Methodenartikel

Een efficiënte eenpersoonstechniek voor het bemonsteren van melk van laboratoriummuizen

DOI:

10.3791/67669

⸱

28 maart 2025

 , 
1Department of Nutritional Sciences, Rutgers -The State University of New Jersey, 2Rutgers Center for Lipid Research, Rutgers -The State University of New Jersey

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

In dit artikel wordt beschreven hoe u een apparaat in elkaar zet dat kan worden gebruikt om melk van laboratoriummuizen op te vangen. Dit apparaat is betaalbaar, draagbaar en maakt het mogelijk om 0,1-0,5 ml melk op te halen door één getraind persoon. Er is ook een gedetailleerd melkprotocol opgenomen.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Knaagdiermodellen worden sinds het begin van de 20e eeuw veel gebruikt in de biologie om basisfysiologie en biochemische mechanismen te bestuderen. In onderzoek naar lactatie en neonatale ontwikkeling is het nodig om melk te bemonsteren om de samenstelling te bepalen en hoe melk kan worden beïnvloed door experimentele manipulaties, waardoor de ontwikkeling van pasgeborenen wordt beïnvloed. Het kan moeilijk zijn om biovloeistoffen in voldoende hoeveelheden van kleine knaagdieren te verzamelen. Verschillende studies hebben verschillende technieken aangetoond om melk van muizen te verkrijgen. Deze technieken vereisen echter vaak ten minste twee getraind personeel, wat in sommige gevallen een uitdaging kan zijn.

Hier demonstreren we een aangepaste melkbemonsteringstechniek op basis van een methode die in 2009 is gepubliceerd. Met deze betaalbare en eenvoudig te monteren methode kan één getraind persoon routinematig 0,1-0,5 ml melk onder narcose van een moeder halen in minder dan 10 minuten. Met deze methode hebben we voldoende melk verzameld op dag 2 na de bevalling (PD2) en dag 10 na de bevalling (PD10). We maten macronutriëntencomponenten van melk en vergeleken deze met de bestaande literatuur om onze verzamelmethode te valideren.

We registreerden dat op PD2 het melkeiwit gemiddeld 70,1 ± 5,2 g/L bedroeg, het melkvet 174,4 ± 7,1 g/L en de melklactose 12,3 ± 0,6 g/L. Op PD10 bleven melklactose en eiwit in vergelijkbare concentraties als op PD2, maar het melkvet was significant hoger (224,4 ± 17,1 g/l). We zagen ook dat de relatieve overvloed aan individuele melkeiwitten varieerde tussen PD2 en PD10. Meer specifiek waren αS1-caseïne en weizuur eiwit hoger, terwijl β-caseïne lager was bij PD10 in vergelijking met PD2. Over het algemeen demonstreren we een efficiënte eenpersoonstechniek voor het bemonsteren van melk bij muizen met behulp van een apparaat dat eenvoudig kan worden geassembleerd met veelgebruikte laboratoriumapparatuur.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Vergelijkende geneeskunde verwijst naar het idee dat mensen en andere dieren overeenkomsten vertonen in anatomie en fysiologie; Informatie die van de ene soort is geleerd, kan dus worden gebruikt om vergelijkbare routes in de andere 1,2 te bestuderen. Sinds het begin van de 20eeeuw worden knaagdieren, met name muizen en ratten, op grote schaal gebruikt in biomedisch onderzoek vanwege de relatief eenvoudige genetische manipulatie voor de ontwikkeling van ziektemodellen 1,2. Bovendien zijn ze relatief klein; Er zijn dus minder middelen nodig om kolonies in stand te houden in vergelijking met andere zoogdiermodellen zonder knaagdieren2. Hun kleine lichaamsgrootte brengt echter ook uitdagingen met zich mee. Bepaalde procedures kunnen niet gemakkelijk worden uitgevoerd bij muizen. De arterioveneuze verschiltechniek kan bijvoorbeeld worden uitgevoerd op ratten 3,4,5, maar het kan een uitdaging zijn bij muizen omdat hun kleine bloedvaten gemakkelijk kunnen scheuren 6,7. De hoeveelheid weefsel die van een muis kan worden bemonsterd, is ook beperkt. Bij zogende muizen neemt het viscerale vetweefsel bijvoorbeeld aanzienlijk af in grootte 8,9 en in sommige gevallen tot bijna niet-detecteerbare hoeveelheden. Bovendien is de bemonstering van biovloeistof van muizen ook beperkt in hoeveelheid; Afhankelijk van de techniek kan het volume van het afgenomen bloed variëren, maar is het altijd enigszins beperkt7, waardoor het aantal analyses dat kan worden uitgevoerd, wordt beperkt.

