Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Regulering van Schwann-celgroei door nanoseconde gepulseerd elektrisch veld voor perifere zenuwregeneratie in vitro

1.8K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/66097

⸱

3 mei 2024

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Orthopedics, The First Affiliated Hospital, College of Medicine, Zhejiang University, 2College of Medicine, Zhejiang University, 3Department of Orthopedics, The Second Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University, 4Department of Orthopedic Physical Therapy, Faculty of Physical Therapy, Nahda University in Beni Suef, 5Plastic & Cosmetic Center, The First Affiliated Hospital, College of Medicine, Zhejiang University

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

Hier presenteren we een protocol voor het toepassen van nanoseconde pulse electric field (nsPEF) om Schwann-cellen in vitro te stimuleren. De synthese en secretiecapaciteit van relevante factoren en veranderingen in celgedrag valideerden de succesvolle stimulatie met behulp van nsPEF. De studie geeft een positief beeld van de perifere zenuwregeneratiemethode.

Samenvatting

Schwann-cellen (SC's) zijn myeliniserende cellen van het perifere zenuwstelsel en spelen een cruciale rol bij de regeneratie van perifere zenuwen. Nanosecond Pulse Electric Field (nsPEF) is een opkomende methode die kan worden toegepast bij elektrische stimulatie van zenuwen en waarvan is aangetoond dat deze effectief is bij het stimuleren van celproliferatie en andere biologische processen. Om te beoordelen of SC's significante veranderingen ondergaan onder nsPEF en om het potentieel voor nieuwe methoden voor perifere zenuwregeneratie te onderzoeken, werden gekweekte RSC96-cellen onderworpen aan nsPEF-stimulatie bij 5 kV en 10 kV, gevolgd door voortgezette teelt gedurende 3-4 dagen. Vervolgens werden enkele relevante factoren die door SC's tot expressie werden gebracht, beoordeeld om de succesvolle stimulatie aan te tonen, waaronder het specifieke markereiwit, de neurotrofe factor, de transcriptiefactor en de myelinisatieregulator. De representatieve resultaten toonden aan dat nsPEF de proliferatie en migratie van SC's aanzienlijk verbeterde en het vermogen om relevante factoren te synthetiseren die positief bijdragen aan de regeneratie van perifere zenuwen. Tegelijkertijd duidde een lagere expressie van GFAP op de goedaardige prognose van perifere zenuwletsels. Al deze resultaten tonen aan dat nsPEF een groot potentieel heeft als een efficiënte behandelmethode voor perifere zenuwletsels door SC's te stimuleren.

Inleiding

Elk jaar worden miljoenen mensen getroffen door zenuwletsel waarbij zowel het perifere zenuwstelsel (PNS) als het centrale zenuwstelsel (CZS) betrokken zijn1. Studies hebben aangetoond dat de axonale herstelcapaciteit van het CZS vrij beperkt is na zenuwletsel, terwijl het PNS een verhoogde capaciteit vertoont vanwege de aanzienlijke plasticiteit van SC's2. Desalniettemin blijft het bereiken van volledige regeneratie na perifere zenuwbeschadigingen moeilijk en blijft het een aanzienlijke uitdaging vormen voor de menselijke gezondheid 3,4. Tegenwoordig zijn autotransplantaten een veel voorkomende behandeling gebleven, ondanks de nadelen van morbiditeit op de donorplaats en de beperkte beschikbaarheid5. Deze situatie heeft onderzoekers ertoe aangezet om alternatieve therapieën te onderzoeken, waaronder materialen6, moleculaire factoren7 en elektrische stimulatie (ES). Als een factor die axonale groei en zenuwregeneratiebevordert 8, wordt het kiezen van een geschikte ES-methode en het onderzoeken van de relatie tussen ES en SC's essentieel.

