Het protocol biedt een gedetailleerd standaardisatieproces van afkookselformule en sondetechniek met Yiqi Jiedu-afkooksel in het osteosarcoommuismodel als voorbeeld. Het beschrijft de bescherming van dieren en verbetert de betrouwbaarheid van onderzoeksgegevens, en biedt effectieve strategieën voor het onderzoeken van therapeutische werkzaamheid en moleculaire mechanismen van afkookselformules in vivo.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Gavage-strategie voor afkookselformule van traditionele Chinese geneeskunde bij osteosarcoommodelmuizen
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Afkookselformule is de meest gebruikte doseringsvorm in de traditionele Chinese geneeskunde en wordt al duizenden jaren in de klinische praktijk toegepast door transorale toediening, die wordt gekenmerkt door een snel effect, gemakkelijke absorptie en geïndividualiseerde behandeling op basis van de specifieke syndromen van patiënten. De kwaliteit van de afkookformule is direct verantwoordelijk voor de klinische werkzaamheid van de traditionele Chinese geneeskunde; Daarom is het standaardisatieproces van de afkookformule belangrijk om verschillen in afkookselkwaliteit veroorzaakt door subjectieve factoren te voorkomen. Ondertussen, vanwege de beperkingen van het uitvoeren van klinische experimenten, worden kleine dieren met menselijke ziekten, zoals muizen, vaak gebruikt in medisch onderzoek om de therapeutische werkzaamheid en uitgebreide mechanismen van verschillende interventies te onderzoeken, waaronder de afkookformule voor traditionele Chinese geneeskunde. Bijgevolg is de bekwame maagsondetechniek, als een belangrijke transorale toedieningsmethode, bijzonder belangrijk om mogelijke schade aan de slokdarm en het morsen van geneesmiddelen te voorkomen, wat ervoor zorgt dat aan elk modeldier een gelijke hoeveelheid geneesmiddel wordt toegediend, wat leidt tot nauwkeurige experimentele resultaten. Bovendien zijn de gestandaardiseerde methode voor de bereiding van afkookselformules en de bekwame maagsondestrategie noodzakelijk om het dierenwelzijn te beschermen en het aantal gebruikte dieren te minimaliseren. Hier rapporteerden we een gedetailleerd standaardisatieproces van de afkookformule en gavage-techniek met Yiqi Jiedu-afkooksel in osteosarcoommuismodel als voorbeeld. De werkzaamheid werd geëvalueerd aan de hand van het tumorvolume. Dit protocol zal de bescherming van dieren maximaliseren en de betrouwbaarheid van onderzoeksgegevens verbeteren, waardoor effectieve strategieën worden geboden voor toekomstig onderzoek naar therapeutische werkzaamheid en moleculaire mechanismen van afkookselformule voor traditionele Chinese geneeskunde in vivo.
Inleiding
Afkookselformule is de meest gebruikte doseringsvorm van de traditionele Chinese geneeskunde en de vloeibare geneesmiddelen 1,2. De afkookselformule van de traditionele Chinese geneeskunde wordt verwerkt door de kruiden na weken in water af te koken, gevolgd door filtering om het bezinksel weg te gooien.
Omdat de afkookformule kan worden geïndividualiseerd op basis van klinische behoeften, vooral in overeenstemming met de kenmerken van evidence-based behandeling in de traditionele Chinese geneeskunde, wordt deze toedieningsvorm via transorale toediening al duizenden jaren in de klinische praktijk toegepast met specifieke en onvervangbare voordelen 3,4. De kwaliteit van de afkookformule is direct gerelateerd aan de klinische werkzaamheid. Daarom moet de afkookformule worden bereid op basis van de principes voor de gestandaardiseerde afkookmethoden om ervoor te zorgen dat de actieve ingrediënten maximaal worden geëxtraheerd en beschermd3. Ondertussen zijn afkookselklare medicijnen de belangrijkste vorm van rauwe Chinese kruiden die in de klinische praktijk worden gebruikt; de kwaliteitsnormen en productiemethoden van geneesmiddelen die klaar zijn voor afkooksel moeten voldoen aan de bepalingen van de Chinese Farmacopee2. Bovendien moeten de voorgeschreven afkookselklare medicijnen ten minste 30 minuten in koud drinkwater worden geweekt voordat ze in een speciale farmaceutische pot worden afkooksel door verhitting5. Studies hebben aangetoond dat de meeste actieve ingrediënten kunnen worden geëxtraheerd door twee keer een afkooksel te gebruiken, en de praktijkcode voor de toediening van afkookkamers van traditionele Chinese medicijnen in medische instellingen schrijft ook voor dat afkooksel twee keer moet worden gedaan 4,6,7. Als speciale Chinese kruiden, zoals een met een harde textuur of tonics, worden voorgeschreven, wordt aanbevolen om de afkooktijd te verlengen. Het afkookgerei en de opslagcontainers die direct in contact komen met de afkookformule, te beginnen met de container waarin de voorgeschreven afkookselklare medicijnen zijn gedrenkt, moeten chemisch stabiel zijn en deksels hebben, zoals stoofschotels, keramiek, glas en roestvrij staal. Aluminium en gewone plastic producten mogen echter niet worden gebruikt, terwijl ijzer en ander bijtend keukengerei moeten worden verboden om mogelijke chemische reacties te voorkomen, die de therapeutische werkzaamheid verminderen en zelfs schadelijke effecten veroorzaken 4,6,7.
