Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Picrosirius rode kleuring voor semikwantitatieve histopathologische evaluatie van collageenafzetting in muizenmodellen van chronische afstoting van longtransplantaten

2K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/66395

⸱

21 maart 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Thoracic Surgery, Medical Center - University of Freiburg, Faculty of Medicine, University of Freiburg, 2Department of Plastic and Hand Surgery, Medical Center - University of Freiburg, Faculty of Medicine, University of Freiburg, 3Department of Thoracic Surgery, Kyoto University Hospital, 4Department of Otolaryngology, Medical Center - University of Freiburg, Faculty of Medicine, University of Freiburg

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

Picrosirius Rode kleuring is een semikwantitatieve methode voor het objectief beoordelen van collageenafzetting bij pulmonale fibrotische remodellering bij muizen op een ruimtelijk opgeloste manier. Afgezien van het evalueren van de totale collageenafzetting, maakt Picrosirius Red-kleuring het mogelijk om collageenvezels van verschillende diktes te differentiëren.

Samenvatting

Fibrose is het pathofysiologische kenmerk van chronische afstoting na longtransplantatie en de belangrijkste hindernis voor de overleving van de ontvanger op de lange termijn. Er zijn verschillende longtransplantatiemodellen bij muizen beschikbaar voor de studie van chronische afstoting. Ze vertonen echter heterogene resultaten met betrekking tot fibrotische veranderingen van het transplantaat, en de histologische omvang van fibrose wordt meestal kwalitatief gerapporteerd. Daarom kan een ruimtelijk opgeloste benadering die statistische analyse mogelijk maakt, helpen bij het evalueren van fibrose in deze modellen. Deze studie presenteert Picrosirius Red-kleuring voor een semikwantitatieve evaluatie van de collageenorganisatie in longtransplantaten bij muizen en vergelijkt deze met standaard hematoxyline en eosine, Masson's Trichrome en Herovici's vlekken. Er werd kleuring uitgevoerd op secties van twee verschillende muizentransplantatiemodellen op basis van kleine en grote mismatches in het histocompatibiliteitscomplex (MHC). De methode is ontwikkeld voor semikwantitatieve analyse van de collageenorganisatie in hele longsecties. Het kan dus dienen als een hulpmiddel voor experimentele modellen van fibrotische longziekten bij muizen.

Inleiding

Longtransplantatie is de definitieve therapeutische optie voor patiënten die lijden aan longziekte in het eindstadium. Overleving op lange termijn wordt echter belemmerd door chronische afstoting, die 50% van de ontvangers binnen de eerste vijf postoperatieve jaren treft1. Fibrotische remodellering van de kleine luchtwegen en het longparenchym is het histologische kenmerk dat ten grondslag ligt aan het progressieve verlies van longfunctie bij chronische afstoting van longtransplantaten2. Experimenteel kan chronische afstoting van longtransplantaten worden gemodelleerd met orthotope longtransplantatie bij muizen tussen MHC-niet-overeenkomende muizenstammen. Er zijn verschillende stamcombinaties voorgesteld om het fenotype van chronische afstoting3 te bereiken. Onder hen wordt vaak de transplantatiecombinatie van de kleine MHC niet-overeenkomende C57BL/10-donor en C57BL/6-ontvanger gebruikt4. Als alternatief kunnen BALB/c-donorlongen worden getransplanteerd naar C57BL/6-ontvangers die dagelijks een immunosuppressieve behandeling krijgen5. Deze modellen resulteren in histologisch verschillende gradaties van fibrotische veranderingen6. Deze veranderingen worden vaak kwalitatief gerapporteerd met behulp van de standaard hematoxyline en eosine, en de trichrome kleuring van Masson.

