Methodenartikel

Gewijzigde Most Probable Number Assay om salmonella in rauwe en kant-en-klare kipproducten te kwantificeren

1.4K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/67910

⸱

31 januari 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Characterization and Interventions for Foodborne Pathogens, Eastern Regional Research Center, Agricultural Research Service (ARS), United States Department of Agriculture (USDA)

In dit artikel

Samenvatting

Het nauwkeurig kwantificeren van Salmonella in pluimvee op lage niveaus is een huidige industriële en regelgevende uitdaging. Dit protocol beschrijft een MPN-test die kwantificering van Salmonella in rauwe en kant-en-klare pluimveeproducten mogelijk maakt. Deze methode is snel, gevoelig en sluit aan bij de FSIS-richtlijnen, waardoor de voedselveiligheid wordt verbeterd en de inspanningen op het gebied van de volksgezondheid worden ondersteund.

Samenvatting

Salmonella is een belangrijke oorzaak van door voedsel overgedragen ziekten in de Verenigde Staten, met name in pluimveeproducten. Traditionele methoden voor het detecteren van Salmonella richten zich op prevalentie in plaats van kwantificering, wat hun bruikbaarheid bij het beoordelen van besmettingsniveaus en risico's beperkt. Deze studie introduceert een nieuwe Most Probable Number (MPN)-test die is ontworpen om Salmonella te kwantificeren in kant-en-klare pluimveeproducten, zoals kip cordon bleu. De methode omvat het wassen van het pluimveemonster, het concentreren van de spoeling door middel van centrifugeren en het serieel verdunnen in een blok van 48 putjes. De MPN-test is geïntegreerd met de lus-gemedieerde isotherme amplificatie (LAMP)-methode om een gevoelige, nauwkeurige en snelle kwantificering van salmonellabesmetting te bieden binnen hetzelfde tijdsbestek als de bestaande protocollen van de Food Safety and Inspection Service (FSIS). De resultaten tonen een sterke lineaire correlatie aan tussen de MPN-LAMP-metingen en theoretische inoculatieniveaus (R² = 0,933). Variabiliteit bij lagere concentraties wijst echter op uitdagingen bij het nauwkeurig detecteren van Salmonella op deze niveaus, waarbij de praktische ondergrens van detectie wordt geschat op ongeveer 300 CFU/g. Mogelijke verfijningen om de toepasbaarheid van het protocol te verbeteren, zijn onder meer het verhogen van de bemonsterde hoeveelheid om de detectielimiet verder te verbeteren, het optimaliseren van formuleringen van verrijkingsmedia en het uitbreiden van moleculaire detectie om zich te richten op meerdere Salmonella-serovars. Al met al biedt deze studie een praktisch hulpmiddel voor de voedingsindustrie, waardoor een betrouwbare kwantificering van salmonellabesmetting in pluimveeproducten mogelijk wordt, wat bijdraagt aan een betere voedselveiligheid en volksgezondheid.

Inleiding

Als een belangrijke oorzaak van door voedsel overgedragen ziekten, ziekenhuisopname en overlijden in de VS, heeft Salmonella een aanzienlijke impact op de volksgezondheid en de economie. De geschatte economische last van de ziekteverwekker bedroeg alleen al in 2013 $ 3.67 miljard1. Hoewel recente regelgevingsinitiatieven erop gericht zijn salmonellose tegen 2030 met 25% te verminderen2, blijven er hiaten in de huidige detectie- en mitigatiestrategieën, met name wat betreft het afstemmen van het toezicht op verwerkingsfabrieken op de resultaten van de volksgezondheid3 .

