Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Constructie van longadenocarcinoom xenotransplantaatmodel bij muizen en evaluatie van de efficiëntie van XY-afkooksel via MAPK-route

592 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/68023

⸱

25 april 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1College of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine, 2Respiratory Department, First Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine, 3Key Laboratory of Active Substances and Biological Mechanisms of Ginseng Efficacy, Changchun University of Chinese Medicine, 4Jilin Provincial Key Laboratory of Bio-Macromolecules of Chinese Medicine, Ministry of Education, Changchun University of Chinese Medicine, 5Northeast Asia Research Institute of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine

In dit artikel

Samenvatting

Deze studie toont aan dat XY-afkooksel therapeutische effecten heeft tegen longadenocarcinoom door de MAPK-route te reguleren.

Samenvatting

Longadenocarcinoom neemt wereldwijd toe, wat leidt tot de verkenning en ontwikkeling van effectieve behandelmethoden. In de afgelopen jaren is het therapeutisch potentieel van de traditionele Chinese geneeskunde voor longadenocarcinoom, zoals het afkooksel XiaoYi (XY), steeds meer erkend. Het werkingsmechanisme van de traditionele Chinese geneeskunde bij de behandeling van longadenocarcinoom wordt nog steeds opgehelderd. In deze studie werden diermodellen gebruikt om de therapeutische effecten van XY-afkooksel bij de behandeling van longadenocarcinoom te onderzoeken. De chemische componenten van XY-afkooksel bij muizen werden gescheiden en geanalyseerd in zowel positieve als negatieve ionenmodi met behulp van UHPLC-QE-MS. De bevindingen werden vervolgens gevalideerd door middel van in vivo experimenten, die een verminderde tumorgrootte, verbeterde pathologische veranderingen en verhoogde apoptose aantoonden. Als gevolg hiervan werden vijftien componenten geïdentificeerd die na toediening van XY-afkooksel in het bloed werden opgenomen: Stachyose, Quercetine-3-O-bèta-glucopyranosyl-7-O-alfa-rhamnopyranoside; Imperialijn; Spinosine B; Peimine; Flavone basis + 3O, 2MeO, O-Hex; Picropodophyllotoxine; (2S,3R,4S,5S,6R)-2-[(2R,3R,4S,5S,6R)-4,5-dihydroxy-2 [[(3S,5R,8R,10R,12R,13R,14R,17S)-12-hydroxy-17-(2-hydroxy-6-methylhept-5-en-2-yl) 4,4,8,10,14-pentamethyl-2,3,5,6,7,9,11,12,13,15,16,17-dodecahydro-1H cyclopenta[a]fenantren-3-yl]oxy]-6-(hydroxymethyl)oxaan-3-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxaan-3,4,5-triol; Tricine; Ginsenoside Rg1; (20R)-Ginsenoside Rh1; Jujuboside B; Aucubine; Ginsenoside Rg3; en bèta-elemonzuur. Dierproeven toonden aan dat XY-afkooksel de tumorgroei remde, pathologische veranderingen verbeterde en tumorcelapoptose op een dosisafhankelijke manier bevorderde. De betrokken mechanismen kunnen verband houden met de opregulatie van p-JNK- en p-P38-eiwitexpressie in de MAPK-route en de downregulatie van p-ERK-eiwitexpressie in de MAPK-route. Concluderend heeft XY-afkooksel het potentieel om de MAPK-route te reguleren en therapeutische effecten uit te oefenen tegen longadenocarcinoom.

Inleiding

De incidentie van longkanker neemt wereldwijd toe. Het is goed voor 18% van alle maligniteiten en is verantwoordelijk voor een aanzienlijk aantal kankergerelateerde sterfgevallen 1,2. Niet-kleincellige longkanker (NSCLC) is een veel voorkomende vorm van longkanker, met adenocarcinoom als de belangrijkste pathologische vorm3. Vanwege de verraderlijke symptomen wordt NSCLC vaak in een vergevorderd stadium gediagnosticeerd en heeft het een hoog sterftecijfer 4,5. Stadium IV NSCLC-patiënten hebben een vijfjaarsoverleving van slechts 5%6, terwijl zelfs chirurgisch reseceerbare NSCLC in een vroeg stadium een vijfjaarsoverleving heeft van slechts 50%7.

Momenteel omvat de behandeling van longadenocarcinoom chirurgie, radiotherapie, chemotherapie, immunotherapie en gerichte therapie. Bovendien wordt de traditionele Chinese geneeskunde (TCM) voor longadenocarcinoom steeds meer erkend en gewaardeerd8. TCM heeft een lange geschiedenis en is gebruikt bij de behandeling van verschillende oncologische ziekten met effectieve therapeutische resultaten 9,10. Het beschouwt het menselijk lichaam als een geheel geheel, waarbij het therapeutisch principe gericht is op het herstellen van de beweging van Qi (Qi verwijst naar de vitale energie die de circulatie van bloed en lichaamsvloeistoffen bevordert, wat bijdraagt aan een verbeterde immuniteit en verminderde ontsteking bij NSCLC-patiënten) in inwendige organen om het algehele evenwicht te herstellen en de progressie van kanker te remmen.