SC's zijn de belangrijkste gliacellen van het PNS en spelen een cruciale rol bij de regeneratie van het PNS 9,10. Na perifere zenuwbeschadigingen ondergaan SC's een snelle activering, uitgebreide herprogrammering2 en overgang van een myelinevormende toestand naar een groeiondersteunende morfologie om de regeneratie van de zenuw uit te voeren2. Een substantiële proliferatie van SC's vindt plaats aan het distale uiteinde van de gewonde zenuw, terwijl SC's van de distale stomp proliferatie en rek ondergaan om de band van Bungner te vormen, die nodig zijn om axonen te begeleiden om naar het doelorgaante groeien 11. Bovendien migreren SC's van de proximale en distale zenuwstompen naar de zenuwbrug om SC-koorden te vormen die de regeneratie van axonen bevorderen12. Bovendien hebben eerdere studies aangetoond dat de synthese en secretie van relevante factoren die verband houden met SC's veranderen in gevallen van perifere zenuwregeneratie, waaronder transcriptiefactoren13, neurotrofe factoren14 en myelinisatieregulatoren13. Dit levert ook indicatoren op voor het beoordelen van de activiteit van SC's. Op basis hiervan is de bevordering van SC-proliferatie, migratie, synthese en secretie van relevante factoren uitgebreid onderzocht voor het verbeteren van de regeneratie van perifere zenuwen15.

Eerdere studies hebben de mogelijkheid aangetoond om ES te gebruiken voor zenuwregeneratie1. Een algemeen aanvaarde verklaring is dat ES depolarisatie van celmembranen kan induceren, membraanpotentiaal kan veranderen en membraaneiwitfuncties kan beïnvloeden door de ladingsverdelingen op deze biomoleculen te veranderen. Het op grote schaal toegepaste Intense PEF kan echter ernstige pijn, onwillekeurige spiersamentrekkingen en hartfibrillatieveroorzaken8. Het verhoogt ook de activiteit van creatinekinase (CK), vermindert de spierkracht en induceert de ontwikkeling van vertraagde spierpijn (DOMS)16. nsPEF is een opkomende techniek die proefpersonen stimuleert met elektrische velden met een hoge spanning binnen een pulsduur van een nanoseconde, en het wordt geleidelijk gebruikt in onderzoek op cellulair niveau17,18. Eerdere studies hebben gemeld dat de mogelijke reden van nsPEF die celproliferatie en organelactiviteit bevordert, de vorming van membraannanoporiën en de activering van ionische kanalen is, wat leidt tot een toename van de cytoplasmatische Ca2+-concentratie19. nsPEF maakt gebruik van pulskrachttechnologie om het celmembraan op te laden en pulsen te produceren die worden gekenmerkt door een korte duur, snelle stijgtimum, hoog vermogen en lage energiedichtheid20. Deze kenmerken suggereren dat nsPEF een voorkeursmodus kan zijn met minimale stimulatiebijwerkingen8. Bovendien biedt nsPEF voordelen zoals minimaal invasieve procedures, omkeerbaarheid, aanpasbaarheid en niet-destructiviteit van neurale weefsels in vergelijking met chirurgische ingrepen. Een van de belangrijkste onderzoeksrichtingen van nsPEF op biomedisch gebied is de toepassing ervan voor ablatie van tumorweefsel met behulp van hoogenergetische elektrische veldstimulatie 21,22,23. Sommige onderzoeksresultaten geven aan dat 12-nsPEF perifere zenuwen kan stimuleren zonder schade aan te richten24. Op dit moment is er echter beperkt bewijs met betrekking tot de toepassing van nsPEF op het gebied van zenuwregeneratie. Bovendien is het stimuleren van SC's met behulp van nsPEF een baanbrekende poging, die bijdraagt aan verder in vivo en klinisch onderzoek. Deze studie onderzoekt of nsPEF-stimulatie van SC's zenuwregeneratie kan bevorderen en een betrouwbare basis kan bieden voor daaropvolgend diepgaand en systematisch onderzoek.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

1. Ontdooien van gecryopreserveerde RSC96-cellen

  1. Ontdooi de cryovial met 1 ml celsuspensie door deze snel te schudden in een waterbad van 37 °C, voeg het vervolgens toe aan een centrifugebuis met 4-6 ml compleet kweekmedium en meng goed.
  2. Centrifugeer bij 1000 x g gedurende 3-5 minuten, gooi het supernatans weg en resuspendeer de cellen in 3 ml volledig kweekmedium.
  3. Voeg de celsuspensie toe aan een kweekkolf (of schaal) met 6-8 ml volledig kweekmedium en incubeer een nacht bij 37 °C.
  4. Bekijk de volgende dag de celgroei en -dichtheid onder een microscoop.

