Dit artikel beschrijft hoe aan vocht blootgestelde brandwondenzalf het herstel van diabetische wonden bevordert door de neovascularisatie van diabetische wonden en de expressie van exosomaal plasma mir-31-5p dynamisch te reguleren.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Onderzoeksartikel
Effecten van vochtige, blootgestelde brandwondenzalf op wondneovascularisatie en plasma-exosomale mir-31-5p bij diabetische muizen
* These authors contributed equally
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Vochtig blootgestelde brandwondenzalf (MEBO) is een traditioneel Chinees medicijn dat wordt gebruikt om chronische diabetische wonden te behandelen; Het onderliggende mechanisme is echter onduidelijk. Recent bewijs suggereert de rol van exosomen en functionele miRNA's bij wondneovascularisatie. Hier wilden we de effecten van MEBO op wondneovascularisatie en plasma-exosomale mir-31-5p (pExo-mir-31-5p) expressie bij diabetische muizen onderzoeken. In totaal werden 120 C57BL/6-muizen willekeurig verdeeld in een niet-diabetische controlegroep (n = 24) en een diabetische groep geïnduceerd door streptozotocine (n = 96), die verder werd gerandomiseerd in diabetische controle-, MEBO-, beifuxine- en MHY1485-groepen (n = 24 elk). Er werden vijf groepen opgesteld met huidresectiemodellen over de volledige dikte, die werden behandeld met respectievelijk fysiologische zoutoplossing, fysiologische zoutoplossing, MEBO, beifuxine en MHY1485. Op dag 1, 7, 13 en 18 werden de wondsluitingssnelheid, de dichtheid van de microvaten en de expressieniveaus van pExo-mir-31-5p, samen met VPS4a en Rab27a mRNA- en eiwitniveaus in wondweefsels, geanalyseerd met behulp van respectievelijk ImageJ, hematoxyline-eosine (HE) kleuring, kwantitatieve real-time polymerasekettingreactie (qPCR) en western blot (WB). Verder werden correlaties tussen de expressie van VPS4a, Rab27a-eiwit, pExo-mir-31-5p en microvatdichtheid geanalyseerd. We ontdekten dat MEBO wondherstel bevorderde bij diabetische muizen (p < 0,050). Het versterkte de neovascularisatie van de wond tijdens de vroege en middelste stadia van wondgenezing, maar remde het tijdens het latere stadium (p < 0,050). MEBO verhoogde de mRNA- en eiwitexpressie van Vps4a en Rab27a in wondweefsels, evenals pExo-mir-31-5p tijdens de vroege en tussenliggende stadia van genezing, terwijl ze in het latere stadium werden verlaagd (p < 0,050). Bovendien waren VPS4a, Rab27a-eiwit, pExo-mir-31-5p-expressie en microvatdichtheid positief gecorreleerd bij met MEBO behandelde muizen (p < 0,050). Concluderend reguleert MEBO dynamisch de neovascularisatie van wonden en de expressie van pExo-mir-31-5p bij diabetische muizen, wat nieuwe theoretische ondersteuning biedt voor de klinische toepassing ervan.
Inleiding
De prevalentie van diabetes mellitus bij oudere patiënten is hoog en neemt jaarlijks toe. De ziekte wordt in verband gebracht met chronische diabetische wonden (CDW's), die een nadelig effect hebben op de gezondheid, het functioneren en de algehele kwaliteit van leven van de patiënt1. Doorgaans omvat wondsluiting vier verschillende fasen: hemostase, ontsteking, proliferatie en re-epithelisatie2. Hiervan is de proliferatieve fase de belangrijkste. Tijdens de vroege proliferatieve fase vermenigvuldigen capillaire endotheelcellen zich en migreren ze naar de wond, waardoor nieuwe bloedvaten ontspruiten en een ingewikkeld netwerk wordt gevormd3. In de latere stadia van wondherstel ondergaan de meeste capillaire lumina echter occlusie, waarbij een minderheid overgaat in kleine slagaders en aders. Bij patiënten met CDW's verstoren weefselverlies, necrose en gangreen, en verschillende niveaus van ontsteking en hyperglykemie, de dynamische balans tussen angiogenese en antiangiogenese, waardoor de wondgenezing wordt vertraagd, vooral wanneer de angiogenese is aangetast 4,5,6. Aan vocht blootgestelde brandwondenzalf (MEBO) is een traditioneel Chinees medicijn dat wordt gebruikt om CDW's te behandelen, maar het mechanisme ervan blijft onduidelijk. Onlangs hebben meerdere onderzoeken aangetoond dat exosoomcargoede miRNA's angiogenese kunnen bevorderen en daardoor diabetische wondgenezing kunnen bevorderen 7,8. Er zijn echter maar weinig studies die het verband tussen MEBO en exosoom-gedragen miRNA's hebben onderzocht. Daarom is het nodig om het mechanisme te onthullen waarmee MEBO angiogenese in CDW's stimuleert vanuit het exosoom- en functionele miRNA-perspectief.
