Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Beoordeling van cytotoxiciteit van metabolieten van typische triazolpesticiden in planten

1.5K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/66048

⸱

22 december 2023

 ,  ,  ,  , 
1Key Laboratory of Microbial Control Technology for Industrial Pollution in Zhejiang Province, College of Environment, Zhejiang University of Technology, 2Research and Teaching Center of Agriculture, Zhejiang Open University, 3International Joint Research Center for Persistent Toxic Substances (IJRC-PTS), College of Environment, Zhejiang University of Technology

In dit artikel

Samenvatting

Het protocol beschrijft een nieuwe methode om de integrale cytotoxiciteit van metabolieten van triazolpesticiden in planten te beoordelen.

Samenvatting

Verschillende organische verontreinigende stoffen zijn in het milieu terechtgekomen als gevolg van antropogene activiteiten. Deze verontreinigende stoffen kunnen worden opgenomen door gewassen, waardoor het ecosysteem en de menselijke gezondheid in de hele voedselketen een bedreiging kunnen vormen. De biotransformatie van verontreinigende stoffen in planten genereert een aantal metabolieten die toxischer kunnen zijn dan hun oorspronkelijke verbindingen, wat impliceert dat de metabolieten in aanmerking moeten worden genomen bij de toxiciteitsbeoordeling. De metabolieten van verontreinigende stoffen in planten zijn echter uiterst complex, waardoor het moeilijk is om de toxicologische informatie van alle metabolieten volledig te verkrijgen. Deze studie stelde een strategie voor om de integrale cytotoxiciteit van verontreinigende metabolieten in planten te beoordelen door ze tijdens toxicologische tests als geheel te behandelen. Triazol-pesticiden, een klasse van breedspectrumfungiciden, zijn op grote schaal toegepast in de landbouwproductie. Hun residuvervuiling in landbouwgrond heeft steeds meer aandacht getrokken. Daarom werden vier triazolpesticiden, waaronder flusilazol, diniconazol, tebuconazol en propiconazol, geselecteerd als de geteste verontreinigende stoffen. De metabolieten werden gegenereerd door de behandeling van wortelcallus met geteste triazolpesticiden. Na een behandeling van 72 uur werden de metabolieten van pesticiden in wortelcallus geëxtraheerd, gevolgd door toxicologische tests met behulp van de Caco-2-cellijn. De resultaten toonden aan dat de metabolieten van geteste pesticiden in wortelcallus de levensvatbaarheid van Caco-2-cellen (P>0,05) niet significant remden, wat geen cytotoxiciteit van metabolieten van pesticiden aantoonde. Deze voorgestelde methode opent een nieuwe weg om de cytotoxiciteit van verontreinigende metabolieten in planten te beoordelen, wat naar verwachting waardevolle gegevens zal opleveren voor een nauwkeurige beoordeling van de toxiciteit.

Inleiding

Gewassen die op landbouwgrond groeien, kunnen worden blootgesteld aan verschillende organische verontreinigende stoffen die afkomstig zijn van antropogene activiteiten 1,2. De verontreinigende stoffen kunnen door planten worden opgenomen, waardoor het ecosysteem en de menselijke gezondheid via voedselketens verder worden bedreigd 3,4. De xenobiotica in planten ondergaan waarschijnlijk een reeks biotransformaties, zoals fase I- en II-metabolismen5, waarbij een aantal metabolieten worden gegenereerd. Volgens het concept van groene lever in planten kan het metabolisme van planten de toxiciteit van xenobiotica verminderen 6,7. Er is echter aangetoond dat de toxiciteit van sommige metabolieten hoger kan zijn dan die van hun ouders. Zo is bijvoorbeeld bewezen dat het gedebromeerde product van tetrabroombisfenol A (TBBPA) en het O-gemethyleerde product van bisfenol A (BPA) veel giftiger zijn dan hun ouders 8,9, en de debrominatie en O-methylering vormen de belangrijkste fase I-metabolismeroutes in planten. De toxiciteitsbeoordeling die uitsluitend is gebaseerd op de ouders van verontreinigende stoffen in planten is dus niet nauwkeurig, terwijl rekening moet worden gehouden met de overeenkomstige metabolieten.