De standaard histologische kleuring met hematoxyline en eosine zorgt voor een overzicht van het monster omdat het de kernen blauw kleurt, terwijl cytoplasma en collageenvezels rood lijken. Met de trichrome kleuring van Masson zijn de kernen zwart gekleurd, zijn de collageenvezels groen tot blauw gekleurd en is de achtergrond, inclusief cytoplasma, fibrine en spieren, rood. Omdat de Trichrome kleuring van Masson kan leiden tot onderschatte waarden, wordt het gebruik van Picrosirius Red kleuring als heilzaam beschouwd7. Picrosirius Red is een lineaire anionische kleurstof die wordt geassocieerd met lange kationische collageenvezels en zorgt voor contrastrijke rode kleuring. Bovendien versterkt Picrosirius Red-kleuring de natuurlijke dubbelbreking van collageenvezels onder kruisgepolariseerd licht8. Op deze manier kunnen de dikte en verpakking van collageenvezels worden geëvalueerd. Met behulp van een polarisatiefilter wordt de achtergrond donker en wordt het mogelijk om de dikte van het afgezette collageen te onderscheiden. Terwijl dikke collageenvezels rood lijken, komen dunne collageenvezels groen tevoorschijn onder polarisatie. Een direct verband tussen dubbelbreking en collageensubtype wordt vaak beschreven in de literatuur, waarbij rode dubbelbreking wordt toegewezen aan collageen I en groene dubbelbreking aan collageen III9.

Dit protocol beschrijft het gebruik van Picrosirius Red-kleuring om fibrose in longtransplantaten bij muizen te evalueren. Naast conventionele histologische kleuring maakt het een semikwantitatieve evaluatie van fibrotische verandering in muizenmodellen van chronische afstoting mogelijk, biedt het een middel om onderscheid te maken tussen dikke en dunne collageenvezels in slechts één kleuring, is het kostenefficiënt en is het gemakkelijk uit te voeren. Deze methode kan ook worden toegepast op andere experimentele modellen bij muizen die worden gekenmerkt door fibrotische remodellering van het longparenchym.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Alle dierprotocollen voldoen aan de ethische principes van de 3V's voor humaan dieronderzoek en zijn goedgekeurd door de lokale veterinaire ethische commissie (Veterinäramt Kanton Zürich, Zwitserland, studienummer 45/2014). Evenzo moeten lezers toestemming krijgen van de relevante instellingen voordat ze procedures op proefdieren uitvoeren.

1. Sample acquisitie

  1. Voer dierproeven uit in overeenstemming met de individuele behoeften en de respectieve ethische goedkeuring. Een enkele microchirurg voert alle operaties uit zonder extra verlengde ischemietijden.
    OPMERKING: Voor een reproductie van onze representatieve resultaten, verkrijg specifieke pathogeenvrije volwassen mannelijke C57BL/6J-, C57BL/10J- en BALB/c-muizen met een gewicht van 27-30 g van Charles River Laboratories. Gebruik voor isotransplantaten C57BL/6J-dieren als zowel donor als ontvanger. In het kleine niet-overeenkomende model, transplanteer C57BL/10J donorlongen naar C57BL/6J-ontvangers. In het belangrijkste niet-overeenkomende model transplanteren BALB/c-donorlongen naar C57BL/6J-ontvangers en postoperatief ciclosporine (10 mg/kg/dag) en methylprednisolon (1,6 mg/kg/dag) subcutaan per dag injecteren5. Gebruik een zoutoplossing voor perfusie en haal de longen op na 8 weken (56 dagen).
  2. Voor euthanasie intubeert u het dier met een 20G-katheter en beademt u het met O2 aangevuld met 2%-3% isofluraan. Bevestig voldoende diepte van de anesthesie door het ontbreken van een reactie op een knijp van de poot.
  3. Voer een mediane laparosternotomie uit door met een chirurgische schaar in de buikwand te snijden en de lengte van het borstbeen af te knippen om het hart bloot te leggen. Identificeer de inferieure vena cava en het linker atriale aanhangsel aan de hand van hun anatomische locatie.
  4. Knip snel achter elkaar de vena cava inferior en het linker atriale aanhangsel door met een chirurgische schaar en prik het dier met 3-5 ml 0,9% NaCl door de wortel van de longslagader met een spuit om al het bloed uit de longcirculatie te verwijderen.
    OPMERKING: Euthanasie moet worden uitgevoerd in overeenstemming met de respectieve ethische goedkeuring. Andere methoden kunnen ook worden toegepast. Het wordt aanbevolen om bloed uit de longcirculatie grondig te verwijderen, wat ook kan worden gedaan door perfusie na een circulatiestilstand.
  5. Verwijder de geperfuseerde longen met een schaar.
  6. Incubeer de monsters voor conservering in 4% formaline. Injecteer de formalineoplossing rechtstreeks in de bronchiën en het longvaatstelsel. Dompel de monsters onder in formaline en laat ze minstens 6 uur incuberen.
    OPMERKING: Voor het opblazen van de long met formaline moet een gestandaardiseerde procedure worden toegepast om vergelijkbare resultaten te verkrijgen. Voorbeeldprotocollen voor dergelijke procedures zijn elders gepubliceerd10,11.
  7. Trim het orgel volgens experimentele behoeften. Snijd de longen dwars doormidden om alle delen van de bronchiale boom in een sectie vast te leggen.
  8. Breng de monsters over naar een automatische weefselverwerker voor dehydratatie in alcoholsequentie, waarbij ze als volgt worden gezuiverd in xylol- en paraffinecoating: 70% ethanol, 70% ethanol, 80% ethanol, 96% ethanol, 100% ethanol (elk 1 uur), 100% ethanol, 100% ethanol, xylol (elk 2 uur), xylol (1 uur) en paraffine 3x gedurende 2 uur.
  9. Smelt paraffine en sluit monsters in de juiste richting in Polyoxymethylen-inbeddingscassettes. Zorg ervoor dat u de monsters insluit met het snijvlak naar beneden gericht. Gebruik een roterende microtoom om secties van 5 μm achter elkaar te snijden. Laat de objectglaasjes 24 uur drogen bij 37 °C alvorens ze verder te verwerken.

