Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Identificatie van PD-1/PD-L1-remmers met Surface Plasmon Resonance-technologie

1.5K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/67859

⸱

2 mei 2025

 ,  ,  ,  , 
1Department of Biomedical and Pharmaceutical Sciences, College of Pharmacy, University of Rhode Island

In dit artikel

Samenvatting

Dit protocol beschrijft een blokkadetest voor PD-1/PD-L1-remmers met behulp van oppervlakteplasmonresonantietechnologie. Het maakt gebruik van een immobilisatiestrategie in twee stappen en een op maat gemaakt buffersysteem om responseenheden nauwkeurig te meten, waardoor de beoordeling van blokkadesnelheden voor verbindingen of biologische geneesmiddelen wordt vergemakkelijkt. Bovendien ondersteunt het de high-throughput identificatie van PD-1/PD-L1-remmers.

Samenvatting

De verstoring van de PD-1/PD-L1-interactie is een veelbelovende strategie voor kankerimmunotherapie. Betrouwbare screeningplatforms zijn essentieel voor het evalueren van de werkzaamheid van PD-1/PD-L1-remmers. Een eerder gevestigde menselijke PD-1/PD-L1-blokkadetest met behulp van Surface Plasmon Resonance (SPR)-technologie (PD-1/PD-L1-remmer SPR-screeningplatform van de eerste generatie) toonde resultaten aan die vergelijkbaar zijn met die verkregen via homogene, time-resolved fluorescence (HTRF) en celgebaseerde assays, met potentieel voor grootschalige screening. Hierin wordt een geoptimaliseerde versie van deze test (tweede generatie PD-1/PD-L1-remmer SPR-screeningplatform) gepresenteerd, met een tweestaps koppelingsproces dat amine- en bio-streptavidine-koppeling combineert om de PD-1-oriëntatiecontrole op de chip te verbeteren en het PD-1-eiwitverbruik te verminderen. Het bijgewerkte platform werd met succes gevalideerd met behulp van de PD-1/PD-L1-remmer BMS-1166, waarbij blokkade-effecten werden vertoond die vergelijkbaar zijn met de vorige op SPR gebaseerde methode en andere gevestigde technieken zoals ELISA. Deze resultaten bevestigen de betrouwbaarheid van de aanpak. Dit geoptimaliseerde SPR-screeningplatform biedt een betrouwbare tool met hoge doorvoer voor het identificeren van nieuwe PD-1/PD-L1-remmers, het bevorderen van onderzoek naar immunotherapie bij kanker en het benadrukken van het potentieel van SPR bij screening op immuuncheckpointremmers.

Inleiding

Immuuncontrolepuntblokkadetherapieën, met name die gericht op geprogrammeerde celdood-1 (PD-1) en geprogrammeerde celdood-ligand 1 (PD-L1), lopen voorop bij immunotherapiestrategieën bij kanker. Anti-PD-1/PD-L1-therapieën zijn goedgekeurd voor gebruik bij verschillende soorten kanker, zoals hematologische, huid-, long-, lever-, urineblaas- en nierkanker1. PD-1 is een transmembraanglycoproteïne dat behoort tot de immunoglobuline-superfamilie, gekenmerkt door een enkel immunoglobulinevariabel (IgV)-achtig domein aan het N-terminal, een stengel van ongeveer 20 aminozuren die het IgV-domein scheidt van het plasmamembraan, een transmembraandomein en een cytoplasmatische staart die op tyrosine gebaseerde signaalmotieven bevat2. PD-L1, geïdentificeerd als een van de liganden voor PD-1, is een type I transmembraaneiwit met een transmembraangebied, twee extracellulaire domeinen - immunoglobulineconstante (IgC) en IgV - en een relatief kort cytoplasmatisch domein dat intracellulaire signaalroutes activeert3. De PD-1/PD-L1-remmende route dient als een kritisch immuuncontrolepunt dat de activering van T-cellen en auto-immuniteit reguleert4. PD-1 wordt tot expressie gebracht op T-cellen, waar het interageert met PD-L1, de signalering van T-celreceptoren remt en de stimulatie van CD28- en CD80-moleculen op antigeenpresenterende cellen en T-cellenblokkeert 5. Kankerweefsels maken gebruik van dit fysiologische mechanisme door PD-L1 tot overexpressie te brengen tijdens de ontsnappingsfase, waardoor een immunosuppressieve omgeving wordt gecreëerd die tumorgroei en -progressie bevordert6. Remmers van PD-1 en PD-L1 verstoren deze interactie, waardoor het immuunsysteem tumorgeïnduceerde onderdrukking kan ontwijken en het T-cel-gemedieerde tumorceldoodproces opnieuw kan initiëren7.