TCM behandelt niet alleen oncologische ziekten met een lage toxiciteit, meerdere doelen en een hoge efficiëntie11, maar het vergemakkelijkt ook het herstel van schade veroorzaakt door radiotherapie en chemotherapie, waardoor de overleving wordt verlengd12.

Vloeistofchromatografie-massaspectrometrie (LC-MS)-technologie integreert vloeistofchromatografie met massaspectrometrie om de scheiding en detectie van componenten in complexe samengestelde mengsels te bereiken13. LC-MS biedt een hoge resolutie, hoge gevoeligheid en hoge specificiteit, waardoor de scheiding en identificatie van verschillende chemische componenten in afkooksels van de traditionele Chinese geneeskunde (TCM) mogelijk is. In combinatie met medicinale serumchemie, die actieve componenten in het bloed scheidt en detecteert na orale toediening14,15, maakt LC-MS de voorspelling en analyse van mogelijke werkingsmechanismen van geneesmiddelen mogelijk. Deze benadering helpt bij het begrijpen van de chemische samenstelling en farmacologische componenten van TCM-afkooksels en levert essentiële gegevens op voor diepgaand onderzoek naar hun farmacologische effecten en klinische toepassingen, waardoor het zeer toepasbaar is in TCM-onderzoek16,17.

De MAPK-signaleringsroute speelt een cruciale rol bij het ontstaan, de progressie, de metastase en de invasie van longkanker, met Erk, p38 en JNK als belangrijke onderfamilies. Van TCM-afkooksels is aangetoond dat ze de expressie van eiwitten in de MAPK-route18 beïnvloeden. XiaoYi (XY) afkooksel is afgeleid van YiGuan-afkooksel en wordt gebruikt voor de behandeling van longadenocarcinoom in het First Affiliated Hospital van Changchun University of Chinese Medicine (Figuur 1), wat een nauwkeurige klinische werkzaamheid aantoont. Het therapeutische mechanisme blijft echter onduidelijk.

In deze studie werd ultra-high-performance vloeistofchromatografie in combinatie met Q-Exactive Orbitrap-massaspectrometrie (UHPLC-QE-MS) gebruikt om het mogelijke therapeutische mechanisme van XY-afkooksel tegen longadenocarcinoom op te helderen, en de effecten ervan werden gevalideerd door middel van in vivo studies.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Alle dierproeven zijn goedgekeurd door de Ethische Commissie Dieren van de Changchun Universiteit voor Traditionele Chinese Geneeskunde (Ethica nr. 2024008). Zes weken oude C57BL/6 mannelijke muizen (20 ± 2 g), gefokt onder specifieke pathogeenvrije (SPF) omstandigheden, vertoonden typische fysieke activiteitspatronen in een gecontroleerde omgeving met constante temperatuur en vochtigheid. Ze hadden ad libitum toegang tot voedsel en water en werden onder een licht/donker-cyclus van 12 uur gehouden. Details van de reagentia en apparatuur die in dit onderzoek zijn gebruikt, zijn te vinden in de materiaaltabel.

1. Bereiding van XY afkooksel waterig extract

  1. Doe Panax ginseng C.A. Mey (Renshen, 15 g), Chinemys reevesii (Grijs) (Guiban, 30 g) en Trionyx sinensis Wiegmann (Biejia, 30 g) in een afkookpotje. Voeg 1000 ml gedeïoniseerd water toe en laat 30 minuten op kamertemperatuur weken.
  2. Kook de drie kruiden uit stap 1.1 gedurende 1 uur. Week tegelijkertijd Rehmannia glutinosa Libosch (Dihuang, 30 g), Trichosanthes kirilowii Maxim. (Tianhuafen, 30 g), Coix lacryma-jobi L. var. mayuen (Romeins.) Stafylokokken (Yiyiren, 20 g), Paeonia lactiflora Pall. (Baishao, 30 g), Boswellia carterii Birdw. (Ruxiang, 7 g), Commiphora myrrha Engl. (Moyao, 7 g), Agrimonia pilosa Ledeb. (Xianheção, 20 g), Alpinia oxyphylla Miq. (Yizhiren, 20 g), Ziziphus jujuba Molen. var. spinosa (Bunge) (Suanzaoren, 30 g), Melia toosendan Sieb. et Zucc. (Chuanlianzi, 5 g), Fritillaria thunbergii Miq. (Zhebeimu, 15 g), Anemarrhena asphodeloides Bge. (Zhimu, 10 g), Platycodon grandiflorum (Jacq.) (Jiegeng, 10 g), Polygala tenuifolia Willd. (Yuanzhi, 15 g), en Phragmites communis Trin. (Lugen, 30 g) in een andere container gedurende 30 min. Breng ze na het weken over naar de afkookpot vanaf stap 1.1.
  3. Kook alle 18 kruiden uit stap 1.1 en stap 1.2 gedurende 30 min. Giet de kruidenvloeistof eruit, voeg 1000 ml gedeïoniseerd water toe en kook nog 30 minuten. Herhaal dit kookproces drie keer om drie porties kruidenvloeistof te verkrijgen, combineer en meng ze grondig.
  4. Filtreer de gemengde kruidenvloeistof door een doek met 400 gaasjes. Concentreer het filtraat onder verminderde druk en breng de geconcentreerde kruidenvloeistof vervolgens over naar koelapparatuur voor verdere verwerking.
  5. Giet de geconcentreerde kruidenvloeistof in een vriesdroogbak en plaats deze in de voorvrieskamer van een vacuümvriesdroogoven. Zodra het voorvriezen is voltooid, brengt u de schaal over naar de sublimatiedroogkamer om water te verwijderen.
  6. Verwijder eventueel achtergebleven vocht bij hoge temperatuur. Verpulver het gevriesdroogde kruidenextract met behulp van een vergruizer om fijn gevriesdroogd XY-afkookselpoeder te verkrijgen (Figuur 2).