In onderzoek naar lactatie en neonatale ontwikkeling is het nodig om melk te bemonsteren om de samenstelling en melkgift te evalueren. In studies die bij muizen zijn uitgevoerd, worden vanwege het beperkte melkvolume vaak monsters van verschillende moederdieren samengevoegd om een voldoende hoeveelheid10 op te leveren. Een aantal studies demonstreert technieken voor het verzamelen van voldoende analytische hoeveelheden melk van een enkele muis 11,12,13. Voor deze methoden zijn echter meestal twee getrainde medewerkers nodig11,12: één om het dier vast te houden terwijl u handmatig melk afkolft en één om melk op te vangen met een pipet; Of ze vereisen apparatuur en gereedschappen die niet direct beschikbaar zijn in een laboratorium. Hier demonstreren we een aanpassing van een techniek bedacht door DePeters en Hovey14. Het apparaat dat in deze procedure wordt gebruikt, kan eenvoudig worden geassembleerd met apparatuur die in het laboratorium beschikbaar is of eenvoudig worden gekocht bij gewone leveranciers. Met dit apparaat kan één persoon routinematig 0,1-0,5 ml muizenmelk verkrijgen in minder dan 10 minuten om te gebruiken voor de meeste analyses. We verzamelden melk op dag 2 na de bevalling (PD2, vroege lactatie) en dag 10 na de bevalling (PD10, pieklactatie) en maten de macronutriënten van de melk om de methode te valideren.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Alle dierverzorgings- en experimentele procedures volgden de federale richtlijnen en kregen goedkeuring van de Rutgers University Institutional Animal Care and Use Committee. Vrouwelijke muizen (C57BL/6 achtergrond) werden gedekt op een leeftijd van 8 weken. Ze kregen ad libitum een standaard kweekvoer en werden onder een regelmatige licht:donker-cyclus van 12:12 uur gehouden. De dag van levering werd geteld als dag 1 na de bevalling (PD1). Op PD2 (vroege lactatie) en PD10 (pieklactatie) werd melk bemonsterd zoals hieronder beschreven.

1. Montage van een melkapparaat

  1. Bevestig het ene uiteinde van de 5/32'' binnendiameter (ID) polyvinylchloride (PVC) slang aan de vacuümpomp en gebruik tape om het hulpstuk vast te zetten (gelabeld a in Figuur 1A).
    NOTITIE: De vacuümpomp kan worden vervangen door elke geschikte pomp of een centrale stofzuiger (soms "huisvacuüm" genoemd) die in het laboratorium beschikbaar is.
  2. Bevestig het andere uiteinde van de 5/32'' ID PVC-buis aan de 1/8'' ID PVC-buis via een rechte connector met weerhaken.
  3. Bevestig het andere uiteinde van de 1/8'' ID PVC-slang aan een 18G injectienaald via een connector (gelabeld b in afbeelding 1A).
  4. Knip het uiteinde van een P200 pipetpunt ~0,2 cm af om een grotere opening te creëren. Steek de P200 pipetpunt door de opening van de septumstop zodat de punt naar boven wijst (Figuur 1B).
    OPMERKING: Vervang de pipetpunten tussen de dieren door.
  5. Bevestig de septumstop aan een steriele opvangbuis. Maak een prik door de septumstop met de injectienaald van 18 G.
  6. Controleer de zuigdruk door de vacuümpomp aan te zetten en een vinger (bedekt met een laboratoriumhandschoen) tegen de opening van de pipetpunt te plaatsen.
    NOTITIE: U zou een zachte zuigkracht moeten voelen als deze correct is gemonteerd. De opvangbuis, de 18 G injectienaald en de P200 pipetpunten moeten steriel zijn.

