Het protocol maakt gebruik van een niet-invasieve ontlastingsbemonstering in combinatie met een kwantitatieve polymerasekettingreactie om een gemakkelijke en snelle diagnostische methode te bieden voor Helicobacter pylori-infectie en de resistentie tegen claritromycine en chinolonen.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Detectie van Helicobacter pylori-infectie en antibioticaresistentie via ontlasting Kwantitatieve polymerasekettingreactieanalyse
* These authors contributed equally
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Helicobacter pylori (H. pylori) komt wereldwijd veel voor, waarbij ongeveer 50% van de wereldbevolking een voorgeschiedenis heeft van H. pylori-infectie . In China varieert het infectiepercentage van 40% tot 70%. H. pylori wordt voornamelijk geassocieerd met gastro-intestinale aandoeningen zoals chronische gastritis, maagzweren en zweren aan de twaalfvingerige darm. Momenteel omvat de klinische behandeling van H. pylori-infectie drievoudige of viervoudige therapie. Het uitgebreide gebruik van antibiotica heeft echter geleid tot de ontwikkeling van antibioticaresistentie bij H. pylori. Daarom is het detecteren van zowel H. pylori als zijn antibioticaresistentie cruciaal voor het begeleiden van de klinische behandeling.
Diagnostische methoden voor H. pylori zijn onder meer ureumademtest (UBT), antigeentest, serologische antilichaamtest, endoscopie, snelle ureasetest (RUT) en bacteriecultuur. Hoewel de eerste drie methoden niet-invasief zijn, laten ze geen bacterieel herstel toe en kunnen ze dus niet worden gebruikt voor resistentietesten. De laatste drie methoden zijn invasief, duur, vereisen een hoge technische expertise en kunnen schade toebrengen aan patiënten.
Daarom is een niet-invasieve, snelle methode voor gelijktijdige detectie van H. pylori-infectie en antibioticaresistentie van het grootste klinische belang voor de effectieve uitroeiing van H. pylori. Dit artikel heeft tot doel een specifiek protocol te introduceren dat kwantitatieve polymerasekettingreactie (qPCR) combineert met TaqMan fluorescerende sondetechnologie om H. pylori-infectie en antibioticaresistentie snel te detecteren. Deze methode biedt een handige, snelle en niet-invasieve manier om H. pylori-infectie en -resistentie te diagnosticeren, in tegenstelling tot traditionele bacteriecultuur en andere technieken. qPCR wordt gebruikt om de infectie te identificeren en mutaties te detecteren in de 23S rRNA- en gyrA-genen , die verband houden met resistentie tegen respectievelijk claritromycine en chinolonen. In vergelijking met conventionele kweektechnieken biedt deze aanpak een niet-invasieve, kosteneffectieve en tijdbesparende methode voor het detecteren van Helicobacter pylori-infectie en het bepalen van de antibioticaresistentie.
Inleiding
Helicobacter pylori is een gramnegatieve, spiraalvormige bacterie die het menselijke maagepitheel1 aanhoudend kan infecteren. In 1994 classificeerde de Wereldgezondheidsorganisatie H. pylori als een kankerverwekkende stof van groep 1 voor maagkanker, waarbij ~3% van de geïnfecteerde personen uiteindelijk de ziekte ontwikkelde2. Een recent gepubliceerde systematische review heeft aangegeven dat er in het afgelopen decennium een algemene trend van verhoogde antibioticaresistentie van H. pylori is waargenomen, die wereldwijd alarmerende niveaus heeft bereikt, met name claritromycineresistentie3. In China toonden de laatste onderzoeksgegevens aan dat de totale prevalentie van H. pylori onder stedelijke Chinezen 27,08% is; de resistentiepercentages voor claritromycine en levofloxacine waren 50,83% en 47,17%4, wat hoger is dan in de Verenigde Staten (levofloxacine 37,6%, claritromycine 31,5%)5en Europa (levofloxacine 15,8% en claritromycine 21,4%)6. Daarom zijn een vroege en nauwkeurige diagnose en behandeling cruciaal. De toenemende antibioticaresistentie van H. pylori vermindert echter aanzienlijk de werkzaamheid van de behandeling, wat de dringende noodzaak benadrukt van doorlopend onderzoek naar de diagnose en behandeling ervan.