2. Geneesmiddelbevattend serumpreparaat

  1. Wijs willekeurig zes weken oude C57BL/6 mannelijke muizen (20 ± 2 g) toe aan de XiaoYi (XY) -groep of de controlegroep.
    OPMERKING: De muisdosis is berekend met behulp van de conversiefactor van mens naar muis:
    Equivalente experimentele dosis voor muizen (g/kg) = {Menselijke dosis (g/kg) / lichaamsgewicht (70 kg)} x 9,1
    Op basis van deze berekening werd de dosering voor muizen bepaald op 2,6 g/kg.
  2. Weeg 0,9152 g gevriesdroogd XY-afkookselpoeder af en los het op in 3,2 ml gedestilleerd water om de medicijnoplossing te bereiden.
    OPMERKING: Muizen werden 12 uur nuchter voor orale toediening.
  3. Dien het XY-afkooksel toe aan de muizen in de XY-groep via een sonde, terwijl de controlegroep een gelijkwaardige hoeveelheid gedeïoniseerd water krijgt.
  4. Verdoof de muizen 2 uur na orale toediening met pentobarbital-natrium (volgens institutioneel goedgekeurde protocollen). Ontpit de oogbollen met een pincet om bloedmonsters te verzamelen en euthanaseer de muizen vervolgens via CO2 -verstikking, gevolgd door cervicale dislocatie volgens ethische richtlijnen19.
  5. Laat de bloedmonsters 90 minuten stabiliseren bij kamertemperatuur. Centrifugeer bij 3450 x g (4 °C) gedurende 15 minuten om het supernatant op te vangen.

3. UHPLC-QE-MS-analyse

  1. Voeg 100 mg XY-afkooksel gevriesdroogd poeder toe aan 500 μL extractieoplossing (methanol: water = 4:1). Meng grondig, sonicaat en incubeer gedurende 1 uur in een ijswaterbad.
  2. Houd het mengsel gedurende 1 uur op -40 °C en centrifugeer vervolgens gedurende 15 minuten bij 13.800 x g (4 °C). Filtreer het supernatans door een filtermembraan van 0,22 μm en combineer vervolgens 100 μL van elk supernatans om kwaliteitscontrolemonsters (QC) te maken.
  3. Neem na het ontdooien van de plasmamonsters 400 μL van het plasmamonster van de controlegroep en 400 μL van de plasmamonsters van de XY-groep. Voeg 40 μL zoutzuur (2 mol/L) toe aan elk monster. Vortex gedurende 1 minuut en laat het mengsel 15 minuten op 4 °C staan. Herhaal deze stap vier keer.
  4. Voeg 1,6 ml acetonitril en vortex toe gedurende 5 min. Centrifugeer 5 minuten bij 13.800 x g bij 4 °C. Onderwerp 1.800 μL van het bovenstaande aan stikstofdroging.
  5. Reconstitueer de gedroogde monsters in 150 μl 80% methanol met 10 μg/ml van de interne standaard door gedurende 5 minuten te vortexen. Centrifugeer bij 13.800 × g gedurende 5 minuten bij 4 °C en breng vervolgens 120 μl van het bovenstaande over in een verse glazen injectieflacon voor LC-MS-analyse (figuur 3).

