Methodenartikel

Correlatieve optische spectroscopie en massaspectrometrie beeldvormingsmethodologie om de distributie van geneesmiddelen in een sectie van zacht weefsel te visualiseren

2K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/67383

⸱

20 juni 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Chemical & Biological Sciences Department, National Physical Laboratory, 2Department of Life Sciences, University of Bath, 3Haleon CH SARL, 4School of Chemistry & Chemical Engineering, University of Surrey

In dit artikel

Samenvatting

Deze studie presenteert een methode voor correlatieve beeldvorming van geneesmiddelen in zachte weefsels met behulp van niet-lineaire optische spectroscopie en massaspectrometriebeeldvorming. De combinatie van huidbeeldvorming met hoge resolutie en detectie van gevoelige geneesmiddelen biedt een waardevolle benadering voor het bestuderen van de distributie van geneesmiddelen in de huid, wat van cruciaal belang is voor de ontwikkeling van superieure topische producten.

Samenvatting

Er is een nieuwe correlatieve beeldvormingsmethodologie ontwikkeld die submicron ruimtelijke resolutie combineert met gevoelige geneesmiddeldetectie door middel van optische spectroscopie en massaspectrometriebeeldvorming om de chemische distributie bij toepassing van geneesmiddelen in zacht weefsel te visualiseren. In dit voorbeeld is de methode getest op weggesneden huidweefsel na in vitro topische toepassing van een commercieel niet-steroïde anti-inflammatoir geneesmiddel gedurende 16 uur. Niet-destructieve optische spectroscopische methoden, waaronder gestimuleerde Raman-verstrooiing, tweede harmonische generatie en twee-foton fluorescentiemicroscopieën, werden voor het eerst gebruikt om de huidstructuur en morfologie in kaart te brengen. Vervolgens werden dezelfde huidweefselmonsters geanalyseerd via time-of-flight secundaire ionenmassaspectrometrie (ToF-SIMS), waardoor een verhoogde gevoeligheid mogelijk was voor de detectie van diclofenac in de buitenste huidlagen - epidermis en dermis. Er werden beeldregistratiemethoden bedacht om de optische en massaspectrometrische gegevens te integreren. Deze benadering combineert labelvrije visualisatie met hoge resolutie van weefselstructuur met gevoelige chemische detectie, en is een waardevol hulpmiddel voor het onderzoeken van de distributie van geneesmiddelen in de huid en mogelijk in andere zachte biologische weefsels.

Inleiding

Inzicht in de snelheid, omvang en drijfveren van de distributie van actieve farmaceutische ingrediënten in zachte biologische weefsels na hun lokale of systemische toepassing is cruciaal om de mechanismen op te helderen die ten grondslag liggen aan weefselspecifieke opname, metabolisme en klaring van geneesmiddelen (d.w.z. een beter begrip van de farmacokinetiek van geneesmiddelen). Hier presenteren we een nieuwe correlatieve beeldvormingsmethode die niet-lineaire optische spectroscopieën en massaspectroscopiebeeldvorming integreert voor labelvrije visualisatie van de weefselstructuur en de distributie van topische geneesmiddelen binnen hetzelfde weefselmonster1.

