkarakterisering. Het huidige artikel heeft tot doel een alternatief protocol aan te bieden voor het isoleren van gestalkte en sessiele glandulaire capitate trichomen van Cannabis sativa door verschillende elementen uit de conventionele protocollen te combineren en te integreren. Deze elementen omvatten droogijs5, het passeren van de trichomen door verschillende microzeven met afnemende poriegroottes 7,9 en het vervangen van vloeibare stikstof (LN) voor het isolatiemedium8.
De nieuwigheid van het huidige trichomenisolatieprotocol, in vergelijking met conventionele protocollen, presenteert zich op een aantal manieren. Dit protocol is handig, omdat het geen gevaarlijke componenten vereist. De procedure kan in het laboratorium worden uitgevoerd met minimale voorzorgsmaatregelen en vergemakkelijkt een hoge doorvoer. Het vervangen van LN door het standaard vloeibare isolatiemedium zorgt voor de integriteit van de trichomen gedurende het hele isolatieproces, waardoor daaropvolgende transcriptomische analyse mogelijk is. Bij sublimatie van de LN en droogijs blijven de geïsoleerde trichomen vrij van schadelijke resten. Verder maakt de neiging van LN om te sublimeren bij kamertemperatuur het royale gebruik ervan in het hele protocol mogelijk. Het gebruik van grote hoeveelheden conventioneel isolatiemedium levert daarentegen praktische problemen op bij de hantering ervan. Ten slotte vermindert het protocol de scheiding van de schijfcel van de resterende fragiele hoofdstructuur van het glandulaire trichome, waardoor de inhoud van de hoofdruimte behouden blijft.
Dit protocol wordt gepresenteerd op een gedetailleerde stap-voor-stap manier ontworpen om de technische praktijk van het isoleren van C. sativa glandulaire capitate trichomen te ondersteunen. Het protocol biedt een beheersbare workflow die resulteert in geïsoleerde trichomen met een hoge concentratie en zuiverheid die geschikt zijn voor downstream moleculaire analyse.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
OPMERKING: Het plantaardige materiaal dat in deze studie werd gebruikt, bestond uit vier C. sativa ARO-Volcani-stammen (CS-11, CS-12, CS-13 en CS-14) die werden gekweekt in het Volcani Center, Israël, zoals elders beschreven11. Glandulaire capitate stengel trichomen werden geïsoleerd uit volwassen bloeiwijzen, en glandulaire capitate sessile trichomen werden geïsoleerd uit grote waaierbladeren van volwassen niet-bloeiende moederplanten. Al het plantmateriaal werd vers geplukt en direct opgeslagen bij −80 °C.
LET OP: Droogijs en LN worden in het hele protocol gebruikt. Deze stoffen zijn uiterst gevaarlijk. De geïsoleerde trichomen kunnen droogijsdeeltjes bevatten die gevaarlijke gasdruk kunnen veroorzaken wanneer ze in afgesloten buizen worden geplaatst; Daarom moeten alle doppen met een naald worden doorboord. Het gebruik van een beschermende bril, geschikte laboratoriumkleding en handschoenen voor hantering bij extreem lage temperaturen wordt ten zeerste aanbevolen.
1. Opstelling voor de eerste scheiding van trichomen van het plantmateriaal
- Verpletter een droogijsblok in kleine fijne vlokken met behulp van een hamer en een hard plat voorwerp in een plastic container van 5 L.
- Zeef de fijne droogijsvlokken (kleiner dan 5 mm) van het niet-gemalen droogijs met een grote zeef (via poriën kleiner dan 5 mm) in een andere plastic container van 5 L. Giet ongeveer 200 cm3 (200 ml merkteken) van de droogijsvlokken in een rechtopstaande glazen bekerglas van 1 L.
- Voeg tot 10 g bevroren C. sativa-bloeiwijzen (vanaf nu plantaardig materiaal genoemd) toe aan de eerste laag gemalen droogijs en dek af met een extra laag van 200 cm3 fijngemalen droogijs.
- Bedek de opening van het glazen bekerglas van 1 L met twee tot drie lagen klamboe van 1 mm hordeur en bevestig het met elastiekjes aan de buitenzijden van de glazen beker (figuur 1).
- Giet LN in een grote roestvrijstalen container met ronde bodem (zie materiaaltabel), waar de geïsoleerde trichomen worden verzameld.