De diagnostische methoden van H. pylori zijn onderverdeeld in invasieve en niet-invasieve technieken7. Invasieve methoden omvatten histopathologisch onderzoek, snelle ureasetest (RUT) en bacteriecultuur8. Histopathologisch onderzoek is gebaseerd op de verwerking en microscopische observatie van biopsiemonsters, waarbij de nauwkeurigheid wordt beperkt door histologische voorbereiding en pathologie-expertise9. RUT detecteert H. pylori door de activiteit van urease, dat ureum hydrolyseert om ammoniak te produceren, wat resulteert in een alkalische verschuiving in het reagens, wat de aanwezigheid van de bacterie9 aangeeft. Het is eenvoudig en kosteneffectief. Bacteriecultuur, beschouwd als de "gouden standaard", heeft vaak een slagingspercentage van minder dan 50% vanwege de unieke fysiologische kenmerken van H. pylori10.
Niet-invasieve methoden omvatten de 13C/14C ureumademtest (UBT), serologische diagnose en ontlastingsantigeentesten (SAT)11. De ademtest werkt volgens een principe dat vergelijkbaar is met dat van RUT, waarbij isotopisch gelabelde CO2 in uitgeademde lucht wordt gedetecteerd om infectie12 te bevestigen. Serologische diagnose detecteert antilichamen die kunnen aanhouden na uitroeiing van bacteriën, waardoor het moeilijk wordt om de effectiviteit van de behandeling te beoordelen13. Ontlastingsantigeentesten detecteren H. pylori-specifieke antigenen in fecale monsters, wat een betrouwbare niet-invasieve methode oplevert met een lager percentage valse positieven en een goede nauwkeurigheid voor het diagnosticeren van actieve infecties14.
Elke diagnostische methode heeft zijn voordelen en beperkingen15. Afgezien van bacteriecultuur worstelen andere methoden met het detecteren van antibioticaresistentie, terwijl cultuur wordt belemmerd door lage slagingspercentages16. Onlangs zijn moleculaire diagnostische methoden zoals real-time kwantitatieve PCR (qPCR) op grote schaal toegepast op microbiële detectie17. qPCR kan H. pylori nauwkeurig detecteren en resistentiegenmutaties analyseren, waardoor een uitgebreider beeld van de infectie wordt geboden18.
Fluorescerende sondes zijn ontworpen om tijdens het qPCR-proces specifiek te binden aan een doelsequentie in het DNA. Deze sondes zijn meestal gelabeld met een fluorescerende kleurstof, die een signaal afgeeft wanneer de sonde zich aan zijn doelwit bindt en tijdens de amplificatie wordt gesplitst door het polymerase. Dit zorgt voor een real-time meting van het PCR-proces. Fluorescerende sondes staan bekend om hun hoge specificiteit vanwege het unieke ontwerp van de sonde, dat ervoor zorgt dat alleen de doel-DNA-sequentie wordt gedetecteerd, waardoor de kans op niet-specifieke binding wordt verkleind en de testspecificiteit wordt verbeterd. Dit maakt fluorescerende sondetechnologie vooral nuttig voor het detecteren van doelen met een lage abundantie, zoals Helicobacter pylori-DNA in ontlastingsmonsters. Hoewel SYBR Green een veelgebruikte DNA-bindende kleurstof is in PCR, kan het zich binden aan dubbelstrengs DNA, wat kan resulteren in niet-specifieke amplificatie en valse positieven.
Het kweken van Helicobacter pylori uit klinische monsters levert geen directe gegevens over antibioticaresistentie op. Daarentegen is qPCR op basis van fluorescerende sondes sneller, handiger en kan het worden aangepast voor gelijktijdige detectie van H. pylori en antibioticaresistentiemarkers. Deze methode levert niet alleen snellere resultaten op dan traditionele kweekmethoden, maar maakt ook de gelijktijdige detectie van antibioticaresistentiegenen mogelijk, waardoor de detectie-efficiëntie en het gemak aanzienlijk worden verbeterd. Deze methode biedt een handige, snelle en niet-invasieve manier om H. pylori-infectie en -resistentie te diagnosticeren, in tegenstelling tot traditionele bacteriecultuur en andere technieken.