Exosomen zijn bolvormige vliezige blaasjes die worden vrijgegeven door levende cellen, met een grootte van 30-200 nm, een dichtheid van 1,1-1,2 g/ml en die markereiwitten bevatten zoals CD81 en tumorgevoeligheid 101 (TSG101)9. De productie en secretie van exosomen worden onderverdeeld in een endosomaal sorteercomplex dat nodig is voor transport- (ESCRT)-afhankelijke en niet-ESCRT-afhankelijke routes. De meest kritische regulatoren binnen deze routes zijn vacuolaire eiwitsortering 4 homoloog a (VPS4a) en Ras-gerelateerd eiwit Rab-27a (Rab27a)10,11,12. Vps4a fungeert als een ATPase en katalyseert het ESCRT-afhankelijke membraanremodelleringsproces, dat de grootte van het exosoom en de snelheid van exosoomvorming regelt13,14. Rab27a is een essentieel klein GTPase dat de koppeling van multivesiculaire lichamen aan het plasmamembraan15 regelt. De secretie van exosomen wordt negatief gereguleerd door het zoogdierdoelwit van rapamycinecomplex 1 (mTORC1)16, dat wordt geactiveerd door MHY1485 competitieve binding aan het ATP-structuurdomein van rapamycine17. Over het algemeen zou MHY1485 indirect de synthese en afscheiding van exosomen kunnen remmen. Exosomen kunnen in bijna alle lichaamsvloeistoffen worden gedetecteerd. Plasma-exosomen zijn productiever dan exosomen die zijn afgeleid van andere lichaamsvloeistoffen18. Bovendien beschermen exosomen de nucleïnezuren die ze dragen tegen afbraak19.
MiRNA's zijn kleine niet-coderende RNA-moleculen die de cellulaire activiteit reguleren20. Exosomen zijn overvloedig ontdekt in tal van miRNA's die cruciaal zijn voor het verbeteren van wondangiogenese, met name mir-126, mir-125a en mir-31-5p. Een eerdere studie toonde aan dat exosomen afgeleid van mir-126 die mesenchymale stamcellen van het beenmerg tot overexpressie brengen, de proliferatie, migratie en buisvorming van menselijke navelstrengader-endotheelcellen in vitro bevorderden door mir-12621 over te brengen. Een andere studie gaf aan dat exosomen die werden uitgescheiden door menselijke vet-afgeleide mesenchymale stamcellen mir-125a overbrachten naar endotheelcellen en angiogenese bevorderden door de angiogene remmer delta-achtig 4 in wonden9 te onderdrukken. Yan et al. rapporteerden dat mir-31-5p geladen in melkexosomen de endotheelcelfuncties in vitro verbeterde, angiogenese bevorderde en diabetische wondgenezing verbeterde in vivo22. Van deze miRNA's was mir-31-5p het enige miRNA dat significant werd gedownreguleerd bij diabetische muizenwonden in vergelijking met dat bij normale muizenwonden22.
