Dit artikel heeft tot doel een geoptimaliseerde methode te presenteren voor het beoordelen van veneuze trombose in een muiskankermodel, met behulp van vasculaire clips om veneuze ligatie te bereiken. Optimalisatie minimaliseert de variabiliteit in trombosegerelateerde metingen en verbetert de relevantie voor bij de mens kankergerelateerde veneuze trombose.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Veneuze trombosetest in een muismodel van kanker
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Dit methodologiedocument belicht de chirurgische nuances van een knaagdiermodel van veneuze trombose, specifiek in de context van kanker-geassocieerde trombose (CAT). Diepe veneuze trombose is een veel voorkomende complicatie bij overlevenden van kanker en kan mogelijk fataal zijn. De huidige modellen voor veneuze trombose bij muizen omvatten meestal een volledige of gedeeltelijke mechanische occlusie van de inferieure vena cava (IVC) met behulp van een hechtdraad. Deze procedure induceert een volledige of gedeeltelijke stasis van bloed en endotheelschade, waardoor trombogenese ontstaat. De huidige modellen hebben beperkingen, zoals een hogere variabiliteit in stolselgewichten, een aanzienlijk sterftecijfer en een langere leercurve. Dit rapport introduceert chirurgische verfijningen met behulp van vasculaire clips om enkele van deze beperkingen aan te pakken. Met behulp van een syngeen xenotransplantaatmuismodel voor darmkanker gebruikten we op maat gemaakte vasculaire clips om de infrarenale vena cava te ligateren. Deze clips zorgen voor resterende lipruimte, vergelijkbaar met een 5-0 polypropyleen hechtdraad na IVC-ligaties. Muizen met de hechtmethode dienden als controles. De vasculaire clipmethode resulteerde in een consistente reproduceerbare partiële vasculaire occlusie en grotere stolselgewichten met minder variabiliteit dan de hechtmethode. De grotere stolselgewichten, de grotere stolselmassa en het stolsel van het IVC-luminale oppervlak werden verwacht vanwege het hogere drukprofiel van de vasculaire clips in vergelijking met een 6-0 polypropyleen hechtdraad. De aanpak werd gevalideerd door echografie met grijze schaal, die een consistent grotere stolselmassa in de infrarenale vena cava met vasculaire clips onthulde in vergelijking met de hechtmethode. Deze waarnemingen werden verder onderbouwd met de immunofluorescentiekleuring. Deze studie biedt een verbeterde methode om een veneus trombosemodel bij muizen te genereren, dat kan worden gebruikt om het mechanistische begrip van CAT te verdiepen en in translationeel onderzoek zoals het ontdekken van geneesmiddelen.
Inleiding
Kanker-geassocieerde veneuze trombo-embolie (VTE)
Het risico op veneuze trombo-embolie (VTE) is 4 tot 7 keer hoger bij overlevenden van kanker in vergelijking met de algemene bevolking 1,2,3. Deze aandoening blijkt fataal bij één op de zeven patiënten met kanker. De incidentie van VTE varieert afhankelijk van het type kanker en de tumorlast en is het hoogst bij patiënten met pancreas- enmaagkanker4.
Kanker-geassocieerde VTE bij kankerpatiënten heeft een prognostische betekenis. Het wordt geassocieerd met ....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Voor dit onderzoek werden 16 vrouwelijke C57Bl6/J-muizen gebruikt, 8-12 weken oud en een lichaamsgewicht van 20 tot 25 g. De muizen werden onder standaardomstandigheden gehuisvest en werden ad libitum gevoed met voer en water. Deze studie werd uitgevoerd met goedkeuring van de Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) van de Universiteit van Boston. De hier beschreven open procedures werden uitgevoerd in een steriele toestand.
1. Het model van Xenograft
- Celkweek
- Voorafgaand aan heterotope subcutane implantatie, kweek MC-38-cellen als een monolaag tot 80% confluentie.
- Na trypsin....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Een groep vrouwelijke C57Bl6/J-muizen, 8-12 weken oud, werd geïnjecteerd met MC-38-cellen in de logaritmische fase van de celgroei. De xenotransplantaten groeiden snel tussen de derde en vierde week na injectie18. Zodra de tumoren een gemiddeld volume van 400 mm3 bereikten, werden muizen gerandomiseerd naar de controle- en experimentele groepen. De controlegroep onderging IVC-ligatie met hechtdraad, terwijl de experimentele muizen werden onderworpen aan IVC-ligatie met vasculaire clipto.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
In een syngeen xenotransplantaat-darmkankermodel zien we een hogere trombogeniciteit en expressie van stollingsmarkers in de experimentele groep in vergelijking met de controlegroep. Belangrijk is dat de variantie in al deze parameters lager was in de experimentele groep in vergelijking met de controlegroep. De modificatie omvatte het inbrengen van een vasculaire clip met een specifiek drukprofiel op het samenvloeiingspunt van de IVC en de linker nierader. De clip werd over een afstandhouder geplaatst, wat een 5-0 polypr.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
Dit werk werd ondersteund door AHA Cardio-oncology SFRN CAT-HD Center-subsidie 857078 (KR, VCC, XY en SL) en R01HL166608 (KR en VCC).
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Buprenorphine 0.3 mg/mL | PAR Pharmaceutical | NDC 42023-179-05 | |
| C57BL/6J muizen | The Jackson Lab | IMSR_JAX:000664 | |
| Caliper | VWR International, Radnor, PA | 12777-830 | |
| CD31 | Abcam | Ab9498 | |
| Celteller | MOXIE | MXZ000 | |
| Klem | Fine Science Tools | 13002-10 | |
| Clips ASSI.B2V Enkele Klem, Algemeen Gebruik, | Accurate Surgical & Scientific Instruments | PR 2 144.50 289.00 | |
| Dumont #5SF Pincet | Fine Science Tools | 11252-00 | |
| Fibrine | Millipore | MABS2155-100UG | |
| Fijne Schaar - Grote Lussen | Fine Science Tools | 14040-10 | |
| Pincet | Fine Science Tools | 11002-12 | |
| Hill Hemostaat | Fine Science Tools | 13111-12 | |
| Isoflurane, USP | Covetrus | NDC 11695-6777-2 | |
| MC-38 cel | Sigma Aldrich | SCC172 | |
| Microscoop | Nikon Eclipse Inverted Microscope | TE2000 | |
| Schaar | Fine Science Tools | 14079-10 | |
| Hechtdraad - Vicryl | AD-Surgical | #L-G330R24 | |
| Hechtdraad-Nylon 2-0 | Ethilon | 664H | |
| Hechtdraad-Prolene 5-0 | Ethicon | 8661G | |
| Hechtdraad-Prolene 6-0 | Ethicon | PDP127 | |
| VEV03100 | VisualSonics | FujiFilm | |
| Vitrogel Matrigel Matrix | The Well Bioscience | VHM01 |
Referenties
- Blom, J. W., et al. Incidence of venous thrombosis in a large cohort of 66,329 cancer patients: results of a record linkage study. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 4 (3), 529-535 (2006).
- Gabre, J., et al.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