- Steek een gaas van 350 μm in een zeef/zeefzeef om het zeefgaas van onderaf te bedekken (figuur 2). Als er een meelzeef met een afneembare plastic ring beschikbaar is, plaatst u het gaas van 350 μm zodat het onder het gaas van de meelzeef wordt bevestigd. Zo niet, bevestig dan het gaas van 350 μm met elastiekjes aan de omtrek van de meelzeef.
- Plaats de meelzeef boven de grote roestvrijstalen container met ronde bodem gevuld met LN (figuur 3). Zorg ervoor dat de breedte van de container groter is dan die van de meelzeef om het verlies van de gezeefde massa buiten de roestvrijstalen container met ronde bodem te minimaliseren.
2. Scheiding van trichomen van het plantmateriaal
- Schud het glas van 1 L met de opening naar beneden gericht in de richting van de bloemzeef alsof u een groot zoutvaatje gebruikt (figuur 4).
- Zet het glazen bekerglas van 1 L om de 2-3 minuten opzij om het gemalen droogijs en het plantaardige materiaal dat zich op de bloemzeef heeft opgehoopt, te kunnen zeven.
- Zeef de bloemzeef horizontaal om de doorgang van het plantmateriaal in de LN in de roestvrijstalen container met ronde bodem eronder te vergemakkelijken.
- Voeg LN toe aan de roestvrijstalen container en gemalen droogijs aan het glazen bekerglas van 1 L wanneer hun niveaus laag zijn. Vul het gebruikte plantmateriaal in het glazen bekerglas aan met nog eens 10 g vers plantmateriaal wanneer het plantmateriaal op de bloemzeef is uitgeput. De aanvulling hoeft meestal niet meer dan twee keer herhaald te worden.
- Herhaal stap 2.1-2.4 totdat een voldoende hoeveelheid verrijkte trichomen is verzameld in de roestvrijstalen container met ronde bodem. Over het algemeen is 20 g vers plantaardig materiaal voldoende voor RNA-extractie en transcriptoomanalyse.
- Controleer of er een witte poederachtige substantie (bestaande uit plantenresten, kliertrichomen en gemalen droogijs) op de bodem van de roestvrijstalen container onder water in de LN zit. Een microscopische observatie zal helpen om te bepalen of er voldoende trichomen zijn verzameld; Deze stap kan echter de stroom van het protocol belemmeren. Meestal volstaat 10-20 g initieel plantmateriaal voor de meeste isolaties; Er kunnen echter verschillen zijn in de trichoomdichtheid van de planten.
OPMERKING: Vanaf dit punt kan het experiment worden onderbroken en later opnieuw worden gestart. Indien kort gepauzeerd, moeten voldoende hoeveelheden LN worden toegevoegd, zodat de trichomen onder water blijven. Als alternatief kunnen de trichomen worden verzameld en bewaard bij −80 °C gedurende maximaal 3 maanden voor later gebruik, zoals beschreven in stap 5.
3. Scheiding van glandulaire capitate trichomen (gespreid en sessiel) van andere trichomentypen, zoals bolvormige en cystolithische trichomen en puin
- Voeg een kleine hoeveelheid LN toe aan een schone kleine roestvrijstalen container met ronde bodem.
- Vouw een microzeef van 40 cm x 40 cm met een maaswijdte van 150 μm tweemaal om een vouw van 20 cm x 20 cm te verkrijgen en open deze. Zorg ervoor dat het lijkt op een kegelachtige vorm (figuur 5).
- Bevestig de gaaskegel aan de rand van de roestvrijstalen container met ronde bodem met een of twee wasknijpers, zodat het geopende deel van de kegel rechtop staat en het puntige deel gedeeltelijk in de LN is ondergedompeld.
- Giet de LN en de witte poederachtige substantie uit stap 2.6 voorzichtig in de microzeefkegel.
- Breng voorzichtig een brede borstel aan om het resterende plantmateriaal van de eerste container te verzamelen en over te brengen in de 150 μm gaaskegel.
- Voeg meer LN toe aan de eerste container en herhaal de borstelbeweging totdat al het plantmateriaal is overgebracht naar de microzeefkegel.
