Wat betreft in vivo chirurgische ingrepen, om deze procedure van niet-gestabiliseerde mandibulaire fractuur in een muismodel optimaal uit te voeren, zijn specifiek leren en training vereist.
Deze techniek voor niet-gestabiliseerde mandibulaire fractuur maakt de studie van het endochondrale botherstelproces mogelijk. Na euthanasie werden mandibulaire monsters verzameld in 4% paraformaldehyde (24 uur). Na volledige ontkalking met EDTA pH 8 werden coupes ingebed in paraffine. Sagittale seriële secties werden uitgevoerd, gedeparaffineerd in deparaffinisatieoplossing en vervolgens opnieuw gehydrateerd voorafgaand aan de kleuring van Sirus Red/Alcian Blue, met behulp van standaardprotocollen. De histologische beelden bevestigden de vorming van een zachte callus met een kraakbeenachtige sjabloon (Figuur 5). De botgenezing is 4 weken na de breuk voltooid, zoals blijkt uit micro-CT-analyses. We raden aan om het botherstelproces op verschillende belangrijke punten te bestuderen vanaf het begin van callusvorming (bijv. elke 7 dagen (dag 7, 14, 21) of meer, afhankelijk van het doel van het onderzoek) tot het einde van de botgenezing (d.w.z. dag 28), met histomorfologische en micro-CT morfometrische analyses.
Op basis van een retrospectieve analyse van deze procedure, uitgevoerd op 58 wildtype muizen (C57BL/6J achtergrond), is het slagingspercentage van het protocol 86,3% en een uitsluitingspercentage van 13,7%. De uitsluiting was het gevolg van vroegtijdige spontane dood in de vroege postoperatieve periode (3%), van de beslissing tot euthanasie voor muizen met een kritische score (1%; score > 3 en/of in geval van gewichtsverlies > 20%), of in geval van abnormale positie van de osteotomie, met abnormale splitsing van de mandibulaire hoek (5%), of wanneer de fractuur zich op molair niveau bevond (n=1/58). In het laatste geval werd infectie waargenomen, met de abnormale splitsing van de fractuur ter hoogte van de kies (n= 1/58; Tabel 2).

Figuur 1: Afbeelding van desubmandibulaire cutane benadering van de mandibulaire opgaande tak. De onderrand van de onderkaak wordt gebroken met een piëzotoominzetstuk, waardoor minimaal botverlies mogelijk is (pijl). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figuur 2: Kleuring van de onderkaak van de muis. Zijaanzicht van een 6 weken oude wildtype muisonderkaak (gekleurd met alizarinerood / alcianusblauwe kleuring): 1. Condylus, 2. Coronoïde processus, 3. Coronoïde inkeping, 4. Hoekproces, 5. Posterieure rand van de ramus, 6. Basilaire (of inferieure) rand van de onderkaak. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figuur 3: Röntgenfoto van de schedel van de muis. Laterale röntgenfoto's van de schedel van een 6 weken oude muis van het wilde type (sagittaal aanzicht) die het aspect van de onderkaak van een niet-gebroken muis tonen (links) en het aspect van de onderkaak van een gebroken muis en de richting van de niet-gestabiliseerde mandibulaire fractuur (pijlen), van de ondergrens tot de coronoïde inkeping, anterieur geplaatst ten opzichte van de condylus (rechts). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figuur 4. Röntgenfoto van de muizenschedel onder suboptimale omstandigheden. Laterale röntgenfoto's van de schedel van een wildtype muis van 6 weken oud (sagittaal aanzicht) met een abnormale fractuur van de mandibulaire hoek (pijlen). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figuur 5: Representatieve resultaten. Resultaten op dag 14 na de fractuur bij een wildtype muis (C57BL/6J). Representatieve 3D-coronale weergaven van een gereconstrueerde μCT-scan van de plaats van de mandibulaire fractuur, waarop de botcallus (witte pijlen) te zien is. Representatieve beelden van het calluskraakbeen (Sirus Red/Alcian Blue-kleuring) die de aanwezigheid van een endochondraal botherstelproces bevestigen. Afkortingen: B = Bot, C = Kraakbeen. Schaalbalk: 200 μm. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
| 0 | 1 | 2 |
| Dierlijk aspect | Normaal | Toilet reductie | Gegolfde haren, gebogen rug |
| Gedrag | Normaal | Hypomobiliteit | Hypomobiliteit, vermindering van de voedselinname, gewichtsverlies > 10 % |
| Klinische symptomen | Normaal | Litteken ontsteking | Geopend litteken, infectie |
Tabel 1. Postoperatieve welzijnsscoreschaal.
| n = 58 muizen |
| Slagingspercentage | 86.3 % |
| Uitsluitingspercentage : | 13.7 % |
| Voortijdige spontane dood | 3% |
| Kritische score < 3 en/of gewichtsverlies > 20 % | 1% |
| Abnormale fractuursplitsing ten opzichte van de mandibulaire hoek | 5% |
| Abnormale fractuursplitsing, ter hoogte van de molaire | 1.7 % |
Tabel 2. Slagings- en uitsluitingspercentages van het protocol.