De metabolieten van xenobiotica in planten zijn uiterst complex 10,11, waardoor het moeilijk is om ze volledig te identificeren en te scheiden. Bovendien kunnen slechts enkele standaarden van geïdentificeerde metabolieten worden verkregen. Daarom zijn er geen toxicologische gegevens van alle metabolieten beschikbaar, wat een uitgebreide toxiciteitsbeoordeling bemoeilijkt. Deze studie stelde een strategie voor om de integrale toxiciteit van verontreinigende metabolieten in planten te beoordelen door ze als geheel te behandelen tijdens toxicologische tests, waardoor nieuwe gegevens werden verkregen voor een nauwkeurige toxiciteitsbeoordeling van verontreinigende stoffen in planten. Onze eerdere studie heeft aangetoond dat de eeltcultuur van planten een eenvoudige en effectieve weg opent om metabolieten van xenobiotica in planten te verkrijgen12. Dienovereenkomstig werd de plantaardige calluscultuur in deze studie gebruikt om de metabolieten van verontreinigende stoffen in planten te genereren, gevolgd door chemische extractie en toxicologische tests met behulp van een menselijke cellijn. Het darmkanaal is een van de directe doelorganen van xenobiotica die worden blootgesteld aan dieren en mensen. De Caco-2-cellijn heeft bewezen het beste model te zijn voor het onderzoeken van het darmgedrag en de toxiciteit van xenobiotica in vitro 13,14,15. Daarom werd in deze studie het Caco-2-celmodel geselecteerd.

Triazol-pesticiden, een klasse van breedspectrumfungiciden, zijn op grote schaal toegepast in de landbouwproductie16. Hun residuvervuiling in landbouwgrond heeft steeds meer aandacht getrokken 17,18. Hier werden vier veelgebruikte triazolpesticiden, waaronder flusilazol, diniconazol, tebuconazol en propiconazol, geselecteerd als de typische verontreinigende stoffen. Wortel werd in dit onderzoek geselecteerd als representatieve plant voor verse, kant-en-klare groenten. Worteleelt werd aanvankelijk blootgesteld aan de geteste pesticiden in een concentratie van 100 mg/L. Na een blootstelling van 72 uur werden de metabolieten geëxtraheerd om de cytotoxiciteit te beoordelen met behulp van Caco-2-cellijn. Deze methode kan gemakkelijk worden uitgebreid om de integrale cytotoxiciteit van metabolieten van andere soorten verontreinigende stoffen in planten te beoordelen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

1. Differentiatie van worteleelt

OPMERKING: Het gedetailleerde protocol voor differentiatie van wortelcallus is beschreven in een eerdere studie12. Hier is een korte beschrijving.

  1. Steriliseer het oppervlak van vernaliseerde zaden met 75% ethanol gedurende 20 minuten, gevolgd door 20% H2O2 gedurende 20 minuten. Was het minimaal 3x met gedestilleerd water.
  2. Zaai de zaden op een hormoonvrij agar-gegeleerde (1% m/v) Murashige en Skoog (MS) medium (pH = 5,8, geautoclaveerd bij 121 °C) en incubeer ze onder 16 uur fotoperiode (350 μmol/m2s) bij 26 °C gedurende 15 dagen om de zaailingen te vormen.
  3. Oogst de explantaten door het hypocotyl en de zaadlob van zaailingen in kleine stukjes (0,5 cm) te snijden en de explantaten uit te broeden in MS-medium met auximon van 1 mg/L 2,4-dichloorfenoxyazijnzuur en fytokinine van 0,5 mg/L 6-benzylaminopurine bij 26 °C in het donker gedurende 3-4 weken om de callus te induceren.
  4. Verzamel het eelt (ongeveer 1 cm diameter, compact) met scalpels en een tang.

