Gif extraheren uit de sluipwesp Trichogramma dendrolimi met behulp van een kunstmatige gastheer

Samenvatting

Hier presenteren we een protocol voor het extraheren van gif uit Trichogramma dendrolimi met behulp van een kunstmatige gastheer gemaakt met polyethyleenfilm en aminozuuroplossing.

Samenvatting

Sluipwespen zijn een diverse groep vliesvleugelige insecten die van onschatbare waarde zijn voor de biologische bestrijding van plagen. Om succesvol parasitisme te garanderen, injecteren sluipwespen gif in hun gastheren om de immuniteit van hun gastheren te onderdrukken, de ontwikkeling, het metabolisme en zelfs het gedrag van gastheren te moduleren. Met meer dan 600.000 geschatte soorten overtreft de diversiteit van sluipwespen die van andere giftige dieren, zoals slangen, kegelslakken en spinnen. Sluipwespengif is een onderbelichte bron van bioactieve moleculen met potentiële toepassingen in ongediertebestrijding en geneeskunde. Het verzamelen van sluipwespif is echter een uitdaging vanwege het onvermogen om directe of elektrische stimulatie te gebruiken en de moeilijkheid bij dissectie vanwege hun kleine formaat. Trichogramma is een geslacht van kleine (~0,5 mm) ei-sluipwespen die veel worden gebruikt voor de biologische bestrijding van lepidoptera-plagen in zowel de landbouw als de bossen. Hier rapporteren we een methode voor het extraheren van gif uit T. dendrolimi met behulp van kunstmatige gastheren. Deze kunstmatige gastheren worden gemaakt met polyethyleenfilm en aminozuuroplossingen en vervolgens geënt met Trichogramma-wespen voor parasitisme. Het gif werd vervolgens verzameld en geconcentreerd. Deze methode maakt de extractie van grote hoeveelheden Trichogramma-gif mogelijk, terwijl besmetting van andere weefsels veroorzaakt door dissectie wordt vermeden, een veelvoorkomend probleem in dissectieprotocollen voor gifreservoirs. Deze innovatieve aanpak vergemakkelijkt de studie van Trichogramma-gif en maakt de weg vrij voor nieuw onderzoek en mogelijke toepassingen.

Inleiding

Sluipwespen zijn parasitaire vliesvleugelige insecten die belangrijke bronnen zijn voor biologische bestrijding¹. Er is een grote verscheidenheid aan sluipwespen, met naar schatting meer dan 600.000 soorten². De diversiteit van sluipwespen is veel groter dan die van andere giftige geleedpotigen, zoals slangen, kegelslakken, spinnen, schorpioenen en bijen. Gif is een belangrijke parasitaire factor bij sluipwespen. Voor succesvol parasitisme wordt gif in de gastheer geïnjecteerd, waardoor het gedrag, de immuniteit, de ontwikkeling en het metabolisme van de gastheer worden gemoduleerd^. Bovendien vert....

Protocol

1. Insectenkweek

1. Voer Corcyra cephalonica op maïsmeel bij een temperatuur van 26 ± 1°C en een relatieve luchtvochtigheid van 40% ± 10%.
2. Kweek de T. dendrolimi-stam uit de Jilin-insect binnenshuis met de eieren van Corcyra cephalonica als gastheer. Voer wespenvolwassenen 10% sucrosewater in Drosophila-buizen bij een temperatuur van 26 ± 1 °C, relatieve vochtigheid van 70% ± 10%, licht (L): donker (D) periode van 14 uur: 10 uur.

2. Bereiding van eierkaarten van polyethyleen plastic folie

1. Neem een polyethyleen plastic folie met ee....

Resultaten

De eiwitconcentratie van representatieve gifmonsters werd gemeten met behulp van de eiwittestkit, met de resultaten weergegeven in tabel 1. De resultaten toonden aan dat de concentratie van gifeiwit die met deze methode werd verzameld, varieerde van 0,35 μg/μL tot 0,46 μg/μL, terwijl de negatieve controle van de aminozuuroplossing slechts een eiwitconcentratie had van 0,03 μg/μL tot 0,05 μg/μL. De concentratie gifeiwit die met deze methode wordt verzameld, is veel hoger dan die van negatieve controle, wa.......

Discussie

Hier presenteren we een methode om gif uit T. dendrolimi te extraheren met behulp van kunstmatige gastheren. De belangrijkste punten in het experiment met het verzamelen van gif zijn als volgt. (1) Tijdens de bereiding moet T. dendrolimi snel worden verdoofd met een passende concentratie CO₂ . Als de CO_{2 -} concentratie te laag is, is deze onvoldoende om de Trichogramma snel te verdoven. Omgekeerd, als de concentratie te hoog is, kan Trichogramma afsterven, waardoo.......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
10 μm Nylon Net	Millipore	NY1002500	Voor het filteren van de eieren
10% Polyvinyl alcohol	Aladdin	P139533	Voor het aantrekken  T. dendrolimi  om eieren te leggen
10% Sucrose water	Sinopharm Chemical Reagent	10021463	Voer Trichogramma dendrolimi
4x LDS loading buffer	Ace Hardware	B23010301	SDS-PAGE
Collectiebox	Deli	8555	Container voor T. dendrolimi parasitisme
Future PAGE  4–12% (12 wells)	Ace Hardware	J70236502X	SDS-PAGE
GenScript eStain L1 proteïnekleuringsapparaat	GenScript	L00753	SDS-PAGE
Glazen maalstaaf	Applygen	tb6268	Halfkringe vormen
L- Leucine	Solarbio	L0011	Kunstmatige gastheercomponenten
L-Histidine	Aladdin	A2219458	Kunstmatige gastheercomponenten
L-Phenylalanine	Solarbio	P0010	Kunstmatige gastheercomponenten
Mini-Centrifuges	Scilogex	D1008	Centrifuge
MOPS-SDS running buffer	Ace Hardware	B23021	SDS-PAGE
Omni-Easy Instant BCA-eiwitanalysekit	Shanghai Yamay Biomedical Technology	ZJ102	Voor schatting van de concentratie van het venom-eiwit
PCR-plaatindeling van 96 gaten	Thermo Fisher	AB1400L	Halfkringe vormen
Polyethyleen kunststoffolie	Suzhou Aopang Trading	001c5427	Kunstmatige eenkaart
Voorgekleurde kleurproteïnemarkering(10–180 kDa)	YiFeiXue Biotech	YWB007	SDS-PAGE
Rubberen band	Guangzhou qianrui biology science and technology	009	De kunststoffolie en de collectiebox strak zetten
Siliconen rubber septummat, 96-well, ronde gat	Sangon Biotech	F504416-0001	Halfkringe vormen