Ramanspectroscopie (RS) is naar voren gekomen als een waardevol hulpmiddel voor het in kaart brengen van de distributie van geneesmiddelen in cellen en weefsels met een hoge ruimtelijke resolutie en moleculaire specificiteit2. RS vertrouwt op de inelastische verstrooiing van licht3 door een interessant monster dat een gedetailleerde chemische karakterisering mogelijk maakt via de karakteristieke trillingsmodi van moleculen daarin, zonder dat er externe labels nodig zijn. De lange acquisitietijden om beelden met een hoge resolutie te produceren, kunnen echter de integriteit van gevoelige biologische monsters in gevaar brengen. Bovendien kan bij het onderzoeken van diepere weefsellagen verstrooiing en absorptie van licht door het weefsel het Raman-signaal verzwakken, waardoor de gevoeligheid ervan verder wordt beperkt. Gestimuleerde Raman Scattering (SRS)-microscopie is een aanzienlijke vooruitgang ten opzichte van conventionele RS, waarbij gebruik wordt gemaakt van gepulseerde laserexcitatie en detectie van het gestimuleerde Raman-signaal4. SRS-microscopie maakt 2D- en 3D-beeldacquisitie mogelijk met een hoge ruimtelijke resolutie en kan - wanneer uitgevoerd in combinatie met tweede harmonische generatie (SHG) en twee foton-geëxciteerde fluorescentiemicroscopieën (TPEF) - een uitgebreid beeld geven van bindweefsels, collageen en elastine 1,5,6,7,8,9 . SHG-microscopie is een niet-lineaire optische techniek die berust op de interactie van licht met niet-centrosymmetrische structuren in een monster, waarbij een signaal wordt gegenereerd op de helft van de golflengte van het invallende licht. Het is vooral handig voor het afbeelden van geordende structuren zoals collageen in biologische weefsels. TPEF is een andere niet-lineaire microscopietechniek waarbij twee fotonen met een lagere energie tegelijkertijd een fluorofoor exciteren, waardoor deze fluorescentie uitzendt. TPEF maakt diepe weefselbeeldvorming mogelijk met verminderde fotoschade, omdat het excitatielicht zich in het nabij-infraroodbereik bevindt, dat dieper doordringt in biologische monsters.

Massaspectrometriebeeldvorming (MSI) is een krachtige analytische techniek die de mogelijkheden van massaspectrometrie combineert met ruimtelijke informatie, waardoor labelvrije identificatie van een breed scala aan moleculen mogelijk is 10,11,12. Time-of-flight secundaire ionenmassaspectrometrie (ToF-SIMS) werkt door het monsteroppervlak te bombarderen met hoogenergetische primaire ionen, waardoor secundaire ionen van het oppervlak worden uitgestoten. Deze secundaire ionen worden vervolgens versneld naar een time-of-flight-analysator, waar hun massa-tot-ladingsverhoudingen worden bepaald. Deze analyse maakt de identificatie mogelijk van moleculaire fragmenten en isotopenvariaties met een hoge gevoeligheid en resolutie. Waardevolle toepassingen van ToF-SIMS zijn aangetoond in biologisch en farmaceutisch onderzoek voor de studie van chemicaliën en biomoleculen in cellen13, weefsels14,15 en organen15.

Zowel SRS als ToF-SIMS zijn onafhankelijk van elkaar gebruikt om de verdeling van geneesmiddelen in verschillende huidmodellen te bestuderen. Het is echter het meest waardevol om deze technieken in combinatie te gebruiken om te profiteren van hun complementariteit. In deze studie beschrijven we een workflow om de optische microscopieën (SRS, TPEF en SHG) te combineren met ToF-SIMS om beelden te verkrijgen van de huidmorfologie met een submicron ruimtelijke resolutie (geleverd door de optische methoden) over het geneesmiddelsignaal dat wordt gedetecteerd met superieure gevoeligheid (geleverd door de ToF-SIMS). De aanpak is gebruikt om het uitdagende voorbeeld aan te pakken van het visualiseren van de distributie van diclofenac in uitgesneden huidweefsels die zijn behandeld met een commerciële topische formulering (Voltaren-gel). De criteria voor succes waren onder meer een hoge chemische gevoeligheid om diclofenac te detecteren in zijn therapeutische concentratie, en voldoende ruimtelijke resolutie om de huidstructuur op te lossen. Hoewel het diclofenacgehalte in verschillende huidlagen na topische behandeling kan worden gekwantificeerd door middel van moeizame en technisch veeleisende methoden zoals tapestrippen gevolgd door kwantificering16, of via open flow microperfusie17, kunnen deze benaderingen de hulpstofafhankelijke diclofenacverdeling, penetratie, retentie en diepteverdeling in de afzonderlijke huidlagen niet ophelderen, die essentiële factoren zijn die helpen bij de productontwikkelingsfase.