- Maak de wasknijper voorzichtig los van het deksel van de container en open de microzeefkegel zodat de trichomen zich in het midden van de geopende microzeef bevinden. Houd alle vier de hoeken van de microzeef bij elkaar zodat het middelste deel met de trichomen ondergedompeld blijft in de LN (figuur 6).
- Terwijl u alle vier de hoeken van de microzeef vasthoudt, dompelt u de microzeef voorzichtig in de LN in de stalen container alsof u een theezakje inbrengt. Ga door met deze dompel-/schudbeweging (verticaal en horizontaal) gedurende 1 minuut. Er is een afweging tussen de isolatiekwaliteit en kwantiteit. Langere dompelbewegingen kunnen resulteren in grotere hoeveelheden trichomen, maar hun isolatiegraad kan slechter zijn. Over het algemeen wordt 1 minuut aanbevolen als voldoende voor zowel kwaliteit als kwantiteit.
OPMERKING: Deze zeefbeweging is het meest kritieke onderdeel van het protocol en moet dienovereenkomstig worden uitgevoerd. - Optioneel: Schep de niet-gezeefde plantenresten en grotere trichomen (nog steeds ondergedompeld in de LN) die in het midden van de microzeef zijn gewikkeld in een reageerbuis van 13 ml of 50 ml en bewaar bij −80 °C voor toekomstig gebruik.
LET OP: Om de ophoping van gas onder druk (van het droogijs en LN-residuen) te voorkomen, prikt u een gat in de dop van de reageerbuis met een gesteriliseerde naald. De dop kan worden vervangen zodra de druk is afgenomen, wat meestal na 24 uur is.
4. Trichomen door microzeven met afnemende poriegrootte
- Breng de gezeefde trichomen ondergedompeld in de LN op de bodem van de kleine roestvrijstalen container met ronde bodem achtereenvolgens over door microzeven met afnemende poriegroottes (105 μm, 80 μm, 65 μm en 50 μm), op dezelfde manier als gepresenteerd in stap 3.
5. Verzameling van de gewenste trichomen
- Verwijder de gewenste trichomen ondergedompeld in de LN en gewikkeld in de 50 μm microzeef met behulp van een voorgekoelde (in LN) lepel. Leg ze op een schoon bord.
OPMERKING: In deze laatste isolatiefase worden de gewenste trichomen uit de zeef verzameld. - Breng de poederachtige trichomen snel over in een gelabelde voorgekoelde buis van 1,5 ml via een voorgekoelde spatel of een scheplepel die in de buis wordt ingebracht (figuur 7). Bewaar de buisjes onmiddellijk bij −80 °C voor verder onderzoek.
OPMERKING: Een schematisch werkstroomdiagram met het hele isolatieprotocol wordt gegeven in figuur 8.
6. Observatie en analyse van de gezuiverde trichomen
- Plaats een kleine hoeveelheid (10 mg) geïsoleerde trichomen op een microscoopglaasje met behulp van een voorgekoelde (via LN) spatel. Voeg een druppel water toe en observeer direct op een lichtmicroscoop zonder vlekken. Evalueer de algehele isolatie- en besmettingsgraad met behulp van lage (10x) en hoge (40x) vergrotingen. De verrijking wordt visueel geschat aan de hand van de relatieve hoeveelheid trichomen ten opzichte van niet-trichoomweefsel, zoals weergegeven in figuur 9.
- Voer RNA-extractie en kwaliteitsanalyse uit van 50 mg geïsoleerde C. sativa glandulaire capitulaire capitate gesteelde en sessiele trichomen.
OPMERKING: Een commerciële extractiekit (zie tabel met materialen) met een poly-A-gebaseerde strategie van mRNA-zuivering werd gebruikt voor de RNA-extractie.- Resuspendeer 50 mg van de geïsoleerde trichomen in de lysisoplossing, vortex gedurende 30 s, soniceer in een ijskoude ultrasone reinigingseenheid bij 35 kHz gedurende 5 minuten en extraheer het mRNA uit de monsters volgens het protocol van de fabrikant (zie tabel met materialen).
- Om de integriteit van het RNA dat uit de trichomen wordt geëxtraheerd te schatten, bepaalt u de RNA-concentratie, de totale hoeveelheid en de RIN-waarden (RNA Integrity Number) met behulp van een lab-on-a-chip-systeem (zie Tabel met materialen).