MEBO is een olieachtige zalf die kan worden gebruikt om vuurvaste wonden zoals CDW'ste behandelen 23,24. Het mechanisme van MEBO dat wondgenezing bevordert, is echter niet opgehelderd. Eerdere studies hebben aangetoond dat MEBO wondneovascularisatie bevordert door de expressie van vasculaire endotheliale groeifactoren bij diabetische ratten te upreguleren25. Slechts enkele studies hebben dit probleem echter aangepakt vanuit het perspectief van exosoom-gedragen miRNA's. Om de effecten van MEBO op CDW's te onderzoeken, hebben we in deze studie een wondmodel van volledige dikte geïnduceerd bij diabetische muizen met behulp van streptozotocine (STZ) en een vetrijk dieet. We toonden aan dat MEBO de wondgenezing bij diabetische muizen aanzienlijk versnelde. Bovendien bestudeerden we de effecten van MEBO op de dichtheid van microvaten, expressieniveaus van pExo-mir-31-5p, samen met VPS4a en Rab27a mRNA en eiwit in wondweefsels. Daarom veronderstelden we dat MEBO wondgenezing bevorderde door pExo-mir-31-5p te reguleren om wondangiogenese bij diabetische muizen te reguleren. Een schematisch overzicht van de onderzoeksopzet is weergegeven in Figuur 1.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle dierexperimentele protocollen zijn goedgekeurd door het Animal Care and Use Committee van de Youjiang Medical University for Nationalities, Baise, China (2018051501). Specifieke pathogeenvrije (SPF) mannelijke C57BL/6-muizen (7 weken oud) werden gehuisvest in het SPF Laboratory Animal Center van Youjiang Medical College for Nationalities en kregen een gewoon of vetrijk dieet en schoon water. Gedurende het hele onderzoek werd de temperatuur van de voederruimte op 23 °C tot 25 °C gehouden, de luchtvochtigheid 40% tot 60% en de licht/donkercyclus 12 uur. De dierenverzorging werd verleend in overeenstemming met de richtlijnen van de Amerikaanse National Institutes of Health en het Chinese National Institute of Health (Beijing, China). Alle chirurgische ingrepen werden uitgevoerd onder narcose met natriumpentobarbital (0,3%, 50 mg/kg) volgens een gestandaardiseerd protocol dat in ons laboratorium was opgesteld. Alles werd in het werk gesteld om het aantal gebruikte dieren te verminderen en het ongemak voor dieren tot een minimum te beperken. Alle secties van dit rapport voldoen aan de ARRIVE-richtlijnen voor het rapporteren van dieronderzoek.
Muiswondmodel en behandeling
In totaal werden 120 muizen willekeurig toegewezen aan een niet-diabetische controlegroep (NDB-CTR; n = 24) of diabetische (n = 96). Om diabetes type 2 bij de mens te simuleren, kregen muizen in de diabetesgroep gedurende 4 weken een vetrijk, geraffineerd suikerdieet en vervolgens intraperitoneaal geïnjecteerd (ip) met STZ (100 mg/kg), eenmaal per dag, gedurende 2 opeenvolgende dagen na 16 uur vasten. Nuchtere bloedglucosespiegels werden gemeten op de 5e en 6e dag na STZ-injectie. Muizen met nuchtere bloedglucosewaarden van meer dan 16,7 mmol/L bij twee gelegenheden en met symptomen zoals polyfagie, polydipsie, polyurie en gewichtsverlies werden beschouwd als succesvolle diabetesmodellen26. Na 1 week werd het dorsale haar geschoren en werd een ronde huidwond over de volledige dikte (diameter = 15 mm) op de rug van elke muis gegenereerd na intraperitoneale toediening van natriumpentobarbital (0,3%, 50 mg/kg). De muizen in de diabetische groep werden willekeurig toegewezen aan de MEBO-, BFX- (beifuxin-), DB-CTR- (diabetische controle) of MHY1485 (MHY) groepen. Muizen in de MEBO- en BFX-groepen werden behandeld met MEBO (0,2 g/cm2) en BFX-gel (0,2 g/cm2) die respectievelijk eenmaal per dag op de wond werden aangebracht. BFX-gel, waarvan de generieke naam bovine basic fibroblast growth factor gel is, is een actueel medicijn dat wordt gebruikt om chronische wonden te behandelen27. De muizen in de NDB-CTR-, DB-CTR- en MHY-groepen werden behandeld met fysiologische zoutoplossing. De MHY-groep werd ook behandeld met MHY1485 (10 mg/kg, ip) gedurende 2 opeenvolgende dagen. De diabetische muizen werden eenmaal per dag subcutaan geïnjecteerd met insuline in een dosering van 2-4 IE/kg om de bloedglucosespiegel onder controle te houden.
Verzameling proefmonsters
Op dag 1, 7, 13 en 18 werden zes muizen in elke groep willekeurig geselecteerd voor euthanasie door cervicale dislocatie, en monsters van ringvormige epidermale weefsels, inclusief de wond, werden genomen op 0,5 cm van de wondrand met een steriele weefselschaar. Vervolgens werden de wondweefsels verzameld voor HE-kleuring, qPCR-analyse en WB-testen. Bloedmonsters werden afgenomen van muizen in de DB-CTR- en MEBO-groepen met behulp van de retro-orbitale methode onder natriumpentobarbital-anesthesie. Bloedmonsters werden gemengd met heparine in antistollingsbuisjes en gedurende 15 minuten gecentrifugeerd bij 3.000 x g om het plasma-supernatant te herstellen. Alle monsters werden bewaard bij -80 °C. Om de wondsluitingssnelheid te berekenen, werd een digitale camera gebruikt om foto's te maken van wondgenezing op een vast tijdstip en op gelijke afstand met een schaalverdeling aan de zijkant. Het wondgebied werd gemeten met behulp van de ImageJ-software. Het wondsluitingspercentage werd als volgt berekend:
Wondsluitingspercentage (%) = [W1-Wn] / W1 x 100%
waarbij W1 en Wn verwijzen naar de wondgebieden op respectievelijk dag 1 en n.