Diepgevroren kant-en-klare pluimveeproducten, die betrokken zijn bij meerdere Salmonella-uitbraken , zijn een grote zorg voor de volksgezondheid. Als reactie hierop heeft de Voedselveiligheids- en Inspectiedienst (FSIS) Salmonella geclassificeerd als een vervalsmiddel in deze producten. Momenteel richt FSIS Microbiology Laboratory Guidebook (MLG) 4.15 zich uitsluitend op het bepalen van de prevalentie van Salmonella in pluimveeproducten4. Volgens deze richtlijn worden de verzamelde monsters gedurende 18-24 uur verrijkt en vervolgens gescreend met behulp van het Moleculair Detectiesysteem (MDS), dat de aan- of afwezigheid van Salmonella identificeert, maar geen inzicht biedt in de mate van besmetting. Hoewel deze aanpak waardevol is voor het detecteren van de aanwezigheid van ziekteverwekkers, biedt het geen kwantitatieve informatie die voedselverwerkers zou kunnen helpen besmettingsrisico's nauwkeuriger in te schatten en gerichte corrigerende maatregelen te nemen.

In deze studie hebben we een methode ontwikkeld om de detectie te vergroten van prevalentie naar kwantificering van microbiële pathogenen. Het is ontworpen voor naadloze integratie in bestaande processen om Salmonella in pluimveeproducten te detecteren met minimale verstoring van de huidige FSIS-protocollen. In plaats van alleen het bulkmonster te verrijken, begint de methode met het wassen van de pluimveeproducten met behulp van media die consistent zijn met de huidige FSIS-methoden. De spoeling wordt vervolgens verdeeld in de eerste kolom van een blok van 48 diepe putten. Seriële verdunningen worden uitgevoerd over de resterende vijf kolommen en het blok wordt gedurende 18-24 uur geïncubeerd, in overeenstemming met het MLG 4.15-protocol. Na incubatie worden de putjes getest op Salmonella en worden de resultaten gebruikt om het meest waarschijnlijke aantal (MPN)5,6 te berekenen. Deze aanpak maakt het mogelijk om de verontreiniging te kwantificeren binnen hetzelfde tijdsbestek als het huidige FSIS-proces, waardoor het een praktische optie is voor zowel industrieel als regelgevend gebruik. Figuur 1 toont een blokdiagram dat de gewijzigde MPN-test samenvat. De figuur omvat foto's die bij specifieke stappen zijn genomen, het blok met 48 putjes dat wordt gebruikt voor verdunning en groei van replicaten, en de drie technieken die worden gebruikt als benchmarks om het meest waarschijnlijke aantal salmonella in gemalen kip te beoordelen. In de eerste fase van deze studie hebben we bestraalde gemalen kip gebruikt om de impact van achtergrondmicroflora en onzekerheid van metingen met betrekking tot geverifieerd inoculum te minimaliseren voordat we het protocol toepasten op niet-doorstraalde kippenmonsters.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

OPMERKING: Alle werkzaamheden in verband met dit protocol moeten worden uitgevoerd in een laboratorium van bioveiligheidsniveau 2 (BSL-2). Indien van toepassing moet dit protocol worden uitgevoerd in een biologische veiligheidskast (BSC) om aseptische omstandigheden te handhaven en het risico van monstercontaminatie of blootstelling van de gebruiker aan microbiële pathogenen te minimaliseren. Gebruik bij het overbrengen van monsters buiten de BSC verzegelde containers om de integriteit van het monster te behouden en morsen te voorkomen in geval van onbedoeld vallen. Bij voorkeur moeten tijdens de hele procedure wegwerpcomponenten worden gebruikt om de kans op kruisbesmetting te verkleinen. In gevallen waarin wegwerpartikelen niet haalbaar zijn, zorg er dan voor dat alle apparatuur en materialen steriel zijn voordat u ze gebruikt. Een goed afvalbeheer is cruciaal; Alle gebruikte wegwerpcomponenten moeten worden weggegooid als biologisch gevaarlijk afval. Autoclaaf herbruikbare materialen vóór hergebruik om een goede sterilisatie en insluiting van potentieel gevaarlijke materialen te garanderen. Het naleven van deze voorzorgsmaatregelen beschermt niet alleen de integriteit van het monster, maar minimaliseert ook het risico van blootstelling van de gebruiker aan microbiële pathogenen.