figure-protocol-1
Figuur 1: Het melkapparaat. A) Melkinrichting met een vacuümpomp die via een PVC-slang is bevestigd aan een injectienaald van 18 G. De naald gaat door een septumstop die is bevestigd aan een microcentrifuge-verzamelbuis. Een omgekeerde P-200 pipetpunt, die wordt gebruikt om melk uit een speen te trekken, wordt door een opening van de septumstop ingebracht. (B) Dwarsdoorsnede van het melkapparaat. (C) Een moeder die wordt gemolken volgens de beschreven methode. (D) Een representatief evenredig deel (0,3 ml) melk dat bij een moederdier wordt opgehaald tijdens de pieklactatie. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

2. Scheiding van het moederdier van de pups

  1. Scheid op de dag van het melken de moeder van haar pups om melkophoping in de klieren mogelijk te maken.
  2. Houd de pups warm in een nest.
  3. Wacht 2 uur scheiding als de melk wordt verzameld tijdens de vroege lactatie (bijv. PD2 in dit onderzoek).
  4. Houd rekening met 30-45 minuten scheiding als de melk wordt verzameld tijdens de pieklactatie (bijv. PD10 in dit onderzoek).

3. Anesthesie van de dam

  1. Wanneer het moederdier klaar is om gemolken te worden, dient u een injectie met ketamine/xylazine-oplossing (intraperitoneaal, i.p.) toe aan één kant van de peritoneale holte tussen het4e en 5epaar spenen.
    OPMERKING: De hoeveelheid toe te dienen verdovingsoplossing wordt berekend aan de hand van het gewicht van de dam (80-100 mg/kg ketamine, 5-12 mg/kg xylazine, volgens het IACUC-protocol van de Rutgers University). Met deze dosis wordt een muis 45-60 minuten verdoven, zodat er voldoende tijd is om de melk op te vangen.
  2. Bevestig de anesthesie door stevig in een voet te knijpen, maar zonder deze te verwonden, om de perceptie van het dier van sensatie en pijn te testen. Adequate anesthesie wordt aangegeven door geen enkele vorm van beweging.
  3. Breng veterinaire oogzalf aan op de ogen van de moeder om uitdroging onder narcose te voorkomen.

4. Melk ophalen

  1. Plaats de verdoofde dam op haar rug op een stevige werkondergrond. Veeg haar borstgebied voorzichtig af met een steriel alcoholdoekje om het gebied schoon te maken voor het melken.
  2. Dien 1-2 eenheden oxytocine (i.p.) toe tussen het4e en 5epaar spenen aan de kant van de peritoneale holte die geen injectie heeft gekregen.
    OPMERKING: Oxytocine is een klein molecuul dat snel kan worden opgenomen en een korte halfwaardetijd heeft 14,15. Het melken moet binnen een minuut na de injectie beginnen.
  3. Houd de dam vast door zachtjes in haar nek te krassen met de niet-dominante hand.
  4. Kolf handmatig melk af uit een speen door in het borstweefsel van de basis tot de punt van de speen te knijpen totdat er een druppel melk zichtbaar is.
  5. Schakel het vacuümapparaat in door de aan/uit-knop in te schakelen.
  6. Begin met melken door de omgekeerde P200 pipetpunt voorzichtig op een speen aan te brengen. Gebruik een zachte trekbeweging om de melk op te zuigen (Figuur 1C).
  7. Herhaal stap 4.4-4.6 op alle spenen totdat er voldoende melk is opgevangen.
    OPMERKING: Tijdens het melken kan melk per ongeluk in de 18 G injectienaald of PVC-slang van de vacuümleiding worden gezogen. Dit kan eenvoudig worden verholpen door de naald of PVC-slang te vervangen voordat het volgende dier wordt gemolken.