Er zijn twee cruciale kwesties waarmee rekening moet worden gehouden bij resistentie tegen H. pylori: i) de consistentie van genotype en fenotype, ii) de multiresistentie. Een grootschalig multicenter onderzoek in China wees uit dat de dubbele resistentiepatronen voor claritromycine/levofloxacine 26,1% waren. De fenotypes en genotypen van claritromycine en levofloxacine-resistente H pylori vertoonden een bevredigende overeenkomst (kappa-coëfficiënt = respectievelijk 0,810 en 0,782)19. Daarom is het haalbaar om de qPCR-methode te gebruiken om H. pylori-infectie en resistentie tegen geneesmiddelen te detecteren. Ontlastingsantigeentest (SAT) en qPCR-methoden worden steeds vaker gebruikt vanwege het gemak van bemonstering. De gevoeligheid, specificiteit en nauwkeurigheid van de methoden voor de detectie van H. pylori zijn als volgt: qPCR > UBT > SAT > RUT> CagA IgG > cultuur20. Alle niet-invasieve methoden zijn geschikt voor primaire screening. Aangezien qPCR bovendien genen voor geneesmiddelresistentie kan detecteren, zullen qPCR en cultuur geschikter zijn voor het begeleiden van de behandeling.
Andere innovatieve benaderingen, zoals algoritmen voor kunstmatige intelligentie (AI) in combinatie met endoscopische beelden21, digitale microfluïdica22 en RPA-CRISPR/Cas12a23, laten theoretisch een goede diagnostische efficiëntie en veelbelovende toepassingsperspectieven zien. qPCR is momenteel echter de meest geavanceerde moleculair-biologische techniek met het potentieel om een superieure oplossing te bieden voor de diagnose en behandeling van H. pylori-infecties .
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Deze studie voldoet aan de ethische richtlijnen die zijn opgesteld door de ethische commissie van het Guangdong Provincial People's Hospital, Southern Medical University, Guangzhou, China (goedkeuringsnummer: KY2024-445-01). Gedetailleerde informatie over de materialen die in dit onderzoek zijn gebruikt (reagentia, chemicaliën, apparatuur en software) is te vinden in de Materiaaltabel.
1. Selectie van deelnemers
- Kies deelnemers in de leeftijdscategorie van 18 tot 60 jaar.
- Kies deelnemers die mogelijk een Helicobacter pylori-infectiescreening ondergaan, zoals patiënten met symptomen zoals gastritis, maagzweren of dyspepsie, evenals asymptomatische personen.
- Sluit patiënten uit van het onderzoek die in de afgelopen maand antibiotica, bismutbevattende middelen (zoals kaliumbismutcitraatcapsules, colloïdale bismutpectinecapsules of tabletten met bismut-aluminiumverbinding) of antimicrobiële Chinese geneesmiddelen hebben gebruikt, of degenen die protonpompremmers of H2-receptorantagonisten (zoals omeprazol, pantoprazol, rabeprazol, cimetidine of nizatidine) hebben gebruikt in de afgelopen 2 weken. Sluit ook vrouwen tijdens hun menstruatie uit van het onderzoek.
2. Afname van fecale monsters
OPMERKING: Geef sectie 2 als instructies aan de deelnemers.
- Controleer of de buitenverpakking van de bemonsteringskit onbeschadigd is en binnen de houdbaarheidsdatum is. Verwijder de materialen uit de set.
- Leg een wit ontlastingspapier in de toiletpot en poep (om besmetting met urine te voorkomen).
- Verzamel met een spatel een deel uitwerpselen ter grootte van een tuinboon (~5 g) en doe deze in de monstercontainer.
- Plaats de bemonsteringsspatel samen met het fecale monster in de verzamelbuis en zorg ervoor dat het vloeistofniveau stijgt tot in de buurt van de bemonsteringslijn die op de buis is aangegeven.
- Draai de buisdop stevig vast. Keer de tube meerdere keren om om ervoor te zorgen dat het monster grondig wordt gemengd met de conserveermiddeloplossing.
- Bewaar het monster in de koelkast tot levering aan het klinische laboratorium voor de volgende identificatie van H. pylori en beoordeling van antibioticaresistentieprofielen via qPCR.
3. Nucleïnezuur-extractie
OPMERKING: Voltooi alle procedures in een bioveiligheidskast om besmetting te voorkomen.
- Keer de conserveringsbuis van het monster om en meng grondig. Breng 1,0 ml van de fecale monsteroplossing over in een microcentrifugebuis.
- Na het mengen van de centrifugebuisjes plaatst u ze gedurende 10 minuten in een metalen bad bij 80 °C, met intermitterend mengen gedurende 30 s in de vijfde minuut. Zodra de buizen zijn afgekoeld tot kamertemperatuur, centrifugeren ze gedurende 5 minuten bij 10.000 × g en verzamelt u het bovenstaande voor verdere verwerking.