Histopathologische test
De kleuring werd uitgevoerd om pathologische wondgenezing dynamisch te observeren. Na fixatie met een 4% paraformaldehyde-oplossing gedurende 16 uur, werden de wondweefsels gedehydrateerd, ingebed in paraffine en vervolgens in secties van 3 μm gesneden. De kleuring werd uitgevoerd op weefselglaasjes. Om de dichtheid van de microvaten van de wondweefsels te onderzoeken, werden weefselglaasjes in beeld gebracht met behulp van een optische microscoop. Om de dichtheid van microvaten van elk monster te kwantificeren, selecteerden we het gebied met de hoogste capillaire dichtheid onder een 10x microscoop, selecteerden en fotografeerden vervolgens drie niet-overlappende gebieden onder een 20x microscoop. De dichtheden van de microvaten werden berekend en gemiddeld met behulp van ImageJ.
Isolatie en karakterisering van plasma-exosomen
Ultracentrifugatie werd uitgevoerd om plasma-exosomen te isoleren volgens een gepubliceerd protocol met kleine aanpassingen28. In het kort werd 2 ml plasma gecentrifugeerd bij 2.000 x g bij 4 °C gedurende 30 minuten. Het bovenstaande werd opnieuw gecentrifugeerd bij 10.000 x g bij 4 °C gedurende 45 minuten om de grotere blaasjes te verwijderen. Het bovenstaande werd gefilterd door een filtermembraan van 0,45 μm en het filtraat werd verzameld. Het filtraat werd vervolgens gedurende 70 minuten gecentrifugeerd bij 100.000 x g bij 4 °C. Na het verwijderen van het supernatant werd de pellet opnieuw gesuspendeerd met 10 ml voorgekoelde 1x PBS en gedurende 70 minuten gecentrifugeerd bij 4 °C, 100.000 x g. Het bovenstaande werd verwijderd en de pellet werd opnieuw gesuspendeerd met 150 μL voorgekoelde 1x PBS en bewaard bij -80 °C. Om de hierboven verzamelde plasma-exosomen te bevestigen, gebruikten we transmissie-elektronenmicroscopie (TEM) om de morfologie van exosomen te bepalen, een nano-flow cytometriesysteem om de grootte en concentratie van exosomen te analyseren, en WB om de expressieniveaus van de exosoommarkers CD81 en TSG101 te detecteren.
RNA-extractie, reverse transcribe (RT) en qPCR
qPCR werd uitgevoerd om de mRNA-expressieniveaus van Vps4a, Rab27a en pExo-mir-31-5p te kwantificeren. Wondweefsel werd verzameld om totaal RNA te extraheren met behulp van RNA-extractiereagens. Een totale RNA-concentratie tussen 400-700 ng/μL werd als acceptabel beschouwd. De RNA-monsters werden omgekeerd getranscribeerd in cDNA met behulp van reverse transcriptase met dsDNase volgens de instructies van de fabrikant. qPCR werd uitgevoerd met behulp van de SYBR Green qPCR Mix (geen ROX). Wat mir-31-5p betreft, werd RNA uit plasma-exosomen geëxtraheerd met behulp van de minikit, omgekeerd getranscribeerd met behulp van de First Strand cDNA Synthesis Kit en geamplificeerd met behulp van SYBR Green qPCR Master Mix. De expressies van mRNA's en miRNA's werden geanalyseerd met behulp van de 2-ΔΔCt-methode ten opzichte van respectievelijk β-actine en cel-mir-39. De gebruikte primers worden weergegeven in tabel 1.
Westerse vlek
De WB-test werd gebruikt om de expressieniveaus van Vps4a- en Rab27a-eiwitten te detecteren, evenals de niveaus van de exosoommarkers CD81 en TSG101. De totale eiwitniveaus van de wondweefsels en plasma-exosomen werden geëxtraheerd door de RIPA-lysisbuffer en de eiwitconcentratie werd bepaald door de Bicinchoninic Acid Protein Assay Kit. In totaal werd 50 μg eiwit gescheiden door natriumdodecylsulfaat-polyacrylamide. Na het deppen op polyvinylideenfluoridemembranen werden de membranen geblokkeerd met runderserumalbumine en vervolgens 's nachts bij 4 °C geïncubeerd met antilichamen tegen Vps4a (1:3000), Rab27a (1:1000), glyceraldehyde-3-fosfaatdehydrogenase (GAPDH) (1:5000), CD81 (1:3000), TSG101 (1:3000), vervolgens geïncubeerd met secundaire antilichamen, anti-konijn IgG-peroxidase geconjugeerd (1:3000), bij 37 °C gedurende 1 uur. De membranen werden gevisualiseerd met behulp van een verbeterde chemiluminescentiekit.