2. Behandeling van worteleelt met pesticiden

  1. Los 10 mg flusilazol, diniconazol, tebuconazol en propiconazol op in 100 ml steriel MS-medium met eindconcentraties van 100 mg/l (pH van 5,6-7,0).
    OPMERKING: De behandelingsconcentratie van geteste pesticiden werd gekozen als het maximum van 50% celgroeiremmingsconcentratie (IC50) op Caco-2-cellen.
  2. Meng 3 g worteleelt (uit stap 1.4) met 10 ml bereide bestrijdingsmiddelenoplossingen (uit stap 2.1) in glazen kolven onder steriele omstandigheden.
  3. Meng 3 g worteleelt (uit stap 1.4) met 10 ml aseptisch MS-medium in glazen kolven onder steriele omstandigheden.
    OPMERKING: Alle glazen kolven zijn geautoclaveerd.
  4. Incubeer de worteleelt (uit stap 2.2 en 2.3) bij 130 rpm en 26 °C in het donker gedurende 72 uur.
    Stel alle behandelingen in drievoud in.
  5. Verzamel de worteleelt uit het medium door filtratie met behulp van glasvezelfilters (0,45 μm) na incubatie van 72 uur. Was de eelt 3x met ultrapuur water.
  6. Vriesdroog het eelt met een vriesdroger bij -55 °C en homogeniseer het vervolgens gedurende 3 minuten met een tissuegrinder met hoge doorvoer bij 70 Hz.

3. Chemische extractie van worteleelt

  1. Meng 0,2 g gemalen poeder van het gevriesdroogde eelt met 3 ml acetonitril in een centrifugebuisje (10 ml).
  2. Draai de centrifugebuis 8 minuten in een draaikolk en sonificeer deze vervolgens gedurende 5 minuten (150 W, 40 kHz).
  3. Verzamel de supernatanten door pipetteren na centrifugeren bij 8.000 x g bij 4 °C gedurende 10 min.
  4. Herhaal de extractieprocedures 3x en doe de extracten in een schone centrifugebuis (10 ml).
  5. Concentreer de gepoolde extracten tot ze droog zijn met behulp van een stikstofblaasconcentrator bij 40 °C.
  6. Los de resten van extracten (uit stap 3.5) opnieuw op met 1 ml Dulbecco's gemodificeerde Eagle's medium (DMEM) met 0,3% dimethylsulfoxide (DMSO).
    OPMERKING: De residuen in stap 3.6 zijn verkregen uit de extracten van met pesticiden behandelde callus (uit stap 2.2).
  7. Los de residuen van extracten (uit stap 3.5) opnieuw op met 1 ml DMEM met 0,3% DMSO, en los 1 mg flusilazol, diniconazol, tebuconazol en propiconazol op in respectievelijk 4 verschillende buisjes.
    OPMERKING: De residuen in stap 3.7 zijn verkregen uit de extracten van blanco eelt (uit stap 2.3).
    OPMERKING: DMEM werd bereid met 10% foetaal runderserum (FBS) en 1% antibiotica (penicilline en streptomycine).

4. Reanimatie van Caco-2-cel

OPMERKING: Alle reagentia en materialen die betrokken waren bij Caco-2-celtests werden gedurende 20 minuten geautoclaveerd en gedurende 2 uur onder ultraviolet licht gesteriliseerd.

  1. Haal de cryopreservatiebuis (waarin bevroren cellen worden bewaard) uit de tank met vloeibare stikstof en breng deze snel over in een waterbad van 37 °C. Schud het continu om de bevroren oplossing te ontdooien.
    NOTITIE: Voorkom dat er water over het deksel van de cryopreservatiebuis stroomt tijdens het schudden.
  2. Desinfecteer het oppervlak van de cryopreservatiebuis met 75% alcohol nadat de bevroren oplossing is ontdooid. Breng de celoplossing snel over in een steriele centrifugebuis door te pipetteren.
  3. Verwijder de supernatanten in de cryopreservatiebuis na centrifugatie bij 1.000 x g bij 4 °C gedurende 3 min. Voeg 1 ml DMEM toe en suspendeer de cellen door zachtjes te tikken en te schudden.
  4. Breng de celsuspensie (vanaf stap 4.3) over in een glazen kolf door te pipetteren. Voeg 5 ml DMEM toe aan de erlenmeyer en schud de erlenmeyer voorzichtig om de cellen gelijkmatig te verdelen.
  5. Incubeer de cellen in een incubator bij 37 °C met 5% CO2 .
    OPMERKING: Stappen 4.2-4.4 werden uitgevoerd in een superschone bank.