- Keer de plaat met 96 putjes meerdere keren om om de magnetische kralen opnieuw te suspenderen. Verwijder voorzichtig de aluminiumfolieafdichting en zorg ervoor dat u niet schudt om morsen te voorkomen.
- Voeg 200 μL van het voorbereide monster (uit stap 3.2) toe aan elk putje van de plaat met 96 putjes met lysisbuffer en zorg ervoor dat elk putje overeenkomt met een enkel monster. Plaats de plaat met 96 putjes in het daarvoor bestemde monstercompartiment van het nucleïnezuurextractie-instrument voor geautomatiseerde extractie.
- Bewaar de resterende monsters en de geëxtraheerde nucleïnezuurmonsters bij -20 °C voor langdurige bewaring en toekomstig gebruik.
4. qPCR Detectie van Helicobacter pylori-nucleïnezuren en resistentiemutaties tegen claritromycine en chinolonen
- Haal de reagentia uit de opslagruimte voor reagentia en ontdooi ze bij kamertemperatuur.
OPMERKING: Deze kit werd gebruikt voor de kwalitatieve detectie van H. pylori-nucleïnezuur, inclusief mutaties in het 23S rRNA-gen (A2143G, A2143C, A2144G) en het gyrA-gen (261A, 261G, 260T, 271A, 271T, 272G). De primers, de sondes, het Taq-enzym, het UNG-enzym en de dNTP's waren beschikbaar in de kit. De doelgenen van H. pylori en humaan β-actine werden opgenomen in de positieve kwaliteitscontrole. Het menselijke β-actine-gen werd gekozen als interne kwaliteitscontrole. - Gebruik op basis van het aantal te testen monsters N + 2 kopieën van het gevriesdroogde reagens, waarbij N staat voor het aantal te testen monsters en 2 voor de negatieve en positieve QC's.
- Centrifugeer kort om ervoor te zorgen dat het gevriesdroogde poeder op de bodem van de buizen bezinkt. Open het deksel van het gevriesdroogde reagens (zorg ervoor dat het poeder niet wordt gemorst) en voeg 25 μl per putje van de geëxtraheerde nucleïnezuren uit de te testen monsters toe, evenals de positieve en negatieve controles. Sluit de buizen goed af.
- Draai de PCR-reagentia gedurende 8-10 s en centrifugeer vervolgens kort gedurende 3-5 s om belvorming te voorkomen.
- Plaats de qPCR-plaat met 96 putjes op de qPCR-machine. Stel het cyclusprogramma als volgt in: incubeer eerst het reactiemengsel (met primers, sondes, Taq-polymerase, UNG-enzym, dNTP's, enz.) bij 42 °C en 95 °C (beide stappen in één cyclus) gedurende 2 minuten; cyclus vervolgens 10x met 10 s bij 95 °C en 45 s bij 65 °C; Cyclus ten slotte 35x met 10 s bij 95 °C en 45 s bij 58 °C voor denaturatie, gloeien en verlengen.
- Stel de detectieparameters voor het fluorescentiesignaal als volgt in: ROX fluorescerende labeling van H. pylori-geconserveerde genen; FAM fluorescerende labeling van H. pylori claritromycine resistentiegenen; HEX fluorescerende labeling van H. pylori-chinolonresistentiegenen; en CY5 fluorescerende labeling van het menselijke β-actine-gen werden gebruikt als interne controle van de kit. Verzamel gegevens bij 58 °C. Zorg er na voltooiing van de reactie voor dat de gegevens worden opgeslagen voor toekomstige analyse.
- Analyseer de gegevens met behulp van qPCR-specifieke software, aangezien het instrument automatisch de basislijndrempel selecteert. Stel alle diagnostische criteria, inclusief de aanwezigheid van Helicobacter pylori-infectie of resistentie, in op een CT-waarde ≤30; bevestigen dat ze een karakteristieke S-vormige curve vertonen.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Toepassing van qPCR voor detectie van Helicobacter pylori-infectie en antibioticaresistentie in fecale monsters
We ontwierpen primers en probes op basis van puntmutaties in de geconserveerde genen van Helicobacter pylori, evenals in het 23S rRNA-gen en het gyrA-gen . Deze primers en sondes werden gelabeld met verschillende fluorescerende kleurstoffen en vervolgens gebruikt vo...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
In de afgelopen jaren zijn moleculaire detectiemethoden op grote schaal toegepast op het gebied van microbiologie, waardoor de klinische behandeling van verschillende infectieziekten aanzienlijk is veranderd. Deze methoden werken op genetisch niveau, waardoor niet alleen de aanwezigheid van bacteriën kan worden bevestigd, maar ook gentypering en antibioticaresistentietesten. Real-time fluorescentie kwantitatieve PCR (qPCR) heeft steeds meer de voorkeur vanwege de korte verwerkingstijd, h...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende belangen hebben.