Statistische analyse
Alle gegevens die in dit onderzoek werden gepresenteerd, werden geanalyseerd op statistische significantie met behulp van SPSS-software. Alle resultaten van deze analyses werden gevisualiseerd met behulp van GraphPad Prism-software. Verschillen tussen de twee groepen werden onderzocht met behulp van een onafhankelijke steekproef t-test. Voor vergelijkingen met meerdere groepen werd eenrichtingsanalyse van variantie gebruikt voor homogene variantiegegevens, terwijl de test van Welch werd toegepast op heterogene variantiegegevens. Verder gebruikten we de minst significante verschiltest voor paarsgewijze vergelijking van gegevens over gelijke variantie en Tamhane's T2-test voor gegevens over ongelijke variantie. Kwantitatieve gegevens worden weergegeven als gemiddelde ± standaarddeviatie. Correlaties werden geanalyseerd met behulp van Spearman's correlatieanalyse voor niet-normaal verdeelde variabelen en werden beschreven als correlatiecoëfficiënten en 95% betrouwbaarheidsintervallen. P < 0,050 werd als statistisch significant beschouwd. Alle experimenten werden minstens drie keer herhaald.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
MEBO versnelt wondgenezing bij diabetische muizen
Om de werkzaamheid van MEBO bij diabetische wonden te valideren, hebben we een diabetisch wondmodel opgesteld en foto's gemaakt op dag 1, 7, 13 en 18. De wonden in elke groep genazen geleidelijk in de loop van de tijd (Figuur 2A). De wonden in de NDB-CTR groep waren op dag 18 volledig genezen. De wonden in de MEBO-groep genazen het snelst van de diabetische wonden, vormden een paar roze gr...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
CDW's, een complicatie van diabetes, kunnen leiden tot aanzienlijke mortaliteit en invaliditeit en worden vaak geassocieerd met vaataandoeningen29. MEBO is effectief bij de behandeling van CDW's; Het onderliggende mechanisme is echter onduidelijk30. Daarom wilden we het onderzoeken vanuit het perspectief van exosomen en functionele miRNA's. In deze studie ontdekten we dat de wondsluitingssnelheid en de dichtheid van de microbloedvaten van d...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende belangen hebben.
Dankbetuigingen
Deze studie werd ondersteund door de National Natural Science Foundation of China onder Grant [nummer 81960875], Guangxi Natural Science Foundation onder Grant [nummer 2023GXNSFDA026008], Guangxi medisch en gezondheidsgeschikt technologieontwikkelings- en toepassingsproject onder Grant [nummer S2022134], Guangxi Zhuang Autonomous Region Health Commission van westerse geneeskunde zelf gefinancierd onderzoeksproject onder Grant [nummer 20210234], en Guangxi Bureau of Traditional Chinese Medicine zelf gefinancierd onderzoeksproject in het kader van Subsidie [nummer GZZC2020255].