2. Deparaffinisatie en hydratatie van paraffineglaasjes

  1. Verwijder paraffine door de monsters 2x in 100% xylol te incuberen gedurende 5 minuten elk.
    LET OP: Xylol is ontvlambaar en gevaarlijk voor de gezondheid. Alleen gebruiken onder de zuurkast.
  2. Hydrateer de monsters elk 2 minuten in 100% ethanol, 100% ethanol, 95% ethanol, 70% ethanol en 50% ethanol. Was vervolgens 2 minuten in gedestilleerd water.

3. Kleuring met Picrosirius Red

  1. Vlek dia's gedurende 8 minuten in de hemalumoplossing van Meyer. Was de dia's 10 minuten onder stromend kraanwater.
  2. Incubeer de dia's gedurende 1 uur in Picrosirius Red-oplossing. Gebruik voor Picrosirius Red-oplossing een voorgemengde kleuringsoplossing of gebruik 0,1% Direct Red 80 of Sirius Red F 3B (CI 35780) verdund in verzadigd picrinezuur.
    LET OP: Picrinezuur is ontvlambaar en zeer explosief en moet zorgvuldig worden behandeld.
    OPMERKING: Er zijn veel verschillende leveranciers voor Picrosirius Red-kleuringskits beschikbaar, zoals vermeld in de materiaaltabel. Houd rekening met verschillen in prijs en kleurmethoden en houd u altijd aan de instructies van de leverancier. Het wordt aanbevolen om alleen kleuringskits te gebruiken met de specifieke kleurindex voor Sirius Red F 3B (CI 35780).
  3. Dompel de glaasjes 5x-10x in een azijnzuuroplossing (0,5%). Schud de dia's voorzichtig om de oplossing fysiek te verwijderen.
  4. Dehydrateer de dia's in 95% ethanol, 100% ethanol, 100% ethanol, 100% xylol en 100% xylol gedurende 5 minuten elk.
  5. Insluiten door een druppel montagemedium toe te voegen aan elk monster en af te dekken met een dekglaasje. Laat de glijbanen drogen onder een zuurkast.