Voortbouwend op de basis die is gelegd door de prominente rol van therapieën voor immuuncheckpointblokkade, heeft de ontwikkeling van PD-1/PD-L1-remmers een aanzienlijke vooruitgang geboekt in de immunotherapie bij kanker. De Amerikaanse Food and Drug Administration (FDA) heeft negen immuuncheckpointremmers goedgekeurd die specifiek gericht zijn op de PD-1/PD-L1-route. Deze omvatten zes PD-1-remmers - pembrolizumab, dostarlimab, nivolumab, cemiplimab, oripalimab en tislelizumab - en drie PD-L1-remmers - atezolizumab, avelumab en durvalumab 8,9. Deze therapieën zijn effectief gebruikt voor de behandeling van een verscheidenheid aan vormen van kanker, zoals melanoom, longkanker, urotheelkanker, baarmoederhalskanker, maag- of gastro-oesofageale kanker en andere solide tumoren10. Ondanks hun werkzaamheid hebben therapieën op basis van monoklonale antilichamen te maken met aanzienlijke beperkingen, waaronder lage responspercentages, hoge kosten, verlengde halfwaardetijden, ernstige immuungerelateerde bijwerkingen en beperkingen op intraveneuze of subcutane toediening 11,12,13. Het onderzoek richt zich dan ook steeds meer op de ontwikkeling van kleinmolecuulremmers die gericht zijn op de PD-1/PD-L1-as. Deze kleine moleculen bieden duidelijke voordelen, zoals verbeterde cellulaire penetratie, modulatie van diverse biologische doelen, verbeterde orale biologische beschikbaarheid en lagere kosten, met als doel vergelijkbare therapeutische resultaten te bereiken met minder nadelige effecten14. De ontwikkeling van kleine molecuulremmers die gericht zijn op de PD-1/PD-L1-interactie bevindt zich echter in een vroeg stadium, voornamelijk vanwege het ontbreken van een betrouwbaar high-throughput screeningplatform. Dergelijke platforms zijn essentieel voor het snel evalueren van enorme bibliotheken van kleine moleculen en het identificeren van leadverbindingen voor verdere validatie en optimalisatie. Het overwinnen van deze uitdaging is van cruciaal belang voor het bevorderen van immunotherapie bij kanker.

Surface Plasmon Resonance (SPR)-technologie wordt op grote schaal gebruikt bij het detecteren van verschillende biomoleculen, waaronder antilichaamantigenen, enzymen, nucleïnezuren en medicijnen, en is bijzonder effectief bij het screenen van geneesmiddelen met kleine moleculen15,16. In tegenstelling tot andere biofysische technieken biedt SPR labelvrije detectie, real-time kinetische gegevens en een breed detectiebereik. Isothermische titratiecalorimetrie daarentegen mist real-time kinetische inzichten en vereist grotere monstervolumes, waardoor de doorvoer wordt beperkt. Thermoforese op microschaal is gevoelig voor bufferinterferentie en kan geen kinetische gegevens leveren, terwijl biolaaginterferometrie toepassingsspecifieke beperkingen heeft op basis van moleculaire grootte en eigenschappen. Homogene, in de tijd opgeloste fluorescentie vereist etikettering en is gevoelig voor fluorescerende interferentie. We erkennen dat HTRF een andere geschikte technologie is om PD-1/PD-L1-remmers te onderzoeken. Een inherente beperking van HTRF, vergeleken met SPR, is fluorescentie-afschrikking veroorzaakt door externe interacties met het intramoleculaire excitatieproces (bijv. elektronenoverdracht, FRET en bleken), de gevoeligheid is te laag in het screeningproces van geneesmiddelen vanwege het kleine vensterbereik en interferentie van fluorescerende bibliotheekverbindingen of biologische eiwitten17. Deze kenmerken positioneren SPR als een superieur hulpmiddel voor het ontdekken van geneesmiddelen. Onze eerdere studies hebben aangetoond dat SPR in staat is om het blokkade-effect van kleine moleculen tegen PD-1/PD-L1 te bepalen, wat voordelig is ten opzichte van andere technieken die hoge etiketteringstechnologie-eisen, meerdere stappen, slechte specificiteit en hoge kosten in het ontdekkingsproces van geneesmiddelen vereisen18.

