Efficiënte technieken voor uitgebreide bemonstering van toegankelijke weefsels bij volwassen Xenopus

Summary

Dit is deel één van een uitgebreid Xenopus-bemonsteringsprotocol . De bemonsterde weefsels zijn de hartventrikel, de arteriële stam, de linker leverkwab, de galblaas, de long, de alvleesklier, de milt, het strottenhoofd, de slokdarm, de maag, de darmen, de teelballen, de vetlichamen, de eileider, de gepaarde nieren, de ischiasplex, de huid, de thymus en het hele oog.

Abstract

Xenopus is al lang een cruciaal modelorganisme voor het onderzoeken van de ontwikkeling en ziekte van gewervelde dieren, en biedt diepgaande inzichten in cellulaire processen en genfunctie. Ondanks de schat aan informatie over embryonale Xenopus, blijft er een aanzienlijke kloof bestaan in gestandaardiseerde methoden voor weefselbemonstering bij volwassenen, vooral voor moderne benaderingen zoals kwantitatieve proteomics. Deze studie introduceert een uitgebreid protocol voor snelle, nauwkeurige en efficiënte bemonstering van meerdere weefsels bij volwassen Xenopus. Het protocol pakt de uitdagingen aan die verband houden met de subtiele anatomische verschillen in vergelijking met andere anuranen, en zorgt voor reproduceerbaarheid, zelfs voor mensen met beperkte ervaring in kikkerdissectie. Dit protocol is geoptimaliseerd voor hoogwaardige biochemische analyses door prioriteit te geven aan de versheid van het monster. We faciliteren de snelle afname van maximaal 18 weefsels binnen een uur. Bovendien zijn de methoden van toepassing op geperfuseerde en niet-geperfuseerde omstandigheden, waardoor flexibiliteit wordt geboden voor een reeks experimentele behoeften. Dit werk vult niet alleen een kritieke methodologische leemte voor Xenopus laevis en tropicalis , maar dient ook als een waardevolle bron voor onderzoekers die technieken aanpassen aan vergelijkbare amfibieënmodellen, waardoor de reikwijdte en betrouwbaarheid van vergelijkende biologische en evolutionaire studies wordt vergroot.

Introduction

Xenopus biedt unieke voordelen ten opzichte van muizen, zebravissen en andere modelorganismen voor het bestuderen van ziekten bij de mens, met name in ontwikkelings- en evolutionaire contexten. De externe embryonale ontwikkeling en grote, gemakkelijk manipuleerbare embryo's maken real-time observatie en experimentele interventies mogelijk (bijv. weefseltransplantatie, genbewerking) die uitdagend zijn bij muizen, die zich intern ontwikkelen en invasieve procedures vereisen. Bovendien bieden de driekamerige hart- en tetrapod-ledematen van Xenopus een meer directe evolutionaire brug voor het bestuderen van aangeboren af....

Protocol

Alle experimenten zijn goedgekeurd door en uitgevoerd in overeenstemming met de regels en voorschriften van de Harvard Medical School IACUC (Institutional Animal Care and Use Committee IS 00001365_3). Als perfusieprotocol¹³ wordt gevolgd voorafgaand aan de bemonstering, ga dan verder met stap 2.3.

1. Bereiding (zonder perfusie)

1. Zorg ervoor dat de onderzoeksinstelling de euthanasietechniek die in dit protocol wordt beschreven, heeft goedgekeurd.
2. Bereid een oplossing van 5 g/l MS-222 (tricaïne methaansulfonaat) en 5 g/l natriumbicarbonaat (zie materiaaltab....

Results

Door alle stappen van dit protocol te volgen, werden de hartventrikel, de arteriële romp, de linker leverkwab, de galblaas, de long, de alvleesklier, de milt, het strottenhoofd, de slokdarm, de maag, de darmen, de teelballen, de vetlichamen, de eileider, de gepaarde nieren, de heupplex, de huid, de thymus en het hele oog binnen een uur na euthanasie netjes weggesneden (zie Figuur 1, Figuur 2, Figuur .......

Discussion

Het hier gepresenteerde protocol is ontworpen om flexibiliteit te bieden aan gebruikers op verschillende ervaringsniveaus en tegelijkertijd te zorgen voor het tijdig en efficiënt verzamelen van essentiële weefsels. Nieuwe gebruikers wordt geadviseerd om elke stap in het protocol te volgen zoals beschreven om de systematische verzameling van weefsels te garanderen. Meer ervaren gebruikers kunnen er echter voor kiezen om bepaalde stappen over te slaan en alleen de weefsels te bemonsteren d.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1x PBS	Corning	21-040-CV
5x Magnifying Glass with LED Light and Stand	amazon.com	B08QJ6J8P1	light must not produce heat
Disposable Transfer Pipets	VWR	414004-036
Dissecting Fine-Pointed Forceps	Fisher Scientific	08-875
Dissecting scissors sharp piont, straight 6.5"	VWR	76457-374
Dissection Tray	Fisher Scientific	14-370-284	styrofoam sheets are an acceptable alternative
Euthanasia container	US Plastic	Item 2860	alternative opaque containers acceptable
Euthanasia container lid	US Plastic	Item 3047
Iridectomy Scissors 6"	VWR	470018-938	iris scissors are an acceptable alternative
MS-222: Syncaine (formerly tricaine)	Pentair AES	TRS1
Rat Tooth Tissue Forceps 5.5 in., Stainless Steel	Fisher Scientific	S08100
Sodium Bicarbonate, Powder, USP	Fisher Scientific	18-606-333
Specimen Forceps, Serrated	VWR	82027-442
T-Pins for Dissecting	Fisher Scinetific	S99385