Optimalisatie van borstbiopsie en borstamputatie Monsterafnameprocedures voor biobankieren, gepersonaliseerde geneeskunde en onderzoekstoepassingen

Samenvatting

Dit artikel presenteert een gedetailleerd protocol voor het verzamelen van borstkankermonsters, ontworpen om hun bruikbaarheid voor biobankieren, gepersonaliseerde geneeskunde en andere onderzoekstoepassingen te optimaliseren. De workflow voor het verzamelen van monsters, inclusief borstbiopsie en borstamputatieprocedures, wordt in detail beschreven, met de nadruk op het minimaliseren van weefselbeschadiging en het maximaliseren van de monsterkwaliteit.

Samenvatting

Borstkanker is de meest voorkomende vorm van kanker bij vrouwen, vooral in Azië, met de hoogste incidentie in de Filippijnen. Ondanks voortdurende inspanningen blijft het begrip van de biologie van borstkanker ontoereikend, verergerd door het gebrek aan effectieve screeningprogramma's en tijdige behandelingen. Om deze problemen aan te pakken, hebben biobanken en andere opslagplaatsen voor biologische specimens wereldwijd aan kracht gewonnen. De Universiteit van de Filippijnen-Filippijnse General Hospital (UP-PGH) heeft een kankerbiobank opgericht, waarmee de levensvatbaarheid van een door de overheid gesteund initiatief voor kankeronderzoek in de Filippijnen wordt aangetoond. De studie omvat een prospectieve observatie van 100 Filippijnse borstkankerpatiënten in verschillende ziektestadia, waarbij gebruik wordt gemaakt van de expertise van UP-PGH, Philippine Genome Center (PGC) en University of the Philippines Diliman - Institute of Biology (UPD-IB). Het integreert het verzamelen, verwerken en opslaan van biospecimens naast uitgebreide patiëntgegevens. Procedures omvatten RNA-extractie, bibliotheekvoorbereiding en sequencing. Daarnaast neemt een subgroep van patiënten deel aan een in vitro driedimensionaal (3D) celkweekexperiment voor pre-screening van chemotherapie. De geaggregeerde gegevens zijn bedoeld om therapeutische strategieën aan het licht te brengen die kunnen leiden tot gepersonaliseerde behandelingen waar standaard klinische benaderingen ontoereikend zijn. De belangrijkste technieken zijn onder meer echogeleide kernnaaldbiopsie, nauwgezette normale verzameling van borstweefsel en nauwkeurige bepaling van het tumorpercentage om hoogwaardige RNA-extractie, sequencing en 3D-celcultuur te garanderen. De studie gaat ook in op de uitdagingen die zich voordeden bij eerdere inspanningen op het gebied van biobankieren. Uiteindelijk wil dit onderzoek een belangrijke bijdrage leveren aan het onderzoek naar borstkanker en zichzelf positioneren als een model voor gezamenlijk onderzoek, het opzetten van biobanken en de vooruitgang van precisiegeneeskunde in ontwikkelingslanden, zoals de Filippijnen.

Inleiding

Borstkanker is de meest voorkomende vorm van kanker bij Filippijnse vrouwen. In Azië vertonen de Filippijnen een van de hoogste sterftecijfers voor borstkanker en de laagste sterfte-tot-incidentieverhouding¹. De tarieven kunnen sterk zijn beïnvloed door het ontbreken van screeningprogramma's en tijdige en effectieve behandeling van borstkanker. In het land wordt borstkanker meestal in een later stadium gediagnosticeerd, aangezien de meeste kankerpatiënten pas in een vergevorderd stadium van kanker worden geraadpleegd. In de Filippijnen, waar een hoge incidentie van borstkanker wordt waargenomen, werd 53% van de gevallen van borstkanker gediagnosticeerd in fase III en IV, en slechts 2-3% werd gediagnosticeerd in fase I ^1,2,3. Afgezien van het bevorderen van de acceptatie van screening en patiëntenvoorlichting over borstkanker, moet onderzoek en ontwikkeling op het gebied van borstkanker verder worden onderzocht om de incidentie van borstkanker in het land te verminderen.