4. Celcultuur en bereiding van dieren

  1. Zaai 1 ml Lewis-longcarcinoomcellen in een kweekschaaltje met Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) aangevuld met 10% foetaal runderserum en 1% penicilline/streptomycine. Incubeer de cellen onder gecontroleerde omstandigheden bij 37 °C met 5% CO2.
  2. Wanneer de cellen 80% samenvloeiing bereiken, passeer ze dan met 0,25% trypsine. Ga door met passeren totdat de celtoestand stabiliseert en pas dan de celconcentratie aan naar 3 x 106 cellen/ml.
  3. Injecteer 0,1 ml van de bereide celsuspensie subcutaan in de rechteroksel van mannelijke C57BL/6-muizen om het longadenocarcinoommodel vast te stellen.
    OPMERKING: Tumorweefsel kan 5 dagen na inoculatie in de oksel van muizen worden gepalpeerd.
  4. Verdeel de muizen na 5 dagen willekeurig in vijf groepen (n = 6 per groep): Modelgroep (M) - Geen behandeling; XY afkooksel lage dosis groep (XY-L) - 1,3 g/kg; XY afkooksel medium-dosis groep (XY-Z) - 2,6 g/kg; XY-afkooksel hoge dosis groep (XY-H) - 5,2 g/kg; Cisplatinegroep (DDP) - Behandeld met cisplatine20.
  5. Los het XY-afkookselpoeder op in 200 μL gedestilleerd water in de overeenkomstige dosis en dien het toe via een maagsonde. De M- en DDP-groepen ontvangen een gelijke hoeveelheid gedestilleerd water via een maagsonde.
  6. Dien cisplatine toe aan de DDP-groep via intraperitoneale injectie (3 mg/kg) eenmaal per 3 dagen. Injecteer hetzelfde volume fysiologische zoutoplossing in de andere groepen.

5. Pathologische analyse van tumorweefsel

  1. Euthanaseer na 21 dagen alle muizen met behulp van CO2 -verstikking gevolgd door cervicale dislocatie (volgens ethische richtlijnen) en snijd het tumorweefselweg 21. Meet het tumorvolume en -gewicht (Figuur 4).
  2. Fixeer het weggesneden tumorweefsel gedurende 24 uur in 4% paraformaldehyde). Dehydrateer het weefsel met behulp van graduele ethanoloplossingen.
  3. Verwijder de gedehydrateerde weefselblokken met xyleen en leg ze vervolgens in gesmolten paraffinewas. Laat de was stollen tot een paraffineblok. Verdeel het weefselblok in plakjes van 5 μm dik met behulp van een microtoom.
  4. Ontwas de weefselsecties in xyleen, gevolgd door rehydratatie in graduele ethanoloplossingen. Kleur de secties 5 minuten met hematoxyline en spoel ze vervolgens af met gedeïoniseerd water.
  5. Bestkleur de secties met 0,5% eosineoplossing gedurende 1 min. Bekijk de bevlekte secties onder een optische microscoop en maak beelden voor analyse.

6. Immunohistochemische analyse van tumorweefsel

  1. Voer ontwaxen en rehydratatie uit volgens de procedures beschreven in de stappen 5.2-5.4.
  2. Incubeer de coupes in een endogene peroxidaseblokker bij kamertemperatuur gedurende 15 minuten. Blokkeer de niet-specifieke binding door de coupes te incuberen met geitenserum.
  3. Breng de primaire antilichamen aan: Ki-67 (1:600) en Caspase-3 (1:100). Incubeer de coupes een nacht bij 4 °C. Spoel met PBS-buffer), breng vervolgens een secundair antilichaam voor algemeen gebruik (1:500) aan en incubeer gedurende 30 minuten bij 37 °C.
  4. Ontwikkel de kleurreactie door DAB-oplossing toe te voegen. Bestig de secties met hematoxylineoplossing.
  5. Voer uitdroging, opruiming en afdichting van de bevlekte delen uit. Observeer eiwitexpressie onder een optische microscoop en leg beelden vast voor analyse.

7. Analyse van de westerse vlek

  1. Homogeniseer de tumorweefsels met behulp van een weefsellyser. Extraheer het totale eiwit en bepaal de concentratie met behulp van een bicinchoninezuur (BCA)-testkit (zie materiaaltabel).
  2. Voer eiwitkwantificering uit, gevolgd door SDS-PAGE-elektroforese en eiwitoverdracht op een membraan.
  3. Incubeer het membraan een nacht bij 4 °C met primaire antilichamen: P38 (1:2000), p-P38 (1:1000), ERK (1:20000), p-ERK (1:500), JNK (1:2000), p-JNK (1:5000), β-actine (1:200) (zie materiaaltabel).
  4. Incubeer het membraan de volgende dag gedurende 1,5 uur bij kamertemperatuur met mierikswortelperoxidase (HRP)-geconjugeerd secundair antilichaam. Detecteer eiwitbanden met behulp van een verbeterd chemiluminescentie (ECL)-systeem.
    OPMERKING: De intensiteit van de eiwitband werd gekwantificeerd met behulp van ImageJ-software.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

XY-poederoplossing en serummonsters van de controlegroep en de XY-groep werden geanalyseerd met behulp van UHPLC-QE-MS, waarbij goed gescheiden pieken aan het licht kwamen. De totale ionisatiediagrammen voor de positieve en negatieve ionenmodi worden weergegeven in figuur 3. De samenstelling van het XY-afkooksel werd geïdentificeerd op basis van retentietijd, acquisitiemodus en massaspectrumfragmenten. Vijftien componenten vo...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

De incidentie van kanker stijgt jaarlijks en trekt veel klinische en onderzoeksbelangstelling22,23. Recente studies hebben de effectiviteit van de traditionele Chinese geneeskunde (TCM) bij de behandeling van longkanker aangetoond 24,25,26. Van Maimendong-afkooksel is bijvoorbeeld aangetoond dat het het aantal en de activiteit van NK-cel...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