Deze studie introduceert een geoptimaliseerd SPR-gebaseerd platform, dat een tweestaps koppelingsproces integreert dat zowel amine- als bio-streptavidine-koppeling gebruikt om de PD-1-oriëntatie op de chip te verbeteren en het eiwitgebruik te minimaliseren. Deze bijgewerkte aanpak werd met succes gevalideerd met behulp van de PD-1/PD-L1-remmer BMS-1166 als een bindmiddel voor positieve controle, waarbij blokkade-effecten werden aangetoond die vergelijkbaar zijn met zowel onze vorige SPR-methode als andere gevestigde technieken zoals ELISA19,20. Dit bevestigt niet alleen de betrouwbaarheid en reproduceerbaarheid van ons protocol, maar illustreert ook de effectiviteit van ons aangepaste platform bij het faciliteren van high-throughput screening van PD-1/PD-L1-remmers. De integratie van de bio-streptavidine-opnamestap zorgt voor plaatsgerichte in plaats van willekeurige eiwitoriëntatie, waardoor een verminderde PD-1-concentratie mogelijk is (40 μg/ml versus 10 μg/ml) en kostenbesparingen door de eindgebruiker in staat te stellen streptavidine (SA) te immobiliseren op een CM5-chip, een goedkoper alternatief voor gecommercialiseerde pre-geïmmobiliseerde SA-chips. Dit maakt het voordelig voor grootschalige, kosteneffectieve screenings van verbindingen/peptidebibliotheken. Hoewel aanvullende karakteriseringsmethoden, waaronder in silico, in vitro en in vivo assays, essentieel zijn om het klinische potentieel van PD-1/PD-L1-remmers tegen kanker te evalueren, onderscheidt ons verbeterde SPR-gebaseerde screeningplatform zich als een efficiënt hulpmiddel voor grootschalige screening van PD-1/PD-L1-remmers.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

De reagentia en apparatuur staan vermeld in de materiaaltabel.