De oprichting van biobanken over de hele wereld maakte het mogelijk om de medische vooruitgang te versnellen. Biobanken worden gebruikt voor de opslag en conservering van wetenschappelijk waardevolle biologische specimens voor toekomstig onderzoek en ontwikkeling⁴. Sindsdien worden biobanken gebruikt voor translationeel onderzoek⁵ en het verbeteren van gepersonaliseerde medische benaderingen⁶. In Azië zijn biobanken vooral geconcentreerd in Oost-Azië, vooral in China, Japan en Korea⁴. In lage- tot middeninkomenslanden in Azië, zoals de Filippijnen, is het concept van biobankieren nog steeds in opkomst. Biobanken in de Filippijnen zijn meestal eigendom van particuliere zorginstellingen, waar de gezondheids- en blootstellingsstatus van de bredere Filippijnse demografie mogelijk niet goed vertegenwoordigd is.

De oprichting van de kankerbiobank aan het Philippine General Hospital (PGH) van de University of the Philippines Manila (UPM) heeft de haalbaarheid bewezen van de oprichting van een door de overheid gesteunde kankerbiobank die kankergerelateerde onderzoeken in de Filippijnen kan bevorderen⁷. Voortbouwend op deze basis door middel van een gezamenlijke inspanning die een brug slaat tussen medische expertise, onderzoeksinnovatie en gezondheidszorgbeleid, streven we ernaar een positieve verschuiving te creëren in het landschap van borstkankerzorg en -onderzoek in de Filippijnen. Daarmee is er een dwingende behoefte aan een biobanking-workflow voor kankerfenomenen en een uitgebreide aanpak die het verzamelen van uitgebreide en gestratificeerde patiëntspecifieke gegevens op nationale schaal stroomlijnt. Deze studie beschrijft het protocol voor procedures voor het afnemen van borstbiopsie en borstamputatie, met de nadruk op hun integratie in het biobankkader. Niet alleen anticiperen op het bevorderen van ons begrip van de pathogenese van borstkanker in de context van de Filippijnse bevolking, maar ook op het faciliteren van de ontwikkeling van precisiebehandelingen die aansluiten bij de unieke genetische, omgevings- en klinische kenmerken van getroffen individuen.

Protocol

Dit is een prospectieve, observationele studie met een verzameling geanonimiseerde biospecimens (tumor en normaal borstweefsel) en klinisch-pathologische, behandelings- en uitkomstgegevens van 100 Filippijnse borstkankerpatiënten in verschillende stadia. Dit is een samenwerking tussen het Philippine General Hospital (PGH), het Philippine Genome Center (PGC) en het Institute of Biology (IB) van de University of the Philippines Diliman, elk met aangewezen taken. Het protocol is geregistreerd in het Research Grants Administration Office (RGAO-2020-0933) en beoordeeld en goedgekeurd door de University of the Philippines Manila Research Ethics Board (UPMREB) voor implementatie onder ethisch goedkeuringsnummer UPMREB 2020-822-01. Alle gebruikte laboratoria houden zich aan de bioveiligheidsrichtlijnen van elke instelling. Het rekruteren van patiënten uit PGH zorgde voor de variantie en vertegenwoordiging in termen van klinisch-pathologische factoren, etniciteit en blootstelling aan het milieu. Een standaard operationele procedure (SOP) die in eerdere projecten is ontwikkeld en gevalideerd, werd gebruikt als kader voor de verwerving, verzameling, transport en andere logistieke regelingen met betrekking tot de monsters.

OPMERKING: Zie Figuur 1 - Schematische workflow van het protocol voor de samenvatting van de protocolworkflow en de rollen van elke instelling die bij het onderzoek betrokken is.