Dankbetuigingen
Deze studie werd gefinancierd door de Research Foundation for Advanced Talents van het Guangdong Provincial People's Hospital [Grant No. KY012023293]. Dit werk werd ondersteund door Jiangsu Mole Bioscience Co. De financiers hadden geen rol in de opzet van het onderzoek, het verzamelen en analyseren van gegevens, de beslissing om te publiceren of de voorbereiding van het manuscript.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| BSC-1500IIA2-X | BIOBASE | SEDA 20143222263 | Biosafety cabinet |
| Disposable fecal collection and storage tube | Mole | Collect fecal specimens | |
| E-Centrifuge | WEALTEC | Centrifuge the residual liquid off the wall of the tube | |
| Helicobacter pylori nucleic acid, clarithromycin, and quinolone resistance mutation detection kit | Mole | Detection of Helicobacter pylori infection and antibiotic resistance; freeze-dried H. pylori reagent (containing primers, probes, Taq polymerase, UNG enzyme, dNTPs, etc.), a positive control for H. pylori (containing Helicobacter pylori and human β-actin target genes), and a negative control for H. pylori (containing human β-actin target genes) | |
| Mole 96M automated nucleic acid extractor | Mole | For DNA extraction | |
| Nucleic acid extraction kit | Mole | To extract nucleic acid; contains lysis buffer (guanidine salt, tris hydroxymethyl aminomethane, Tween-20, sodium chloride), Wash Buffer 1 (sodium chloride), Wash Buffer 2 (tris hydroxymethyl aminomethane, Tween-20), Wash Buffer 3 (magnetic beads, Tween-20), Wash Buffer 4 (nuclease-free water), and Elution Buffer (tris hydroxymethyl aminomethane), along with a magnetic rack | |
| SLAN Fully automatic medical PCR analysis system | HONGSHI | Data Analysis | |
| SLAN-96S Real-Time PCR machine | HONGSHI | Fluorescent quantitative PCR amplification | |
| Ultra-low temperature freezers (DW-YL450) | MELING | SEDA 20172220091 | -20 °C for storing reagents |
| Vortex-5 | Kylin-bell | For mixing reagent |
Referenties
- Yuan, C., et al. The global prevalence of and factors associated with Helicobacter pylori infection in children: a systematic review and meta-analysis. Lancet Child Adolesc Health. 6 (3), 185-194 (2022).
- Watari, J., et al. Helicobacter pylori associated chronic gastritis, clinical syndromes, precancerous lesions, and pathogenesis of gastric cancer development. World J Gastroenterol. 20 (18), 5461-5473 (2014).
- Yu, Y., et al. Global primary antibiotic resistance rate of Helicobacter pylori in recent 10 years: A systematic review and meta-analysis. Helicobacter. 29 (3), e13103(2024).
- Wang, L., et al. cross-sectional surveillance of Helicobacter pylori prevalence and antibiotic resistance to clarithromycin and levofloxacin in urban China using the string test coupled with quantitative PCR. Lancet Microbe. 5 (6), e512-e513 (2024).
- Ho, J. J. C., Navarro, M., Sawyer, K., Elfanagely, Y., Moss, S. F. Helicobacter pylori antibiotic resistance in the United States between 2011 and 2021: A systematic review and meta-analysis. American J Gastroenterol. 117 (8), 1221-1230 (2022).
- Megraud, F., et al. Helicobacter pylori resistance to antibiotics in Europe in 2018 and its relationship to antibiotic consumption in the community. Gut. 70 (10), 1815-1822 (2021).
- Guevara, B., Cogdill, A. G. Helicobacter pylori: A review of current diagnostic and management strategies. Dig Dis Sci. 65 (7), 1917-1931 (2020).
