Dit artikel presenteert een gids voor het bemonsteren van zes belangrijke en diverse organen in volwassen Xenopus die snel en gemakkelijk toegankelijk zijn: de hartkamer, de leverkwab, de alvleesklier, de vetlichamen, de gepaarde nieren en de huid.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Technieken voor het snel bemonsteren van zes cruciale organen in volwassen xenopus
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Xenopus is al meer dan honderd jaar een krachtig modelorganisme voor het begrijpen van de ontwikkeling en ziekten van gewervelde dieren. Hoewel experimentele analyse- en dissectietechnieken van het embryo goed gedocumenteerd zijn, zijn beschrijvingen van volwassen Xenopus-structuren en -organen, samen met technieken voor het werken met volwassenen, niet bijgewerkt om rekening te houden met de vereisten van moderne benaderingen zoals kwantitatieve proteomics en single-cell transcriptomics. De celtype- en gencentrische perspectieven vereisen contrasterende waarnemingen in embryonale stadia met die in volwassen weefsels. De organen van de larve ondergaan aanzienlijke veranderingen in hun algehele structuur, morfologie en anatomische locatie langs de overgang van larval naar volwassene, met name tijdens massale metamorfose-remodellering. Het vaststellen van robuuste normen voor orgaanidentificatie en -dissectie is van cruciaal belang om ervoor te zorgen dat datasets die het resultaat zijn van onderzoeken die in verschillende laboratoria zijn uitgevoerd, consistent kunnen zijn. Het huidige protocol identificeert zes van de organen in de volwassen Xenopus, en demonstreert methoden voor dissectie en bemonstering van de hartkamer, de lever, het vetlichaam, de alvleesklier, de gepaarde nier en de huid van de volwassen Xenopus. Afhankelijk van de conserveringsmethoden kunnen de ontlede organen worden gebruikt voor kwantitatieve proteomics, single cell/nuclei transcriptomics, in situ hybridisatie, immunohistochemie, histologie, enz. Dit protocol heeft tot doel weefselbemonstering te standaardiseren en multi-labonderzoek van de volwassen orgaansystemen te vergemakkelijken.
Inleiding
Hoewel de "digitale dissectie" van volwassen Xenopus" beschikbaar is1, blijft repliceerbare orgaan- en weefselbemonstering van volwassen Xenopus een uitdaging zonder de gedetailleerde instructie die beschikbaar is voor andere volwassen modellen (bijv. muizen 2,3,4). Dit artikel is bedoeld om duidelijke richtlijnen te geven voor nauwkeurige en reproduceerbare orgaanbemonstering van volwassen Xenopus, vergelijkbaar met wat momenteel beschikbaar is voor hun larven5. De nadruk wordt gelegd op het gemak van....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle experimenten werden uitgevoerd in overeenstemming met de regels en voorschriften van de Harvard Medical School IACUC (Institutional Animal Care and Use Committee) (IS 00001365_3). De representatieve resultaten worden getoond voor zowel een geperfuseerde als een niet-geperfuseerde volwassen albino man Xenopus laevis.
1. Experimentele voorbereiding
OPMERKING: Als perfusieprotocol8 wordt gevolgd vóór de bemonstering, ga dan verder met stap 2.2.
- Zorg ervoor dat de onderzoeksinstelling de in dit protocol beschreven euthanasietechniek heeft goedgekeurd.<....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Door gebruik te maken van figuur 1 tot figuur 20 en alle stappen van dit protocol te volgen, werden de hartkamer, de linker leverkwab, de alvleesklier, de linker vetlichamen, gepaarde nieren en een huidflap binnen een uur na euthanasie netjes weggesneden. Binnen deze tijd worden de monsters gespoeld en bijgesneden zodat ze verschijnen, zoals weergegeven in figuur 21.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Omdat dit protocol tot doel heeft de versheid te maximaliseren, kunnen sommige monsters ongewenste weefsels bevatten. Het hepatopancreatische kanaal en een deel van het mesenterium worden bijvoorbeeld bemonsterd met de alvleesklier, en een deel van het buikvliesweefsel, de bijnieren en de urineleiders zullen altijd worden bemonsterd met de gepaarde nieren. Als versheid geen probleem is, kan een nauwkeurigere bemonstering worden bereikt met behulp van gewijzigde technieken.
Het uiterlijk en de.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs verklaren geen tegenstrijdige belangen.
Dankbetuigingen
Dit werk werd ondersteund door de OD-subsidie van de NIH R24OD031956. We danken Samantha Jalbert, Jill Ralston en Cora Anderson voor hun hulp en steun, evenals onze redacteur en anonieme peer reviewers voor hun nuttige feedback
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 5x Vergrootglas met LED-licht en standaard | amazon.com | B08QJ6J8P1 | licht mag geen hitte produceren |
| Disposible overdrachtpijpjes | VWR | 414004-036 | |
| Dissectietang met fijne punt | Fisher Scinetific | 08-875 | |
| Dissectie schaar scherpe punt, recht 6.5" | VWR | 76457-374 | |
| Dissectielade | Fisher Scinetific | 14-370-284 | schuimplastic platen zijn een acceptabele alternatief |
| Euthanasiecontainer | US Plastic | Item 2860 | alternatieve ondoorzichtige containers acceptabel |
| Deksel voor euthanasiecontainer | US Plastic | Item 3047 | |
| Iridectomieschaar 6" | vwr | 470018-938 | iris schaar is een acceptabel alternatief |
| MS-222: Syncaine (voorheen tricaine) | Pentair AES | TRS1 | |
| PBS 1x | Corning | 21-040-CV | |
| Natriumbicarbonaat, Poeder, USP | Fisher Scientific | 18-606-333 | |
| Specimentang, Gekarteld | VWR | 82027-442 | |
| T-Pins voor dissectie | Fisher Scinetific | S99385 |
Referenties
- Porro, L. B., Richards, C. T. Digital dissection of the model organism Xenopus laevis using contrast-enhanced computed tomography. J Anat. 231 (2), 169-191 (2017).
- Ruehl-Fehlert, C., et al. Revised guides for organ sampling and trimming i....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