1. Procedure voor het afnemen van borstmonsters

1. Identificeer en screen de in aanmerking komende patiënten voor opname in de studie tijdens een consult in de kliniek of een preoperatieve conferentie.
   1. Inclusiecriteria voor kankerpatiënten
      1. Inclusief Filippijnse, vrouwelijke vrouwen van 19-75 jaar oud bij wie borstkanker in stadium 1, 2 en 3 is vastgesteld, en Filippijnse vrouwen van 19-70 jaar bij wie borstkanker in stadium 3B en 4 is vastgesteld.
      2. Neem klinisch vermoede of pathologisch gediagnosticeerde gevallen van invasieve borstkanker in elk stadium op.
      3. Neem patiënten op die een chirurgische behandeling zullen ondergaan (gemodificeerde radicale borstamputatie of radicale borstamputatie) vooraf (klinische fase I of II) of postneoadjuvante chemotherapie (stadium IIIB, IIIC). Patiënten met stadium IIIA kunnen een operatie vooraf of neoadjuvante therapie ondergaan volgens de aanbevelingen van de arts. Voor patiënten in stadium IV, degenen die bereid zijn een kernnaaldbiopsie van de borsttumor en aangrenzend normaal weefsel te ondergaan. Patiënten met borstkanker in stadium IV ondergaan geen chirurgische behandeling.
      4. Neem stadium III borstkankerpatiënten op die voorafgaand aan rekrutering neoadjuvante therapie hebben ondergaan, en er is een volledig medisch en klinisch behandelingsresponsdossier.
      5. Betrek patiënten die geïnformeerde toestemming kunnen begrijpen en ondertekenen.
   2. Uitsluitingscriteria voor kankerpatiënten
      1. Sluit patiënten uit die eerdere of gelijktijdige maligniteit hebben, inclusief eerdere diagnose van borstkanker.
      2. Sluit patiënten met bilaterale borstkanker uit.
      3. Sluit patiënten uit die eerder neoadjuvante radiotherapie of hormonale therapie hebben ondergaan.
      4. Sluit patiënten uit die eerder een kern- of incisiebiopsie hebben ondergaan waarbij geen toestemming is voor herhaling van de biopsieprocedure voor die patiënten die neoadjuvante chemotherapie zullen ondergaan (aangezien er geen vers tumormonster vóór chemotherapie kan worden verkregen)
      5. Sluit patiënten uit die eerder een excisiebiopsie hebben ondergaan zonder resttumor.
      6. Sluit patiënten uit met comorbiditeiten die chirurgische behandeling of neoadjuvante chemotherapie uitsluiten.
   3. Criteria voor herroeping
      1. Informeer deelnemers dat ze zich op elk moment kunnen terugtrekken om veiligheids- of andere redenen zonder hun medische zorg te beïnvloeden. Deze niet-interventionele studie heeft geen invloed op de behandelingskeuze voor deelnemers.
2. Zorg voor toestemming van de patiënt en vul het formulier voor gegevensverzameling in.
   OPMERKING: De toegewezen fellow-in-charge (FIC) of de consultant zorgt samen met de universitaire onderzoeksmedewerker (URA) voor de toestemming.
3. Verkrijg en verifieer het schema van de patiënt voor de kernnaaldbiopsieprocedure na bevestiging van hun deelname aan het onderzoek.
4. Procedures uitvoeren in overeenstemming met de richtlijnen die zijn opgesteld en goedgekeurd door de Commissie Ethische Raad en de Commissie Bioveiligheid van de instelling.

2. Procedure voor het verzamelen van borstbiopsiemonsters

OPMERKING: Zie figuur 2 voor de gedetailleerde workflow van de kernprocedure voor naaldborstbiopsie voor patiënten in stadium III en IV, met de verdeling van monsters voor elke procedure.