5. Passage van Caco-2-cel

  1. Haal de glazen kolf uit de incubator en gooi het kweekmedium weg wanneer de celdichtheid meer dan 80% bereikt. Was de cellen met PBS 3x.
  2. Voeg 1 ml trypsine-EDTA-oplossing toe en verdeel het gelijkmatig om volledig contact met de cellen te garanderen.
  3. Verwijder de spijsverteringsoplossing wanneer de cellen krimpen van de aanhangende vorm tot een kleine ronde punt en niet onder de waarneming met de microscoop zijn gesuspendeerd (100x vergroting). Tik zachtjes op de wand van de kolf om de cellen te verwijderen.
  4. Voeg 2 ml DMEM toe, herhaal het spoelen van de wand van de kolf 10x, tik zachtjes op de wand van de kolf en breng 1 ml celsuspensie over in een andere glazen kolf.
  5. Voeg 5 ml DMEM toe aan de glazen kolven. Tik zachtjes op de wand van de kolf om de cellen gelijkmatig te verdelen.
  6. Incubeer de cellen in de incubator bij 37 °C met 5% CO2 . Vervang het kweekmedium elke 24 uur door verse DMEM totdat de celdichtheid meer dan 80% bereikt.
  7. Herhaal de procedures voor het passeren van cellen totdat er voldoende cellen (ongeveer 2 x 106) zijn geoogst voor de volgende blootstellingstests.
    OPMERKING: Stappen 5.1-5.5 werden uitgevoerd in de superschone bank. Het aantal cellen werd bepaald door een hemocytometer19.

6. Blootstelling van Caco-2-cellen

  1. Haal de glazen kolven (uit stap 5.7) uit de incubator en herhaal stap 5.1-5.4 om de cellen te verzamelen.
  2. Tik zachtjes op de wand van de kolf om de cellen gelijkmatig te verdelen en breng de celsuspensies over in een centrifugebuis (15 ml).
  3. Verdun de celsuspensie (uit stap 6.2) met DMEM in combinatie met cytometrie om een celdichtheid van ongeveer 1 x 105 cellen/ml te bereiken. Tik zachtjes op de wand van de kolf om de cellen gelijkmatig te verdelen.
  4. Voeg 100 μL PBS toe aan de buitenste putjes van de plaat met 96 putjes om verdamping van het kweekmedium door het randeffect te voorkomen.
    NOTITIE: Tik continu op de wand van de centrifugebuis om de celsuspensie uniform te houden.
  5. Voeg 100 μL celsuspensie (uit stap 6.3) toe in de linker putjes van de plaat met 96 putjes en laat 10 minuten rusten.
  6. Incubeer de cellen in de incubator bij 37 °C met 5% CO2 gedurende 48 uur.
  7. Verwijder de plaat met 96 putjes na een incubatie van 48 uur uit de incubator en gooi het kweekmedium weg.
  8. Stel een metabolietgroep van bestrijdingsmiddelen in door in elk putje 100 μl oplossingen (uit stap 3.6) toe te voegen.
    OPMERKING: In elk putje in stap 6.8 werden metabolieten van bestrijdingsmiddelen gegenereerd uit ouders van 0,1 mg.
  9. Stel een pesticide-moedergroep in door 100 μL oplossingen (uit stap 3.7) in elk putje toe te voegen ter vergelijking.
    OPMERKING: In elk putje in stap 6.9 waren er 0,1 mg pesticide-ouders.
  10. Stel een blanco-regeling in door 100 μL DMEM toe te voegen met 0,3% DMSO in elk putje. Gebruik zes putjes voor elke groep (stap 6.8-6.9).
  11. Incubeer de cellen in de incubator bij 37 °C met 5% CO2 gedurende 24 uur.
    OPMERKING: Stappen 6.1-6.5 en 6.7-6.10 zijn uitgevoerd in de superschone bank.