Voorafgaand aan de hieronder beschreven meetmethode werd Voltaren Forte-gel (met 2,32 % diclofenac-diethylammonium) of een overeenkomstige placebo-gel (geleverd door Haleon CH SARL) gedurende verschillende perioden (4, 12, 16 of 24 uur) op het huidoppervlak aangebracht. Na verwijdering van eventuele resterende formulering werden SRS- en ToF-SIMS-metingen op dezelfde huidmonsters uitgevoerd; Volledige details van de methodologie worden beschreven in het originele manuscript1.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Ethische verklaring: Menselijke huidmonsters werden verkregen van Tissue Solutions Ltd, Glasgow, VK, door Charles River Laboratories (CRL) in Edinburgh, VK. Alle anonieme monsters werden verkregen in overeenstemming met de wettelijke en ethische normen van het verzamelland, met ethische goedkeuring en geïnformeerde toestemming van de donoren of hun naaste familieleden.

1. Huid doorsnede

Een cryostaat werd gebruikt om delen van het huidweefsel te produceren.

  1. Transporteer de behandelde huidschijven uit de vriezer van -20 °C en snijd een klein stukje (~1,0 cm x 1,0 cm) uit het midden van de schijf.
  2. Monteer het monster op de klauwplaat in de cryostaat boven een bevroren waterdruppel. Gebruik geen optimale snijtemperatuur (OCT) compound of andere inbeddingsmedia.
  3. Stel het mes en de monstertemperatuur in op respectievelijk - 20 °C en - 16 °C.
  4. Doorsnede 30 μm dik op een glazen dekglaasje (#1.5, Fisher Scientific).
  5. Voer SRS en ToF-SIMS onmiddellijk uit of als alternatief kan het monster vacuüm worden verpakt voor opslag bij -80 °C.
  6. Droog 20 minuten voor gebruik.

2. SRS-beeldvorming

SRS-, SHG- en TPEF-microscopie werd uitgevoerd met behulp van een coherente Raman-microscoop. Twee picoseconde laserpulsen werden gegenereerd door een Stokes-straal van 1031,2 nm, ruimtelijk en tijdelijk overlapt met een afstembare pompstraal. De Stokes-straal, gemoduleerd op 20 MHz, vergemakkelijkte de detectie van gestimuleerde Raman-verliessignalen via transmissie. Een op silicium gebaseerde detector, gekoppeld aan een lock-in versterker, werd gebruikt voor signaaldetectie. Een ander kanaal werd gebruikt om tweede harmonische en uitgezonden fluorescentiesignalen te verzamelen, waarbij een fotomultiplicatorbuis werd gebruikt voor detectie.

  1. Installeer geschikte objectief- en condensorlenzen voor multifotonweefselbeeldvorming, in dit geval een lens met een wateronderdompeling met een vergroting van 40x (1,1 NA) in combinatie met een luchtcondensorlens met korte werkafstand (0,9 NA).
  2. Plaats het gemonteerde weefselgedeelte op de SRS-microscoopmonstertafel zodat het weefsel zich op dezelfde kant van het microscoopglaasje bevindt als de condensorlens. Richt de objectieflens op het weefselgedeelte en optimaliseer vervolgens de hoogte van de condensor.
  3. Stel het laservermogen in op de juiste waarden om een goede signaal-ruisverhouding te verkrijgen zonder het weefsel te beschadigen. In dit voorbeeld werd ongeveer 10 mW voor de pompstraal en 30 mW voor de Stokes-straal toegepast op het monster. Raadpleeg Tsikritsis et al voor praktische overwegingen voor SRS-metingen4.
  4. Verkrijg een mozaïekafbeelding van het hele gedeelte met een resolutie van 512 x 512 pixels, wat overeenkomt met 290 μm x 290 μm bij X1 zoom, met een beeldsnelheid van 400 Hz en lijngemiddelde van 1 op 2850 cm-1 , wat overeenkomt met CH2 uitrekken.
  5. Kies binnen het mozaïekbeeld van de hele sectie een interessegebied (ROI) met de volgende overwegingen: (i) het wordt in het midden geplaatst, waarbij de buitenste 20% van de monsteromtrek wordt vermeden waar er niet-gedoseerde huid zou kunnen zijn die in het Franz-celapparaat was geklemd; ii) het is voldoende vlak om binnen hetzelfde optische diepteniveau te worden onderzocht; iii) het heeft duidelijke structurele kenmerken die de visuele identificatie ervan zouden vergemakkelijken wanneer het monster naar ToF-SIMS wordt overgebracht.
  6. Pas consistente versterkingsinstellingen toe in het hele onderzoek voor SRS- en SHG/fluorescentiedetectoren en verkrijg beelden in (i) het C-H-rekgebied (op 2945 cm-1, 2850 cm-1 en 2650 cm-1 overeenkomend met respectievelijk CH3, CH2 en off-resonantiecontrole); (ii) het vingerafdrukgebied (op 1666 cm-1 en 1723 cm-1 overeenkomend met respectievelijk amide I en off-resonantiecontrole); (iii) het golfgetal dat overeenkomt met de aan- en uitresonantie met betrekking tot het toegediende geneesmiddel; in dit voorbeeld op 1586 cm-1 en 1530 cm-1 wat overeenkomt met respectievelijk C=C en off-resonantie.