1. Label de buisjes vóór het verzamelen van het monster als GB, wat betekent Genomics - Breast (het onderzoek waar het monster onder valt), xxx wat het deelnemersnummer is en kan variëren van 001 tot 100, of meer, en de letters A, C en D. Hieronder volgen de lettercodes die moeten worden gebruikt bij het etiketteren van de tubes:
   A - betekent kernnaaldbiopsie, tumorweefsel, voor verzending naar PGC
   C - betekent kernnaaldbiopsie, tumorweefsel, voor biobankieren
   D - betekent kernnaaldbiopsie, normaal weefsel
   1. Wijs de monsters die voor sequencing zijn ingediend toe aan het label van het laboratorium: "BC" en twee tweecijferige monsternummers (bijv. BC01, BC21). Elk monster heeft een overeenkomstige "GB"-code die overeenkomt met de code die tijdens het verzamelen van monsters is toegewezen.
2. Verkrijg maximaal negen weefselkernen met behulp van een biopsiepistool met een 14 G-kern onder echografische begeleiding, in een polikliniek, operatiekamer of andere aseptische omgeving.
   1. Verkrijg voor elke kern een borstmonster van ongeveer 2 cm lang in het midden van de tumor en op 1 cm afstand van de tumor voor aangrenzend normaal weefsel. Verzamel twee soorten monsters van elke deelnemer: tumorweefsel en normaal weefsel.
   2. Geef elk monster aan de URA voor plaatsing in een petrischaaltje met fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS).
      OPMERKING: In deze studie werden alleen kernnaaldbiopten uitgevoerd bij patiënten met stadium III en IV borstkanker. Voor patiënten in stadium III leverden kernnaaldbiopten chemotherapie-naïeve tumormonsters op. Voor patiënten in stadium IV dienden kernnaaldbiopten als het primaire tumormonster, aangezien er geen borstamputatie werd uitgevoerd. Voor patiënten met borstkanker in stadium I en II werden geen kernnaaldbiopten uitgevoerd. In plaats daarvan werden tumor en aangrenzende normale weefsels verkregen uit borstamputatiemonsters.
3. Snijd de biopsiemonsters doormidden om ze gelijkmatig te verdelen over het onderzoek en de histopathologische analyse.
   1. Verkrijg voor tumorweefsel maximaal 9 kernen per onderzoekspatiënt met behulp van een naald van 14 G.
   2. Verdeel de verkregen tumorkernen in 2 groepen in de petrischaal: monsters voor RNA-analyse (6 kernen) en monsters voor biobankieren (3 kernen).
   3. Snijd elke kern in de lengte in 2, maar in gevallen waarin het moeilijk is om dit te doen, snijdt u de kernen kruiselings in 2. Gebruik een steriel mes om de kernen door te snijden. Stuur de helft van de weefselkern op voor RNA-analyse of bewaar deze voor biobanking. Stuur de andere helft van de weefselkern naar Pathologie voor routinematige histopathologische analyse.
   4. Verkrijg voor normaal weefsel tot 3 kernen per onderzoekspatiënt met behulp van een naald van 14 G. Gebruik een andere naald dan de naald die wordt gebruikt om tumorweefsel te verkrijgen om besmetting te voorkomen. In gevallen waarin dit niet mogelijk is, moet u eerst normaal borstweefsel verkrijgen voordat u tumorweefsel krijgt.
   5. Plaats elk normaal verkregen weefsel in een petrischaaltje, vergelijkbaar met wat er met het tumorweefsel is gedaan, en snijd de kernen doormidden. Verdeel de stalen voor het onderzoek en naar de afdeling Pathologie voor de histopathologische analyse.
4. Verdeel de monsters na het verzamelen over de buisjes, volgens een manier en volgorde van prioriteit.
   1. Plaats de helft van de kernen in de aangewezen cryoviale 2 ml cryovial die is voorgevuld met 1,25 ml RNA-stabilisatieoplossing (alle kernen voor RNA-analyse worden samen in 1 injectieflacon geplaatst en alle kernen voor biobankieren in een aparte injectieflacon, houd de monsters te allen tijde bij koude temperatuur) en plaats de overeenkomstige helften van deze kernen in een gewone monsterflacon/buis en gefixeerd met 10% neutraal gebufferd formaline (10% NBF), voor histopathologische analyse. Zorg ervoor dat de twee corresponderende halve groepen, de groep die naar het aangewezen centrum gaat (bijv. monsters die worden verzonden voor RNA-analyse) en het bijbehorende pathologiemonster dezelfde monstercode hebben.
5. Vul de chirurgische pathologieformulieren in. Dien samen met de formulieren de pathologiemonsters gefixeerd met formaline in bij Pathologie voor routinematige histopathologie.
6. Sluit met parafilm de biopsiemonsters van de kernnaald af die zijn gedrenkt in buisjes met RNA-stabilisatieoplossing (idealiter 5:1 verhouding van oplossing tot weefsel, dus als 0,25 cm weefsel, 1,25 ml RNA-stabilisatieoplossing).
7. Bewaar de monsters gedurende 24 uur bij 4 °C en breng ze uiteindelijk over in de ultra-lage vriezer, met een temperatuur van -80 °C.
   OPMERKING: Een gids voor opslag wordt besproken in hoofdstuk 4 (Opslag, verpakking en transport van monsters).