Dit werk werd ondersteund door het Punt van het Wetenschaps- en Technologieontwikkelingsplan (YDZJ202301ZYTS459) van de provincie Jilin.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
AcetonitrileCNW Technologies5/8/1975
2-Chloro-L phenylalanineShanghai Hengbo Biotechnology Co., Ltd.103616-89-3
Ammonium Hydroxide SolutionChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.#2028
Antibody-β-actinAbcamab8228
Anti-Erk1 (pT202/pY204) + Erk2 (pT185/pY187) AntibodyAbcamab4819
Anti-ERK1/ERK2 AntibodyAbcamab184699
Anti-JNK1 (pY185) + JNK2 (pY185) + JNK3 (pY223) AntibodyAbcamab76572
Anti-JNK1/JNK2/JNK3 AntibodyAbcamab208035
Anti-Ki67 AntibodyCell Signaling TechnologyGB121141
Anti-p38 (phospho T180) AntibodyAbcamab178867
Anti-p38 alpha/MAPK14 AntibodyAbcamab170099
BCA protein concentration assay kitBoster Biological Technology17E17B46
Bovine Serum Albumin (BSA)DAKOBIOFROXX
Broad-spectrum phosphatase inhibitor (100x)Boster Biological TechnologyAR1183
C57bl/6 miceLiaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd.SCXK2021-0006
Chromatographic columnWatersACQUITY UPLC BEH C18 1.7 μm2.1*100 mm
CisplatinChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.232120
Citrate (pH 6.0) Antigen Retrieval SolutionWuhan Baiqiandu Biotechnology Co., Ltd.B2010
Cover SlipJiangsu Shitai Laboratory Equipment Co., Ltd.10212432C
Cryogenic StageWuhan Junjie Electronics Co., Ltd.JB-L5
DAB Chromogenic KitJiangsu Shitai Laboratory Equipment Co., Ltd.2005289
Decolorization shakerBeijing Liu Yi Instrument FactoryWD-9405A
DehydratorWuhan Junjie Electronics Co., Ltd.JJ-12J
Drying OvenShanghai Huitai Instrument Manufacturing Co., Ltd.DHG-9140A
Dulbecco's modified eagle mediumGibco8121587
EDTA (pH 8.0) Antigen Retrieval SolutionWuhan Baiqiandu Biotechnology Co., Ltd.B2001
EDTA (pH 9.0) Antigen Retrieval SolutionWuhan Baiqiandu Biotechnology Co., Ltd.B2002
Electrophoresis bufferNCM Biotech20230801
Embedding machineWuhan Junjie Electronics Co., Ltd.JB-P5
EosinChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.212954
EthanolChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.493511
Fetal bovine serumGibco2166090RP
Formic acidSIGMA64-18-6
GraphPad Prism softwareGraphPad software, LLCVersion 9.0.0
HematoxylinChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.H3136
High performance liquid chromatographyAgilent1260 Infinity II Prime
High speed refrigerated centrifugeThermo Fisher ScientificLegend Micro 17R
High-Resolution Mass SpectrometryThermo Fisher ScientificQ Exactive Focus
HRP-conjugated Goat Anti-MouseSeraCare5220-0341
HRP-conjugated Goat Anti-RabbitSeraCare5220-0336
HRP-conjugated Goat Anti-Rabbit/Mouse Universal Secondary AntibodyDAKOK5007
HRP-conjugated Goat Anti-RatSeraCare5220-0364
HRP-conjugated Rabbit Anti-GoatSeraCare5220-0362
Hydrochloric acidChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.H9892
Hydrogen PeroxideChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.B12555
Hypersensitive ECL chemiluminescence kitNCM BiotechP10300
ImageJ softwareNational Institutes of Healthv1.8.0
Imaging SystemNikon (Japan)NIKON DS-U3
Lewis lung carcinoma cellsChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.90020104
Mesh clothBaijie100110779650
Metal heating temperature control instrumentBaiwan Electronictechnology Co., Ltd.HG221-X3
MethanolAladdinM116118
MicropipetteDlab Scientific Co., Ltd.KE0003087/KA0056573
Microscope SlideJiangsu Shitai Laboratory Equipment Co., Ltd.10212432C
MicrotomeShanghai Leica Instruments Co., Ltd.RM2016
Microwave OvenGalanz Microwave Electrical Appliances Co., Ltd.P70D20TL-P4
Neutral BalsamChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.10004160
Optical microscopeNikon (Japan)Nikon Eclipse CI
OvenShanghai Huitai Instrument Manufacturing Co., Ltd.DHG-9140A
PAGE gel rapid preparation kitBiosharpPL566B-5
ParaformaldehydeChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.8.18715
Phosphate buffered saline (1x)Gibco8120485
Pre-stained color protein marker (10-180 kDa)Cywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.SW176-02
Protein loading buffer (5X)Boster Biological TechnologyAR1112
pulverizerShangzhiqiao Co., Ltd.DFT-100A
PVDF (0.45 μm)Cywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.SW120-01