5. Herstel van de dam na het ophalen van de melk

  1. Breng de verdoofde moeder terug naar de kooi met haar pups en houd ze warm. Houd het dier in de gaten totdat het weer bij bewustzijn komt.
    OPMERKING: De moeder kan weigeren opnieuw te zogen als ze zelf wakker mag worden in een aparte kooi voordat ze terugkeert naar haar pups. Dit komt vaker voor wanneer de melk wordt opgehaald tijdens de vroege lactatie (PD2).
  2. Laat de dammen weg van haar pups bewegen om volledig te herstellen wanneer ze wakker begint te worden; Dit is normaal gedrag.
    OPMERKING: We zien dat moederdieren periodiek terugkeren naar hun pups en na een paar uur weer volledig gaan zogen.

6. Analyse van melk

  1. Gebruik een in de handel verkrijgbare lactosetestkit (zie materiaaltabel) om de melklactose te meten. Verdun de melk 75x met steriel water en voer de test uit volgens het kitprotocol.
  2. Meet het melkvet met behulp van de creamatocrietmethode die in andere publicaties wordt gedemonstreerd16,17.
  3. Schat het melkeiwit door de Bradford-eiwittest18 uit te voeren met runderserumalbumine als standaard19. Centrifugeer de melk vóór de test gedurende 15 minuten bij 4.000 × g bij 4 °C. Extraheer het infranatant door te pipetteren en verdun het tot 1:10 met steriel water vóór de test.
  4. Voer polyacrylamidegelelektroforese (PAGE) uit; scheid 10 μg eiwit op een geprefabriceerde 4%-12% Bis-Tris-gel volgens de instructies van de fabrikant. Breng de eiwitten over op polyvinylideenfluoride (PVDF) membranen en kleur ze met Coomassie Blue R-250.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Met behulp van deze techniek hebben we met succes voldoende melk bemonsterd op verschillende momenten tijdens een lactatie van 21 dagen. We beschouwen de dag van bevalling als dag 1 na de bevalling (PD1), en in dit werk hebben we melk bemonsterd op PD2 (vroege lactatie) en PD10 (pieklactatie), elk n = 4. We kregen comfortabel 0,1-0,5 ml melk van elke moeder (Figuur 1D). Om deze methode te valideren, hebben we de samenstelling van de bruto macronutriënten van deze melkmonsters gemeten en de verschillen tussen melk die in de vroege en pieklactatie werd verzameld vergeleken met behulp van de t-test van Student.

We ontdekten dat de lactoseconcentratie in melk gemiddeld 12,3 ± 0,6 g/L bedroeg op PD2 en 12,0 ± 0,9 g/L op PD10 (Tabel 1). Het melkvetpercentage was 26,0 ± 1,0% en 33,4 ± 2,5% op respectievelijk PD2 en PD10. De vetconcentratie was 174,4 ± 7,1 g/L op PD2 en significant hoger, 224,4 ± 17,1 g/L op PD10 (Tabel 1). Het gemiddelde eiwitgehalte was 70,1 ± 5,2 g/L op PD2 en 75,1 ± 2,6 g/L op PD10 (Tabel 1). Hoewel het totale melkeiwitgehalte niet verschilde tussen PD2 en PD10, verschilde de relatieve overvloed aan individueel melkeiwit wel. In het bijzonder waren αS1-caseïne en weizuur eiwit hoger in PD10-melk dan in PD2-melk (p < 0,05), terwijl β-caseïne (p < 0,05) een hogere abundantie vertoonde in PD2 dan in PD10 (Figuur 2).

figure-results-1
Figuur 2: Analyse van melkeiwit. (A) Coomassie Blue-stained PAGE-analyse van melk verzameld bij PD2 en PD10. Eiwitidentificatie werd gedaan zoals eerder beschreven14. (B) Individuele eiwitsignalen werden geanalyseerd in Afbeelding J en genormaliseerd naar het gekleurde totale eiwit. De resultaten werden uitgedrukt als het gemiddelde met standaard foutbalken en individuele gegevenspunten als stippen. De gemiddelde abundantie van elk eiwit op PD2 en PD10 werd vergeleken met behulp van een tweezijdige Student's t-test. *p < 0,05, n = 4. Afkortingen: PAGE = polyacrylamidegelelektroforese; PDn = dag na de bevalling n. Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.

