Hier presenteren we een protocol voor een antilichaamafhankelijke, celgemedieerde cytotoxiciteit (ADCC) assay met behulp van een ADCC-bioassaykit. Deze methode biedt een waardevol hulpmiddel voor het ophelderen van het ADCC-mechanisme en het evalueren van het therapeutisch potentieel van antilichamen in kankerimmunotherapie.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Beoordeling van antilichaamafhankelijke, celgemedieerde cytotoxiciteit in kankercellen met behulp van antilichaamafhankelijke celgemedieerde cytotoxiciteit Reporter Bioassay
* These authors contributed equally
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
De methode voor antilichaamafhankelijke, celgemedieerde cytotoxiciteit (ADCC) is een belangrijk hulpmiddel om de werkzaamheid van therapeutische antilichamen bij kankerimmunotherapie te beoordelen. Het evalueren van ADCC-activiteit in kankercellen is essentieel voor de ontwikkeling en optimalisatie van behandelingen op basis van antilichamen. Hier stellen we een methodologische benadering voor van het gebruik van een ADCC-bioassaykit voor kwantitatieve beoordeling van de ADCC-reactie met behulp van schildklierkankercellen als effectorcellen. Het protocol omvat de co-cultuur van effectorcellen met doelwitkankercellen in verschillende verhoudingen in aanwezigheid van een therapeutisch antilichaam. De ADCC-bioassaykit die in dit experiment wordt gebruikt, bevat de genetisch gemanipuleerde effectorcellen die een luciferase-reportergen tot expressie brengen onder controle van Nuclear Factor of Activated T-cell (NFAT) responselementen. Bij de binding van het oppervlakteantigeen op de doelcellen met de antilichamen en effectorcellen, geven de effectorcellen luciferase af, waardoor kwantificering van cytotoxiciteit mogelijk is door meting van het luminescentiesignaal. In tegenstelling tot conventionele ADCC-testen bewees deze methode de binding van doelwitantigeen met antilichamen en effectorcellen, die in korte tijd betrouwbare resultaten kunnen opleveren.
Inleiding
Antilichaamafhankelijke, celgemedieerde cytotoxiciteit (ADCC) is een belangrijk mechanisme waarmee antilichamen immuungemedieerde celdodende effecten uitoefenen 1,2,3. De immuuncellen worden geactiveerd door binding aan het therapeutische antilichaam, dat interageert met oppervlakte-antigenen van de doelcellen om granzymen, perforine, vrij te geven, wat leidt tot de dood van de doelcellen. Deze immuuncellen omvatten natuurlijke killercellen (NK) en neutrofielen 2,3,4,5,6,7. De ADCC-test is een belangrijk hulpmiddel geworden om de werkzaamheid van therapeutisch antilichaam te evalueren 8,9.
In de conventionele ADCC-test worden perifere mononucleaire bloedcellen (PBMC's) of natural killer-cellen gebruikt als effectorcellen om de werkzaamheid van een therapeutisch antilichaam te bewaken door het celsterftecijfer van het doelwit te kwantificeren. Onze methode maakt gebruik van een ADCC-bioassaykit die genetisch gemanipuleerde effectorcellen bevat die een luciferase reporter-gen tot expressie brengen onder controle van Nuclear Factor of Activated T-cell (NFAT) responselementen. Vervolgens kwantificeren we de binding van het oppervlakteantigeen op de doelcellen met het antilichaam en de effectorcellen. Deze methode is gebaseerd op de ADCC-reactie die in een korte periode optreedt zonder dat menselijke PBMC-cellen nodig zijn. De experimentele stappen omvatten de co-cultuur van effectorcellen met doelcellen in aanwezigheid van therapeutische antilichamen.
Tijdens de incubatie bindt het therapeutische antilichaam zich aan het doelantigeen op het oppervlak van de doelcellen, wat leidt tot de binding van de effectorcellen en het Fc-fragment van een antilichaam. Dit activeert het NFAT-responselement en geeft luminescentiesignalen af voor de kwantitatieve beoordeling van de ADCC-reactie.