Vanwege de beperkingen van het uitvoeren van klinische experimenten, worden kleine dieren die de menselijke ziekten dragen, zoals muizen, vaak gebruikt in medisch onderzoek om de therapeutische werkzaamheid en uitgebreide mechanismen van verschillende interventies te onderzoeken, waaronder de afkookformule van de traditionele Chinese geneeskunde 8,9; In tegenstelling tot mensen moeten de afkookselformules echter elke dag worden bereid, met elkaar worden gemengd en in de klinische praktijk 2x per dag vers worden toegediend. Dieren zijn niet in staat om vrijwillig hun medicijnen op tijd in te nemen met de vereiste dosering, en de meeste dierproeven met betrekking tot de traditionele Chinese geneeskunde zijn momenteel op maagsonde gebaseerde orale toediening van de afkookselformules. De afkooksels die voor in-vivodierproeven worden gebruikt, moeten van tevoren worden bereid, gealiquoteerd, bij -20 °C worden bewaard en vlak voor gebruik worden ontdooid 3,4,10. Bovendien verhogen ondermaatse immobilisatie van dieren en manipulatie van sondenaalden het risico op onnodige verwondingen en negatieve emoties. Daarom is de bekwame maagsondetechniek, als een belangrijke methode voor transorale toediening van geneesmiddelen, bijzonder belangrijk om mogelijk slokdarmletsel en morsen van geneesmiddelen te voorkomen, en er zo voor te zorgen dat elk modeldier een gelijke hoeveelheid voorgeschreven kruidengeneesmiddelen krijgt om nauwkeurige experimentele resultaten te bereiken. Hier bieden we een maagsondeprotocol voor de afkookformule van de traditionele Chinese geneeskunde.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Dit protocol beschrijft de gedetailleerde sondetechniek in osteosarcoommodelmuizen door het afkooksel van Yiqi Jiedu als monster te gebruiken. Vier weken oude, mannelijke athymische muizen (BALB/c naakt) werden in dit experiment gebruikt en gehouden in de SPF-kwaliteit kweekruimte van het Laboratory Animal Center in Shanghai University of Traditional Chinese Medicine. Alle dierproeven zijn goedgekeurd door het Animal Management and Committee van de Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, voldeden aan de Code of Ethics for Laboratory Animals (Animal Ethics Approval Number: PZSHUTCM2304060007) en werden uitgevoerd in strikte overeenstemming met de internationale vereisten met betrekking tot proefdieren.
1. Materialen
- Verkrijg de volgende materialen: Chinese kruiden (Ginseng 42 g, Hedyotis diffusa 52,5 g, glidkruid met weerhaken 31,5 g), spuit van 1 ml en 12 G/55 mm elleboognaald (Figuur 1).
2. Bepaling van de dosering
- Bereken de dagelijkse dosering als volgt: de dagelijkse dosering voor volwassenen met een standaard lichaamsgewicht van 60 kg is Ginseng 12 g, Hedyotis diffusa 15 g en Weerhaak glidkruid 9 g, met een totaal van 36 g afkooksel-klaar medicijn, dat wil zeggen 0,6 g afkooksel-klaar medicijn/kg lichaamsgewicht. Verwijzend naar de 12 keer voor equivalente dosis, 6 keer voor lage dosis en 24 keer voor hoge dosis tussen de volwassenen met een standaard lichaamsgewicht van 60 kg en de muizen met een standaard lichaamsgewicht van 25 g volgens het lichaamsoppervlak11, evenals onze voorlopige gegevens, gebruik een 20 keer dosisverhouding van Yiqi Jiedu-afkooksel voor de muizen in de huidige studie, Daarom was de dosering voor muizen 12 g afkookselklare medicijnen/kg lichaamsgewicht.