GemiddeldSEMp-waarde
Lactose
(g/L)		PD212.30.60.75
PD1012.00.9
Vet
(g/L)		PD2174.47.10.04
PD10224.417.1
Eiwit
(g/L)		PD270.15.20.42
PD1075.12.6

Tabel 1: Macronutriëntensamenstelling van melk verzameld bij PD2 en PD10. De resultaten, uitgedrukt als de gemiddelde en standaardfout van het gemiddelde (SEM), werden geanalyseerd om de effecten van de lactatiedag op de melksamenstelling te onderzoeken met behulp van een tweezijdige Student's t-test, n = 4.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

We hebben een aangepaste melktechniek gedemonstreerd die door één persoon kan worden uitgevoerd met behulp van een apparaat dat eenvoudig kan worden gemonteerd en draagbaar. Traditioneel wordt knaagdiermelk verzameld met behulp van capillaire buisjes10,17, glazen pasteurpipetten12 of micropipetten11. Bij deze methoden moet één persoon de dam in bedwang houden en handmatig melk afkolven en een andere om melk op te halen. Dit kan soms een uitdaging zijn, vooral wanneer de melkbemonstering in het weekend of op feestdagen plaatsvindt. Melk die op deze manier wordt opgevangen, moet worden overgebracht in steriele voorraadbuisjes. Aangezien melk bij knaagdieren relatief veel vet bevat (zoals hier en in andere onderzoeken20,21 wordt aangetoond) en daarom stroperig is, leidt het proces van het overbrengen van melk waarschijnlijk tot een verlies van melkvolume, waardoor de hoeveelheden voor analyses worden beperkt. Het hier beschreven apparaat kan in minder dan 5 minuten worden gemonteerd met gereedschap dat in het laboratorium beschikbaar is. Het kan gemakkelijk door één persoon worden gebruikt om binnen 10 minuten voldoende melkvolume te bemonsteren. De continue, zachte zuigbenadering die bij deze methode hoort, verlicht het probleem van monsterverlies als gevolg van overdracht, aangezien melk constant rechtstreeks in een verzamelbuis wordt getrokken. Het minimaliseren van monsterverlies is vooral belangrijk bij het verzamelen van melk al in PD2, aangezien bekend is dat de melkgift in dit stadium relatief laag is10. Bovendien werden hetzelfde apparaat en protocol gebruikt om met succes melk te verzamelen van een andere muizenstam (FVB/N-achtergrond), wat suggereert dat deze methode waarschijnlijk even goed werkt bij muizenstammen.

In deze studie hebben we ook vastgesteld dat het tijdstip van scheiding kan verschillen afhankelijk van het stadium van de lactatie. Eerdere studies melden dat moederdieren ten minste 2 uur en maximaal 16 uur vóór het ophalen van de melk van hun jongen moeten worden gescheiden om voldoende melkvolume te verkrijgen11,13. Bij het toepassen van deze methode ontdekten we dat het scheiden van moederdieren van hun pups gedurende 2 uur bij de vroege lactatie (PD2) en slechts 30-45 minuten bij de pieklactatie (PD10) voldoende was om een voldoende hoeveelheid melk te verkrijgen. Omdat het extra tijd kost voor de dam om te herstellen van de anesthesie, verkort het minimaliseren van de duur van de scheiding niet alleen de bemonsteringstijd, maar vermindert het ook de mogelijke impact die het kan hebben op de moeder en haar pups.

Bovendien ontdekten we dat het verzamelen van melk al in PD2 een negatieve invloed kan hebben op de latere groei van de pups vanwege de lange scheidings- en hersteltijd van de moeder, wat leidt tot een periode van onvoldoende voeding. Dit werd niet waargenomen bij het nemen van melk tijdens de pieklactatie (PD10). Daarom, als een onderzoeker geïnteresseerd is in het bemonsteren van melk op verschillende tijdstippen tijdens de lactatieperiode van 21 dagen, is het raadzaam om vroege lactatiemelk te bemonsteren van een aparte set moederdieren. De melkophaling kan echter meerdere keren op dezelfde moeder worden uitgevoerd tijdens piek- en late lactatie voor longitudinale studies.