Alvorens het experiment uit te voeren, moet de expressie van het doelwitantigeen in de doelcellen worden bevestigd door flowcytometrie of westerse blotting. Doelcellen worden gekweekt en gedurende 24 uur vóór het experiment in platen met 96 putjes geplaatst. Verschillende concentraties van een therapeutisch antilichaam worden toegevoegd samen met verschillende celtellingen van effectorcellen om de berekende effector-tot-doelcelverhouding te bereiken.
De belangrijkste stappen in deze methode zijn onder meer (1) preparatie van doelcellen en effectorcellen, (2) effector-tot-doelcelverhoudingen, (3) bereiding van verschillende concentraties van het antilichaam en (4) variërende incubatieduur. Na de incubatie worden luminescentiesignalen gemeten met behulp van een luminometer, die een kwantitatieve uitlezing van de ADCC-activiteit oplevert. In vergelijking met andere methoden voor het meten van ADCC is deze methode relatief eenvoudig te bedienen en zijn de resultaten nauwkeurig.
De ADCC-reporterbioassay geeft de binding aan van het doelantigeen, het therapeutische antilichaam en de immuuncellen in de activering van de ADCC-route. Deze binding activeert gentranscriptie via de NFAT-route in de effectorcellen-gemanipuleerde Jurkat-cellen met stabiel tot expressie brengende FcγRIIIa-receptor, de V158-variant (hoge affiniteit). Het NFAT-responselement bemiddelt de expressie van luciferase in de effectorcellen10,11. De biologische activiteit van het antilichaam in het werkingsmechanisme (MOA) van ADCC wordt gekwantificeerd door het luciferasesignaal dat wordt geproduceerd door de NFAT-route. Het luciferasesignaal in de effectorcellen - FcγRIIIa-receptor die Jurket-cellen tot expressie brengt - wordt gekwantificeerd met behulp van een luminescentielezer (Figuur 1). De signaal-ruisverhouding van de test is hoog.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
1. Detectie van EGFR- en VEGFR-expressie in doelcellen
OPMERKING: Gebruik western blotting om de expressie van het doelantigeen in de doelcellen te detecteren.
- Voorbereiding van het monster
- Kweek de cellen (BHT-101 en SW-1736 menselijke schildklierkankercellijnen) in T75-kolven met behulp van Roswell Park Memorial Institute (RPMI) medium aangevuld met 10% foetaal runderserum (FBS), 1% L-glutamine en 1% antibiotica (penicilline-streptomycine).
- Oogst de cellen wanneer ze voor 80% samenvloeien door de kweekmedia te verwijderen en de cellen te wassen met PBS. Voeg 5 ml PBS toe en schraap de cellen weg met behulp van een celschraper om de cellen uit de kweekkolf te verwijderen. Breng de cellen over in een conische buis van 15 ml.
- Tel de cellen met een cellenteller.
- Aliquot 5 × 106 van BHT-101 en SW-1736 cellen in 15 ml conische buizen.
- Draai de cellen 5 minuten op 135 × g bij kamertemperatuur. Verwijder het bovenstaande PBS.
- Lyseer de celpellet door 100 μL RIPA lysisbuffer met protease-fosfataseremmers toe te voegen gedurende 5 minuten op ijs. Breng het lysaat over in een buis van 2 ml, centrifugeer gedurende 15 minuten bij 15.000 × g en breng het bovenstaande over in een nieuwe buis van 2 ml.
- Meet de eiwitconcentratie van het cellysaat met behulp van een bicinchoninezuur (BCA) testkit.
- Van elk monster wordt 70 μg eiwit uit het cellysaat toegevoegd, 2x Laemmli-monsterbuffer aangevuld met 10% 2-mercaptoethanol en wordt de monsters gedurende 5 minuten bij 100 °C gekookt voor denaturatie van de monsters.
- Gelelektroforese en membraanoverdracht
- Bereid 8% natriumdodecylsulfaat (SDS) polyacrylamidegel met gedestilleerd water (4,7 ml), 30% acrylamide (2,7 ml), 1,5 m tris-buffer, pH 8,8 (2,5 ml), 10% natriumdodecylsulfaat (0,1 ml), 10% ammoniumpersulfaat (100 μl) en TEMED (10 μl).