1. Immobilisatie van het streptavidine (SA) eiwit op de CM5-chip

  1. Stel de immobilisatiemethode in op het SPR-instrument: Open/nieuw wizardsjabloon , kies immobilisatie, stel het chiptype in op CM5 en stroomcellen per cyclus op 1. Controleer immobiliseer stroomcel 1 en stroomcel 2.
    1. Stel amine in als de immobilisatiemethode. Stel doel in op geïmmobiliseerd niveau, ligandconcentratie: 40 μg/ml streptavidine, streefniveau: 2000 RU, wasoplossing: 50 mM NaOH. Controleer vervolgens de prime-toets voordat u gaat hardlopen.
  2. Bereid de volgende buisjes voor: R2 B1 en R2 C1 - 40 μg/ml streptavidine; R2 B2 en R2 C2: 50 mM NaOH; R2 B3 en R2 C3: EDC; R2 B4 en R2 C4: NHS; R2 B5 en R2 C5: leeg; R2 B6 en R2 C6: ethanolamine.
    OPMERKING: EDC en NHS activeren de carboxylgroepen op de CM5-chip, waardoor covalente koppeling met amines op de ligand mogelijk is. Ethanolamine wordt gebruikt als een blokkerende buffer om niet-specifieke binding tijdens immobilisatie te voorkomen.
  3. Verdun 20 ml HBS-EP+ buffer 10× in 180 ml gedeïoniseerd (DI) water om 200 ml 1× HBS-EP+ lopende bufferoplossing te bereiden.
  4. Voeg 1 ml DNase-vrij water toe aan 1 mg streptavidine en incubeer gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur. Verdun vervolgens de streptavidineoplossing tot 40 μg/ml in acetaatbuffer (pH 4,5). Bereid de reagentia van de aminekoppelingsreagensset voor volgens de instructies van de fabrikant en plaats alle relevante lay-outs van de reagentia zoals aangegeven in stap 1.2.
  5. Vervang de onderhoudssensorchip door de CM5-chip, plaats vervolgens buis A in de voorbereide 1× HBS-EP+-buffer, open de immobilisatiemethode opnieuw en plaats de buizen volgens de lay-out van stap 1.2. Voer de methode uit en sla het resultatenbestand op.
  6. Onderhoud na het gebruik: vervang de CM5-chip door de onderhoudssensorchip, plaats buis A in een fles gevuld met gedeïoniseerd water en laat de prime draaien. Nadat u de CM5-chip hebt verwijderd, wast u de chip met een paar druppels DI-water en laat u deze aan de lucht drogen. Plaats de chip in een buis van 50 ml bij 4 °C.
    OPMERKING: De geïmmobiliseerde SA zorgt ervoor dat de CM5-chip kan functioneren als een SA-chip.

2. Immobilisatie van PD-1-eiwit op de SA-chip

  1. Stel de immobilisatiemethode in op het SPR-instrument: Open/nieuw wizardsjabloon , kies immobilisatie, stel het chiptype in op SA en stroomcellen per cyclus op 1. Controleer immobiliseer stroom cel 1 en cel 2.
    1. Stel SA-biotine-afvang in als methode. Voor cel 1 set blanco immobilisatie, voor cel 2 set streef naar geïmmobiliseerd niveau, 10 μg/ml PD-1 als ligand, streefniveau: 4000 RU, controleer vervolgens prime voordat u gaat hardlopen.
      OPMERKING: Bereid de volgende buizen voor - R2 B1 en R2 C1: 1 M NaCl, 50 mM NaOH; R2 B2 en R2 C2: 50% isopropanol/50 mM NaOH/1 m NaCl; R2 C3: 10 µg/mL PD-1.
  2. Los 58,44 mg NaCl op in 1 ml 50 mM NaOH om de 1 M NaCl en 50 mM NaOH-oplossing te bereiden. Los 58,44 mg NaCl en 4,0 mg NaOH op in 500 μl water en voeg vervolgens 500 μl isopropanol toe om de 50% isopropanol/50 mM NaOH/1 M NaCl-oplossing te bereiden.
  3. Bereid PD-1-oplossing voor: Voeg 200 μL DNase-vrij water toe aan 100 μg gebiotinyleerd humaan PD-1 (Fc en Avitagged) en stabiliseer gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur, verdun vervolgens tot 10 μg/ml in acetaatbuffer (pH 5.0).
  4. Plaats alle reagenslay-outs zoals beschreven in stap 2.1. Plaats buis A in de 1× HBS-EP+ lopende bufferoplossing, werp vervolgens de onderhoudssensorchip uit en plaats de SA-chip (CM5-chip gecoat met streptavidine-eiwit uit stap 1). Open de immobilisatiemethode opnieuw, plaats reagensrek 2 en controleer de posities en voer vervolgens de methode uit voor de geschatte looptijd.
  5. Herhaal stap 1.6.