Als alternatief kunnen onderzoekers kiezen voor andere anesthetica om de hersteltijd van de dam te minimaliseren. Inhalatie van isofluraan kan bijvoorbeeld helpen de hersteltijd te verkorten, aangezien dieren doorgaans snel herstellen na het staken van isofluraan22. Hoewel deze keuze voor anesthesie door velen wordt uitgevoerd 13,23, wordt gemeld dat inhalatie van isofluraan een negatieve invloed kan hebben op de hoeveelheid verzamelde melk13. Bovendien vereist de inhalatie van isofluraan geschikte apparatuur om een nauwkeurige regeling van de dosering te garanderen. Onderzoek naar de effecten van anesthetica zoals ketamine/xylazine en isofluraan op de lactatie en de melksamenstelling en hun mogelijke overdracht naar moedermelk is beperkt 24,25,26. Het wordt daarom geadviseerd om de gegevensinterpretatie zorgvuldig uit te voeren bij het vergelijken van onderzoeken met verschillende anesthesiekeuzes. Een ander alternatief is om melk te proeven zonder verdoving, zoals beschreven door andere onderzoekers 14,27,28,29. Deze procedure kan echter mogelijk overmatige stress voor de moeder veroorzaken en een extra persoon vereisen om het dier in bedwang te houden.

Deze studie toonde ook aan dat macronutriëntentesten konden worden uitgevoerd met behulp van de melkmonsters, waarbij een overschot overbleef voor meer procedures zoals omics-analyses. Het lactose-, eiwit- en vetgehalte in melk werd gemeten en vergeleken met gepubliceerde gegevens om de beschreven methode te valideren. De lactoseconcentratie in melk was goed voor ~1,2% van de melkcomponent, wat vergelijkbaar is met die van muizen op een controledieet die in andere onderzoeken werden gerapporteerd 30,31,32. Er werd bevestigd dat muizenmelk een hoog vetpercentage bevatte, variërend van 26% tot 33%, zoals eerder gerapporteerd 20,30. De totale eiwitconcentratie die hier werd gerapporteerd, was vergelijkbaar met die gerapporteerd door Chen et al.30, maar lager dan die gerapporteerd in andere studies31,32. In termen van veranderingen van vroege naar pieklactatie, ontdekten we dat lactose- en eiwitniveaus relatief constant bleven, maar dat het melkvetpercentage toenam van vroege naar pieklactatie. Dit is in strijd met Ragueneau32, maar de discrepantie kan te wijten zijn aan verschillen in steekproefomvang. Hoewel de totale eiwitconcentratie vergelijkbaar was tussen vroege en pieklactatie, ontdekten we dat de individuele eiwitovervloed (αS1-caseïne, β-caseïne en weizuur) varieerde, vermoedelijk als gevolg van veranderingen in de behoeften van de pasgeborenen in verschillende ontwikkelingsstadia.