1. Bereiding van vleesmonsters

  1. Verkrijgen en verwerken van vleesmonsters
    1. Vers vlees
      1. Koop gemalen kip bij de versvleesafdeling van lokale retailers. Breng alle monsters over naar opslag bij 4 °C en verwerk ze binnen 24 uur na ontvangst. Verdeel het vlees aseptisch in monsters van 25 g.
      2. Vacumeer het monster en bestraal het. Hier bestraalde Texas A&M AgriLife National Center for Electron Beam Research vlees dat werd onderworpen aan een dosis van ~25 kGy.
        OPMERKING: Hoewel bestraling in dit onderzoek als controlemaatregel werd gebruikt om de eliminatie van achtergrondmicroflora te garanderen, is het geen vereiste voor het protocol in praktische toepassingen, zoals blijkt uit de niet-bestraalde kant-en-klare producten die in de volgende paragraaf worden gebruikt. In veldomgevingen kunnen alternatieve methoden, zoals selectieve media of specificiteit van moleculaire diagnostiek, mogelijke interferentie van niet-doelwitmicro-organismen aanpakken.
    2. Kant-en-klare kipproducten
      1. Koop kant-en-klare kipproducten bij de diepvriesafdeling van lokale retailers. Aseptisch verdelen in monsters van 25 g.
      2. Verzamel monsters uit het midden van de afzonderlijke stukken om er zeker van te zijn dat alle ingrediënten (bijv. paneermeel en kaas) zijn opgenomen.
  2. Voorbereiding van de media
    1. Bereid gebufferd peptonwater (BPW) voor door 25 g BPW-poeder op te lossen in 1 l nanozuivere H2O.
    2. Bereid platen voor op hersenhartinfusie (BHI). Los hiervoor 37 g BHI-poeder op in 1 L nanopure H2O en voeg 15 g agar toe aan de BHI-oplossing. Steriliseer alle media door gedurende 15 minuten te autoclaveren op 121 °C. Giet 20 tot 25 ml media in petrischaaltjes met doorzichtig deksel (100 mm x 15 mm).
      OPMERKING: Het is het beste om de platen in een biologische veiligheidskast te gieten om aseptische omstandigheden te behouden.

2. Celcultuur

  1. Bereid de eerste cultuur voor door Salmonella enterica serovar Typhimurium ATCC 14028 op een BHI-agarplaat te strooien en een nacht bij 37 °C te incuberen.
  2. Bereid nachtculturen voor door 25 ml BHI-bouillon te inoculeren met een kolonie vers geteelde Salmonella. Aëroob kweken culturen 's nachts bij 37 °C met schudden bij 100 tpm.

3. Inoculatie van pluimveemonsters

  1. Cultuur verdunning en plating
    1. Bereid een reeks 10-voudige verdunningen van de nachtcultuur in BPW om eindconcentraties van ongeveer 1 x 108 tot 1 x 101 CFU/ml te bereiken. Stel dat de concentratie van de Salmonella nachtcultuur 1 x 109 CFU/ml is.
    2. Breng 0,5 ml van de nachtcultuur over in 4,5 ml BPW, meng en breng vervolgens 0,5 ml van de verdunning over in 4,5 ml BPW voor elke extra verdunning.
      1. Verdeel 10 μL van de verdunning 1 x 103 CFU/ml op een BHI-agarplaat in drievoud voor celtelling om de nachtelijke cultuurconcentratie te berekenen.
  2. Inoculatie van vleesmonsters
    1. Breng aseptisch 25 g doorstraalde gemalen kip in tweevoud over in een steriele maagzak. De tas is 7.5 x 12 inch en is gelabeld als 1.63 L. De zak bevat een filterschot met een gatdiameter van 330 μm, en er zijn er 285 per vierkante cm.
    2. Inoculeer elk monster met 1 ml van de verdunning van de doelconcentratie. Voeg bijvoorbeeld 1 ml cultuur toe uit de verdunning van 1 x 10³ CFU/ml om een besmettingsniveau van ongeveer 1.000 cellen/25 g kip te bereiken. Verdeel het vloeibare inoculum voorzichtig over het oppervlak van de kippenmonsters met behulp van een steriele celspreider en laat het 1 uur bij 4 °C staan.
    3. Bereid negatieve controlemonsters voor door 1 ml steriel BPW toe te voegen.