7. Beoordeling van de levensvatbaarheid van de cellen

  1. Verwijder de plaat met 96 putjes (vanaf 6.11) uit de incubator en gooi het kweekmedium na blootstelling van 24 uur weg. Was de cellen met PBS 2x.
  2. Voeg 100 μL DMEM toe aan elk putje en voeg vervolgens 10 μL CCK-8-reagentia toe. Schud de plaat voorzichtig om de cellen gelijkmatig te verdelen.
  3. Incubeer de cellen in de incubator bij 37 °C met 5% CO2 gedurende 4 uur.
  4. Verwijder de plaat met 96 putjes uit de incubator na een incubatie van 4 uur en meet de optische absorptie (OD) bij 450 nm met een fluorescentiespectrofotometer.
  5. Bereken de levensvatbaarheid van de cel met de volgende vergelijking:
    levensvatbaarheid van de cel (%) = (ODexperimentele groep - ODDMEM) / (ODcontrole - ODDMEM)×100%.
    OPMERKING: Stappen 7.1-7.2 werden uitgevoerd in de superschone bank.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Figuur 1 geeft het schema weer van de voorgestelde methode voor het genereren, extraheren en cytotoxiciteitsbeoordeling van metabolieten van bestrijdingsmiddelen in wortelcallus. In figuur 2 zijn de kinetiekcurves van de opname en het metabolisme van geteste pesticiden te zien, waaruit we kunnen opmaken dat de concentraties van pesticiden in kweekmedia exponentieel waren afgenomen, terwijl die in wortelcallus begonnen toe te nem...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Dit protocol is ontwikkeld om de integrale cytotoxiciteit van metabolieten van triazolpesticiden in planten te beoordelen door planteelt en menselijke celmodellen te combineren. De cruciale stappen voor dit voorgestelde protocol zijn de kweek van planteelt en Caco-2-cel. Het moeilijkste deel en het meest relatieve advies voor de eeltcultuur van planten zijn gegeven in onze vorige studie12. Hier moet worden opgemerkt dat celonderhoud het moeilijkste onderdeel is vo...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

Deze studie werd ondersteund door de National Natural Science Foundation of China (21976160) en het Public Welfare Technology Application Research Project (LGF21B070006) van de provincie Zhejiang.

     

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
2,4-dichloorfenoxyazijnzuurWAKO1 mg/L
20% H2O2Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.10011218-500ML
6-benzylaminopurineWAKO0.5 mg/L
75% ethanolSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.1269101-500 mL
96-wellsplaatThermo Fisher
AcetonitrilSigma-Aldrich
Kunstmatige klimaatincubatorNingbo DongNan Lab Equipment Co.,LtdRDN-1000A-4
AutoclavenSTIKMJ-Series
Caco-2 cellenNuoyang Biotechnology Co.,Ltd.
CCK8 reagentiaNanjing Jiancheng Bioengineering Institute, ChinaG021-1-3
CentrifugeThermo Fisher
CO2 incubatorLabtripHWJ-3-160
DimethylsulfoxideSolarbio Life SciencesD8371
Diniconazole, 98.7%J&K Scientific83657-24-3
Dulbecco's gemodificeerd Eagle's mediumSolarbio Life Sciences11965-500 mL
Elektronische weegschaalShanghai Precision Instrument Co., LtdFA1004B
Fetaal runder serumCellmax
FluorescentiespectrofotometerTecanInfinite M200
Flusilazole, 98.5%J&K Scientific85509-19-9  
VriesdrooginstallatieSCIENTZ
Hoog-doorvoer weefselmolenSCIENTZ
Omgekeerde microscoopLeica BiosystemsDMi1
Milli-Q systeemMilliporeMS1922801-4L
Murashige & Skoog mediumHOPEBIOHB8469-7
Stichting stikstofconcentratorAOSHENGMD200-2
PBSSolarbio Life SciencesP1022-500 mL
Penicilline-Streptomycine VloeistofSolarbio Life SciencesP1400-100 mL
Propiconazool, 100%J&K Scientific60207-90-1 
Research plusEppendorf10-1000 μL
Zaden van Little Finger wortel (Daucus carota var. sativus)Shouguang Seed Industry Co., Ltd
Schuddende IncubatorsShanghai bluepard instruments Co.,Ltd.THZ-98AB
Tebuconazool, 100%J&K Scientific107534-96-3
Trypsine-EDTA oplossingSolarbio Life SciencesT1300-100 mL
UltrasoundapparaatZKIUC-6
UV-gesteriliseerde super schone werkbankAIRTECH
Vortex instrumentWuxi Laipu Instrument Equipment Co., LtdBV-1010