- Laat 70 μg van de gedenatureerde monsters in de 8% SDS-polyacrylamidegel 20 minuten bij 80 V en 100 minuten bij 120 V draaien.
- Breng het eiwit op de gel over naar een polyvinylideenfluoride (PVDF) membraan bij 100 V gedurende 90 minuten.
- Blokkeer na het overbrengen het membraan met 7% magere melk verdund in TBS-T-buffer (20 mM Tris pH 7,6, 140 mM NaCl, 0,2% Tween-20) gedurende 1 uur.
- Incubatie van antilichamen
- Incubeer het geblokkeerde membraan met anti-epidermale groeifactorreceptor (EGFR) van muizen en monoklonale antilichamen van konijnen (verdund tot 1:1.000 in 7% magere melk) 's nachts bij 4 °C.
- Was het membraan na incubatie grondig met Tris-gebufferde zoutoplossing (TBS-T) buffer (20 mM Tris pH 7,6, 140 mM NaCl, 0,2% Tween-20) gedurende 7 minuten en herhaal 4x.
- Incubeer het membraan met het HRP-geconjugeerde secundaire antilichaam (verdund tot 1:4.000 in 7% magere melk (TBS-T)) gedurende 1 uur.
- Was het membraan na incubatie grondig met TBS-T buffer gedurende 7 minuten en herhaal 4 keer.
- Eiwit detectie
- Incubeer het membraan in chemiluminescerend HRP-substraat dat is bereid door 1 ml HRP-substraatperoxideoplossing te mengen met 1 ml HRP-substraat Luminol-reagens (beide reagentia komen uit de chemiluminescente substraatkit) gedurende 2 minuten.
- Visualiseer het membraan met behulp van een beeldvormingssysteem.
2. Bereiding van doelcellen
- Kweek de doel-T-cellen, BHT-101- en SW-1736-cellen exponentieel totdat 80% confluent in RPMI-media aangevuld met 10% FBS, 1% L-glutamine en 1% antibiotica (penicilline-streptomycine) in T-75-kolven.
- Was de cellen na het verwijderen van de media één keer met PBS. Incubeer de cellen met 1 ml niet-enzymatische celdissociatiebuffer gedurende 5 minuten om de aanhangende cellen los te maken. Voeg PBS toe om de reactie van de niet-enzymatische celdissociatiebuffer te stoppen. Draai de cellen gedurende 5 minuten op 135 × g en voeg 5 ml PBS toe.
OPMERKING: Hier gebruiken we een niet-enzymatische celdissociatiebuffer om de integriteit van het membraanoppervlakte-eiwit te behouden. - Tel de cellen en zaai ze op 15.000 cellen/putjes in witte polystyreenmicroplaten met 96 putjes en een heldere, platte bodem.
3. Preparaat van verschillende concentraties van het therapeutische antilichaam
- Om dit protocol te volgen, gebruikt u Cetuximab (chimeer anti-EGFR-antilichaam) om EGFR te binden en gebruikt u Bevacizumab (gehumaniseerd anti-VEGF-A-antilichaam) als negatieve controle.
- Bereid de ADCC-bioassaybuffer voor door 1,4 ml serum met een laag IgG-gehalte toe te voegen aan 33,6 ml RPMI-1640 (meegeleverd in de kit).
- Gebruik ADCC Bioassay-buffer voor de verdunning van antilichamen. Bereid 400 μl van elk antilichaam in drie verschillende concentraties: 30 μg/ml, 3 μg/ml en 0,3 μg/ml (3x concentratie) om de uiteindelijke concentratie van 10 μg/ml, 1 μg/ml en 0,1 μg/ml te krijgen voor een breedspectrumdekking om de optimale dosis te detecteren.
OPMERKING: De uiteindelijke antilichaamconcentraties zijn gebaseerd op 25 μl gekweekte doelwitcellen, 25 μl effectorcellen en 25 μl antilichaam in elk putje van een plaat met 96 putjes.
4. Voorbereiding van effectorcellen
- Bewaar de effectorcellen voor gebruik bij -80 °C.
- Verwarm de ADCC Bioassay Buffer voor gebruik minimaal 30 minuten voor in een waterbad van 37 °C.