- Voer RNAseq-analyse uit van de trichoomfracties (optioneel). RNAseq-analyse en bioinformatica-analyses van gesequencede reads kunnen worden uitgevoerd door standaard outsourcingdiensten
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
De belangrijkste wijziging in dit protocol ten opzichte van conventionele trichoomisolatieprotocollen is het vervangen van het standaard isolatiemedium door LN. Het gebruik van LN als isolatiemedium maakt een ontspannen workflow mogelijk, want zolang de monsters worden ondergedompeld in LN, is metabole degradatie waarschijnlijk niet opgetreden. Bovendien, omdat het protocol de gevaarlijke componenten (d.w.z. aurintricarbonzuur en β-mercaptoethanol) vermijdt die worden gebruikt in traditioneel trichoomisolatiemedium, is h...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Ten opzichte van de momenteel beschikbare trichomenisolatieprotocollen worden in dit protocol twee belangrijke wijzigingen beschreven. Deze omvatten het losmaken van de trichomen van het plantmateriaal met behulp van droogijs in de eerste stap en het vervangen van LN door het veelgebruikte vloeibare buffermedium. De eerste modificatie voor C. sativa trichomenzuivering is gebaseerd op een eerder protocol dat het gebruik van gemalen droogijs introduceerde om de trichomen los te maken van geraniumpedicels
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben geen belangenconflicten.
Dankbetuigingen
De auteurs erkennen de financiële steun van CannabiVar Ltd. Al het plantmateriaal werd genereus verstrekt door professor Hinanit Koltai van het Volcani Center, Israël.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Bioanalyzer RNA Pico 6000 chip | Agilent, Duitsland | Bestelnummer 5067-1513 | Lab-on-a-chip systeem |
| Transsonic-310 | Elma, Duitsland | D-78224 | Ultrasoon reinigingsapparaat |
| TruSeq RNA Sample Prep Kit v2 | Illumina, VS | RS-122-2001 | Sample voorbereiding voor RNA sequencing bibliotheek |
| Spectrum Plant Total RNA Kit | SIGMA-ALDRICH, VS | STRN50-1KT | Plant Total RNA Kit |
| Nylon micro-zeef met een maaswijdte van 350 µm (40 x 40 cm of groter dan de omtrek van de bloemzeef) | Sinun Tech, Israël | r0350n350210 | Nylon schermopening |
| Nylon micro-zeef met maaswijdte van 150 µm (maat 30 x 30 cm) | Sinun Tech, Israël | r0150n360465 | Nylon schermopening |
| Nylon micro-zeef met maaswijdte van 105 µm (maat 30 x 30 cm) | Sinun Tech, Israël | r0105n320718 | Nylon schermopening |
| Nylon micro-zeef met maaswijdte van 80 µm (maat 30 x 30 cm) | Sinun Tech, Israël | r0080n370465 | Nylon schermopening |
| Nylon micro-zeef met maaswijdte van 65 µm (maat 30 x 30 cm) | Sinun Tech, Israël | r0065n340715 | Nylon schermopening |
| Nylon micro-zeef met maaswijdte van 50 µm (maat 30 x 30 cm) | Sinun Tech, Israël | r0080n370465 | Nylon schermopening |
| Tot 10 g bevroren plantmateriaal (opgeslagen in -80 oC of vloeibare stikstof) | |||
| Geschikte handschoenen voor het hanteren van lage temperaturen | |||
| Veiligheidsbril | |||
| 1 mm schermdeurlijst (mug) maas (strook van 30 x 100 cm) | |||
| Grote zeef (kokhals) met gaten van ongeveer 5 mm | |||
| 1 L glazen beker | |||
| 1 blok droog ijs (0,5-1 kg) | |||
| Hamer en hard vlak object | |||
| Twee 5 L plastic containers | |||
| Elastieke banden | |||
| Grote bloemzeef of zeefzeef - bij voorkeur een met een afneembare plastic ring op de omtrek | |||
| Meerdere grote en kleine roestvrijstalen containers met ronde bodem. Een van hen moet groter zijn dan de omtrek van de bloemzeef (ongeveer 40 cm in diameter), om het verlies van de gezeefde massa buiten de roestvrijstalen container met ronde bodem te minimaliseren | |||
| Voorgekoelde (via vloeibare stikstof) roestvrijstalen lepel, spatel en schep | |||
| Schoon bord | |||
| Meerdere wasklemmen | |||
| Voorgekoelde (via vloeibare stikstof) gelabelde 1,5 mL buisjes met gaten in het deksel geprikt met een steriele naald | |||
| Twee containers vloeibare stikstof | |||
| 1 cm brede schildersborstel |
Referenties
- Schilmiller, A. L., Last, R. L., Pichersky, E. Harnessing plant trichome biochemistry for the production of useful compounds. Plant Journal for Cell & Molecular Biology. 54 (4), 702-709 (2008).