Breng het monster na SRS-beeldvorming onmiddellijk over naar de ToF-SIMS-opstelling voor analyse.

3. ToF-SIMS-beeldvorming

Time-of-flight secundaire ionenmassaspectrometriebeeldvorming werd uitgevoerd met behulp van een 30 keV Bi3+ primaire ionenbundel met een stroom van 0,2 pA.

  1. Kies de juiste acquisitie-instellingen; In dit voorbeeld werd een negatieve ionenpolariteit gebruikt, met een inschakelduur van 100 ms, een massabereik van m/z 0-900 en een bundeldiameter van 5 μm. Een 20 eV elektronenoverstromingskanon bij 5 μA werd gebruikt voor ladingscompensatie.
  2. Verkrijg een algemeen beeld door de macro-rastermodus van het podium om het hele weefselgedeelte in kaart te brengen met een gezichtsveld afhankelijk van de weefselafmetingen (in ons geval gebruikten we 2,5 tot 3,0 mm x 8,5 tot 9,0 mm). Dit totaalbeeld wordt gevormd uit een mozaïek van kleinere afbeeldingen. In dit voorbeeld had elk een gezichtsveld van 0,5 mm x 0,5 mm (256 x 256 pixels) met 1 ionenbundelopname per pixel, wat resulteerde in een ionendosis van 8,18 x 108 ionen/cm2.
  3. Gebruik dezelfde methode om afbeeldingen van de ROI vast te leggen door een geschikt gezichtsveld te selecteren; In dit geval was het 1,0 mm x 0,5 mm, met 4 opnamen per pixel per frame en 10 frames per patch, wat overeenkomt met een ionendosis van 1,31 x 1011 ionen/cm2.
  4. Om kwaliteitscontrole te garanderen, analyseert u weefselhomogenaatmonsters onmiddellijk voor en na het onderzoeken van elk huidgedeelte. Gebruik een gezichtsveld van 0,5 mm x 0,5 mm (256 x 256 pixels) met 1 opname per pixel en 1 frame per scan, waarbij in totaal 15 scans worden uitgevoerd. Deze opstelling komt overeen met een ionendosisdichtheid van 3,27 x 1010 ionen/cm2.
  5. Na acquisitie kunnen de resulterende massaspectra worden gekalibreerd met behulp van H-, C-, C 2-, C2- en C3-ionen.
  6. Gegevensverzameling en -extractie werden uitgevoerd met behulp van Surface Lab 7.1-software.