4. Digitalisering en beeldverwerking

  1. Stel de monsters scherp onder een lichtmicroscoop met de juiste beeldvormingssoftware totdat het beeld helder en scherp wordt. Voeg een polarisatiefilter toe en pas de polarisatiegraad aan totdat de achtergrond helemaal donker of zwart is. Wanneer de achtergrond zo donker mogelijk is, wordt de juiste polarisatie bereikt.
    OPMERKING: Het is ook mogelijk om Picrosirius Red-kleuring te visualiseren met conventioneel doorvallend licht en zonder polarisatiefilter. Voor dit doel wordt aanbevolen om Sirius Red met Fast Green te gebruiken, omdat is aangetoond dat het gevoeliger is dan Sirius Red alleen12,13. Polariserende microscopie is echter nodig om onderscheid te maken tussen dikke en dunne collageenvezels.
  2. Scan alle monsters volledig onder een vergroting van 20x en exporteer ze als .tiff. Overdracht naar Fiji software14. Zorg ervoor dat u de dia's van tevoren goed schoonmaakt en gebruik gestandaardiseerde instellingen met betrekking tot belichtingstijd en lichtbronintensiteit.
  3. Omring het monster handmatig en knip het uit in de software met behulp van Edit > Clear Outside. Meet de totale oppervlakte door te klikken op Analyseren > Meten.
    OPMERKING: De selectie van het te meten compartiment is een cruciale stap in het creëren van betrouwbare en vergelijkbare resultaten. Door het hele monster te digitaliseren en te selecteren, wordt een goede dwarsdoorsnede weergegeven en worden heterogene weefsels als een geheel beschouwd. Het is echter ook mogelijk om zich te beperken tot specifieke gebieden binnen de monsters, zoals het borstvlies of individuele bronchiën. Houd er rekening mee dat u altijd compartimenten selecteert om op een gestandaardiseerde manier te vergelijken. Als de monsters een grote variabiliteit in ventilatie vertonen, is het raadzaam om het luchtruim uit te sluiten van het geanalyseerde compartiment15.
  4. Meet het totale collageengehalte per monster met behulp van de kleurdrempel door te klikken op Afbeelding > > kleurdrempel aanpassen en pas de instellingen aan door te klikken op Deeltjes analyseren > analyseren. Setgrootte = 1 - oneindig, duidelijk, samenvattend. Helderheid = 35 - 255. Tint = 2 - 130
    OPMERKING: Een redelijke instelling van de kleurdrempels is van cruciaal belang om betrouwbare resultaten te bereiken.
  5. Herhaal dit voor dikke en dunne collageenvezels door de tint aan te passen als rode figure-protocol-1 dikke collageenvezels (tint 2-30) en geelgroene figure-protocol-2 dunne collageenvezels (tint 31-130). Het resultaat is het gebied met bevlekte pixels.
  6. Configureer Macro voor geautomatiseerde verwerking door te klikken op Plug-ins > Macro's > Opnemen en herhalen met alle voorbeelden.
  7. Om definitieve waarden te ontvangen die zijn gestandaardiseerd op het oppervlak van de doorsnede, deelt u de oppervlakte van de gekleurde pixels voor alle parameters door de totale oppervlakte zoals gemeten in respectievelijk stap 4.3 en 4.5 voor elk monster.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Het hierboven beschreven protocol maakt een objectieve semikwantitatieve evaluatie van collageenafzetting in longweefsel van muizen mogelijk. Fibrotische remodellering is het pathofysiologische kenmerk van chronische afstoting na longtransplantatie. Daarom werd Picrosirius Red-kleuring toegepast in chronische longtransplantaatafstotingsmodellen met behulp van linkszijdige orthotope longtransplantatie bij muizen. De grote MHC-niet-overeenkomende longtransplantatie van een BALB/c-donor naa...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Standaard histologische methoden zoals hematoxyline en eosine en Masson's trichrome kleuring worden veel gebruikt om fibrotische veranderingen in de longen van muizen op een ruimtelijk opgeloste manier te detecteren16,19. Er zijn echter vaak aanvullende methoden nodig om deze veranderingen te kwantificeren en de collageensamenstelling van het weefsel te evalueren.

Picrosirius Red-kleuring werd voor het...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