Referenties

  1. Fan, Y., et al. Uptake of halogenated organic compounds (HOCs) into peanut and corn during the whole life cycle grown in an agricultural field. Environ Pollut. 263, 114400(2020).
  2. Wu, Q., et al. Trace metals in e-waste lead to serious health risk through consumption of rice growing near an abandoned e-waste recycling site: Comparisons with PBDEs and AHFRs. Environ Pollut. 247, 46-54 (2019).
  3. Liu, A. F., et al. Tetrabromobisphenol-A/S and nine novel analogs in biological samples from the Chinese Bohai Sea: Implications for trophic transfer. Environ Sci Technol. 50 (8), 4203-4211 (2016).
  4. Awasthi, A. K., Zeng, X., Li, J. Environmental pollution of electronic waste recycling in India: A critical review. Environ Pollut. 211, 259-270 (2016).
  5. Zhang, Q., et al. Plant accumulation and transformation of brominated and organophosphate flame retardants: A review. Environ Pollut. 288, 117742(2021).
  6. Sandermann, H. Higher plant metabolism of xenobiotics: the 'green liver' concept. Pharmacogenetics. 4, 225-241 (1994).
  7. Zhang, J. J., Yang, H. Metabolism and detoxification of pesticides in plants. Sci Total Environ. 790, 148034(2021).
  8. Debenest, T., et al. Ecotoxicity of a brominated flame retardant (tetrabromobisphenol A) and its derivatives to aquatic organisms. Comp Biochem Phys C. 152 (4), 407-412 (2010).
  9. McCormick, J. M., Van Es, T., Cooper, K. R., White, L. A., Haggblom, M. M. Microbially mediated O-methylation of bisphenol A results in metabolites with increased toxicity to the developing zebrafish (Danio rerio) embryo. Environ Sci Technol. 45 (15), 6567-6574 (2011).
  10. Zhang, Q., et al. Multiple metabolic pathways of 2,4,6-tribromophenol in rice plants. Environ Sci Technol. 53 (13), 7473-7482 (2019).
  11. Hou, X., et al. Glycosylation of tetrabromobisphenol A in pumpkin. Environ Sci Technol. 53 (15), 8805-8812 (2019).
  12. Wu, J., et al. Elucidating the metabolism of 2,4-Dibromophenol in plants. J Vis Exp. (192), e65089(2023).
  13. Zucco, F., et al. An Inter-laboratory study to evaluate the effects of medium composition on the differentiation and barrier function of Caco-2 cell lines. Atla-Altern Lab Anim. 33, 603-618 (2005).
  14. Eisenbrand, G., et al. Methods of in vitro toxicology. Food Chem Toxicol. 40, 193-236 (2002).
  15. Sambuy, Y., et al. The Caco-2 cell line as a model of the intestinal barrier: influence of cell and culture-related factors on Caco-2 cell functional characteristics. Cell Biol Toxicol. 21, 1-26 (2005).
  16. Li, H., et al. Uptake, translocation, and subcellular distribution of three triazole pesticides in rice. Environ Sci Pollut Res. 29 (17), 25581-25590 (2022).
  17. Satapute, P., Kamble, M. V., Adhikari, S. S., Jogaiah, S. Influence of triazole pesticides on tillage soil microbial populations and metabolic changes. Sci Total Environ. 651, 2334-2344 (2019).
  18. Xu, Y., et al. A possible but unrecognized risk of acceptable daily intake dose triazole pesticides exposure-bile acid disturbance induced pharmacokinetic changes of oral medication. Chemosphere. 322, 138209(2023).
  19. Louis, K. S., Siegel, A. C. Cell viability analysis using trypan blue: manual and automated methods. Methods Mol Biol. 740, 7-12 (2011).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Meer artikelen verkennen

Metabolieten van triazoolpesticidencytotoxiciteitsbeoordelingplantcalluskweekbiotransformatie van pesticidenCaco-2-cellijnresidu-analyse van pesticidentoxicologische testenextractie van wortelkalluscelviabiliteitsassayCCK8-reagens
Beoordeling van cytotoxiciteit van metabolieten van typische triazolpesticiden in planten
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.