4. Verwerking van monsters

  1. Voeg 225 ml BPW toe aan elk monster. De verhouding tussen volume en media werd gekozen om overeen te komen met FSIS MLG 4.154.
  2. Homogeniseer de monsters met behulp van de Stomacher7 met normale snelheid en een duur van 120 s.
  3. Centrifugeren en resuspensie
    1. Verwijder de vloeistof voorzichtig van de gefilterde kant van de zak met behulp van een pipet van 50 ml. Verdeel de vloeistof in twee steriele centrifugeflessen.
    2. Breng de flessen in evenwicht met steriel BPW om gelijke gewichten te garanderen. Centrifugeer de monsters gedurende 10 minuten op 10.000 x g . Gooi het bovenstaande weg. Resuspendeer de celkorrel in 3 ml BPW-bouillon met een steriele spatel.
    3. Voeg nog 27 ml BPW-bouillon toe en meng grondig door te roeren met een spatel. Combineer de inhoud van beide centrifugeflessen in één fles voor elk monster.

5. MPN-blok instellen

OPMERKING: Tabel 1 geeft een schema weer van de verdunningen in een blok van 48 putjes.

  1. Voeg 3 ml van het geresuspendeerde monster toe aan elk putje in kolom 1 van het blok met 48 putjes (8 replicaten).
  2. Bereid een reeks 10-voudige verdunningen voor in de kolommen 1-6 van het blok met behulp van een achtkanaalspipet.
  3. Voeg 0,3 ml monster toe aan 2,7 ml BPW-pipet om te mengen. Herhaal dit voor elke verdunning. Incubeer blokken een nacht (~18 uur) bij 37 °C met schudden bij ~100 tpm.

6. Beplating en opsomming

  1. Gewijzigde opsomming van drop-plate
    1. Plaat 7 μL van een nacht gekweekt monster van elke verdunning in een rooster van 4 x 6 op een agarplaat met behulp van een meerkanaalspipet (figuur 2). Het gebruik van een raster van 4 x 6 op twee platen is beter geschikt voor 8 monsters, in tegenstelling tot het typische 6 x 6 raster van druppels8.
    2. Laat de platen 10 minuten aan de lucht drogen voordat je ze incubeert. Incubeer de agarplaten een nacht (~18-24 uur) bij 37 °C. Tel na incubatie het aantal kolonies op elke plaat.