- Liu, Y., Jing, S. X., Luo, S. H., Li, S. H. Non-volatile natural products in plant glandular trichomes: chemistry, biological activities and biosynthesis. Natural Product Reports. 36 (4), 626-665 (2019).
- Fairbairn, J. W. The trichomes and glands of Cannabis sativa L. UN Bulletin on Narcotics. 23, 29-33 (1972).
- Booth, J. K., Page, J. E., Bohlmann, J. Terpene synthases from Cannabis sativa. PLoS One. 12 (3), 0173911(2017).
- Yerger, E. H., et al. A rapid method for isolating glandular trichomes. Plant Physiology. 99 (1), 1-7 (1992).
- Gershenzon, J., Maffei, M. M., Croteau, R. Biochemical and histochemical localization of monoterpene biosynthesis in the glandular trichomes of spearmint (Mentha spicata). Plant Physiology. 89 (4), 1351-1357 (1989).
- Gershenzon, J., et al. Isolation of secretory cells from plant glandular trichomes and their use in biosynthetic studies of monoterpenes and other gland products. Analytical Biochemistry. 200 (1), 130-138 (1992).
- Conneely, L. J., Mauleon, R., Mieog, J., Barkla, B. J., Kretzschmar, T. Characterization of the Cannabis sativa glandular trichome proteome. PLoS One. 16 (4), 0242633(2021).
- Liu, Y., Zhu, P., Cai, S., Haughn, G., Page, J. E. Three novel transcription factors involved in cannabinoid biosynthesis in Cannabis sativa L. Plant Molecular Biology. 106 (1-2), 49-65 (2021).
- Slone, J. H., Kelsey, R. G. Isolation and purification of glandular secretory cells from Artemisia tridentata (ssp. vaseyana) by Percoll density gradient centrifugation. American Journal of Botany. 72 (9), 1445-1451 (1985).
- Namdar, D., et al. Terpenoids and Phytocannabinoids Co-Produced in Cannabis Sativa Strains Show Specific Interaction for Cell Cytotoxic Activity. Molecules. 24 (17), 3031(2019).
- McDowell, E. T., et al. Comparative functional genomic analysis of Solanum glandular trichome types. Plant Physiology. 155 (1), 524-539 (2011).
- Bergau, N., Santos, A. N., Henning, A., Balcke, G. U., Tissier, A. Autofluorescence as a signal to sort developing glandular trichomes by flow cytometry. Frontiers in Plant Science. 7, 949(2016).
- Livingston, S. J., et al. Cannabis glandular trichomes alter morphology and metabolite content during flower maturation. The Plant Journal. 101 (1), 37-56 (2019).
- Turner, J. C., Hemphill, J. K., Mahlberg, P. G. Gland distribution and cannabinoid content in clones of Cannabis sativa L. American Journal of Botany. 64 (6), 687-693 (1977).
- Turner, J. C., Hemphill, J. K., Mahlberg, P. G. Quantitative determination of cannabinoids in individual glandular trichomes of Cannabis sativa L. (Cannabaceae). American Journal of Botany. 65 (10), 1103-1106 (1978).
- Hammond, C. T., Mahlberg, P. G. Morphology of glandular hairs of Cannabis sativa from scanning electron microscopy. American Journal of Botany. 60 (6), 524-528 (1973).
- Marks, M. D., et al. A new method for isolating large quantities of Arabidopsis trichomes for transcriptome, cell wall, and other types of analyses. The Plant Journal. 56 (3), 483-492 (2008).
- Huebbers, J. W., et al. An advanced method for the release, enrichment and purification of high-quality Arabidopsis thaliana rosette leaf trichomes enables profound insights into the trichome proteome. Plant Methods. 18 (1), 12(2022).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