Hoewel deze techniek het niet mogelijk maakt de melkproductie te kwantificeren, kan dit worden berekend aan de hand van de prestatie-index (IOP) die Falconer in 194733 voorstelde. De melkproductie is sterk afhankelijk van de worpgrootte en de dag van bemonstering. Deze index kan worden gebruikt als een meting van de melkproductie, waarbij rekening wordt gehouden met verschillen in strooiselgrootte. Zo kan bijvoorbeeld het hele strooisel worden gewogen op PD10 (wanneer het moederdier wordt gescheiden voor melkbemonstering). De IOD van een moeder wordt dan berekend door het gewicht van haar nest te delen door het gemiddelde gewicht van nesten van dezelfde grootte op PD10. Concluderend demonstreren we een efficiënte eenpersoonstechniek voor het bemonsteren van melk van laboratoriummuizen met behulp van een apparaat dat eenvoudig kan worden geassembleerd met relatief goedkope en gemakkelijk verkrijgbare apparatuur. Deze techniek maakt het mogelijk om voor de meeste analyses consequent voldoende hoeveelheden melk te verzamelen.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs hebben geen belangenconflicten te onthullen.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit werk werd ondersteund door NJAES Hatch Project 14190 en NIH R21HD 108496.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
1 mL cryogenic vialsCorning430658Voorkeur voor vroege melkverzameling
1 mL spuitExel26048
2 mL microcentrifuge verzamelbuisFisher Scientific02-681-344Voorkeur voor piek- en late melkverzameling
18 G hypodermische naaldBD PrecisionGlide305195
27 G hypodermische naaldBD PrecisionGlide305109
Alcohol prep doekHoneywell154818
Bio-Rad Protein Assay Dye Reagent ConcentrateBio-Rad5000006
Bovine Serum AlbuminSigma-AldrichA2153
Immobilon -P PVDF MembraanImmobilonIPVH00010
KetamineDechra1000001250Gekocht via Veterinair Kantoor 
Laboratorium etiketteringstapeVWR International89097
Lactose Assay KitSigma-AldrichMAK487
Mini Barbed polypropyleen fittingenCole-Parmer Instrument Company6365-90
MuisdieetLab Diet5015
NuPAGE Bis-Tris Mini Protein Gels, 4–12%InvitrogenNP0335BOX
Optixcare Eye LubeAventixN/AGekocht via Veterinair Kantoor 
OxytocinBimeda1OXY015Gekocht via Veterinair Kantoor 
P200 pipette tipsGilsonF1733001
PVC buis: 1/8'' IDVWR InternationalMFLX07407-75 
PVC buis: 5/32'' IDVWR InternationalMFLX07407-77
Septum stopperChemglass Life SciencesCG-3022-91
VacuumpompDrummond Scientific Co.P-103635
XylazineAkorn Animal HealthNDC 59399-110-20Gekocht via Veterinair Kantoor 