- Bereken de dosering voor elke muis met behulp van de vergelijking:
Dosering voor muis (lichaamsgewicht van de standaard) = Dosering voor volwassene (lichaamsgewicht van de standaard) x 20 (aangeduide equivalente dosisverhouding).
De dagelijkse dosering van elke muis is 0,3 g [(12 g afkookselklare geneesmiddelen/1000 g lichaamsgewicht) x 25 g lichaamsgewicht] in 200 μL met een eindconcentratie van 1,5 g/ml. - Bereken het totale afkooksel voor muizen (n=7) in de Yiqi Jiedu-afkookselgroep met maagsonde gedurende 28 dagen op 58,8 g. Concentreer dit tot 39,2 ml om een eindconcentratie van 1,5 g/ml te bereiken.
- Rekening houdend met mogelijk medicijnverlies tijdens het afkooksel en de maagsonde, en voor het gemak van de berekening, bereidt u in totaal 126 g (Ginseng 42 g, Hedyotis diffusa 52,5 g, Weerhaak glidkruid 31,5 g) afkookselklaar medicijn, concentreer in een uiteindelijk volume van 84 ml.
3. Celbron en -kweek
- Koop van mensen afgeleide 143B-osteosarcoomcellen van de ATCC-celbank.
- Zaad 1 x 106 143B-cellen in 10 ml MEM-medium met 10% FBS, 100 E/ml penicilline en 100 μg/ml streptomycine in een celkweekschaaltje van 10 cm.
- Kweek 143B-cellen bij 37 °C in een 5% CO2 -incubator totdat de cellen voor 80%-90% samenvloeien.
4. Modelleringsmethoden
- Verzamel de 80% confluente gekweekte 143B-cellen, resuspendeer in 6 ml 10% serumbevattend MEM-medium en meng met basale membraanmatrixgel in een volumeverhouding van 1:1 om een celsuspensie te maken met een eindconcentratie van 1 x 107 cellen/ml.
- Injecteer 10 μL van de celsuspensie in het linker scheenbeen van elke athymische muis om een in situ xenotransplantaat osteosarcoom muismodel op te zetten, zoals beschreven in onze vorige publicatie12. De stappen in het kort zijn als volgt.
- Was de cellen 2x met PBS. Trypsiniseer de cellen met 1,5 ml 0,25% trypsine gedurende 3 minuten. Voeg 6 ml 10% serumbevattende MEM-media toe. Verzamel de cellen in een centrifugebuisje van 15 ml.
- Zuig 20 μL celsuspensie op in de kamer van de celtelplaat en bereken de celconcentratie met behulp van een automatische celteller. Centrifugeer de cellen op 800 x g gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur.
- Gooi het supernatans weg met een pipet, resuspendeer de celpellet in een basaalmembraanmatrix van 8,5 mg/ml en leg ze op ijs.
- Verdoof de muizen door ze bloot te stellen aan 2% isofluraan en 98% zuurstof (zuurstofdebiet, 2 l/min). Breng een kleine hoeveelheid dierenartszalf aan op de ogen om uitdroging onder narcose te voorkomen.
- Voer de hele procedure uit in een goed geventileerde ruimte. Zorg er vóór de injectie van osteosarcoomcellen voor dat elke muis onder diepe anesthesie is door de voet zachtjes aan te raken; als de muis nog steeds reacties heeft, zoals trillen of schokken. Wacht langer als de muis nog steeds reacties heeft, zoals trillen of schokken, totdat deze reacties verdwijnen.
- Plaats de muis in rugligging. Houd de enkel van de muis vast met duim en wijsvinger en desinfecteer de injectieplaats van het scheenbeen met drie afwisselende rondes betadine en 70% ethanolwattenstaafje.
- Bevestig de naald aan een spuit van 1 ml en richt de punt van de naald op de injectieplaats, evenwijdig aan de as van het scheenbeen. Steek de naald percutaan in om een gat te boren door het scheenbeenplatform in de richting van het distale uiteinde van het scheenbeen.