3. Procedure voor het afnemen van borstamputatiemonsters

1. Volg de procedure voor het afnemen van borstmonsters in sectie 1.
   OPMERKING: Fase I-, II- en III-patiënten die deelnemen aan het onderzoek ondergaan een borstamputatie in de operatiekamer (OK). Voor patiënten in fase I en II zal de borstamputatie vooraf worden uitgevoerd, terwijl voor patiënten in fase III de borstamputatie pas zal worden uitgevoerd na voltooiing van 8 cycli neoadjuvante therapie. Voor fase 4 worden geen borstamputatiemonsters verzameld. Zie figuur 3 voor het gedetailleerde protocol voor het afnemen van borstborstamputaties, met de verdeling van monsters per procedure.
2. Coördineer de planning met de medewerkers en de afdeling Pathologie. Doe dit minimaal 2 dagen voor de streefdatum van de ingreep. In geval van wijzigingen in het ingestelde schema, informeer het betrokken personeel onmiddellijk om conflicten in het schema te voorkomen.
3. Label de buisjes vóór het verzamelen van het monster vooraf als GB, wat betekent Genomics Breast (het onderzoek waar het monster onder valt), xxx wat het deelnemersnummer is en kan variëren van 001 tot 100, of meer, en de letters E en F. Hieronder volgen de lettercodes die moeten worden gebruikt bij het etiketteren van de tubes:
   E - betekent borstamputatie, tumorweefsel, voor verzending naar PGC, IB en voor biobanking
   F - betekent borstamputatie, normaal weefsel
   1. Wijs de monsters die voor sequencing worden ingediend toe aan het label van het laboratorium: "BC" en een tweecijferig monsternummer (bijv. BC01, BC21). Elk monster heeft een overeenkomstige "GB"-code die overeenkomt met de code die tijdens het verzamelen van monsters is toegewezen.
4. Vul de chirurgische pathologieformulieren in tijdens de operatie, in afwachting van het monster. Stuur updates naar de verantwoordelijke patholoog zodat deze de nodige voorbereidingen kan treffen voor de monsterafname.
5. Plaats het monster in een schone plastic/monsterzak direct na het verwijderen en documenteren van het borstmonster. Zorg ervoor dat het borstamputatiemonster onmiddellijk naar de afdeling Pathologie wordt gebracht om te worden geëxterviewd om de koude ischemische tijd te minimaliseren. Plaats het monster niet in formaline bij inzending.
   OPMERKING: Voorbeeldactiefoto's tijdens borstamputatie worden weergegeven in figuur 4 (Representatieve afbeeldingen van monsterafname tijdens borstamputatieprocedure).
6. Verkrijg twee soorten monsters van elk monster bij het extraheren: tumorweefsel en normaal weefsel.
   1. Tumorweefsel
      1. Verkrijg minimaal één blok (bij voorkeur meer) van 1 cm × 1 cm × 1 cm tumorweefsel per monster.
      2. Snijd het verkregen weefselblok verder in twee delen, waarbij elk half blok 1 cm × 0,5 cm × 0,5 cm meet. Overhandig de helft van het weefselblok aan de URA voor biobanking en analyse, en fixeer vervolgens de andere helft in formaline voor routinematige histopathologie.