Referenties

  1. Ferlay, J., et al. Cancer statistics for the year 2020: An overview. Int J Cancer. 149 (4), 778-789 (2021).
  2. Sung, H., et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J Clin. 71 (3), 209-249 (2021).
  3. Ahn, M. J., et al. Asian Thoracic Oncology Research Group (ATORG) expert consensus statement on MET alterations in NSCLC: Diagnostic and therapeutic considerations. Clin Lung Cancer. 23 (8), 670-685 (2022).
  4. Seguin, L., Durandy, M., Feral, C. C. Lung adenocarcinoma tumor origin: A guide for personalized medicine. Cancers (Basel). 14 (7), 1759(2022).
  5. Nasim, F., Sabath, B. F., Eapen, G. A. Lung cancer. Med Clin North Am. 103 (3), 463-473 (2019).
  6. Miller, K. D., et al. Cancer treatment and survivorship statistics, 2022. CA Cancer J Clin. 72 (5), 409-436 (2022).
  7. Torrente, M., et al. Understanding prognosis and survival outcomes in patients with early-stage non-small-cell lung cancer. Clin Med (Lond). 22 (Suppl 4), 38-40 (2022).
  8. Li, Z., Feiyue, Z., Gaofeng, L. Traditional Chinese medicine and lung cancer--From theory to practice. Biomed Pharmacother. 137, 111381(2021).
  9. Wei, Z., et al. Traditional Chinese medicine has great potential as candidate drugs for lung cancer: A review. J Ethnopharmacol. 300, 115748(2023).
  10. Miao, K., et al. Harnessing the power of traditional Chinese medicine monomers and compound prescriptions to boost cancer immunotherapy. Front Immunol. 14, 1277243(2023).
  11. Wang, K., et al. Anticancer activities of TCM and their active components against tumor metastasis. Biomed Pharmacother. 133, 111044(2021).
  12. Chen, S., et al. Efficacy and safety of TCM combined with chemotherapy for SCLC: A systematic review and meta-analysis. J Cancer Res Clin Oncol. 146 (11), 2913-2935 (2020).
  13. Yu, Y., Yao, C., Guo, D. A. Insight into chemical basis of traditional Chinese medicine based on the state-of-the-art techniques of liquid chromatography-mass spectrometry. Acta Pharm Sin B. 11 (6), 1469-1492 (2021).
  14. Wei, J., et al. Integrated serum pharmacochemistry and network pharmacology approach to explore the effective components and potential mechanisms of Menispermi rhizoma against myocardial ischemia. Front Chem. 10, 869972(2022).
  15. Shao, D., et al. Identification of the active compounds and functional mechanisms of Jinshui Huanxian formula in pulmonary fibrosis by integrating serum pharmacochemistry with network pharmacology. Phytomedicine. 102, 154177(2022).
  16. Han, J., et al. Using network pharmacology to explore the mechanism of panax notoginseng in the treatment of myocardial fibrosis. J Diabetes Res. 2022, 8895950(2022).
  17. Wang, Y., et al. Mechanisms underlying the therapeutic effects of Qingfeiyin in treating acute lung injury based on GEO datasets, network pharmacology and molecular docking. Comput Biol Med. 145, 105454(2022).
  18. Rubio, K., et al. Non-canonical integrin signaling activates EGFR and RAS-MAPK-ERK signaling in small-cell lung cancer. Theranostics. 13 (8), 2384-2407 (2023).
  19. Guo, T. F., Li, W., Xi, B. Animal welfare and slaughter methods of fur animal. J Econ Anim. 15 (2), 112-119 (2011).
  20. Moar, K., et al. Synergistic anticancer activity of resveratrol with cisplatin and carboplatin in A549 lung adenocarcinoma cells. Int J Clin Exp Pathol. 17 (11), 411-420 (2024).
  21. Li, Z., et al. Exploring tumor-suppressive effect and mechanism of action of Zilongjin Tablets combined with icotinib in Lewis tumor-bearing mice based on EGFR/PI3K/Akt signaling pathway. Chin Tradit Herb Drugs. 56 (2), 529-535 (2025).
  22. Mullard, A. Addressing cancer's grand challenges. Nat Rev Drug Discov. 19 (12), 825-826 (2020).
  23. Williams, P. A., Zaidi, S. K., Sengupta, R. AACR cancer disparities progress report 2022. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 31 (7), 1249-1250 (2022).
  24. Zhao, W., et al. Si Jun Zi decoction inhibits the growth of lung cancer by reducing the expression of PD-L1 through TLR4/MyD88/NF-κB pathway. J Ethnopharmacol. 318 (Pt A), 116948(2024).
  25. Ye, Y., et al. Integrating network pharmacology and experimental validation to explore the effects and mechanisms of Qinghao Biejia decoction and its active compound artemisinin B against non-small-cell lung cancer. Drug Des Devel Ther. 17, 2461-2479 (2023).