2. Cel passage:

OPMERKING: Als de celdichtheid 80%-90% bereikt, is deze klaar voor doorgang.

  1. Gooi het kweekmedium weg en spoel de cellen 1-2 keer met fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) zonder calcium- en magnesiumionen.
  2. Voeg 0,25% (m/v) trypsine-0,53 mM EDTA toe aan de kweekkolf (1-2 ml voor een T25-kolf, 2-3 ml voor een T75-kolf) en incubeer bij 37 °C gedurende 1-2 min.
  3. Observeer de celloslating onder een microscoop. Als de meeste cellen rond worden en loskomen, breng de kolf dan snel terug naar het werkgebied, tik zachtjes op de kolf en voeg 3-4 ml kweekmedium met 10% FBS toe om de spijsvertering te stoppen.
  4. Meng de inhoud, zuig de oplossing op en centrifugeer gedurende 5 minuten op 1000 x g . Gooi vervolgens het supernatans weg en repareer de cellen door 1-2 ml vers kweekmedium toe te voegen en voorzichtig te pipetteren.
  5. Breng de celsuspensie over in een nieuwe T25-kolf in een verhouding van 1:2 en voeg 7 ml kweekmedium toe.

3. Werking van het nsPEF-apparaat

  1. Resuspendeer de RSC96-cellen in 1 ml DMEM-kweekmedium en breng ze over in colorimetrische schalen met elektroden aan beide zijden.
  2. Zet de aan/uit-schakelaar aan.
  3. Pas de parameters aan door aan de knop op het instrument te draaien om de intensiteit van het elektrische veld te wijzigen. De intensiteiten die in dit onderzoek zijn vastgesteld, zijn 5 kV/cm, 10 kV/cm, 20 kV/cm en 40 kV/cm.
  4. Draai de elektroden voorzichtig totdat er vonken verschijnen, zodat de cellen 5 pulsen nsPEF kunnen ontvangen volgens de vooraf ingestelde veldsterkte-intensiteiten voordat ze de twee elektroden onmiddellijk scheiden. Neem na deze behandeling de cellen uit de experimentele groep die zijn behandeld met nsPEF en de onbehandelde cellen uit de controlegroep om respectievelijk secties 4-6 uit te voeren na een bepaalde periode van celkweek (1 dag in dit experiment).

4. Celtelling kit-8 (CCK-8) test

  1. Bereid een celsuspensie van een bepaalde concentratie voor uit RSC96-cellen die worden gestimuleerd met elektrische stimulatie. Voeg 100 μL van de celsuspensie toe aan elk putje van een celkweekplaat met 96 putjes. Rekening houdend met de vereisten van de CCK-8-test, controleert u het totale aantal cellen in de reagenskit tussen 1 x 103 en 1 x 106.
  2. Neem 10 μL CCK-8-oplossing uit de kit en voeg deze toe aan de celkweekplaat met 96 putjes. Incubeer in een CO2 -incubator bij 37 °C gedurende nog eens 30 minuten tot 4 uur.
  3. Meet de absorptie. Gebruik dubbele golflengtemeting met een detectiegolflengte van 430-490 nm en een referentiegolflengte van 600-650 nm.
  4. Bepaal de intensiteit van de veldsterkte voor volgende experimenten op basis van de experimentele resultaten van celproliferatie. Selecteer cellen met een goede proliferatie voor volgende experimenten.

5. De test van de celkrassen

  1. Zaai in elk putje van een plaat met zes putjes 3 x 105 cellen met een totaal volume van 2 ml per putje. Ongeveer 72 uur later zullen de cellen de put bedekken. Voer de test uit op de experimentele en de controlegroep afzonderlijk.
  2. Gebruik een pipetpunt om een horizontale lijn te trekken aan de onderkant van de kweekput. Zorg ervoor dat de pipetpunt verticaal wordt gehouden en probeer te voorkomen dat deze kantelt.
  3. Zuig de kweekmedia op en was 2-3 keer met PBS.
  4. Voeg 2 ml serumvrij medium toe aan elk putje.
  5. Plaats de plaat in de incubator van 37 °C. Maak foto's onder een viervoudige vergroting van de omgekeerde microscoop op 0 uur en 24 uur om veranderingen in celmigratie waar te nemen.