Bijdrage van de auteur:
Yuanyuan Xu: Schrijven - origineel ontwerp, Software, Methodologie, Onderzoek, Formele analyse, Conceptualisering. Jianchang Xu: Middelen, Methodologie, Onderzoek. Anbang Zhou: Onderzoek, Formele analyse. Nimiao Cen: Visualisatie, Lina Huang: Supervisie. Biaoliang Wu: Schrijven-review & redactie, Bronnen, Projectadministratie, Methodologie, Funding acquisitie, Data curatie, Conceptualisatie.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 1×PBS | Solarbio (Beijing, China) | #P1020 | Buffered oplossing |
| 4% paraformaldehyde-oplossing | Solarbio (Beijing, China) | #P1110 | Fixeerweefsel |
| anti-konijn IgG peroxidase geconjugeerd | Affiniteit | #S0001 | Secundaire antilichaam |
| Beifuxin-gel | Essexbio (Zhuhai, China) | #042404A06 | Een zalf om chronische wonden te behandelen |
| CD81-antilichaam | Signalway Antibody | #41779 | Primair antilichaam |
| verbeterde chemiluminescentie-kit | Epizyme(China) | #SQ101 | Chemiluminescentie-kit voor eiwitband |
| Glyceraldehyde-3-fosfaatdehydrogenase (GAPDH) antilichaam | Affiniteit | #AF7021 | Primair antilichaam |
| GraphPad Prism | https://www.graphpad.com/prism/ | Visualisatie | |
| ImageJ | https://imagej.net/ij/ | Meet wondoppervlak | |
| Instant Bicinchoninic Acid (BCA) Eiwitbepalingskit | Epizyme(China) | #ZJ102 | Bepaal de eiwitconcentratie |
| LightCycler96-systeem | Roche | qPCR-apparatuur | |
| MHY1485 | MedChemExpress (USA) | #326914-06-1 | Een activator van de mammalian target of rapamycin complex 1 (mTORC1) |
| miRNeasy Mini-kit | Tiangen (China) | #217004 | RNA-extractie (miRNA) |
| Vochtige-exposéer brandpleister | Mebo (Shantou, China) | #2403103B | Een zalf om chronische wonden te behandelen |
| MonAmp SYBR Green qPCR Mix (geen ROX) | Monad (China) | #MQ10101S | qPCR-kit (mRNA) |
| MonScript RTIII All-in-One Mix met dsDNase | Monad (China) | #MR05101S | Omgekeerde transcriptie-kit (mRNA) |
| nano flowcytometriesysteem | N30E (China) | Een apparaat om de grootte en concentratie van exosomen te analyseren | |
| optisch microscoop | Olympus (Tokyo, Japan) | Bekijk weefselpathomorfologie | |
| fysiologisch zout | Kelun (Sichuan, China) | #L24041709 | Fysiologisch zout |
| polyvinylideenfluoridemembranen | Millipore(USA) | #IPVH00010 | Western blotting-membraan |
| Primers | Generay Biotech Co., Ltd. (Shanghai, China) | ||
| Rab27a-antilichaam | Cell Signaling Technology | #69295 | Primair antilichaam |
| RevertAid First Strand cDNA-synthesekit | Thermo Fisher (USA) | #K1622 | Omgekeerde transcriptie-kit (miRNA) |
| RIPA-lysebuffer | Solarbio (Beijing, China) | #R0010 | Totale eiwitextractie |
| natriumdodecylsulfaat–polyacrylamide | Epizyme(China) | #PG222 | Elektroforesebuffer |
| natriumpentobarbital | Merck (Shanghai, China) | #P3761 | Anesthesie |
| Specifiek pathogeen-vrije mannelijke C57BL/6-muizen | Guangdong Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd (Guangdong, China) | Experimentele dieren | |
| SPSS | https://www.ibm.com/spss | Statistische analyse | |
| streptozotocine | Solarbio (Beijing, China) | #S8050 | Induceert diabetisch muismodel |
| SYBR Green qPCR Master Mix | Roche (Zwitserland) | #4943914001-SR | qPCR-kit (miRNA) |
| transmissie-elektronenmicroscopie | Hitachi (Japan) | HT-7700 | Een apparaat om de morfologie van exosomen te bepalen |
| TRIZOL | Invitrogen (USA) | #15596026CN | RNA-extractie (mRNA) |
| TSG101-antilichaam | Abcam | # ab125011 | Primair antilichaam |
| Vps4a-antilichaam | Abcam | # ab197896 | Primair antilichaam |
Referenties
- Zhi, Q., et al. The effectiveness of cell-derived exosome therapy for diabetic wound: A systematic review and meta-analysis. Ageing Res Rev. 85, 101858(2023).
- David, S., Vikrant, R., Sarah, M., Kira, C., Devendra, K. A. Impact of resolvin mediators in the immunopathology of diabetes and wound healing. Expert Rev Clin Immunol. 17 (6), 681-690 (2021).
- Holly, N. W., Matthew, J. H. Wound healing: cellular mechanisms and pathological outcomes. Open Biol. 10 (9), 200223(2020).
- Vikrant, R., Rebecca, M., Devendra, K. A. Stem Cells and Angiogenesis: Implications and Limitations in Enhancing Chronic Diabetic Foot Ulcer Healing. Cells. 11 (15), 2287(2022).
- Nour, S., Imani, R., Chaudhry, G. R., Sharifi, A. M. Skin wound healing assisted by angiogenic targeted tissue engineering: A comprehensive review of bioengineered approaches. J Biomed Mater Res A. 109 (4), 453-478 (2020).
- Shirin, N., Rana, I., Chaudhry, G. R., Ali, M. S. Skin wound healing assisted by angiogenic targeted tissue engineering: A comprehensive review of bioengineered approaches. J Biomed Mater Res A. 109 (4), 453-478 (2020).