3. Regeneratie scouting voor PD-1 en PD-L1

  1. Stel de regeneratiescoutingmethode in: Open/nieuw wizardsjabloon , kies Regeneratiescouting, stel het stroompad in: 2-1, 4-3, chiptype op SA, controleer de conditioneringscyclus, registreer de oplossing als HBS-EP+, contacttijd als 30 s, aantal injecties als 3, oplossing als PD-L1, contacttijd: 30 s, debiet: 30 μL/min.
    1. Voor regeneratieparameters is het debiet 30 μL/min en de stabilisatieperiode is 300 s. Stel in het experimentele ontwerp het aantal voorwaarden in op 4 en het aantal cycli voor elke aandoening op 2. Stel de voorwaarden in op 4, regeneratieoplossing: Glycine 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, contacttijden: 30 s, controleer vervolgens de prime voordat u gaat hardlopen.
  2. Stel elke PD-L1-concentratie in als een afzonderlijke positie van het monsterputje in een microplaatlay-out met 96 putjes: R1 A1 tot R1 A9: 1 μM PD-L1; R1 A10 tot R1 A12: HBS-EP+ buffer; R1 B1: Glycine 1,5; R1 B2: Glycine 2; R1 B3: Glycine 2,5; R1 B4: Glycine 3.
    OPMERKING: Glycinebuffer met verschillende pH wordt gebruikt als regeneratiebuffer.
  3. Bereid PD-L1-oplossing voor: Voeg 200 μL DNase-vrij water toe aan 100 μg humaan PD-L1 Fc Tag-eiwit (9,42 μM) en verdun vervolgens tot 1 μM in HBS-EP+-buffer.
  4. Plaats alle relevante reagentia in de lay-out zoals beschreven in stap 3.2. Plaats buis A in de 1× HBS-EP+-buffer en vervang vervolgens de onderhoudssensorchip door de SA-chip. Open de regeneratiescoutingmethode opnieuw, volg de buispositie uit stap 3.2, plaats het reagensrek en voer vervolgens de methode uit voor de geschatte gebruiksduur.
  5. Herhaal stap 1.6.

4. Validatie van de PD-1/PD-L1-interactie

LET OP: Ter validatie is een eerder gepubliceerd rapport18 gevolgd met kleine aanpassingen.

  1. Gebruik dezelfde parameters als in het gepubliceerde rapport onder Algemene instellingen, Teststappen en Cyclustypen, stel de contacttijd in op 60 s, de dissociatietijd op 60 s en het debiet op 30 μL/min. Gebruik onder methodevariabelen, evaluatievariabelen en commando's dezelfde instelling, behalve voor het gebruik van Glycine 2.0 als regeneratie, stel het debiet in op 30 μL/min, doorloopt het stroompad van 1, 2, 3, 4.
    1. Stel vervolgens Run in en kies het stroompad: 2-1, 4-3. Voer PD-L1 in met concentraties van 0 μM, 0,037 μM, 0,111 μM, 0,333 μM en een molecuulgewicht van 51.300 Da. Controleer alle teststappen ter verificatie en selecteer prime voor de run.
    2. Stel vervolgens elke PD-L1-concentratie in als een afzonderlijke positie van een monsterputje in een reagensrack 2-lay-out: R2 B1: PD-L1 0 μM; R2 B2: PD-L1 0,037 μM; R2 B3: PD-L1 0,111 μM; R2 B4: PD-L1 0,333 μM; R2 A1: Glycine 2.0 als regeneratiebuffer; R2 A2: HBS-EP+ als opstartbuffer.
  2. Bereid 200 ml 1× HBS-EP+ lopende bufferoplossing voor. Bereid PD-L1-concentraties voor: verdun het PD-L1-eiwit bij 9,42 μM tot 0,333 μM, 0,111 μM en 0,037 μM in HBS-EP+. Plaats vervolgens alle relevante reagentia in de lay-out zoals beschreven in stap 4.1.2.
    1. Plaats buis A in de 1× HBS-EP+ lopende bufferoplossing, werp de onderhoudssensorchip uit en plaats de SA-chip. Open de regeneratieverkenningsmethode opnieuw, volg de plaatsing van de buis uit stap 4.1, plaats reagensrek 2 en voer de methode uit voor de geschatte duur.
  3. Herhaal stap 1.6.