  26. Zhang, J., et al. Ze-Qi decoction inhibits non-small cell lung cancer growth and metastasis by modulating the PI3K/Akt/p53 signaling pathway. J Tradit Complement Med. 13 (5), 417-429 (2023).
  27. Zhang, Z., et al. Maimendong decoction inhibits lung cancer metastasis by increasing the proportion and killing activity of NK cells. J Ethnopharmacol. 338 (Pt 3), 119127(2025).
  28. Zhang, W., et al. Explore the mechanism and substance basis of Mahuang FuziXixin decoction for the treatment of lung cancer based on network pharmacology and molecular docking. Comput Biol Med. 151 (Pt A), 106293(2022).
  29. Lee, J. Y., et al. Picropodophyllotoxin inhibits cell growth and induces apoptosis in gefitinib-resistant non-small lung cancer cells by dual-targeting EGFR and MET. Biomol Ther (Seoul). 31 (2), 200-209 (2023).
  30. Li, J. X., et al. Metabolomics and integrated network pharmacology analysis reveal Tricin as the active anticancer component of Weijing decoction by suppression of PRKCA and sphingolipid signaling. Pharmacol Res. 171, 105574(2021).
  31. Hong, J., Gwon, D., Jang, C. Y. Ginsenoside Rg1 suppresses cancer cell proliferation through perturbing mitotic progression. J Ginseng Res. 46 (3), 481-488 (2022).
  32. Wei, H., et al. Shuangshen granules attenuate lung metastasis by modulating bone marrow differentiation through mTOR signaling inhibition. J Ethnopharmacol. 281, 113305(2021).
  33. Nakhjavani, M., et al. Anti-Angiogenic properties of Ginsenoside Rg3. Molecules. 25 (21), 4905(2020).
  34. Liu, Z., et al. Insights into the antitumor mechanism of ginsenosides Rg3. Mol Biol Rep. 48 (3), 2639-2652 (2021).
  35. Huang, G., et al. Stachyose-induced apoptosis of Caco-2 cells via the caspase-dependent mitochondrial pathway. Food Funct. 6 (3), 765-771 (2015).
  36. Lin, Q., et al. Mechanistic and therapeutic study of novel antitumor function of natural compound imperialine for treating non-small cell lung cancer. J Ethnopharmacol. 247, 112283(2020).
  37. Zhang, T., et al. Peimine-induced apoptosis and inhibition of migration by regulating reactive oxygen species-mediated MAPK/STAT3/NF-κB and Wnt/β-catenin signaling pathways in gastric cancer MKN-45 cells. Drug Dev Res. 83 (7), 1683-1696 (2022).
  38. Sun, J., et al. Peimine inhibits MCF-7 breast cancer cell growth by modulating inflammasome activation: Critical roles of MAPK and NF-κB signaling. Anticancer Agents Med Chem. 23 (3), 317-327 (2023).
  39. Zhang, P., et al. Jujuboside B suppresses angiogenesis and tumor growth via blocking VEGFR2 signaling pathway. Heliyon. 9 (6), e17072(2023).
  40. Guo, L., et al. Jujuboside B inhibits the proliferation of breast cancer cell lines by inducing apoptosis and autophagy. Front Pharmacol. 12, 668887(2021).
  41. Shao, M., et al. Aucubin exerts anticancer activity in breast cancer and regulates intestinal microbiota. Evid Based Complement Alternat Med. 2022, 4534411(2022).
  42. Yang, Z., et al. Jujuboside B reverses CUMS-promoted tumor progression via blocking PI3K/Akt and MAPK/ERK and dephosphorylating CREB signaling. J Immunol Res. 2022, 5211368(2022).
  43. Sun, J., et al. Peimine inhibits MCF-7 breast cancer cell growth by modulating inflammasome activation: Critical roles of MAPK and NF-κB signaling. Anticancer Agents Med Chem. 23 (3), 317-327 (2023).
  44. Shan, X., et al. Ginsenoside Rg3-induced EGFR/MAPK pathway deactivation inhibits melanoma cell proliferation by decreasing FUT4/LeY expression. Int J Oncol. 46 (4), 1667-1676 (2015).
  45. Wang, J., et al. Low toxicity ginsenoside Rg1-carbon nanodots as a potential therapeutic agent for human non-small cell lung cancer. Colloids Surf B Biointerfaces. 246, 114392(2025).
  46. Colic, E., Patel, P. U., Kent, O. A. Aberrant MAPK signaling offers therapeutic potential for treatment of ovarian carcinoma. Onco Targets Ther. 15, 1331-1346 (2022).
  47. Bahar, M. E., Kim, H. J., Kim, D. R. Targeting the RAS/RAF/MAPK pathway for cancer therapy: From mechanism to clinical studies. Signal Transduct Target Ther. 8 (1), 455(2023).
  48. Sugiura, R., Satoh, R., Takasaki, T. ERK: A double-edged sword in cancer. ERK-dependent apoptosis as a potential therapeutic strategy for cancer. Cells. 10 (10), 2509(2021).
  49. Ullah, R., et al. RAF-MEK-ERK pathway in cancer evolution and treatment. Semin Cancer Biol. 85, 123-154 (2022).