- Ruo, L., et al. Exosome-cargoed microRNAs: Potential therapeutic molecules for diabetic wound healing. Drug discovery today. 27 (10), 103323(2022).
- Li, Q., et al. MiR146a-loaded engineered exosomes released from silk fibroin patch promote diabetic wound healing by targeting IRAK1. Signal transduction and targeted therapy. 8 (1), 62(2023).
- Yang, A., et al. Exosomes from adipose-derived stem cells and application to skin wound healing. Cell Prolif. 54 (3), 119(2021).
- Fang, W., Yan, L. The emerging roles of exosome-derived noncoding RNAs in the tumor immune microenvironment and their future applications. Biomed Pharmacother. 156, 113863(2022).
- Phyllis, I. H., Anil, C. Multivesicular body morphogenesis. Annu Rev Cell Dev Biol. 28, 337-362 (2012).
- Matias, O., et al. Rab27a and Rab27b control different steps of the exosome secretion pathway. Nat Cell Biol. 12 (1), 1-13 (2009).
- Christophe, C., Sourav, M., Nolwenn, M., Wouter, H. R., Winfried, W. The role of VPS4 in ESCRT-III polymer remodeling. Biochem Soc Trans. 47 (1), 441-448 (2019).
- Hao, L., Rui, Z., Wen, W., Li, L. miR-4454 Promotes Hepatic Carcinoma Progression by Targeting Vps4A and Rab27A. Oxid Med Cell Longev. 2021, 9230435(2021).
- Mostafa, J., et al. Identification of the first structurally validated covalent ligands of the small GTPase RAB27A. RSC Med Chem. 13 (2), 150-155 (2022).
- Wen, Z., et al. Exosome Release Is Regulated by mTORC1. Adv Sci (Weinh). 6 (3), 1801313(2019).
- Ji, Z., et al. Administration of follicle-stimulating hormone induces autophagy via upregulation of HIF-1α in mouse granulosa cells. Cell Death Dis. 8 (8), e3001(2017).
- Tânia, S. M., José, C., Ilka, M. R., Odete, A. S. Henriques Ana Gabriela. Exosome isolation from distinct biofluids using precipitation and column-based approaches. PLoS One. 13 (6), e0198820(2018).
- Yuan, Z., Yun, L., Hai, L., Wai, T. Exosomes: biogenesis, biologic function and clinical potential. Cell Biosci. 9, 19(2019).
- Kehinde, R. MiR equal than others: MicroRNA enhancement for cutaneous wound healing. J Cell Physiol. 236 (12), 8050-8059 (2021).
- Lei, Z., et al. Exosomes from microRNA-126 overexpressing mesenchymal stem cells promote angiogenesis by targeting the PIK3R2-mediated PI3K/Akt signalling pathway. J Cell Mol Med. 25 (4), 2148-2162 (2020).
- Cheng, Y., et al. Milk exosomes-mediated miR-31-5p delivery accelerates diabetic wound healing through promoting angiogenesis. Drug Deliv. 29 (1), 214-228 (2022).
- Yuan, G., Yan, J., Jin, H., Zuo, H., Qian, T. Moist exposed burn ointment accelerates diabetes-related wound healing by promoting re-epithelialization. Front Med (Lausanne). 9, 1042015(2023).
- Ming, S., et al. Combined application of moist exposed burn ointment and maggot therapy in wound healing. J Wound Care. 31 (Sup10), S41-S52 (2022).
- Qian, T., et al. Moist exposed burn ointment promotes cutaneous excisional wound healing in rats involving VEGF and bFGF. Mol Med Rep. 9 (4), 1277-1282 (2014).
- Xiao, Q., et al. Role of Hydrogen Sulfide in the Development of Colonic Hypomotility in a Diabetic Mouse Model Induced by Streptozocin. J Pharmacol Exp Ther. 384 (2), 287-295 (2022).
- Jia, Z., et al. Hydrogel plus growth factors treatment after 2940nm erbium:YAG lattice laser improves periorbital wrinkles and wound healing: a case report. J Int Med Re.s. 49 (9), 3000605211042506(2021).
- Hina, K., et al. Comparative proteomics evaluation of plasma exosome isolation techniques and assessment of the stability of exosomes in normal human blood plasma. Proteomics. 13 (22), 3354-3364 (2013).
- Yi, H., et al. Exosomes derived from pioglitazone-pretreated MSCs accelerate diabetic wound healing through enhancing angiogenesis. J Nanobiotechnology. 19 (1), 150(2021).