- Ontdooi de ADCC Bioassay Effector-cellen uit een koude opslag van -80 °C door ze in een waterbad van 37 °C te plaatsen (ongeveer 2-3 min). Schud de injectieflacon voorzichtig en inspecteer deze visueel, maar keer deze niet om tijdens het ontdooiproces.
- Breng 630ul Effector-cellen over naar een buis van 15 ml met 3,6 ml ADCC-assaybuffer. Meng goed door de tube 2x voorzichtig om te keren.
5. Incubatie van effectorcellen met antilichaam en doelwitcellen
- Verwijder na een nacht incubatie de media van de doelcellen (15.000 kankercellen per putje) en voeg 25 μL van de ADCC Bioassay-buffer en 25 μL Cetuximab (EGFR-antagonist) en Bevacizumab (VEGF-antagonist) toe om de uiteindelijke concentratie van 0,1 μg/ml, 1 μg/ml of 10 μg/ml van de doelcellen in elk putje te krijgen volgens figuur 2.
- Voeg 75.000 effectorcellen in 25 μL ADCC-bioassaybuffer per putje toe aan de microtiterplaat met 96 putjes die de doelcellen bevat. De putjes met het label No mAb fungeren als No antibody control (Figuur 2).
- Voeg de ADCC-bioassaybuffer toe aan de putjes die zijn gelabeld als AB (ADCC-bioassaybuffer) voor blancocontrole.
- Incubeer de plaat gedurende 6 uur.
6. Kwantitatieve uitlezing van de ADCC-activiteit
- Bereid het luciferase-assay-reagens 4 uur voor de meting voor door de luciferase-assaybuffer toe te voegen aan het luciferase-assaysubstraat (gevriesdroogd).
- Na 6 uur incubatie van doelwitcellen, antilichamen en effectorcellen voegt u 75 μL van het luciferase-assay-reagens toe aan elk putje en incubeert u gedurende 30 minuten.
- Meet na de incubatietijd het luminescentiesignaal in elke put met behulp van een luminometer, die een kwantitatieve uitlezing van de ADCC-activiteit geeft.
- Bereken voor data-analyse de vouw Inductie als volgt:
Vouwinductie = RLU (antilichaam geïnduceerd - achtergrond) / RLU (geen antilichaamcontrole - achtergrond).
waarbij RLU relatieve luminescentie-eenheden zijn; Door antilichamen geïnduceerde putten B3 tot B8 en C3 tot C8; Geen antilichaamcontrole = B2 en C2; Achtergrond = Gemiddelde RLU van put A2 tot A5 (Figuur 2).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
De expressie van EGFR en VEGFR in de doelcellen BHT-101 en SW-1736 werd gedetecteerd met behulp van western blotting. EGFR-expressie werd gedetecteerd in zowel BHT-101- als SW-1736-cellen, maar geen VEGFR-expressie (Figuur 3).
Met behulp van de ADCC-bioassaykit hebben we de ADCC-reactie van het anti-EGFR-antilichaam, cetuximab, gedetecteerd met behulp van EGFR-positieve cellijnen, BHT-101 en SW-1736, als doelcellen. Bevacizumab, e...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Hier hebben we de ADCC Bioassay-methode gepresenteerd voor het beoordelen van de ADCC-reactie van een therapeutisch antilichaam. De methode is eenvoudig en maakt gebruik van een eenvoudig "add-mix-read"-formaat voor meting.
Alvorens het experiment uit te voeren, moet de expressie van het doelantigeen in de doelcellen worden bevestigd door flowcytometrie of westerse blotting. Flowcytometrie zal een beter hulpmiddel zijn om het oppervlakteantigeen te detecteren...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
Alle auteurs verklaren geen belangenconflicten.