- Laad de osteosarcoomcelsuspensie die eerder op ijs is geplaatst in een injectiespuit met microvolume en vervang de spuit van 1 ml in het scheenbeen door de met osteosarcoomcellen beladen microvolumespuit. Injecteer langzaam ongeveer 10 μL (1 x 107 cellen/ml) osteosarcoomcelsuspensie in het scheenbeen van elke athymische muis.
- Verwijder de injectiespuit met microvolume van de injectieplaats en druk met het wattenstaafje ongeveer 30 s op de injectieplaats. Plaats de muis terug in een schone kooi en observeer het herstel gedurende 10 minuten.
5. Bereiding van afkookselformule uit de traditionele Chinese geneeskunde voor maagsonde ( Figuur 2)
- Bereken de dosering volgens stap 2.
- Week alle geneeskrachtige kruiden voor afkooksel, behalve het dure kruid Ginseng, gedurende 30 minuten in drinkwater met een niveau dat 3 cm hoger is dan het medicijnoppervlak, en voer vervolgens het afkooksel 2x uit zoals hieronder beschreven.
- Voer het eerste afkooksel uit door te verwarmen tot het kookt boven een sterk vuur en vervolgens gedurende 15-25 minuten te verwarmen op een mild vuur. Milde brand verwijst naar een warmte met een laag vermogen met temperaturen die doorgaans variëren van 80 °C tot 100 °C, terwijl sterk vuur verwijst naar een krachtige warmte die doorgaans varieert van 200 °C tot 300 °C.
- Giet de afkookselvloeistof in een bakje.
- Voer het tweede afkooksel uit door de geneeskrachtige kruiden in drinkwater te verwarmen, met een volume dat net genoeg is om het medicijnoppervlak onder te dompelen, tot koken boven een sterk vuur en vervolgens gedurende 15-25 minuten verwarmen boven een mild vuur.
- Giet de afkookvloeistof in hetzelfde bakje als in stap 5.4.
- Week en kook 42 g Ginseng apart, met drinkwater dat 3 cm hoger is dan het medicijnoppervlak, omdat het duur is.
- Voer het eerste afkooksel van geweekte ginseng uit door het gedurende 60 minuten boven een sterk vuur te verwarmen.
Giet de afkookvloeistof in hetzelfde bakje als in stap 5.4. - Voer het tweede afkooksel van Ginseng uit in drinkwater met een volume dat net genoeg is om het medicijnoppervlak onder te dompelen, door gedurende 40 minuten op een mild vuur te verwarmen. Giet de afkookvloeistof in hetzelfde bakje als in stap 5.4.
OPMERKING: De containers die voor afkooksel worden gebruikt, moeten chemisch stabiel zijn, zoals stoofschotels (de meest gebruikte in de klinische praktijk), keramiek, glas en roestvrij staal om mogelijke chemische reacties met de medicinale stoffen te voorkomen. Alle afkookselvloeistof die uit verschillende stappen is verkregen, moet in dezelfde container worden gedaan. - Meng en filter de afkookvloeistof met behulp van drie lagen gaas die met elastiekjes aan de mond van een maatbeker zijn bevestigd.
- Kook het gefilterde afkooksel op een sterk vuur in een pan, verander dan naar mild vuur en houd het milde vuur aan tot het bereiken van de doelconcentratie (een eindvolume van 84 ml met een eindconcentratie van 1,5 g/ml).
- Bereid 21 ml aliquots van het geconcentreerde afkooksel volgens de dosis die nodig is voor intragastrische toediening gedurende 1 week en bewaar de aliquots in de koelkast bij -20 °C.
6. Maagsonde toediening bij muizen met behulp van een maagsonde
- Plaats de muis op het oppervlak van de muizenkooi of een ander ruwer oppervlak.
- Pak de staart van de muis vast met de duim en wijsvinger van de rechterhand. Pak vervolgens de nek van de muis vast met de duim, wijsvinger en middelvinger van de linkerhand.
- Houd de muisstaart vast met de andere twee vingers van de linkerhand om het hoofd, de nek en het lichaam van de muis in een rechte lijn te maken.
NOTITIE: Zorg ervoor dat u de muis ontspannen houdt tijdens het hele grijpproces. Als de muis moeite blijft hebben om te bewegen, moet het grijpproces worden uitgevoerd totdat de muis ontspannen is. - Houd het sondeapparaat in de rechterhand en laad 200 μL afkookselformule voor een muis met 20 g lichaamsgewicht (100 μL afkookselformule/10 g lichaamsgewicht van muis).