- Ai, Z., et al. Effects of Moist Exposed Burn Therapy and Ointment (MEBT/MEBO) on the autophagy mTOR signalling pathway in diabetic ulcer wounds. Pharm Biol. 58 (1), 124-130 (2020).
- Nina, D., et al. Updates in Diabetic Wound Healing, Inflammation, and Scarring. Semin Plast Surg. 35 (3), 153-158 (2021).
- Dimitrios, B., Ioanna, E., Aristidis, V. Pathogenesis and treatment of impaired wound healing in diabetes mellitus: new insights. Adv Ther. 31 (8), 817-836 (2014).
- Heng, G., et al. Metal-polyphenol nanocomposite hybrid hydrogel: A multifunctional platform for treating diabetic foot ulcers through metabolic microenvironment reprogramming. Biomaterials. 322, 123414(2025).
- Elof, E., et al. Chronic wounds: Treatment consensus. Wound Repair Regen. 30 (2), 156-171 (2022).
- Elena, T., Andreas, B., Hannes, R., Andreas, R., Stefan, R. B. Current aspects in the pathophysiology and treatment of chronic wounds in diabetes mellitus. Biomed Res Int. 2013, 385641(2013).
- Jamie, L. B., Wyant, W. A., Beatriz, A. A., Robert, S. K., Ivan, J. Diabetic Wound-Healing Science. Medicina (Kaunas). 57 (10), 1072(2021).
- Xin, Z., Yan, G., Kun, Y., Peng, L., Jun, W. The signaling pathways of traditional Chinese medicine in promoting diabetic wound healing. J Ethnopharmacol. 282, 114662(2021).
- Vilelmine, J. C., Evangelia, G. T., Georgia, C. S., Fotini, N. A., John, D. I. Comparing oil based ointment versus standard practice for the treatment of moderate burns in Greece: a trial based cost effectiveness evaluation. BMC Complement Altern Med. 11, 122(2011).
- Hong, Z., Qing, S., Lei, Y., Jia, C. Clinical Study of MEBO Combined with Jinhuang Powder for Diabetic Foot with Infection. Evid Based Complement Alternat Med. 2021, 5531988(2021).
- Ya, T., Xiao, L., Lei, J. Simultaneous Determination of 12 Components in Moist Exposed Burn Ointment by HPLC. China Pharm. 31 (16), 73-77 (2022).
- Wei, L., Yu, M., Qi, Y., Yu, P., Qing, M. Moist exposed burn ointment for treating pressure ulcers: A multicenter randomized controlled trial. Medicine (Baltimore). 96 (29), e7582(2017).
- Qing, H., et al. Vps4A mediates the localization and exosome release of β-catenin to inhibit epithelial-mesenchymal transition in hepatocellular carcinoma. Cancer Lett. 457, 47-59 (2019).
- Zhi, W., et al. Extracellular vesicles in fatty liver promote a metastatic tumor microenvironment. Cell Metab. 35 (7), 1209-1226 (2023).
- Sathish, M., Asawari, B., Rashmi, J., Naveen, J., Madhan, J. Exosomal therapy-a new frontier in regenerative medicine. Stem Cell Investig. 8, 7(2021).
- Sonam, G., Dany, P., Loukia, T. o, Julien, B. The exosome journey: from biogenesis to uptake and intracellular signalling. Cell Commun Signal. 19 (1), 47(2021).
- Roi, I., Felipe, C. R., Wei, Y., Jerrold, M. O. Exosomes as mediators of intercellular crosstalk in metabolism. Cell Metab. 33 (9), 1744-1762 (2021).
- Xiao, Z., et al. The function and clinical application of extracellular vesicles in innate immune regulation. Cell Mol Immunol. 17 (4), 323-334 (2020).
- Li, C., Shu, S., Song, W. LncRNA SNHG16 Knockdown Promotes Diabetic Foot Ulcer Wound Healing via Sponging MiR-31-5p. Tohoku J Exp Med. 261 (4), 283-289 (2023).
- Ai, S., Ning, S., Xiao, L., Zhen, H. Circ-FBXW12 aggravates the development of diabetic nephropathy by binding to miR-31-5p to induce LIN28B. Diabetol Metab Syndr. 13 (1), 141(2021).
- Wei, X., Ya, L., Ying, Z., Zhi, Y. Identification of miRNA-mRNA Regulatory Networks Associated with Diabetic Retinopathy using Bioinformatics Analysis. Endocr Metab Immune Disord Drug Targets. 23 (13), 1628-1636 (2023).
- Fei, W., et al. MicroRNA-31 Can Positively Regulate the Proliferation, Differentiation and Migration of Keratinocytes. Biomed Hub. 5 (2), 93-104 (2021).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
