$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Oppervlakteplasmonresonantie (SPR)-technologie is een optische detectietechniek die het labelen van de analyt overbodig maakt. Het maakt real-time en dynamische monitoring van kwantitatieve bindingsaffiniteit, kinetiek en thermodynamica mogelijk. Deze hoge doorvoercapaciteit is zeer gevoelig en reproduceerbaar, waardoor verschillende open rates, off rates en affiniteit kunnen worden gemeten. Bovendien vergroot de kleine benodigde monsterhoeveelheid de bruikbaarheid van deze methodeverder 1,2. De fast response biomoleculaire detectiemethode3, die de affiniteitsbinding tussen biomoleculen monitort, is naar voren gekomen als een prominent onderzoeksgebied.
SPR-technologie heeft verschillende toepassingen op het gebied van onderzoek en ontwikkeling van geneesmiddelen4. Een van de toepassingen is het ontdekken van de structurele basis van specifieke medicijndoelen. Het kan ook worden gebruikt om de actieve ingrediënten van Chinese kruiden te identificeren die aanzienlijke farmacologische activiteiten bezitten en om hun mechanismen voor het screenen en verifiëren van geneesmiddelen te bestuderen. Gassner et al. hebben een lineaire dosis-responscurve opgesteld voor bispecifieke antilichamen door middel van SPR-bepaling, die concentratieanalyse en kwaliteitscontrole mogelijk maakt5. Bovendien kan SPR worden gebruikt voor het uitvoeren van klinische immunogeniciteitstests bij de ontwikkeling van farmacopees en vaccins6.
Een gebied waar het kan worden gebruikt, is bij de detectie van residuen van bestrijdingsmiddelen, residuen van diergeneesmiddelen, illegale additieven, pathogene bacteriën en zware metalen 7,8,9,10 in landbouwproducten en voedselveiligheidstests. Door gebruik te maken van SPR-technologie kan de nauwkeurigheid en efficiëntie van deze tests worden verbeterd.
Een ander gebied waar SPR-technologie kan worden toegepast, is de snelle detectie van gifstoffen en antibiotica. Deze technologie maakt de hechting van virale antilichamen, kleine molecuulverbindingen en aptameren aan de SPR-biosensorchip mogelijk. De SPR-biosensorchip detecteert vervolgens verschillende concentraties viraal RNA als de analyt11. Deze methode is met succes gebruikt bij de snelle detectie van virussen zoals H5N1, H7N9 vogelgriepvirus en nieuw coronavirus 12,13,14. Naast deze toepassingen is SPR-technologie ook nuttig bij proteomics, screening van geneesmiddelen, real-time detectie van gerelateerde farmacokinetiek en de studie van virussen en pathogene eiwitten en receptoren 15,16,17,18. Het is met name geschikt voor wetenschappelijk onderzoek en onderwijsexperimenten in universiteiten en onderzoeksinstituten en is een waardevol hulpmiddel in verschillende wetenschappelijke en onderzoeksomgevingen.
Het principe van SPR is de collectieve oscillerende beweging van vrije elektronen op het grensvlak tussen een metaalfilm en diëlektricum, veroorzaakt door invallende lichtgolven19. Het is in wezen de resonantie tussen de vluchtige golf en de plasmagolf op het metaaloppervlak20. Wanneer licht overgaat van een fotodicht medium naar een fotofoob medium, vindt onder bepaalde omstandigheden totale reflectie plaats. Vanuit het perspectief van golfoptica, wanneer het invallende licht de interface bereikt, genereert het niet onmiddellijk gereflecteerd licht. In plaats daarvan gaat het eerst door het optisch fobische medium op een diepte van ongeveer één golflengte. Het stroomt vervolgens langs het grensvlak voor ongeveer een halve golflengte voordat het terugkeert naar het optisch dichte medium. Deze golf die door het optisch fobische medium gaat, wordt een ontwijkende golf genoemd, zolang de totale energie van het licht constant blijft. Omdat metaal vrij elektronengas bevat, kan het als plasma worden beschouwd. Het invallende licht wekt de longitudinale trilling van het elektronengas op, wat leidt tot het genereren van een ladingsdichtheidsgolf langs de metaal-diëlektrische interface, bekend als een plasmagolf aan het oppervlak. Deze resonantie plant zich voort in de vorm van exponentiële verzwakking in beide media. Bijgevolg wordt de energie van het gereflecteerde licht aanzienlijk verminderd. De corresponderende invalshoek waarbij het gereflecteerde licht volledig verdwijnt, staat bekend als de resonantiehoek21. SPR is zeer gevoelig voor de brekingsindex van het medium dat zich aan het metaalfilmoppervlak hecht20. De SPR-hoek varieert met de brekingsindex van het metaalfilmoppervlak, waarbij de verandering van de brekingsindex voornamelijk evenredig is met de molecuulmassa van het metaalfilmoppervlak22. Eventuele veranderingen in de eigenschappen van het oppervlaktemedium of de mate van hechting zullen resulteren in verschillende resonantiehoeken. De moleculaire interactie kan dus worden geanalyseerd door de veranderingen in de resonantiehoek te onderzoeken.
Deze niet-destructieve, labelvrije, real-time optische SPR-analyse, gebaseerd op bovenstaande principes, is geschikt voor onderzoek in verschillende vakgebieden. Daarom hebben we de hoekverplaatsing van de SPR-curve en experimentele resultaten aangetoond door middel van multicyclusanalyse, waarbij we de combinatie van quercetine en calycosine met KCNJ2 recombinant eiwit als voorbeeld nemen.