Dankbetuigingen
We zijn Prof. Zeng (IMCB, A*STAR) dankbaar voor het ondersteunen van dit werk. Deze studie werd ondersteund door de Youth Foundation van de National Natural Science Foundation of China (NSFC) (82202231) en het Medical and Health Science and Technology Project van de provincie Zhejiang, China (2021KY110,2024KY824).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 0.5% Trypsin-EDTA | Gibco | 15400-054 | Verdunn 10x in PBS om 0,05% Trypsin te maken |
| 1x Tris Buffer Saline (TBS) | 1st BASE | BUF-3030-1X1L | Voor het wassen van membranen in western blotting |
| 1.5 M Tris Buffer, pH 8.8 | 1st BASE | BUF-1419-1L-pH8.8 | Voor SDS-gel bereiding |
| 2-Mercaptoethanol | Sigma Aldrich | M7522-100ML | Voor monsters voorbereiden voor western blotting |
| 30% Acrylamide/Bis oplossing | Bio-Rad | #1610158 | Voor SDS-gel bereiding |
| 4x Laemmli Buffer | Bio-Rad | #1610747 | Voor monsters voorbereiden voor western blotting |
| 96-well witte polystyreen microplaat met doorzichtige platte bodem | Corning Incorporated | 3610 | Voor ADCC-test |
| ADCC Bioassay Effector cellen (0,65 mL) | Promega | G7011 | Inbegrepen in ADCC reporter bioassay core kit (Promega G7010), 1 x 1 vial |
| ADCC reporter bioassay core kit | Promega | G7010 | Aangeduid als ADCC bioassay kit voor ADCC-test in dit experiment |
| Ammonium Persulfate | Sigma Aldrich | A3678-25G | Voor SDS-gel bereiding |
| Bevacizumab (Humanized Anti VEGF-antilichaam) | MVASI | - | Gebruik als negatief controle-antilichaam in ADCC-test |
| BHT-101 | Leibniz Institute DSMZ | ACC279 | Menselijke anaplastische papillaire schildklierkanker cellijn |
| Bio-Glo Luciferase Assay Buffer | Promega | G7941 | Inbegrepen in ADCC reporter bioassay core kit (Promega G7010), 1 x 10 mL |
| Bio-Glo Luciferase Assay Substraat (Lyofilisaat) | Promega | G7941 | Inbegrepen in ADCC reporter bioassay core kit (Promega G7010), 1 x 1 vial |
| Celschraper | GenFollower | GD00235 | Om cellen uit cultuurkolf te verwijderen |
| Cetuximab (Chimere anti-EGFR antilichaam) | ERBITUX | - | Gebruik als therapeutisch antilichaam in ADCC-test |
| Chemiluminescent HRP substraat | Merck Millipore | WBKLS0500 | Voor proteïne detectie in western blotting |
| Gedestilleerde water | Gibco | 15230-162 | Voor SDS-gel bereiding |
| Fetaal bovien serum (FBS) | Gibco | 10270-106 | Aanvulling voor cultuurmedium |
| iBright CL1500 beeldvormingssysteem | Thermo Scientific | 2462621100038 | Voor proteïne detectie in western blotting |
| L-glutamine, 200 mM | Gibco | 25030-081 | Aanvulling voor cultuurmedium |
| Laag IgG Serum | Promega | G7110 | Inbegrepen in ADCC reporter bioassay core kit (Promega G7010), 1 x 4 mL |
| Megafuge 8R | Thermo Scientific | 42876589 | Centrifuge |
| Muis anti-EGFR monoklonale antilichamen | BD Biosciences | 610016 | Primair antilichaam in western blotting |
| Muis anti-VEGFR monoklonale antilichamen | BD Biosciences | 571194 | Primair antilichaam in western blotting |
| Niet-enzymatische celdissociatie buffer | Sigma Aldrich | C5789-100ML | Voor celoogst uit T75 kolf |
| Penicilline-Streptomycine | PAN Biotech | P06-07100 | Antibacterieel voor cultuurmedium |
| Fosfaat Gebufferde Saline (PBS), pH 7,2, Sterieel gefilterd | 1st BASE | CUS-2048-1x1L | Gebruik als wasoplossing voor cellen |
| Pierce BCA assay kit | Thermo Scientific | 23225 | Om proteïneconcentratie te meten |
| Protease en fosfatase remmer | Thermo Scientific | A32959 | Voor proteïne vertering in monsters voorbereiden voor western blotting |
| PVDF membraan (Immobilin-P) | Merck Millipore | IPVH00010 | Voor proteïne overdracht in western blotting |
| Konijn anti-muis IgG, Fcγ HRP-geconjugeerd secundair antilichaam | Jackson ImmunoResearch | 315-035-046 | Secundair antilichaam in western blotting |