Birte Ohm wordt ondersteund door het Berta-Ottenstein-programma voor clinicus-wetenschappers, Faculteit der Geneeskunde, Universiteit van Freiburg. Steffen U Eisenhardt is een Heisenberg-professor van de Duitse Onderzoeksstichting (DFG) en ondersteunde dit werk met persoonlijke beurzen. Verder willen we Sheena Kreuzaler bedanken voor haar technische assistentie. Figuur 1 is gemaakt met behulp van Biorender.com. Beeldvorming werd uitgevoerd in de Lighthouse Core Facility, die gedeeltelijk wordt gefinancierd door de Medische Faculteit, Universiteit van Freiburg (Projectnummers 2023/A2-Fol; 2021/B3-FOL), de DKTK en de DFG (Projectnummer 450392965).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
AzijnzuurHoneywell, Charlotte, USA33209
Axio ObserverZeiss, Oberkochen, Duitsland4633000956 (serienummer)
Dekglas 1.5Roth, Karlsruhe, DuitslandKCY5.1
Formaldehyde 37%Fisher Scientific, Leicestershire, UKF/1501/PB15
Meyer's hemalum-oplossingMerck, Darmstadt, Duitsland109249
Picrosirius Red-oplossingMorphisto, Offenbach am Main, Duitsland13422alternatieven die kunnen worden gebruikt: ab150681, abcam, Cambridge, UK; SRS250 ScyTek Laboratories, Logan City US
PolarisatiefilterZeiss, Oberkochen, Duitsland000000-1121-813
Roterende microtoom, HistoCore AUTOCUTLeica, Wetzlar, Duitsland149AUTO00C1, 14051956472
ROTI Histokitt montagemediumRoth, Karlsruhe, Duitsland6638.1
ROTI Plast ParaffinRoth, Karlsruhe, Duitsland6642.5
Rotilabo-inbeddingscassettes, POMRoth, Karlsruhe, DuitslandK113.1
Superfrost Plus Adhesion Microscoopglaasjeepredia, Portsmouth, UKJ1800AMNZ
Weefselprocessor Leica, Wetzlar, DuitslandTP 1020
Software
Fiji-software versie 2.14.0/1.54fOpen Source
Beeldvormingssoftware ZEN 3.4.91Zeiss, Oberkochen, Duitsland