      3. Snijd het halve blok vers weefsel gelijkmatig door. Dit zal bedoeld zijn voor RNA-sequencing, biobanking en organoïdecultuur.
      4. Voor RNA-sequencing: Onmiddellijk plaatsen in voorgekoelde, vooraf gelabelde cryovials van 5 ml, voorgevuld met 2.5 ml RNA-stabilisatieoplossing (niet langer dan 30 minuten, moet te allen tijde koud worden bewaard).
      5. Voor biobankieren: Onmiddellijk plaatsen in voorgekoelde, voorgelabelde en voorgevulde cryovials van 5 ml met 2.5 ml RNA-stabilisatieoplossing (niet langer dan 30 minuten, moet te allen tijde koud worden bewaard).
      6. Voor organoïdecultuur: Onmiddellijk plaatsen in voorgekoelde, voorgelabelde en voorgevulde kegelvormige flesjes van 15 ml met 5 ml tissuebewaaroplossing en 0,01 ml Primocin (niet langer dan 30 min, moet te allen tijde koud worden bewaard). Samenvoegen in één conische buis een derde van alle tumorblokken verkregen uit verschillende delen van het monster.
   2. Normaal weefsel
      1. Verkrijg minimaal één blok (bij voorkeur meer) van 1 cm × 1 cm × 1 cm normaal borstweefsel per monster.
      2. Snijd het verkregen weefselblok verder in twee delen, waarbij elk half blok 1 cm × 1 cm × 0,5 cm meet. Overhandig de helft van het weefselblok aan de URA voor biobanking en analyse, en fixeer vervolgens de andere helft in formaline voor routinematige histopathologie.
      3. Snijd het weefselblok gelijkmatig in tweeën voor het onderzoek. Deze zullen bedoeld zijn voor RNA-sequencing en biobanking.
      4. Voor RNA-sequencing: Onmiddellijk plaatsen in voorgekoelde, vooraf gelabelde cryovials van 5 ml, voorgevuld met cryovials van 2.5 ml met RNA-stabilisatieoplossing (niet langer dan 30 minuten, te allen tijde op koude temperatuur houden).
      5. Voor biobanking onmiddellijk plaatsen in voorgekoelde, vooraf gelabelde en voorgevulde cryovials van 2.5 ml met RNA-stabilisatieoplossing (niet langer dan 30 minuten, te allen tijde op koude temperatuur houden).
         OPMERKING: Tumormonsters met het label "E" worden meestal verkregen uit drie of meer verschillende secties van het monster. Om verwarring te voorkomen, moeten tumormonsters die bedoeld zijn voor RNA-analyse en biobanking in afzonderlijke buisjes worden geplaatst die zijn gelabeld als E1, E2, E3, enz., terwijl gepoolde tumormonsters die bedoeld zijn voor celcultuur in buisjes moeten worden geplaatst die eenvoudigweg als E zijn gelabeld. Voor monsters met het label E1, E2 en E3 moet de relatieve positie/locatie van elk weefselmonster ten opzichte van de tumor (bijv. midden, 10 uur-positie) worden geregistreerd.
7. Sluit de cryovials met de monsters van de borstamputatie af met parafilm.
8. Bewaar de cryovials 24 uur in 4 °C en breng ze uiteindelijk over naar de ultra-low freezer, met een temperatuur van -80 °C voor langdurige opslag.
9. Verpak de conische buis met de gepoolde tumorblokken en maak deze klaar voor transport. Deze tumorblokkades zullen worden gebruikt voor celkweek tot organoïden.