7. qPCR-detectie van Salmonella

  1. DNA-extractie met behulp van een commerciële kit
    1. Meng culturen in het blok met 48 putjes door meerdere keren op en neer te pipetteren. Pipetteer 200 μL van elke cultuur in een PCR-plaat met 96 putjes.
    2. Sluit de plaat af en centrifugeer de plaat vervolgens gedurende 10 minuten op 6.600 x g . Verwijder het bovenstaande en voeg 20 μL van het kitreagens toe aan de pellet.
    3. Resuspendeer de pellet door op en neer te pipetteren. Sluit de plaat af en verwarm deze gedurende 10 minuten op 99 °C, gevolgd door afkoeling tot 20 °C.
    4. Centrifugeer opnieuw op 6.600 x g gedurende 10 min. Gebruik 2 μL van het bovenstaande voor qPCR-analyse.
  2. Plaat opstelling
    1. Bereid het qPCR-reactiemengsel volgens vastgesteld protocol9 als volgt: 10 μL 2x Master Mix; 0,4 μL van elke primer en sonde (10 μM werkoplossing): invA vooruit: 5'-GTTGAGGATGTTATTCGCAAAGG-3', invA omgekeerd: 5'-GGAGGCTTCCGGGTCAAG-3', invA-sonde: 5'-CCGTCAGACCTCTGGCAGTACCTTCCTC-3' gelabeld met de Cal Fluor Orange 560 fluorenen kleurstof; 0,2 μl IAC-sjabloon (Internal Amplification Control) (6 x 104 kopie/μl)9; 0,4 μL van elke IAC-primer en sonde (10 μM): IAC vooruit: 5'-GGCGCGCCTAACACATCT-3', IAC omgekeerd: 5'-TGGAAGCAATGCCAAATGTGTA-3', IAC-sonde: 5'-TTACAACGGGAAGACAATGCCACCA-3' gelabeld met TAMRA-kleurstof. Pas het volume aan met ddH2O tot 20 μL in totaal.
    2. Voer real-time PCR uit met de volgende cyclusomstandigheden9: 95 °C gedurende 10 minuten (initiële denaturatie van DNA en activering van hot-start polymerase), 40 cycli van 95 °C gedurende 15 s en 60 °C gedurende 1 minuut, gebruik standaard Ct-instellingen om resultaten te exporteren voor analyse.

8. Detectie met behulp van 3M MDS-assay

  1. Volg het protocol van de Salmonella-kit voor moleculaire detectietest. Meng culturen in het blok met 48 putjes door meerdere keren op en neer te pipetteren. Pipetteer 20 μL van elk monster in de door de kit meegeleverde lysisbuis.
  2. Verwarm de monsters gedurende 15 minuten op 100 °C. De oplossing verandert van roze naar geel. Incubeer de monsters gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur. De oplossing verandert van geel naar roze.
  3. Breng 20 μl lysaat over in een reagensbuisje en plaats de reagensbuisjes in de houder.
  4. Voeg de houder toe aan het MDS-instrument en configureer de software om de informatie over de kit en het monster door te geven. Het instrument vereist dat elke put wordt gelabeld met het lotnummer voor de test en een monsternaam. Voer de MDS-software uit en exporteer het rapport.

9. Gegevensanalyse

  1. Classificatie van positieve en negatieve resultaten.
    1. Beoordeel voor 4 x 6 druppelplaten vlekken op agarplaten met ten minste 1 kolonie als positief en vlekken op agarplaten zonder groei als negatief.
    2. Beoordeel voor qPCR putten met een Ct kleiner dan of gelijk aan 30 als positief en putten met een Ct groter dan 30 als negatief.
    3. Gebruik voor MDS de resultaten van het MDS-systeem, gerapporteerd als positief of negatief.
  2. MPN-berekening
    1. Analyseer geannoteerde positieven en negatieven met behulp van de eenvoudige methode voor maximale waarschijnlijkheidsresolutie (SMPR) die eerder is beschreven6 of alternatieve geverifieerde MPN-calculators. 10

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Doorstraald vlees
In de regressieanalyse geeft een helling van 1 aan dat voor elke eenheid toename in de onafhankelijke variabele (x-as), de afhankelijke variabele (y-as) met precies 1 eenheid toeneemt. Dit suggereert een evenredige relatie tussen de twee variabelen, wat betekent dat de verandering in de afhankelijke variabele de verandering in de onafhankelijke variabele weerspiegelt. Een snijpunt van 0 betekent dat wanneer de onafhankelijke variabele 0 is, de afhank...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Betekenis van het protocol
Salmonella blijft een groot probleem op het gebied van voedselveiligheid, met name in pluimveeproducten, die vaak betrokken zijn bij uitbraken van door voedsel overgedragen ziekten13,14. Als een belangrijke oorzaak van bacteriële door voedsel overgedragen ziekten in de Verenigde Staten, zijn betrouwbare methoden voor het detecteren van Salmonella in zowel verse als...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

Alle auteurs verklaren dat er geen sprake is van belangenverstrengeling.