- Steek de sondenaald vanuit de hoek in de mond en duw de tong tegen de bovenkaak van de muis.
- Houd het muislichaam in dezelfde richting en duw de maagsondenaald voorzichtig in de richting van de maag langs de slokdarm totdat ongeveer 10 mm van de maagsondenaald buiten blijft.
OPMERKING: Er is een hol gevoel wanneer de sondenaald in de slokdarm komt. De lengte van de sondenaald die in de muis wordt ingebracht, moet worden gemeten tot aan de bovenkant van het borstbeen. De totale lengte van de maagsondenaald is 60 mm (figuur 3), daarom moet ongeveer 50 mm van de maagsondenaald in het lichaam van de muis worden ingebracht voordat de afkookselformule in de maag van de muis wordt geïnjecteerd. - Injecteer de afkookformule in de maag van de muis. Weerstand of vloeistof die uit de mondhoek komt, betekent dat de sondenaald verkeerd wordt geplaatst, wat moet worden vermeden. Bovendien moet de injectiesnelheid worden vertraagd als de afkookformule dik is.
- Laat de muis los en observeer ze gedurende 10 minuten. De maagsonde is succesvol als er geen ademhalingsafwijking wordt waargenomen en de muis terug in de kooi wordt geplaatst (Figuur 4).
7. Verloop van de behandeling
- Om de therapeutische werkzaamheid van Yiqi Jiedu-afkooksel te onderzoeken, zet je een controlegroep en een Yiqi Jiedu-afkookselgroep op. Voor muizen in de controlegroep, fysiologische zoutoplossing toedienen, eenmaal per dag gedurende 28 dagen. Voor muizen in de Yiqi Jiedu-afkookselgroep, dien het Yiqi Jiedu-afkooksel eenmaal per dag gedurende 28 dagen toe.
8. Bijwerkingen
- Observeer nauwlettend de status van de muizen nadat ze terug in de kooi zijn geplaatst, inclusief gewichtsverlies en verminderde mentale toestand als gevolg van het onvermogen van voedsel om in de maag te komen.
- Muizen zullen ademhalingsmoeilijkheden en kortademigheid ervaren als gevolg van door voedsel veroorzaakte tracheale obstructie en zullen hoesten in een poging de luchtpijp vrij te maken. Als een van deze symptomen wordt waargenomen tijdens de maagsonde, stop dan onmiddellijk met de maagsonde en euthanaseer de muizen.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Het remmende effect van Yiqi Jiedu-afkooksel op de groei van osteosarcoom in vivo werd bepaald in een intra-tibiaal xenotransplantaat osteosarcoommuismodel, dat werd bereid door de 143B osteosarcoomcellen in het scheenbeen van athymische muizen te injecteren. Het Yiqi Jiedu-afkooksel werd gedurende 28 dagen vanaf de tweede dag van de 143B-injectie toegediend aan de muizen van de Yiqi Jiedu-afkookgroep via een maagsonde. Fysiologische zoutoplossing werd gegeven aan de muizen in de controlegroep. Alle muizen werde...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
De klinische werkzaamheid van de voorgeschreven kruiden in de traditionele Chinese geneeskunde hangt grotendeels samen met de toegediende dosis en doseringsvorm; Daarom zijn de vaststelling van een gestandaardiseerde afkookstrategie en een bekwaam toedieningsproces noodzakelijk in de klinische praktijk, evenals bij het verbeteren van de betrouwbaarheid van experimentele resultaten.
In deze studie hebben we eerst een gedetailleerde strategie gegeven voor het gestandaardiseerde afkooksel van Chi...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs verklaren dat ze niets te onthullen hebben.