5. PD-1/PD-L1 blokkadetest met kleine molecuulremmer: BMS-1166

LET OP: Voor de blokkadetest is een eerder gepubliceerd rapport18 gevolgd met kleine aanpassingen.

  1. Gebruik dezelfde parameters als in het gepubliceerde rapport onder Algemene instellingen, Teststappen en Cyclustypen, stel de contacttijd in op 60 s, de dissociatietijd op 60 s en het debiet op 30 μL/min. Onder methodevariabelen, evaluatievariabelen en commando's wordt ook dezelfde instelling gebruikt, behalve voor het gebruik van Glycine 2.0 als regeneratie, stel het debiet in op 30 μL/min, doorloopt het stroompad van 1, 2, 3, 4.
    1. Stel vervolgens de run in en kies het stroompad: 2-1, 4-3. Voer de monsteroplossing in: PD-L1 (0.111 μM, molecuulgewicht van 51.300 Da) met BMS-1166 bij 0 μM, 0.125 μM, 0.625 μM, 3.125 μM. Controleer alle teststappen ter verificatie en selecteer prime voor de run.
    2. Stel vervolgens elke PD-L1-concentratie in als een afzonderlijke positie van een monsterputje in een reagensrack 2-lay-out: R2 B1: PD-L1 (0,111 μM) + BMS-1166 0 μM R2 B2: PD-L1 (0,111 μM) + BMS-1166 0,125 μM; R2 B3: PD-L1 (0,111 μM) + BMS-1166 0,625 μM; R2 B4: PD-L1 (0,111 μM) + BMS-1166 3,125 μM; R2 A1: Glycine 2.0 voor regeneratie.
  2. Bereid 200 ml 1× HBS-EP+ lopende bufferoplossing voor. Bereid het BMS-1166/PD-L1-mengsel: Los 5 mg BMS-1166 op in 77,99 μL dimethylsulfoxide (DMSO) om een voorraadoplossing van 100 mM te bereiden. Verdun de stockoplossing met PD-L1-eiwit (0,11 μM) tot de doelconcentraties van BMS-1166 bij 0 μM, 0,125 μM, 0,625 μM en 3,125 μM in HBS-EP+. Plaats alle relevante lay-outs van de reagentia zoals beschreven in stap 5.1.2.
    1. Plaats buis A in de 1× HBS-EP+ lopende bufferoplossing, werp vervolgens de onderhoudssensorchip uit en plaats de SA-chip. Open de regeneratieverkenningsmethode opnieuw, volg de buispositie vanaf 5.1 en plaats reagensrek 2 en voer vervolgens de methode uit voor de geschatte looptijd.
  3. Herhaal stap 1.6.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Immobilisatie van SA op CM5-chip
Gegevens werden geanalyseerd via de output van het SPR-instrument en de bijbehorende analysesoftware die aangaven dat de beoogde RU (2000 RU) van SA-eiwit op flowcel 1 en flowcel 2 met succes is bereikt. Flowcellen 1 en 2 werden geïmmobiliseerd met SA (40 μg/ml) op het oppervlak van de CM5-chip met een eindrespons van 1902,3 RU op flowcel 1 (Figuur 1A) en 1900,7 RU op flowcel 2 (

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

In de afgelopen decennia hebben verschillende immunotherapiebenaderingen, waaronder kankervaccins, immuuncheckpointremmers en CAR T-celtherapieën, de behandeling van kanker aanzienlijk verbeterd21. Immuuncontrolepunten spelen een cruciale rol bij het voorkomen van door immuuncellen gemedieerde nevenschade tijdens pathogene reacties en bij het onderdrukken van auto-immuniteit. Een belangrijk voorbeeld is de interactie tussen PD-L1 en PD-1, die een belangrijk immuun...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