4. Beeldregistratie en data-analyse met behulp van MATLAB

  1. Verklein SIMS- en SRS-afbeeldingen tot elk 3 dimensies met behulp van niet-negatieve matrixfactorisatie die moet worden gevisualiseerd als rode, groene en blauwe kleurkanalen.
  2. Kies overeenkomende functies tussen deze twee niet-matrix factorisatiebeelden door de Matlab-controlepuntselectietool "cpselect" te selecteren (Matlab, Mathworks, 2019b en Image Processing Toolbox).
  3. Gebruik de functies "cp2tform" en "imtransform" om registratie uit te voeren, waarbij een affiene transformatie wordt toegepast met de SIMS-gegevens als de vaste beelden en de optische spectroscopiegegevens als de bewegende beelden.
  4. Als er meerdere pieken worden gedetecteerd in de ToF-SIMS-gegevens voor het geneesmiddel van belang, tel dan de intensiteiten van deze pieken bij elkaar op om een gecombineerde ionenintensiteit van het geneesmiddel te creëren.
  5. Extraheer het gemiddelde totale aantal ionen van de twee homogenate datasets (voor en na) voor elk corresponderend huidweefselmonster. Normaliseer aan de hand van deze overeenkomstige waarde de intensiteiten in de ToF-SIMS-gegevens van het geneesmiddelion in elk huidbeeld.
  6. Maak na registratie een overlay van de optische spectroscopie- en SIMS-gegevens door de respectievelijke afbeeldingen toe te wijzen aan de RGB-kanalen: rood (SRS-beeld voor CH2), groen (SHG-beeld voor collageen) en blauw (SIMS-beeld voor diclofenac, inclusief signalen van verschillende ionen op m/z 214.04, 216.04, 250.02, 252.02, 294.01 en 296.01).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Figuur 1 toont de resultaten van op kenmerken gebaseerde beeldregistratie, waarbij de geregistreerde overlay-beelden van SRS, SHG en SIMS worden weergegeven voor twee huidmonsters: één behandeld met een placebo (Figuur 1a) en de andere met Voltaren-gel gedurende 4 uur (Figuur 1b) en 16 uur (Figuur 1c). In deze afbeelding wordt het opgete...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Deze methode maakt correlatieve beeldvorming mogelijk met niet-lineaire optische spectroscopie en massaspectrometriebeeldvorming om de distributie van geneesmiddelen in zacht weefsel te detecteren met een ruimtelijke resolutie van submicron en een hoge gevoeligheid. Belangrijk is dat beeldvorming wordt bereikt zonder het gebruik van mogelijk storende labels die nodig zouden zijn voor op fluorescentie gebaseerde microscopieën. Verdere validatie van de workflow omvatte de conventionele hem...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

MBB is een medewerker van Haleon CH SARL, de financieringsinstelling van de studie.

Dankbetuigingen

Deze studie werd gefinancierd door Haleon CH SARL. Bijdragen van NAB en RHG werden gedeeltelijk ondersteund door de Food and Drug Administration (FDA) van het Amerikaanse ministerie van Volksgezondheid en Human Services (HHS) door middel van een toekenning voor financiële steun (1-U01-FD006533). Dit werk werd gefinancierd door het Britse ministerie van Bedrijfsleven, Energie en Industriële Strategie via de projecten NMS/ID74 en NMS/ST18 van het UK National Measurement System. De inhoud van dit artikel is die van de auteurs en vertegenwoordigt niet noodzakelijkerwijs de officiële standpunten van, noch een goedkeuring door, FDA/HHS of de Amerikaanse overheid. NAB is dankbaar voor de steun van de Community for Analytical Measurement Science voor de CAMS Fellowship Award 2020, gefinancierd door het Analytical Chemistry Trust Fund.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Coherent Raman microscope Leica Microsystemshttps://www.leica-microsystems.com/products/confocal-microscopes/p/leica-tcs-sp8-cars/
Human skin samples Tissue Solutions Ltd, Glasgow
Leica CM 1850 Cryostat Leica Biosystemshttps://www.leicabiosystems.com/en-fr/histology-equipment/cryostats/leica-cm1850/Discontinued
PicoEmerald-S laser systemAPE Berlinhttps://www.ape-berlin.de/en/cars-srs/
ToF SIMS 5IONToF GmbHhttps://spectral.se/products/tof-sims-5