| Roswell Park Memorial Institute (RPMI) medium | Capricorn Scientific | RPMI-XA | Cellen cultuurmedium |
| RPMI-1640 | Promega | G7080 | Inbegrepen in ADCC reporter bioassay core kit (Promega G7010), 1 x 36 mL |
| Mager melkpoeder | Merck Millipore | 70166-500G | Voor membraan blokkering in western blotting |
| Natrium Dodecyl Sulfaat | 1st BASE | BIO-2050-500g | Voor SDS-gel bereiding |
| SW-1736 | Cytion | 300453 | Menselijke schildklier kwaadaardige plaveiselcel canker cellijn |
| T75 kweekkolven | SPL Lifesciences | 70075 | Celcultuurkolf |
| Tecan Multimode Reader model Spark 10M | Tecan | 1607000294 | voor luminescente kwantificering |
| TEMED | Bio-Rad | #1610801 | Voor SDS-gel bereiding |
| Tween-20 | Promega | H5151 | Voor membraan wassen in western blotting |
| Vi-cell XR celvitaliteitsanalyzer | Beckman Coulter | AL15072 | Celteller |
Referenties
- Zahavi, D., AlDeghaither, D., O'Connell, Enhancing antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity: a strategy for improving antibody-based immunotherapy. Antib Ther. 1 (1), 7-12 (2018).
- Fenis, A., Demaria, O., Gauthier, L., Vivier, E. New immune cell engagers for cancer immunotherapy. Nat Rev Immunol. 24 (7), 471-486 (2024).
- Pinto, S., Pahl, J., Schottelius, A., Carter, P. J. Reimagining antibody-dependent cellular cytotoxicity in cancer: the potential of natural killer cell engagers. Trends Immunol. 43 (11), 932-946 (2022).
- Ochoa, M. C., et al. Antibody-dependent cell cytotoxicity: immunotherapy strategies enhancing effector NK cells. Immunol Cell Biol. 95 (4), 347-355 (2017).
- Wang, W., Erbe, A. K., Hank, J. A., Morris, Z. S. NK cell-mediated antibody-dependent cellular cytotoxicity in cancer immunotherapy. Front Immunol. 6, 368(2015).
- Chung, S., et al. Characterization of in vitro antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity activity of therapeutic antibodies - impact of effector cells. J Immunol Methods. 407, 63-75 (2014).
- Shimasaki, N., Jain, A., Campana, D. NK cells for cancer immunotherapy. Nat Rev Drug Discov. 19 (3), 200-218 (2020).
- Cheng, Z. J., et al. Development of a robust reporter-based ADCC assay with frozen, thaw-and-use cells to measure Fc effector function of therapeutic antibodies. J Immunol Methods. 414, 69-81 (2014).
- Parekh, B. S., et al. Development and validation of an antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity-reporter gene assay. MAbs. 4 (3), 310-318 (2012).
- Hogarth, P. M., Pietersz, G. A. Fc receptor-targeted therapies for the treatment of inflammation, cancer and beyond. Nat Rev Drug Discov. 11 (4), 311-331 (2012).
- Chung, S., et al. Quantitative evaluation of fucose reducing effects in a humanized antibody on Fcgamma receptor binding and antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity activities. MAbs. 4 (3), 326-340 (2012).
- Promega. ADCC Reporter Bioassay Core Kit Technical Manual. , https://www.promega.sg/-/media/files/resources/protocols/technical-manuals/101/adcc-reporter-bioassay-core-kit-protocol.pdf?rev=bec36264c0b6470591ded081377d207d&sc_lang=en (2023).
- Miller, A. S., Tejada, M. L., Gazzano-Santoro, H. Methods for measuring antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity in vitro. Methods Mol Biol. 1134, 59-65 (2014).
- Lo Nigro, C., et al. NK-mediated antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity in solid tumors: biological evidence and clinical perspectives. Ann Transl Med. 7 (5), 105(2019).
- Gómez Román, V. R., Murray, J. C., Weiner, L. M. Antibody Fc. Ackerman, M. E., Nimmerjahn, F. , Academic Press. 1-27 (2014).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