- Rotimi, O., Cairns, A., Gray, S., Moayyedi, P., Dixon, M. F. Histological identification of Helicobacter pylori: Comparison of staining methods. J Clin Pathol. 53 (10), 756-759 (2000).
- Lim, L. L., Ho, K. Y., Ho, B., Salto-Tellez, M. Effect of biopsies on sensitivity and specificity of ultra-rapid urease test for detection of Helicobacter pylori infection: A prospective evaluation. World J Gastroenterol. 10 (13), 1907-1910 (2004).
- Hortelano, I., Moreno, Y., Vesga, F. J., Ferrús, M. A. Evaluation of different culture media for detection and quantification of H. pylori in environmental and clinical samples. Int Microbiol. 23 (4), 481-487 (2020).
- Wang, Y. K., et al. Diagnosis of Helicobacter pylori infection: Current options and developments. World J Gastroenterol. 21 (40), 11221-11235 (2015).
- Gisbert, J. P., Pajares, J. M. Review article: 13C-Urea breath test in the diagnosis of Helicobacter pylori infection -- a critical review. Aliment Pharmacol Ther. 20 (10), 1001-1017 (2004).
- Laheij, R. J., Straatman, H., Jansen, J. B., Verbeek, A. L. Evaluation of commercially available Helicobacter pylori serology kits: A review. J Clin Microbiol. 36 (10), 2803-2809 (1998).
- Gisbert, J. P., Pajares, J. M. Stool antigen test for the diagnosis of Helicobacter pylori infection: A systematic review. Helicobacter. 9 (4), 347-368 (2004).
- Benigno, T. G. D. S., et al. pylori primary strains and virulence genotypes in the Northeastern region of Brazil. Rev Inst Med Trop Sao Paulo. 64, e47(2022).
- Savoldi, A., Carrara, E., Graham, D. Y., Conti, M., Tacconelli, E. Prevalence of antibiotic resistance in Helicobacter pylori: A systematic review and meta-analysis in World Health Organization regions. Gastroenterology. 155 (5), 1372-1382.e17 (2018).
- Kalach, N., et al. Usefulness of gastric biopsy-based real-time polymerase chain reaction for the diagnosis of Helicobacter pylori infection in children. J Pediatr Gastroenterol Nutr. 61 (3), 307-312 (2015).
- Han, X., et al. Quantitative PCR of string-test collected gastric material: A feasible approach to detect Helicobacter pylori and its resistance against clarithromycin and levofloxacin for susceptibility-guided therapy. Helicobacter. 28 (4), e12985(2023).
- Zhong, Z., et al. A retrospective study of the antibiotic-resistant phenotypes and genotypes of Helicobacter pylori strains in China. Am J Cancer Res. 11 (10), 5027-5037 (2021).
- Hussein, R. A., Al-Ouqaili, M. T. S., Majeed, Y. H. Detection of Helicobacter pylori infection by invasive and non-invasive techniques in patients with gastrointestinal diseases from Iraq: A validation study. PloS One. 16 (8), e0256393(2021).
- Bang, C. S., Lee, J. J., Baik, G. H. Artificial intelligence for the prediction of Helicobacter pylori infection in endoscopic images: Systematic review and meta-analysis of diagnostic test accuracy. J Med Internet Res. 22 (9), e21983(2020).
- Liu, J., et al. Rapid and multi-target genotyping of Helicobacter pylori with digital microfluidics. Biosens Bioelectron. 256, 116282(2024).
- Liu, H., Wang, J., Hu, X., Tang, X., Zhang, C. A rapid and high-throughput Helicobacter pylori RPA-CRISPR/Cas12a-based nucleic acid detection system. Clin Chim Acta. 540, 117201(2023).
- Fan, C. J., et al. Diagnostic accuracy of a real-time PCR assay for detection of Helicobacter pylori and resistance to clarithromycin and levofloxacin directly from stool. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 28 (12), 3836-3840 (2024).
- Patel, S. K., Pratap, C. B., Jain, A. K., Gulati, A. K., Nath, G. Diagnosis of Helicobacter pylori: what should be the gold standard. World J Gastroenterol. 20 (36), 12847-12859 (2014).
- Celiberto, F., et al. The state of the art of molecular fecal investigations for Helicobacter pylori (H. pylori) antibiotic resistances. Int J Mol Sci. 24 (5), 4361(2023).
- Yang, H., Hu, B. Diagnosis of Helicobacter pylori infection and recent advances. Diagnostics. 11 (8), 1305(2021).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