Dankbetuigingen

Dit onderzoek werd ondersteund door het Amerikaanse ministerie van landbouw, Agricultural Research Service (USDA-ARS), National Program 108, Current Research Information System-nummers 8072-42000-093-000-D en 8072-42000-094-000-D. Vermelding van handelsnamen of commerciële producten in dit artikel is uitsluitend bedoeld voor het verstrekken van specifieke informatie en impliceert geen aanbeveling of goedkeuring door het Amerikaanse ministerie van landbouw. USDA is een aanbieder van gelijke kansen en werkgever.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
48 deep well block 4.6mlFisher Scientific International, IncNC1964628
Agar - Solidifying Agent (Difco)Becton, Dickinson and Company (BD)281230
Analytical BalanceMettler ToledoJL602-G/LEquipment 
Analytical BalanceMettler ToledoAB54-SEquipment 
Autoclave - Amsco Lab250, Laboratory Steam SterilizerSteris plcLV-250Equipment 
Biological Safety Cabinet, Type A2, Purifier Logic+Labconco Corporation302411101Equipment 
Brain Heart Infusion (BHI) BrothBecton, Dickinson and Company (BD)237500
Buffered Peptone WaterBio-Rad Laboratories Inc.3564684
Cell Spreader - L-shapedVWR76208-438
Centrifuge Microcentrifuge 5424Eppendorf5424Equipment
Centrifuge, Avanti J-25Beckman Coulter, Inc. Equipment
DNA Extraction - PreMan Ultra Sample Preparation Reagent Thermo Fisher Scientific Inc. 4318930
Ground Chicken Local retailers
IAC forward  primer: 5'-GGCGCGCCTAACACATCT-3'Integrated DNA Technologies 
IAC probe: 5'-TTACAACGGGAGAAGACAATGC
CACCA-3' labeled with 5' TAMRA/3' BHQ-2		Biosearch Technologies
IAC reverse primer: 5'-TGGAAGCAATGCCAAATGTGTA-3'Integrated DNA Technologies 
Incubator - Inova 4230 incubator shakerNew Brunswick Scientific4230Equipment 
Inoculating Loop - Combi Loop  10µL and 1µL Fisher Scientific International, Inc22-363-602
invA forward primer: 5'-GTTGAGGATGTTATTCGCAAAG
G-3'		Integrated DNA Technologies 
invA probe: 5'-CCGTCAGACCTCTGGCAGTAC
CTTCCTC-3' labeled with 5' Cal Fluor Orange 560/3' BHQ-1		Biosearch Technologies
invA reverse primer: 5'-GGAGGCTTCCGGGTCAAG-3'Integrated DNA Technologies 
Irradiation TreatmentTexas A&M Agrilife Research National Center for Electron Beam ResearchService
Luria Bertani (LB) BrothBecton, Dickinson and Company (BD)244620
Manual pipette Pipet-Lite LTS Pipette L-1000XLS+Mettler Toledo17014382Equipment