De auteurs erkennen de RI-INBRE-kernfaciliteit aan de Universiteit van Rhode Island, ondersteund door Grant P20GM103430 van het National Center for Research Resources (NCRR), een onderdeel van de National Institutes of Health (NIH). Dit onderzoek werd ondersteund door een Pilot Grant Award van het College of Pharmacy aan de Universiteit van Rhode Island, een Small Grant Award van de Rhode Island Life Science Hub (RILSH) en een Rhode Island Foundation-beurs, allemaal toegekend aan Chang Liu, Ph.D.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
50 mM NaOHCytiva Life Sciences100358
50 mM NaOHFisher Scientific905376
96-Well Polystyrene MicroplatesCytiva Life SciencesBR100503
Amine Coupling KitCytiva Life Sciences35120
Biacore T200 SPR System and Evaluation Software 3.2Cytiva Life Sciences28975001
Biotinylated Human PD-1 Fc, Avitag ProteinAcro BiosystemsPD1-H82F1
BMS1166MedChemExpressHY-102011
Dimethyl Sulfoxide (DMSO)Sigma-Aldrich276855
DNase Free WaterFisher Scientific188506
Glycine 1.5Cytiva Life SciencesBR100354
Glycine 2.0Cytiva Life SciencesBR100355
Glycine 2.5Cytiva Life SciencesBR100356
Glycine 3.0Cytiva Life SciencesBR100357
HBS-EP+ BufferCytiva Life SciencesBR100669
Human PD-L1 Fc Tag ProteinAcro BiosystemsPD-1-H5258
IsopropanolFisher ScientificBP2618-1
Microplate Foil, 96-Well Cytiva Life Sciences28975816
NaClSigma-Aldrich746398
Plastic Vials 7 mmCytiva Life SciencesBR100212
Rubber Caps, Type 3Cytiva Life SciencesBR100502
Series S Sensor Chip CM5Cytiva Life Sciences29149603
Sodium Acetate 4.5Cytiva Life Sciences100350
Sodium Acetate 5.0Cytiva Life Sciences100351
StreptavidinSigma-AldrichS4762