4. Opslag, verpakking en transport van specimens

1. Sluit onmiddellijk alle cryovials die de tumor en normale weefsels bevatten af met parafilm en bewaar deze gedurende 24 uur bij 4 °C. Breng de buizen na 24 uur ongeveer 2-4 uur over naar -20 °C en breng ze uiteindelijk voor onbepaalde tijd over naar -80 °C, voor langdurige opslag tot transport.
2. Werk de monstertracker en database bij voorafgaand aan het transport van monsters voor RNA-analyse, inclusief de resultaten van routinematige histopathologie en tumorpercentages, om de identiteit van het monster te garanderen.
3. Maak een transportmanifest voor elk monster, voorafgaand aan het transport. Zorg ervoor dat het verpakkingsproces snel verloopt en dat de buisjes met de monsters niet te lang op kamertemperatuur (RT) worden bewaard.
   1. Dicht alle cryoviale doppen af met parafilm om lekkage te voorkomen.
   2. Plaats alle buisjes in een reageerbuisrek.
   3. Stel de temperatuurlogger in en plaats deze over het rek naast de buizen voor transport.
   4. Wikkel de tubes in met absorberend materiaal, vervolgens met noppenfolie en plaats de items in de hersluitbare zak. Zorg ervoor dat de temperatuurlogger de temperatuur registreert en dat de buizen intact zijn en rechtop staan voordat u de items in de zak verzegelt.
   5. Plaats de gelpacks op de bodem van de verzenddoos van polystyreen en plaats vervolgens de hersluitbare zak met de tubes op de gelpacks. Leg nog een laag gelpacks op de zak. Zorg ervoor dat de buisjes tussen gelpacks zijn geklemd om ervoor te zorgen dat de exemplaren tijdens het transport koud blijven.
   6. Sluit de polystyreendoos en doe deze in een kartonnen verzenddoos. Als er geen grote kartonnen doos beschikbaar is, gebruik dan een grotere polystyreen doos. Plaats het ingevulde transportmanifest in een ritssluitingszak en stop deze in de doos. De plaatsing van de items in de doos wordt weergegeven in afbeelding 5.
   7. Sluit de kartonnen doos en plak het juiste verzendlabel buiten de doos.
4. Informeer de ontvanger over het schema voor het verzamelen van monsters en wanneer het doel is om monsters te verzenden.
   1. Voor organoïdecultuur worden alleen tumorweefsels afkomstig van borstamputaties verzonden en gebruikt. Zorg ervoor dat deze vers, op nat ijs en binnen 24 uur na het verzamelen van de monsters worden geleverd. Zodra de monsters zijn ingepakt en de doos is verzegeld, boekt u snel een koerier om ze te vervoeren. Zorg ervoor dat de dozen niet voor langere tijd in gebieden met een hoge temperatuur worden achtergelaten, aangezien een ernstige temperatuurdaling of -stijging de levensvatbaarheid van de monsters in gevaar kan brengen.
   2. Noteer voordat u de verzending aan de koerier doet het aantal verzonden injectieflacons/buisjes en het tijdstip waarop de koerier de Biobank heeft verlaten. Zorg er bij aankomst van het pakket voor dat de ontvanger rekening houdt met het volgende: Tijd van aankomst en ontvangst in het aangewezen centrum, temperatuur bij aankomst, aantal ontvangen injectieflacons/buisjes en eventueel gecompromitteerd monster
   3. Controleer voor RNA-analyse of de te leveren monsters een bijbehorend histopathologisch resultaat en tumorpercentages hebben van de afdeling Chirurgische Pathologie, voordat u monsters opstuurt voor RNA-analyse. Identificeer en selecteer het weefselblok met het hoogste tumorgehalte voor elke patiënt die moet worden ingediend voor RNA-extractie. Transportmonsters alleen die met tumorpercentages.
   4. Stuur de monsters in groepen van niet meer dan 40 om de batchverwerking te vergemakkelijken. Kies een combinatie van tumorweefsel uit een kernnaaldbiopsie of borstamputatie en normaal weefsel uit een borstamputatie. Bekijk de volgende voorwaarden als normaal weefsel van een kernnaaldbiopsie moet worden vervoerd:
      -Ingeschreven als fase 3, maar histopathologisch resultaat toont fase 4
      -Ingeschreven als stadium 3, maar histopathologisch resultaat toont locoregionale progressie van de ziekte.
   5. Zorg ervoor dat alle monsters op nat ijs worden vervoerd. Net als bij het protocol dat wordt gevolgd bij het verzenden van monsters voor 3D-celcultuur, moet u, zodra de monsters zijn ingepakt en de doos is verzegeld, onmiddellijk een koerier boeken voor transport. Laat de dozen niet gedurende langere tijd in gebieden met een hoge temperatuur staan, aangezien aanzienlijke temperatuurschommelingen de levensvatbaarheid van de monsters in gevaar kunnen brengen.
   6. Noteer voordat u de verzending aan de koerier doet het aantal verzonden injectieflacons/buisjes en het tijdstip waarop de koerier de Biobank heeft verlaten. Let bij aankomst van het pakket op het volgende: tijdstip van aankomst en ontvangst in het aangewezen centrum, temperatuur bij aankomst, aantal ontvangen injectieflacons/buisjes en eventueel gecompromitteerd exemplaar (indien aanwezig).
5. Werk de database met verzonden monsters bij en voer alle benodigde informatie in die nodig is voordat de monsters verder worden verwerkt. Bewaak en evalueer de database één keer per week.

Resultaten

Voor het verzamelen van monsters tijdens de kernnaaldbiopsie had het uitvoeren van de procedure onder echografische begeleiding een enorme impact op het gemak van de patiënt en de efficiëntie van de workflow, evenals op de RNA-integriteit van de monsters. Als dit niet gebeurt, worden de verwachte resultaten mogelijk niet verkregen en moeten patiënten teruggaan naar de klinieken om de procedure te herhalen, waardoor de monsterverzameling en -verwerking worden verlengd.

Discussie

De succesvolle implementatie van dit protocol is niet alleen afhankelijk van technische precisie, maar ook van de coördinatie van klinische en onderzoeksteams om een consistente monsterkwaliteit en gegevensintegriteit te garanderen. Dit protocol bevat verschillende belangrijke procedures die zijn ontworpen om de diagnostische nauwkeurigheid te maximaliseren en biospecimens van hoge kwaliteit te genereren die geschikt zijn voor stroomafwaartse moleculaire analyses. Belangrijke stappen zij...