Dankbetuigingen
Het huidige werk wordt ondersteund door subsidies van de (1) National Nature Science Foundation (81973877 en 82174408), (2) National Key R&D Program of China (2020YFE0201600), (3) Shanghai Top Priority Research Center bouwproject (2022ZZ01009), (4) Shanghai Collaborative Innovation Center of Industrial Transformation of Hospital TCM Preparation, en (5) onderzoeksprojecten binnen het budget van Shanghai University of Traditional Chinese Medicine (2021LK047).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 143B-cellijn | ATCC | CRL-8303 | osteosarcoom-cellijn |
| Anesthesiegepparaat | Shenzhen RWD Life Technology Co.,Ltd | R500IP | Apparatuur voor anesthesie bij muizen |
| Automatische celteller | Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd | IC1000 | Tellen van cellen |
| BALB/c atymische muizen | Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd. | Mannetje | Dier |
| Barbed skullcap-kruid | Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. | 20230606 | Afkookbare medicijnen |
| Basement Membrane Matrix | Shanghai Uning BioscienceTechnology Co., Ltd | 356234, BD, Matrigel | herschorste cellen |
| Centrifugebuis (15 mL) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 430790, Corning | Centrifugeer de cellen |
| Elboogintubatie-naald (12-gauge/ 55 mm) | RWD Life Science Co., Ltd. | C21014-12 | Onderdeel van het maagperfusie-apparaat |
| Gaas | Haishi Hainuo Group Co., Ltd. | LC45 | Afkookfilter |
| Ginseng | Shanghai Wanshicheng Pharmaceutical Co., Ltd. | 20220704-2 | Afkookbare medicijnen |
| Hedyotis diffusa | Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. | 2023071107 | Afkookbare medicijnen |
| isofluraan | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | VETEASY | Anesthesie bij muizen |
| Micro-volume spuit | Shanghai high pigeon industry and trade Co., Ltd | 0-50 μL | Injecteer nauwkeurige cellen in het scheenbeen |
| Fosfaatgebufferde zoutoplossing | Beyotime Biotechnology | ST447 | Was de menselijke osteosarcoomcellen |
| Gumbandjes | Shanghai Hengfei Biotechnology Co., Ltd. | XPJ | Bevestig gaas op de maatbeker |
| Spuit (1 mL ) | Shanghai Mishawa Medical Industry Co., Ltd. | SBM0040 | Onderdeel van het maagperfusie-apparaat |
| Trypsine (0,25%) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 25200056, Gibco | Trypsine-behandeling van cellen |
Referenties
- Gao, S. Discussion on advantages and improvement of traditional Chinese medicine decoction. Chinese Community Physicians (Comprehensive Edition). (21), 12(2005).
- Chinese Pharmacopoeia Commission. Pharmacopoeia of the People's Republic of China. , (2015).
- An, Y., et al. Interpretation on specification of traditional Chinese medicine decoction. Herald Med. 42 (11), 1648-1652 (2023).
- Chen, S., et al. Research strategies in standard decoction of medicinal slices. China J Chinese Materia Medica. 41 (8), 1367-1375 (2016).
- Luo, F. Effect of soaking traditional Chinese medicine before decoction on active components. Shanghai Yiyao. 40 (9), 63-64 (2019).
- Liu, F., Chen, M. On the standardization of decocting methods of modern decoction. Global Trad Chinese Med. 7 (5), 377-378 (2014).
- Li, X., et al. Influence of decocting times and instrument on the quality of decoction. J Trad Chinese Med. 50 (6), 550-552 (2009).
- Li, X., et al. Herbal decoctosome is a novel form of medicine. Sci China. Life Sci. 62 (3), 333-348 (2019).
- Lan, Y., Hu, Y., Huang, W., Tang, S. Reflections on PK - PD model based on animal experiments for study of Chinese medicine. Lishizen Med Materia Medica Res. 34 (2), 395-397 (2023).
- Li, Y., Bai, M., Song, Y., Guo, H., Miao, M. Research and reflection on standard decoction of Chinese materia medica. Chinese Trad Herbal Drugs. 49 (17), 3977-3980 (2018).
- Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration, Center for Drug Evaluation and Research (CDER). Estimating the maximum safe starting dose in initial clinical trials for therapeutics in adult healthy volunteers. , https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/estimating-maximum-safe-starting-dose-initial-clinical-trials-therapeutics-adult-healthy-volunteers (2005).
- Chang, J., et al. Intratibial osteosarcoma cell injection to generate orthotopic osteosarcoma and lung metastasis mouse models. J Vis Exp. (176), 63072(2021).
- He, C. Laboratory animal science. , (2006).
- Patten, A. R., Fontaine, C. J., Christie, B. R. A comparison of the different animal models of fetal alcohol spectrum disorders and their use in studying complex behaviors. Fronti Pedia. 2, 93(2014).
- Jones, C. P., Boyd, K. L., Wallace, J. M. Evaluation of mice undergoing serial oral gavage while awake or anesthetized. J Am Assoc Lab Animal Sci. 55 (6), 805-810 (2016).
- Recena Aydos, L., et al. Nonalcoholic fatty liver disease induced by high-fat diet in C57bl/6 models. Nutrients. 11 (12), 3067(2019).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