6. Immunofluorescentie

  1. Cel permeabilisatie:
    1. Nadat u de celsuspensies voorzichtig in kweekschaaltjes hebt gepipeteerd, tekent u cirkels met een histologiepen op plaatsen waar de cellen gelijkmatig op het dekglaasje zijn verdeeld. Behandel de controlegroep en verschillende experimentele groepen afzonderlijk.
    2. Voeg 50-100 μL permeabilisatie-werkoplossing (0,25-0,5% Triton X-100) toe en incubeer bij kamertemperatuur (RT) gedurende 20 minuten. Was drie keer met PBS gedurende 5 minuten per keer.
  2. Serumblokkering: Voeg 3% BSA toe aan de cirkels om het weefsel gelijkmatig te bedekken. Incubeer bij RT gedurende 30 min.
  3. Incubatie van primaire antilichamen: Verwijder voorzichtig de blokkerende oplossing en voeg het op de juiste manier verdunde primaire antilichaam (afkomstig van muizen, verdund op 1:300) toe aan de celputjes. Plaats de celkweekplaat in een vochtige doos en incubeer een nacht bij 4 °C.
  4. Secundaire antilichaamincubatie: Plaats de celplaat op een shaker en was deze drie keer gedurende 5 minuten per keer. Voeg het overeenkomstige secundaire antilichaam toe (CY3-gelabeld geitenanti-muis IgG, verdund tot 1:300) en incubeer gedurende 50 minuten bij RT.
  5. DAPI nucleaire kleuring:
    1. Plaats het dekglaasje in PBS (pH 7.4) op een shaker en was drie keer gedurende 5 minuten per keer.
    2. Voeg na het voorzichtig drogen van het objectglaasje DAPI-kleuringsoplossing (2 μg/ml, 0,5 ml per cirkel) toe aan de cirkels en incubeer 10 minuten bij RT in een donkere kamer.
  6. Montage: Plaats het dekglaasje in PBS (pH 7.4) op een shaker en was drie keer gedurende 5 minuten per keer. Nadat u de slede voorzichtig hebt gedroogd, verzegelt u het dekglaasje met een anti-vervagend montagemedium voor fluorescentie.
  7. Beeldacquisitie: Exciteer DAPI bij een golflengte van 330-380 nm en detecteer emissie bij 420 nm; exciteren bij 465-495 nm en detecteren emissie bij 515-555 nm voor AF488; exciteren bij 510-560 nm en detecteren emissie bij 590 nm voor CY3; exciteren bij 608-648 nm en detecteren emissie bij 672-712 nm voor CY5.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Gepulseerde elektrische velden met lage intensiteit stimuleren de celproliferatie
Volgens de CCK-8-test was de proliferatiesnelheid van RSC96 in de 5 kV/cm-groep significant sneller dan die van de cellen in de controlegroep. Naarmate de parameters echter toenamen (20 kV/cm en 40 kV/cm), was de proliferatiesnelheid onstabiel, zelfs lager dan die van de controlegroep. De celproliferatiesnelheid van RSC96-cellen in de 40 kV/cm-groep was significant lager dan die van de controlegroep en de 5 kV/cm-groep, ...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

In de afgelopen jaren heeft de toepassing van nsPEF een stimulerende groei doorgemaakt, zoals gemeld. nsPEF heeft een zeer gericht effect op alleen het gewenste gebied en levert voldoende energie om te behandelen zonder extra thermische schade te veroorzaken, waardoor het veiliger is voor het menselijk lichaam28. Deze kenmerken geven het veelbelovende translationele vooruitzichten in tumorbehandeling en zenuwregeneratie. Sommige studies hebben echter enkele beperkingen van nsPEF voorgesteld. In ve...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