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
37% Formaline oplossing	PHILUSA Corporation	N/A	Gebruikt als conserveermiddel van weefsels voor histopathologische analyse
70% Isopropyl alcohol	Green Cross Inc.	N/A	Gebruikt als ontsmettingsmiddel
Barcode printer	Zebra	GC420t	Voor het afdrukken van barcodelabels te gebruiken bij het labelen van buisjes met de monsters
Bleekmiddel	Green Cross Inc.	N/A	Gebruikt als ontsmettingsmiddel; voor decontaminatie van chirurgische instrumenten
Blauwe ijspakketten	Rubbermaid	1002	Voor het bewaren van monsters bij lage temperaturen tijdens transport
Core naald biopsie 14-G naald	Bard	MN1410	Een invasief tubulair chirurgisch instrument dat is ontworpen om te worden aangesloten op een biopsiepistool voor het automatisch extraheren van een klein weefselmonster uit een anatomische structuur (een biopsie), terwijl minimaal schade aan het omringende weefsel wordt veroorzaakt, voor weefselpathologische onderzoek/testen.
Core naald borst biopsiepistool	Bard	MG1522	Herbruikbaar core biopsie-instrument dat wordt gebruikt bij het verzamelen van weefselmonsters tijdens core naald biopsie
Disposible petrischaal 90 mm x 15 mm	Phoenix Biomedical Products	LOT: 20220206	Gebruikt bij het verzamelen van monsters met core naald biopsie wanneer weefsels in PBS worden ondergedompeld
Dulbecco's fosfaat-gebufferde zoutoplossing (PBS)	Thermo Fisher Scientific	21600010	Een gebalanceerde zout-oplossing die wordt gebruikt voor verschillende celkweektoepassingen, zoals het wassen van cellen voor dissociatie, het transporteren van cellen of weefsel, het verdunnen van cellen voor het tellen, en het bereiden van reagentia.
Pincet	Lokaal leverancier	N/A
Kimtech Science KimWipes Delicate Task Wipers	Kimberly Clark Professional	KC34120	4.3 x 8.4 in. (11.0 cm x 21.3 cm); 1-laags 280 aantal; voor het schoonmaken van oppervlakken, onderdelen, instrumenten en medische kantoren, deze doekjes reinigen gemakkelijk vloeistoffen, stof en kleine deeltjes.
MACS Weefselopslag oplossing	Miltenyi Biotec	130-100-008	Opslagoplossing die wordt gebruikt om een geoptimaliseerde opslag van verse orgaan- en weefselmonsters mogelijk te maken
Micropipet	Shanghai Lichen Instrument Technology Co., Ltd.	STEM-GC-3197-Y	voor het pipetten/overbrengen van vloeistoffen in kleine volumes
Micropipet tips	Tarsons	521100	voor het pipetten/overbrengen van vloeistoffen in kleine volumes
Parafilm	Parafilm M	5259-04LC PM996	Voor luchtdichte en vochtdichte afdichting van buisjes om lekkages te voorkomen
Primocin 250 mg (5 x 1 mL)	InvivoGen	ant-pm-05	Gebruikt om weefsels te beschermen tegen microbiële besmetting
Koelkasten (4 °C)	LG	Model: GR-Y331SLZB	Voor de opslag van weefselmonsters en reagentia
RNAlater oplossing	Thermo Fisher Scientific	AM7021	RNA stabilisatie oplossing die wordt gebruikt bij de opslag en biobank van weefsels
Steriele 15 mL conische buis	Thermo Scientific	339650	Gebruikt voor het maken van aliquoten van reagentia/media die worden gebruikt bij weefselopslag
Steriele 5 mL Cryovials	Thermo Scientific	5000-1020	Gebruikt voor het maken van aliquoten van reagentia/media die worden gebruikt bij weefselopslag
Steriele scalpelblad (#11)	Surgitech	N/A	Voor het snijden van tumor en normale borstweefsels
Chirurgische schaar (18,5 cm 7 ¼" lengte)	Olten Instruments	BO-0125	Voor het snijden van tumor en normale borstweefsels
Temperatuurlogger	Extech Instruments	42280	Voor het opnemen van temperatuur en vochtigheid tijdens transport van monsters
Weefsel inkt	Epredia	3120123	Voor het kleuren van de randen van gesneden chirurgische specimens voor histopathologische analyse
Ultra-lage vriezer	Haier Biomedical	DW-86L579	Voor onbepaalde opslag van tumor en normale borstweefsels
Urineweermonster container 60mL	Sure Guard	0016UCS06PC	Voor de opslag van weefsels voor histopathologische analyse
Ziplock Zakken	Reynolds Consumer Products LLC		Gebruikt bij het inpakken van de monsters voor transport