  50. Romany, A., et al. Analysis of the ERK pathway cysteinome for targeted covalent inhibition of RAF and MEK kinases. J Chem Inf Model. 63 (8), 2483-2494 (2023).
  51. Ghosh, A. K., et al. Covalent inhibition in drug discovery. ChemMedChem. 14 (9), 889-906 (2019).
  52. Kaoud, T. S., et al. Modulating multi-functional ERK complexes by covalent targeting of a recruitment site in vivo. Nat Commun. 10 (1), 5232(2019).
  53. Qian, X., et al. Qingyihuaji formula promotes apoptosis and autophagy through inhibition of MAPK/ERK and PI3K/Akt/mTOR signaling pathway on pancreatic cancer in vivo and in vitro. J Ethnopharmacol. 307, 116198(2023).
  54. Yue, S. J., et al. A ferulic acid derivative FXS-3 inhibits proliferation and metastasis of human lung cancer A549 cells via positive JNK signaling pathway and negative ERK/p38, AKT/mTOR and MEK/ERK signaling pathways. Molecules. 24 (11), 2165(2019).
  55. Ozgun, G. S., et al. Piperine induces cellular stresses, apoptosis, and cytotoxicity via JNK signaling and has concentration-dependently additive or synergistic effects with sorafenib in hepatocellular carcinoma: An in vitro study. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. , (2024).
  56. Martínez-Limón, A., et al. The p38 pathway: From biology to cancer therapy. Int J Mol Sci. 21 (6), 1913(2020).
  57. Xie, C. Q., et al. Triptolide exerts pro-apoptotic and cell cycle arrest activity on drug-resistant human lung cancer A549/Taxol cells via modulation of MAPK and PI3K/Akt signaling pathways. Oncol Lett. 12 (5), 3586-3590 (2016).
  58. Luo, Y. H., et al. Anticancer effects of baicalein on cervical carcinoma cells through down-regulation of the ERK/p38/MAPK pathway. J Biol Regul Homeost Agents. 35 (3), 945-952 (2021).
  59. Lan, H. Y., et al. Aidi injection induces apoptosis of hepatocellular carcinoma cells through the mitochondrial pathway. J Ethnopharmacol. 274, 114073(2021).
  60. Remnant, L., et al. The intrinsically disorderly story of Ki-67. Open Biol. 11 (8), 210120(2021).
  61. Ma, W., et al. Breast cancer Ki67 expression prediction by DCE-MRI radiomics features. Clin Radiol. 73 (10), 909.e1-909.e5 (2018).
  62. Ahmed, S. T., et al. Proliferative index (Ki67) for prediction in breast duct carcinomas. Asian Pac J Cancer Prev. 19 (4), 955-959 (2018).
  63. Sobecki, M., et al. Cell-cycle regulation accounts for variability in Ki-67 expression levels. Cancer Res. 77 (10), 2722-2734 (2017).
  64. Gown, A. M. The biomarker Ki-67: Promise, potential, and problems in breast cancer. Appl Immunohistochem Mol Morphol. 31 (7), 478-484 (2023).
  65. Piri, R., et al. Ki-67/MIB-1 as a prognostic marker in cervical cancer - A systematic review with meta-analysis. Asian Pac J Cancer Prev. 16 (16), 6997-7002 (2015).
  66. Pelosi, G., et al. Ki-67 antigen in lung neuroendocrine tumors: Unraveling a role in clinical practice. J Thorac Oncol. 9 (3), 273-284 (2014).
  67. Li, H., et al. A correlation research of Ki67 index, CT features, and risk stratification in gastrointestinal stromal tumor. Cancer Med. 7 (9), 4467-4474 (2018).
  68. Asadi, M., et al. Caspase-3: Structure, function, and biotechnological aspects. Biotechnol Appl Biochem. 69 (4), 1633-1645 (2022).
  69. Eskandari, E., Eaves, C. J. Paradoxical roles of caspase-3 in regulating cell survival, proliferation, and tumorigenesis. J Cell Biol. 221 (6), e202201159(2022).
  70. Jiao, C., et al. Caspase-3/GSDME mediated pyroptosis: A potential pathway for sepsis. Int Immunopharmacol. 124 (Pt B), 111022(2023).
  71. Zhou, M., et al. Caspase-3 regulates the migration, invasion and metastasis of colon cancer cells. Int J Cancer. 143 (4), 921-930 (2018).
  72. Ke, H., et al. Effect of weimaining on apoptosis and Caspase-3 expression in a breast cancer mouse model. J Ethnopharmacol. 264, 113363(2021).
  73. Xu, H., et al. The natural product dehydrocurvularin induces apoptosis of gastric cancer cells by activating PARP-1 and caspase-3. Apoptosis. 28 (3-4), 525-538 (2023).
  74. Huang, Y. L., et al. Expression levels of Caspase-3 and gasdermin E and their involvement in the occurrence and prognosis of lung cancer. Cancer Rep (Hoboken). 5 (9), e1561(2022).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Tags

Traditionele Chinese GeneeskundeTumorapoptoseUHPLC QE MSRemming van TumorgroeiProte ne expressieDiermodel

Dit artikel is gepubliceerd

Video binnenkort beschikbaar

Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.