Dit werk werd gefinancierd door het National Key Scientific Instrument and Equipment Development Project (NO.82027803).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Antifade mounting mediumWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDG1401
Anti-GFAP Mouse mAbWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDGB12100-100
Anti-Neurofilament heavy polypeptide Mouse mAbWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDGB12144-100
Anti-S100 beta Mouse mAbWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDGB14146-100
BSAWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDGC305010
CoverslipJiangsu Shitai experimental equipment Co., LTD10212432C
CY3-labeled goat anti-mouse IgGWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDGB21302
DAPI Staining ReagentWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDG1012
Decolorizing shakerWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDDS-2S100
High Voltage Power Supply for nsPEFMatsutada Precision Inc.AU-60P1.6-L
Histochemical penWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDG6100
Membrane breaking liquidWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDG1204
Microscope slideWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDG6012
Palm centrifugeWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDMS6000
PBS powderedWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDG0002
PipetteWuhan Xavier Biotechnology Co., LTD
Positive fluorescence microscopeNikon, JapanNIKON ECLIPSE C1
Rabbit Anti-SOX10/AF488 Conjugated antibodyBeijing Bioss Biotechnology Co., LTDBS-20563R-AF488
RSC96 Schwann cellsWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDSTCC30007G-1
Scanister3DHISTECHPannoramic MIDI
Special cable for nsPEFTimes Microwave SystemsM17/78-RG217
Turbine mixerWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDMV-100