Referenties

  1. Belsey, N. A., et al. Visualisation of drug distribution in skin using correlative optical spectroscopy and mass spectrometry imaging. J Control Release. 364, 79-89 (2023).
  2. Pudlas, M., et al. Raman spectroscopy: A noninvasive analysis tool for the discrimination of human skin cells. Tissue Eng Part C Methods. 17 (10), 1027-1040 (2011).
  3. Raman, C. V., Krishnan, K. S. A new type of secondary radiation. Nature. 121 (3048), 501-502 (1928).
  4. Tsikritsis, D., Legge, E. J., Belsey, N. A. Practical considerations for quantitative and reproducible measurements with stimulated Raman scattering microscopy. Analyst. 147 (21), 4642-4656 (2022).
  5. Sarri, B., et al. Stimulated Raman histology: One to one comparison with standard hematoxylin and eosin staining. Biomed Opt Express. 10 (10), 5378-5384 (2019).
  6. Lee, M., et al. Recent advances in the use of stimulated Raman scattering in histopathology. Analyst. 146 (3), 789-802 (2021).
  7. Mansfield, J., Moger, J., Green, E., Moger, C., Winlove, C. P. Chemically specific imaging and in-situ chemical analysis of articular cartilage with stimulated Raman scattering. J Biophotonics. 6 (10), 803-814 (2013).
  8. Shi, L., Fung, A. A., Zhou, A. Advances in stimulated Raman scattering imaging for tissues and animals. Quant Imaging Med Surg. 11 (3), 1078-1101 (2021).
  9. Brzozowski, K., et al. Stimulated Raman scattering microscopy in chemistry and life science - development, innovation, perspectives. Biotechnol Adv. 60, 108003(2022).
  10. Buchberger, A. R., Delaney, K., Johnson, J., Li, L. Mass spectrometry imaging: A review of emerging advancements and future insights. Anal Chem. 90 (1), 240-265 (2018).
  11. Seeley, E. H., Caprioli, R. M. Molecular imaging of proteins in tissues by mass spectrometry. Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (47), 18126-18131 (2008).
  12. Vanbellingen, Q. P., et al. Time-of-flight secondary ion mass spectrometry imaging of biological samples with delayed extraction for high mass and high spatial resolutions. Rapid Commun Mass Spectrom. 29 (13), 1187-1195 (2015).
  13. Singh, A. V., et al. ToF-SIMS 3D imaging unveils important insights on the cellular microenvironment during biomineralization of gold nanostructures. Sci Rep. 10 (1), 261(2020).
  14. Yoon, S., Lee, T. G. Biological tissue sample preparation for time-of-flight secondary ion mass spectrometry (ToF-SIMS) imaging. Nano Converg. 5 (1), 24(2018).
  15. Shi, X., et al. A ToF-SIMS methodology for analyzing inter-tissue lipid distribution variations and intra-tissue multilevel mass spectrometry imaging within a single rat. Microchem J. 200, 110235(2024).
  16. Louw, E. -V., et al. Comparative study on the topical and transdermal delivery of diclofenac incorporated in nano-emulsions, nano-emulgels, and a colloidal suspension. Drug Deliv Transl Res. 13 (5), 1372-1389 (2023).
  17. Hummer, J., et al. Optimization of topical formulations using a combination of in vitro methods to quantify the transdermal passive diffusion of drugs. Int J Pharm. 620, 121737(2022).
  18. Sjövall, P., et al. Imaging the distribution of skin lipids and topically applied compounds in human skin using mass spectrometry. Sci Rep. 8 (1), 16683(2018).
  19. Delvaux, X., Noël, C., Poumay, Y., Houssiau, L. Probing the human epidermis by combining tof-sims and multivariate analysis. Biointerphases. 18 (1), 011002(2023).
  20. Kolenc, O. I., Quinn, K. P. Evaluating cell metabolism through autofluorescence imaging of nad (p) h and fad. Antioxid Redox Signal. 30 (6), 875-889 (2019).
  21. Hanson, K. M., Clegg, R. M. Observation and quantification of ultraviolet-induced reactive oxygen species in ex vivo human skin. Photochem Photobiol. 76 (1), 57-63 (2002).
  22. Wang, J., et al. Non-invasive skin imaging assessment of human stress during head-down bed rest using a portable handheld two-photon microscope. Front Physiol. 13, 899830(2022).
  23. Brunetti, A., et al. Correlative morphologic and functional imaging for diagnosis, staging and follow up in aids: An overview. Q J Nucl Med. 39 (3), 201-211 (1995).
  24. Van Zyl, T., Van Rensburg, L. J., Naidoo, K., Merven, M., Opperman, J. F. Correlative imaging and histopathology of a complicated sinonasal teratocarcinosarcoma. SA J Radiol. 27 (1), 2548(2023).
  25. Huber, K., et al. Novel approach of MALDI drug imaging, immunohistochemistry, and digital image analysis for drug distribution studies in tissues. Anal Chem. 86 (21), 10568-10575 (2014).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Correlatieve beeldvorminghuidweefselgestimuleerde Raman verstrooiingtweefotonfluorescentieTime Of Flight SIMSbeeldregistratiedrugpenetratie

Gerelateerde artikelen