Referenties

  1. Ribas, A., Wolchok, J. D. Cancer immunotherapy using checkpoint blockade. Science. 359 (6382), 1350-1355 (2018).
  2. Zhang, X., et al. Structural and functional analysis of the costimulatory receptor programmed death-1. Immunity. 20 (3), 337-347 (2004).
  3. Freeman, G. J., et al. Engagement of the PD-1 immunoinhibitory receptor by a novel B7 family member leads to negative regulation of lymphocyte activation. J Exp Med. 192 (7), 1027-1034 (2000).
  4. Han, Y., Liu, D., Li, L. PD-1/PD-L1 pathway: Current researches in cancer. Am J Cancer Res. 10 (3), 727-742 (2020).
  5. Lyu, N., et al. Recognition of PDL1/L2 by different induced-fit mechanisms of PD1: A comparative study of molecular dynamics simulations. Phys Chem Chem Phys. 22 (3), 1276-1287 (2020).
  6. Taube, J. M., et al. Colocalization of inflammatory response with B7-H1 expression in human melanocytic lesions supports an adaptive resistance mechanism of immune escape. Sci Trans Med. 4 (127), 127ra37(2012).
  7. Sun, X., et al. Immune-related adverse events associated with programmed cell death protein-1 and programmed cell death ligand 1 inhibitors for non-small cell lung cancer: A PRISMA systematic review and meta-analysis. BMC Cancer. 19 (1), 558(2019).
  8. Alkholifi, F. K., Alsaffar, R. M. Dostarlimab an inhibitor of PD-1/PD-L1: A new paradigm for the treatment of cancer. Medicina. 58 (11), 1572(2022).
  9. Uzar, W., et al. An updated patent review on PD-1/PD-L1 antagonists (2022-present). Expert Opin Ther Pat. 34 (8), 627-650 (2024).
  10. Ai, L., et al. Research status and outlook of PD-1/PD-L1 inhibitors for cancer therapy. Drug Des Devel Ther. 14, 3625-3649 (2020).
  11. Conroy, M., Naidoo, J. Immune-related adverse events and the balancing act of immunotherapy. Nat Commun. 13 (1), 392(2022).
  12. Guzik, K., et al. Small-molecule inhibitors of the Programmed Cell Death-1/Programmed Death-Ligand 1 (PD-1/PD-L1) interaction via transiently induced protein states and dimerization of PD-L1. J Med Chem. 60 (13), 5857-5867 (2017).
  13. Sifniotis, V., Cruz, E., Eroglu, B., Kayser, V. Current advancements in addressing key challenges of therapeutic antibody design, manufacture, and formulation. Antibodies. 8 (2), 36(2019).
  14. Beck, H., Härter, M., Haß, B., Schmeck, C., Baerfacker, L. Small molecules and their impact in drug discovery: A perspective on the occasion of the 125th anniversary of the Bayer Chemical Research Laboratory. Drug Discov Today. 27 (6), 1560-1574 (2022).
  15. Nguyen, H. H., Park, J., Kang, S., Kim, M. Surface plasmon resonance: A Versatile technique for biosensor applications. Sensors (Basel, Switzerland). 15 (5), 10481-10510 (2015).
  16. Liu, C., Seeram, N. P., Ma, H. Small molecule inhibitors against PD-1/PD-L1 immune checkpoints and current methodologies for their development: A review. Cancer Cell Int. 21 (1), 239(2021).
  17. Hu, K., Li, X. -J., Asmamaw, M. D., Shi, X. -J., Liu, H. -M. Establishment of high-throughput screening HTRF assay for identification small molecule inhibitors of Skp2-Cks1. Sci Rep. 11 (1), 21105(2021).
  18. Puopolo, T., et al. Establishment of human PD-1/PD-L1 blockade assay based on surface plasmon resonance (SPR) biosensor. Bio-protoc. 13 (15), e4765(2023).
  19. Ding, M., Chen, Y., Lang, Y., Cui, L. The role of cellular prion protein in cancer biology: A potential therapeutic target. Front Oncol. 11, 742949(2021).
  20. Li, H., Seeram, N. P., Liu, C., Ma, H. Further investigation of blockade effects and binding affinities of selected natural compounds to immune checkpoint PD-1/PD-L1. Front Oncol. 12, 995461(2022).
  21. Kamrani, A., et al. New immunotherapeutic approaches for cancer treatment. Pathol Res Pract. 248, 154632(2023).
  22. Yan, Y., Zhang, L., Zuo, Y., Qian, H., Liu, C. Immune checkpoint blockade in cancer immunotherapy: mechanisms, clinical outcomes, and safety profiles of PD-1/PD-L1 inhibitors. Arch Immunol Ther Exp. 68 (6), 36(2020).
  23. Chandrasekharan, G., Unnikrishnan, M. High throughput methods to study protein-protein interactions during host-pathogen interactions. Eur J Cell Biol. 103 (2), 151393(2024).
  24. Zhang, Y., et al. BMS-202, a PD-1/PD-L1 inhibitor, decelerates the profibrotic effects of fibroblasts derived from scar tissues via ERK and TGFβ1/Smad signaling pathways. Immun Inflamm Dis. 10 (1), e591(2022).
  25. Surmiak, E., et al. PD-L1 inhibitors: Different classes, activities, and mechanisms of action. Int J Mol Sci. 22 (21), 11797(2021).
  26. Feoli, A., Sarno, G., Castellano, S., Sbardella, G. DMSO-Related effects on ligand-binding properties of lysine methyltransferases G9a and SETD8. ChemBioChem. 25 (4), e202300809(2024).
  27. Tjernberg, A., Markova, N., Griffiths, W. J., HalléN, D. DMSO-Related effects in protein characterization. SLAS Discov. 11 (2), 131-137 (2006).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Tags

PD 1 remmersSPR screeningimmuuncheckpointkankerimmunotherapiebindingsaffiniteitblokkade assayhigh throughput screeningBMS 1166
Identificatie van PD-1/PD-L1-remmers met Surface Plasmon Resonance-technologie
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.