Manual pipette Pipet-Lite LTS Pipette L-100XLS+Mettler Toledo17014384Equipment
Manual pipette Pipet-Lite LTS Pipette L-10XLS+Mettler Toledo17014388Equipment
Manual pipette Pipet-Lite LTS Pipette L-200XLS+Mettler Toledo17014391Equipment
Manual pipette Pipet-Lite LTS Pipette L-20XLS+Mettler Toledo17014392Equipment
Manual pipette Pipet-Lite Multi Pipette L8-200XLS+Mettler Toledo17013805Equipment
Manual pipette Pipet-Lite Multi Pipette L8-20XLS+Mettler Toledo17013803Equipment
Media Storage Bottle -PYREX 1L Square Glass  Bottle, with GL45 Screw CapCorning Inc.1396-1LEquipment
Media Storage Bottle -PYREX 2L Round Wide Mouth Bottle, with GLS80 Screw CapCorning Inc.1397-2LEquipment
Microtiter plate, 96 well plate, flat bottom, polystyrene, 0.34cm2, sterile, 108/csMilliporeSigmaZ707902
Mixer - Vortex Genie 2Scientific Industries Inc.SI-0236Equipment
Molecular Detection Assay 2-Salmonella kitNeogenMDA2SAL96
Molecular Detection Instrument NeogenMDS100Equipment 
Motorized pipette controller, PIPETBOY2INTEGRA Biosciences Corp.155019Equipment
PCR Mastermix 2× TaqMan Gene Expression Thermo Fisher Scientific Inc. 4369542
Petri Dish Rotator -  bioWORLD Inoculation TurntableFisher Scientific International, Inc3489E20Equipment
Petri Dishes with Clear Lid (100 mm x 15mm)Fisher Scientific International, IncFB0875713
Pipette Tips GP LTS 1000µL S 768A/8Mettler Toledo 30389273
Pipette Tips GP LTS 20µL 960A/10Mettler Toledo30389270
Pipette Tips GP LTS 200µL F 960A/10Mettler Toledo30389276
Ready to cook chicken productsLocal retailers
Reagent Reservoir, 25 mL sterile reservoir used with multichannel pipettorsThermo Fisher Scientific Inc. 8093-11
Realtime PCR - 7500 Real-Time PCR system (Applied Biosystems, Foster City, CA)2750036476Equipment
Serological Pipettes, Nunc Serological Pipettes (10 mL)Thermo Fisher Scientific Inc. 170356N
Serological Pipettes, Nunc Serological Pipettes (2 mL)Thermo Fisher Scientific Inc. 170372N
Serological Pipettes, Nunc Serological Pipettes (25 mL)Thermo Fisher Scientific Inc. 170357N
Serological Pipettes, Nunc Serological Pipettes (50 mL)Thermo Fisher Scientific Inc. 170376N
Spreader - Fisherbrand L-Shaped Cell SpreadersFisher Scientific International, Inc14-665-230
Stomacher bag, Nasco Whirl-Pak Write-On Homogenizer Blender Filter BagsThermo Fisher Scientific Inc. 01