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Ericsson, A. C., Crim, M. J., Franklin, C. L. A brief history of animal modeling. Mo Med. 110 (3), 201-205 (2013).
  2. Bryda, E. C. The mighty mouse: The impact of rodents on advances in biomedical research. Mo Med. 110 (3), 207-211 (2013).
  3. Watford, M., Erbelding, E. J., Smith, E. M. Glutamine metabolism in rat small intestine: Response to lactation. Biochem Soc Trans. 14 (6), 1058-1059 (1986).
  4. Robinson, A. M., Williamson, D. H. Comparison of glucose metabolism in the lactating mammary gland of the rat in vivo and in vitro. Effects of starvation, prolactin or insulin deficiency. Biochem J. 164 (1), 153-159 (1977).
  5. Kowalski, T. J., Wu, G., Watford, M. Rat adipose tissue amino acid metabolism in vivo as assessed by microdialysis and arteriovenous techniques. Am J Physiol. 273 (3 Pt 1), E613-E622 (1997).
  6. Ashcroft, S. P., et al. Protocol to assess arteriovenous differences across the liver and hindlimb muscles in mice following treadmill exercise. STAR Protoc. 4 (1), 101985(2023).
  7. Hallemeesch, M. M., Ten Have, G. A., Deutz, N. E. Metabolic flux measurements across portal drained viscera, liver, kidney and hindquarter in mice. Lab Animal. 35 (1), 101-110 (2001).
  8. Le, H., Nguyen, M., Manso, H. E. C., Wang, M. D., Watford, M. Adipocytes are the only site of glutamine synthetase expression within the lactating mouse mammary gland. Curr Dev Nutr. 8 (6), 102168(2024).
  9. Giordano, A., Smorlesi, A., Frontini, A., Barbatelli, G., Cinti, S. White, brown and pink adipocytes: The extraordinary plasticity of the adipose organ. Eur J Endocrinol. 170 (5), R159-R171 (2014).
  10. Knight, C. H., Maltz, E., Docherty, A. H. Milk yield and composition in mice: Effects of litter size and lactation number. Comp Biochem Physiol A Comp Physiol. 84 (1), 127-133 (1986).
  11. Willingham, K., et al. Milk collection methods for mice and reeves' muntjac deer. J Vis Exp. (89), e51007(2014).
  12. Muranishi, Y., et al. Method for collecting mouse milk without exogenous oxytocin stimulation. Biotechniques. 60 (1), 47-49 (2016).
  13. Gómez-Gallego, C., et al. A method to collect high volumes of milk from mice (mus musculus). Anales de Veterinaria de Murcia. 29, 55-61 (2014).
  14. DePeters, E. J., Hovey, R. C. Methods for collecting milk from mice. J Mammary Gland Biol Neoplasia. 14 (4), 397-400 (2009).
  15. Oxytocin- oxytocin injection. , https://dailymed.nlm.nih.gov/dailymed/fda/fdaDrugXsl.cfm?setid=a9b62187-4141-487c-a9da-f42ad7f9b408&type=display (2019).
  16. Lucas, A., Gibbs, J. A., Lyster, R. L., Baum, J. D. Creamatocrit: Simple clinical technique for estimating fat concentration and energy value of human milk. Br Med J. 1 (6119), 1018-1020 (1978).
  17. Paul, H. A., Hallam, M. C., Reimer, R. A. Milk collection in the rat using capillary tubes and estimation of milk fat content by creamatocrit. J Vis Exp. (106), e53476(2015).
  18. Ernst, O., Zor, T. Linearization of the Bradford protein assay. J Vis Exp. (38), e1918(1918).
  19. Hueso, D., Fontecha, J., Gomez-Cortes, P. Comparative study of the most commonly used methods for total protein determination in milk of different species and their ultrafiltration products. Front Nutr. 9, 925565(2022).
  20. Anderson, S. M., Rudolph, M. C., Mcmanaman, J. L., Neville, M. C. Key stages in mammary gland development. Secretory activation in the mammary gland: It's not just about milk protein synthesis. Breast Cancer Res. 9 (1), 204(2007).
  21. Meier, H., Hoag, W. G., Mcburney, J. J. Chemical characterization of inbred-strain mouse milk. I. Gross composition and amino acid analysis. J Nutr. 85 (3), 305-308 (1965).
  22. Hohlbaum, K., et al. Severity classification of repeated isoflurane anesthesia in c57bl/6jrj mice-assessing the degree of distress. PLoS One. 12 (6), e0179588(2017).
  23. Weaver, S. R., et al. Serotonin deficiency rescues lactation on day 1 in mice fed a high fat diet. PLoS One. 11 (9), e0162432(2016).
  24. Statement on resuming breastfeeding after anesthesia. , Committee on Obstetric Anesthesia. https://www.asahq.org/standards-and-practice-parameters/statement-on-resuming-breastfeeding-after-anesthesia (2009).
  25. Lee, J. J., Rubin, A. P. Breast feeding and anaesthesia. Anaesthesia. 48 (7), 616-625 (1993).
  26. Reece-Stremtan, S., Campos, M., Kokajko, L. Academy of Breastfeeding, M. Abm clinical protocol #15: Analgesia and anesthesia for the breastfeeding mother, revised 2017. Breastfeed Med. 12 (9), 500-506 (2017).
  27. Oosting, A., Verkade, H. J., Kegler, D., Van De Heijning, B. J., Van Der Beek, E. M. Rapid and selective manipulation of milk fatty acid composition in mice through the maternal diet during lactation. J Nutr Sci. 4, e19(2015).
  28. Silverman, J., Stone, D. W., Powers, J. D. The lipid composition of milk from mice fed high or low fat diets. Lab Animal. 26 (2), 127-131 (1992).
  29. Rodgers, C. T. Practical aspects of milk collection in the rat. Lab Animal. 29 (4), 450-455 (1995).
  30. Chen, Y., et al. Effect of high-fat diet on secreted milk transcriptome in midlactation mice. Physiol Genomics. 49 (12), 747-762 (2017).
  31. Kucia, M., et al. High-protein diet during gestation and lactation affects mammary gland mrna abundance, milk composition and pre-weaning litter growth in mice. Animal. 5 (2), 268-277 (2011).
  32. Ragueneau, S. Early development in mice. Iv: Quantity and gross composition of milk in five inbred strains. Physiol Behav. 40 (4), 431-435 (1987).
  33. Falconer, D. S. Milk production in mice. J Agric Sci. 37 (3), 224-235 (1947).

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Milk SamplingLaboratory MiceLactation ResearchRodent Milk CollectionSingle Person TechniqueMilk MacronutrientsOxytocin AdministrationVacuum Pump MethodMammary GlandMilk Protein Analysis

Gerelateerde artikelen