Referenties

  1. Jing, W., et al. Study of electrical stimulation with different electric-field intensities in the regulation of the differentiation of PC12 cells. ACS Chem Neurosci. 10 (1), 348-357 (2018).
  2. Nocera, G., Jacob, C. Mechanisms of Schwann cell plasticity involved in peripheral nerve repair after injury. Cell Mol Life Sci. 77, 3977-3989 (2020).
  3. Aguilar, Z. Nanomaterials for Medical Applications. , Newnes. (2012).
  4. Xie, S., et al. Efficient generation of functional Schwann cells from adipose-derived stem cells in defined conditions. Cell Cycle. 16 (9), 841-851 (2017).
  5. Rosenbalm, T. N., Levi, N. H., Morykwas, M. J., Wagner, W. D. Electrical stimulation via repeated biphasic conducting materials for peripheral nerve regeneration. J Mater Sci Mater Med. 34 (11), 1-18 (2023).
  6. Daly, W. T., et al. Comparison and characterization of multiple biomaterial conduits for peripheral nerve repair. Biomaterials. 34 (34), 8630-8639 (2013).
  7. Lee, B. -K., et al. End-to-side neurorrhaphy using an electrospun PCL/collagen nerve conduit for complex peripheral motor nerve regeneration. Biomaterials. 33 (35), 9027-9036 (2012).
  8. Kim, V., Gudvangen, E., Kondratiev, O., Redondo, L., Xiao, S., Pakhomov, A. G. Peculiarities of neurostimulation by intense nanosecond pulsed electric fields: how to avoid firing in peripheral nerve fibers. Int J Mol Sci. 22 (13), 7051(2021).
  9. Assinck, P., Duncan, G. J., Hilton, B. J., Plemel, J. R., Tetzlaff, W. Cell transplantation therapy for spinal cord injury. Nat Neurosci. 20 (5), 637-647 (2017).
  10. Chen, Y. Y., McDonald, D., Cheng, C., Magnowski, B., Durand, J., Zochodne, D. W. Axon and Schwann cell partnership during nerve regrowth. J Neuropathol Exp Neurol. 64 (7), 613-622 (2005).
  11. Yi, S., et al. Tau modulates Schwann cell proliferation, migration and differentiation following peripheral nerve injury. J Cell Sci. 132 (6), (2019).
  12. Min, Q., Parkinson, D. B., Dun, X. Migrating Schwann cells direct axon regeneration within the peripheral nerve bridge. Glia. 69 (2), 235-254 (2021).
  13. Zhang, Y., Zhao, Q., Chen, Q., Xu, L., Yi, S. Transcriptional control of peripheral nerve regeneration. Mol Neurobiol. 60 (1), 329-341 (2023).
  14. Nishi, M., Kawata, M., Azmitia, E. C. Trophic interactions between brain-derived neurotrophic factor and S100β on cultured serotonergic neurons. Brain Res. 868 (1), 113-118 (2000).
  15. Gu, Y., et al. miR-sc8 inhibits Schwann cell proliferation and migration by targeting EGFR. PLoS One. 10 (12), e0145185(2015).
  16. Dong, H. -L., et al. AMPK regulates mitochondrial oxidative stress in C2C12 myotubes induced by electrical stimulations of different intensities. Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao. 38 (6), 742-747 (2018).
  17. Beebe, S. J., Blackmore, P. F., White, J., Joshi, R. P., Schoenbach, K. H. Nanosecond pulsed electric fields modulate cell function through intracellular signal transduction mechanisms. Physiol Meas. 25 (4), 1077(2004).
  18. Haberkorn, I., Siegenthaler, L., Buchmann, L., Neutsch, L., Mathys, A. Enhancing single-cell bioconversion efficiency by harnessing nanosecond pulsed electric field processing. Biotechnol Adv. 53, 107780(2021).
  19. Ruiz-Fernández, A. R., Campos, L., Gutierrez-Maldonado, S. E., Núñez, G., Villanelo, F., Perez-Acle, T. Nanosecond pulsed electric field (nsPEF): Opening the biotechnological Pandora's box. Int J Mol Sci. 23 (11), 6158(2022).
  20. Nuccitelli, R., et al. First-in-human trial of nanoelectroablation therapy for basal cell carcinoma: proof of method. Exp Dermatol. 23 (2), 135-137 (2014).
  21. Nuccitelli, R., et al. Non-thermal nanoelectroablation of UV-induced murine melanomas stimulates an immune response. Pigment Cell Melanoma Res. 25 (5), 618-629 (2012).
  22. Carr, L., et al. A nanosecond pulsed electric field (nsPEF) can affect membrane permeabilization and cellular viability in a 3D spheroids tumor model. Bioelectrochemistry. 141, 107839(2021).
  23. Hornef, J., Edelblute, C. M., Schoenbach, K. H., Heller, R., Guo, S., Jiang, C. Thermal analysis of infrared irradiation-assisted nanosecond-pulsed tumor ablation. Sci Rep. 10 (1), 5122(2020).
  24. Zuo, K. J., Gordon, T., Chan, K. M., Borschel, G. H. Electrical stimulation to enhance peripheral nerve regeneration: Update in molecular investigations and clinical translation. Exp Neurol. 332, 113397(2020).
  25. Juckett, L., Saffari, T. M., Ormseth, B., Senger, J. -L., Moore, A. M. The effect of electrical stimulation on nerve regeneration following peripheral nerve injury. Biomolecules. 12 (12), 1856(2022).
  26. Jessen, K. R., Mirsky, R. Negative regulation of myelination: relevance for development, injury, and demyelinating disease. Glia. 56 (14), 1552-1565 (2008).
  27. Chen, Z. -L., Yu, W. -M., Strickland, S. Peripheral regeneration. Annu Rev Neurosci. 30, 209-233 (2007).
  28. Yin, D., et al. Cutaneous papilloma and squamous cell carcinoma therapy utilizing nanosecond pulsed electric fields (nsPEF). PloS One. 7 (8), e43891(2012).
  29. Qi, F., et al. Photoexcited wireless electrical stimulation elevates nerve cell growth. Colloids Surf B Biointerfaces. 220, 112890(2022).
  30. Mi, Y., Liu, Q., Li, P., Xu, J., Yang, Q., Tang, J. Targeted gold nanorods combined with low-intensity nsPEFs enhance antimelanoma efficacy in vitro. Nanotechnology. 31 (35), 355102(2020).
  31. Ho, T. -C., et al. Hydrogels: Properties and applications in biomedicine. Molecules. 27 (9), 2902(2022).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Meer artikelen verkennen

RSC96-cellencelproliferatiecelmigratieCCK-8-assayscratch-assayS100-bèta-expressieSox10-expressie
Regulering van Schwann-celgroei door nanoseconde gepulseerd elektrisch veld voor perifere zenuwregeneratie in vitro
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.