Referenties

  1. Weigt, S., DerHovanessian, A., Wallace, W., Lynch, J., Belperio, J. Bronchiolitis Obliterans Syndrome: The Achilles' heel of lung transplantation. Semin Respir Crit Care Med. 34 (3), 336-351 (2013).
  2. Verleden, G. M., et al. Chronic lung allograft dysfunction: Definition, diagnostic criteria, and approaches to treatment-A consensus report from the Pulmonary Council of the ISHLT. J Heart Lung Transplant. 38 (5), 493-503 (2019).
  3. Lama, V. N., et al. Models of lung transplant research: A consensus statement from the National Heart, Lung, and Blood Institute workshop. JCI Insight. 2 (9), e93121(2017).
  4. Martinu, T., et al. Spectrum of chronic lung allograft pathology in a mouse minor-mismatched orthotopic lung transplant model. Am J Transplant. 19 (1), 247-258 (2019).
  5. de Vleeschauwer, S., et al. Chronic rejection pathology after orthotopic lung transplantation in mice: The development of a murine BOS model and its drawbacks. PLoS One. 7 (1), e29802(2012).
  6. Yamada, Y., et al. Chronic airway fibrosis in orthotopic mouse lung transplantation models-An experimental reappraisal. Transplantation. 102 (2), e49-e58 (2018).
  7. Whittaker, P., Kloner, R. A., Boughner, D. R., Pickering, J. G. Quantitative assessment of myocardial collagen with picrosirius red staining and circularly polarized light. Basic Res Cardiol. 89 (5), 397-410 (1994).
  8. Puchtler, H., Waldrop, F. S., Valentine, L. S. Polarization microscopic studies of connective tissue stained with picro-sirius red FBA. Beitr Pathol. 150 (2), 174-187 (1973).
  9. Junqueira, L. C. U., Cossermelli, W., Brentani, R. Differential staining of collagens type I, II and III by Sirius Red and polarization microscopy. Arch Histol Jpn. 41 (3), 267-274 (1978).
  10. Davenport, M. L., Sherrill, T. P., Blackwell, T. S., Edmonds, M. D. Perfusion and inflation of the mouse lung for tumor histology. J Vis Exp. (162), e60605(2020).
  11. Limjunyawong, N., Mock, J., Mitzner, W. Instillation and fixation methods useful in mouse lung cancer research. J Vis Exp. (102), e52964(2015).
  12. Segnani, C., et al. Histochemical detection of collagen fibers by Sirius Red/Fast Green is more sensitive than van Gieson or Sirius Red alone in normal and inflamed rat colon. PLoS One. 10 (12), e0144630(2015).
  13. Courtoy, G. E., et al. Digital image analysis of Picrosirius Red staining: A robust method for multi-organ fibrosis quantification and characterization. Biomolecules. 10 (11), 1585(2020).
  14. Schindelin, J., et al. Fiji: an open-source platform for biological-image analysis. Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).
  15. Ségard, B. D., et al. Quantification of fibrosis extend and airspace availability in lung: A semi-automativ ImageJ/Fiji toolbox. PloS. 2 (2), e0298015(2024).
  16. Zhou, X., Moore, B. B. Lung section staining and microscopy. Bio Protoc. 7 (10), e2286(2017).
  17. Herovici, C. Picropolychrome: histological staining technic intended for the study of normal and pathological connective tissue. Rev Fr Etud Clin Biol. 8, 88-89 (1963).
  18. Sweat, F., Puchtler, H., Rosenthal, S. Sirius Red F3BA as a stain for connective tissue. Arch Pathol. 78, 69-72 (1964).
  19. Cardiff, R. D., Miller, C. H., Munn, R. J. Manual hematoxylin and eosin staining of mouse tissue sections. Cold Spring Harb Protoc. 2014 (6), 655-658 (2014).
  20. Montes, G. S., Junqueira, L. C. The use of the Picrosirius-polarization method for the study of the biopathology of collagen. Mem Inst Oswaldo Cruz. 86, Suppl 3 1-11 (1991).
  21. Rittié, L. Method for Picrosirius Red-polarization detection of collagen fibers in tissue sections. Methods Mol Biol. 1627, 395-407 (2017).
  22. Diehm, Y. F., et al. Stem cell-enriched hybrid breast reconstruction reduces risk for capsular contracture in a hybrid breast model. Plast Reconstr Surg. 152 (3), 572-580 (2023).
  23. Rich, L., Whittaker, P. Collagen and Picrosirius Red staining: A polarized light assessment of fibrillar hue and spatial distribution. Braz J Morphol Sci. 22 (2), 97-104 (2005).
  24. Datar, U. V., et al. Clinicopathologic study of a series of giant cell fibroma using picrosirius red polarizing microscopy technique. Arch Iran Med. 17 (11), 746-749 (2014).
  25. Nishat, R., Kumar, H. Collagen fibers in oral submucous fibrosis - A polarizing microscopy study using two special stains. Indian J Pathol Microbiol. 62 (4), 537-543 (2019).
  26. Lattouf, R., et al. Picrosirius red staining: a useful tool to appraise collagen networks in normal and pathological tissues. J Histochem Cytochem. 62 (10), 751-758 (2014).
  27. López De Padilla, C. M. Picrosirius Red staining: Revisiting its application to the qualitative and quantitative assessment of collagen type I and type III in tendon. J Histochem Cytochem. 69 (10), 633-643 (2021).
  28. Junqueira, L. C. U., Bignolas, G., Brentani, R. R. Picrosirius staining plus polarization microscopy, a specific method for collagen detection in tissue sections. Histochem J. 11 (4), 447-455 (1979).
  29. Zheng, L., et al. Scar collagen deposition in the airways of allografts of lung transplant recipients. Am J Respir Crit Care Med. 155 (6), 2072-2077 (1997).
  30. Astbury, S., et al. Reliable computational quantification of liver fibrosis is compromised by inherent staining variation. J Pathol Clin Res. 7 (5), 471-481 (2021).
  31. Feingold, B., et al. Diffuse myocardial fibrosis among healthy pediatric heart transplant recipients: Correlation of histology, cardiovascular magnetic resonance, and clinical phenotype. Pediatr Transplant. 21 (5), 12986(2017).
  32. vander Ploeg, E. A., Melgert, B. N., Burgess, J. K., Gan, C. T. The potential of biomarkers of fibrosis in chronic lung allograft dysfunction. Transplant Rev (Orlando). 35 (3), 100626(2021).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Trefwoorden

Chronische longafstotingmuislongtransplantatiesemikwantitatieve evaluatiefibroseanalysepolarisatiemicroscopieMasson s trichroomdigitale beeldanalyse
Picrosirius rode kleuring voor semikwantitatieve histopathologische evaluatie van collageenafzetting in muizenmodellen van chronische afstoting van longtransplantaten
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleid

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.