Referenties

  1. Batz, M., Hoffmann, S., Morris, J. G. Disease-outcome trees, eq-5d scores, and estimated annual losses of quality-adjusted life years (qalys) for 14 foodborne pathogens in the united states. Foodborne Pathogens and Disease. 11 (5), 395-402 (2014).
  2. The Grand Challenge: Salmonella. , United States Department of Agriculture. https://tellus.ars.usda.gov/stories/articles/the-grand-challenge-salmonella (2024).
  3. National Advisory Committee on Microbiological Criteria in Foods (NACMCF). Response to questions posed by the food safety and inspection service: Enhancing Salmonella control in poultry products. J Food Prot. 82 (4), 645-668 (2019).
  4. Food Safety and Inspection Service. 4.15 Isolation and identification of Salmonella from meat, poultry, pasteurized egg, siluriformes (Fish) products and carcass and environmental sponges. , (2024).
  5. Irwin, P., Reed, S., Brewster, J., Nguyen, L., He, Y. P. Non-stochastic sampling error in quantal analyses for campylobacter species on poultry products. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 405 (7), 2353-2369 (2013).
  6. Irwin, P., Tu, S., Damert, W., Phillips, J. A modified gauss-newton algorithm and ninety-six well micro-technique for calculating mpn using excel spreadsheets. Journal of Rapid Methods & Automation in Microbiology. 8 (3), 171-191 (2000).
  7. Ravishankar, S. Food microbiology: A laboratory manual. Food Microbiology. Ahmed, E. Y., Carlstrom, C. 21, wiley-interscience. singapore. 489(2004).
  8. Chen, C. Y., Nace, G. W., Irwin, P. L. A 6 x 6 drop plate method for simultaneous colony counting and mpn enumeration of campylobacter jejuni, listeria monocytogenes, and escherichia coli. J Microbiol Methods. 55 (2), 475-479 (2003).
  9. Suo, B., He, Y., Tu, S. I., Shi, X. A multiplex real-time polymerase chain reaction for simultaneous detection of salmonella spp., escherichia coli o157, and listeria monocytogenes in meat products. Foodborne Pathogens and Disease. 7 (6), 619-628 (2010).
  10. Jarvis, B., Wilrich, C., Wilrich, P. T. Reconsideration of the derivation of most probable numbers, their standard deviations, confidence bounds and rarity values. J Appl Microbiol. 109 (5), 1660-1667 (2010).
  11. Stevens, R., Poppe, K. Validation of clinical prediction models: What does the "calibration slope" really measure. Journal of Clinical Epidemiology. 118, (2019).
  12. Miller, M. E., Hui, S. L., Tierney, W. M. Validation techniques for logistic regression models. Statistics in Medicine. 10 (8), 1213-1226 (1991).
  13. Galán-Relaño, Á, et al. Salmonella and salmonellosis: An update on public health implications and control strategies. Animals. 13 (23), 3666(2023).
  14. Gorski, L., et al. Growth assessment of salmonella enterica multi-serovar populations in poultry rinsates with commonly used enrichment and plating media. Food Microbiology. 119, 104431(2024).
  15. Schmidt, J. W., et al. Evaluation of methods for identifying poultry wing rinses with salmonella concentrations greater than or equal to 10 cfu/ml. J Food Prot. 87 (11), 100362(2024).
  16. Gorski, A., Liang, L. S. Effect of enrichment medium on real-time detection of salmonella enterica from lettuce and tomato enrichment cultures. Journal of Food Protection. 73 (6), 1047-1056 (2010).
  17. Guillén, S., Nadal, L., Álvarez, I., Mañas, P., Cebrián, G. Impact of the resistance responses to stress conditions encountered in food and food processing environments on the virulence and growth fitness of non-typhoidal salmonellae. Foods. 10 (3), 617(2021).
  18. Rohde, A., Hammerl, J. A., Appel, B., Dieckmann, R., Al Dahouk, S. Sampling and homogenization strategies significantly influence the detection of foodborne pathogens in meat. BioMed Research International. 2015, (2015).
  19. Wang, D., Wang, Z., He, F., Kinchla, A. J., Nugen, S. R. Enzymatic digestion for improved bacteria separation from leafy green vegetables. Journal of Food Protection. 79 (8), 1378-1386 (2016).
  20. Pitard, F. F. Theory of sampling and sampling practice. , Chapman and Hall/CRC. (2019).
  21. Sharpe, A. in Detecting pathogens in food. , Elsevier. 52-68 (2003).
  22. Hannah, J., et al. Effect of stomaching on numbers of bacteria recovered from chicken skin. Poultry Science. 90 (2), 491-493 (2011).
  23. Mcmeekin, T., Thomas, C. Retention of bacteria on chicken skin after immersion in bacterial suspensions. Journal of Applied Bacteriology. 45 (3), 383-387 (1978).
  24. Rodrigues-Szulc, U., Ventoura, G., Mackey, B., Payne, M. Rapid physicochemical detachment, separation and concentration of bacteria from beef surfaces. Journal of Applied Bacteriology. 80 (6), 673-681 (1996).
  25. Vibbert, H. B., et al. Accelerating sample preparation through enzyme-assisted microfiltration of salmonella in chicken extract. Biotechnol Prog. 31 (6), 1551-1562 (2015).
  26. Armstrong, C. M., et al. Use of a commercial tissue dissociation system to detect salmonella-contaminated poultry products. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 416 (3), 621-626 (2024).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Kwantificering van Salmonellavoedselborne pathogenenloop gemedieerde amplificatieseri le verdunningcentrifugebuizenDNA extractiereal time PCRmoleculaire detectie

Gerelateerde artikelen