Methodenartikel

Nauwkeurige visualisatie van insulinereceptoren A en B in de hersenen van muizen met een RNA in situ hybridisatietest

843 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/68677

⸱

15 juli 2025

 ,  ,  ,  , 
1Diabetes Section/Laboratory of Clinical Investigation, National Institute on Aging, National Institutes of Health

In dit artikel

Samenvatting

We hebben een Duplex in situ hybridisatietest opgezet om insulinereceptorisovormen IR-A en IR-B in de plexus choroid muizen in kaart te brengen, waardoor de beperkingen van traditionele methoden worden overwonnen. Deze benadering met hoge resolutie onthult isovormspecifieke expressie en biedt nieuwe inzichten in insulinesignalering in de hersenen en mogelijke isovormgerichte therapieën voor neurologische aandoeningen.

Samenvatting

Insulinereceptoren (IR's) komen op grote schaal tot expressie in alle weefsels en alle celtypen. Het bestaat in twee functioneel verschillende isovormen - IR-A en IR-B - die verschillen door 12 aminozuren als gevolg van alternatieve exon 11-splitsing. Deze isovormen vertonen weefsel- en celspecifieke expressiepatronen, waarbij hun relatieve overvloed varieert tijdens ontwikkeling, veroudering en ziekte. Vanwege hun hoge sequentiegelijkenis was het een uitdaging om onderscheid te maken tussen IR-A en IR-B met behulp van traditionele immunologische methoden. Hier beschrijven we een nieuwe Duplex in situ hybridisatie (ISH) assay die de visualisatie van IR-A en IR-B expressie in weefsel mogelijk maakt. Met behulp van deze benadering tonen we voor het eerst aan dat hoewel beide isovormen tot expressie komen in de plexus choroideus van muizen, IR-A overheersend is. Deze methode biedt een krachtig hulpmiddel voor het onderzoeken van de ruimtelijke verdeling van insulinereceptorisovormen in situ over verschillende weefsels. Hoewel real-time qPCR IR-A- en IR-B-transcripten kan detecteren in monocellulaire in-vitroculturen , mist het de capaciteit voor ruimtelijke lokalisatie binnen complexe weefsels, wat de noodzaak en het nut van de Duplex ISH-techniek benadrukt.

Inleiding

De insulinereceptor (IR) is een single-pass transmembraan enzymatische receptor die de diverse fysiologische effecten van insuline medieert. Het functioneert als een dimeer eiwit, waarbij elk monomeer bestaat uit twee peptideketens die met elkaar verbonden zijn door een disulfidebinding: de extracellulaire α-subeenheid, die het ligandbindende domein bevat, en de transmembraan β-subeenheid, waarvan de intracellulaire sequentie intrinsieke tyrosinekinase-activiteit bezit1. Door alternatieve splicing van exon 11 geeft transcriptie van het IR-gen aanleiding tot twee IR-mRNA-varianten. IR-A mist exon 11, terwijl IR-B het behoudt. Bijgevolg verschillen IR-A en IR-B door een sequentie van 12 aminozuren nabij de C-terminus van de α-subeenheid, wat resulteert in een duidelijke binding van groeifactoren naast rijpe insuline, en variërende stroomafwaartse signaleringseigenschappen. Hoewel beide varianten een vergelijkbare affiniteit voor insuline vertonen, heeft IR-A een hogere affiniteit voor insuline-achtige groeifactor-II (IGF-II) en pro-insuline in vergelijking met IR-B. De expressiepatronen van IR-A en IR-B variëren afhankelijk van het weefsel- en celtype en de ziektetoestand2.

Hun differentiële expressie in weefsels en ziekten onderstreept hun unieke bijdrage aan fysiologie en pathologie. De plexus choroides (CP), een gespecialiseerde structuur die cerebrospinale vloeistof (CSF) produceert en deel uitmaakt van de bloed-CSF-barrière, speelt een cruciale rol bij het transport van voedingsstoffen, de afvoer van afvalstoffen en neuroprotectie, vooral tijdens ontstekingen. Beide IR-isovormen worden tot expressie gebracht in de CP, waar ze waarschijnlijk het volume en de samenstelling van de CSF reguleren. IR-A bevordert, door zijn hoge affiniteitsbinding door IGF-II, waarschijnlijk cellulaire proliferatie en weefselherstel in het CP-epitheel. IR-B, aan de andere kant, is betrokken bij insulinetransport door de bloed-CSF-barrière, ter ondersteuning van de beschikbaarheid van insuline in de hersenen voor astrocyten, neuronen, glia en glucosehomeostase 3,4.

Pre-diabetische IR-spiegels zijn in verband gebracht met verhoogde CSF-tau bij asymptomatische personen met een genetisch risico op de ziekte van Alzheimer (AD)5, en veranderingen in de IR-A/IR-B-ratio zijn in verband gebracht met insulineresistentie, veroudering en verhoogde proliferatieve activiteitsfactoren die kunnen bijdragen aan kanker en andere pathologieën6. Het identificeren van isovormspecifieke expressiepatronen van IR-A en IR-B is een cruciale stap in de richting van de ontwikkeling van nieuwe therapeutische strategieën voor complexe aandoeningen van het centrale zenuwstelsel. De huidige benaderingen, zoals immunokleuring en qPCR, zijn echter beperkt: niet alle eiwitten kunnen betrouwbaar worden geimmunolabeld vanwege een gebrek aan gevalideerde antilichamen, en hoewel qPCR zeer specifiek is, mist het ruimtelijke resolutie.

Om deze beperkingen te overwinnen, hebben we gebruik gemaakt van Duplex in situ hybridisatie (ISH), een geavanceerde RNA-detectietechnologie op basis van het RNAscope-platform BaseScope. Deze test maakt gebruik van een uniek dubbel-Z-sondeontwerp dat tandembinding aan het doel-RNA vereist, waardoor een hoge specificiteit en gevoeligheid mogelijk is, zelfs voor transcripten met een lage abundantie. Het fluorescerende of chromogene signaal wordt versterkt door meerdere sondebindingsgebeurtenissen, waardoor de detectie wordt verbeterd en de achtergrondwordt verminderd 7. In tegenstelling tot standaard RNAscope is deze test geoptimaliseerd om korte RNA-sequenties (50-300 basen) te detecteren, waardoor deze bijzonder geschikt is voor het identificeren van alternatieve splitsingsgebeurtenissen, single-nucleotide varianten en zeldzame transcripten in complexe weefsels zoals de hersenen8.

Deze test visualiseert doelen tegelijkertijd als verschillende groene (C1) en rode (C2) chromogene signalen onder helderveld. Het zorgt voor succes met behulp van weefsels gefixeerd in 4% paraformaldehyde (PFA) of 10% neutraal gebufferd formaline (NBF) en doorgesneden op 5 μm-15 μm (bevroren/FFPE), met RNA met een lage tot hoge abundantie. Vanwege de gevoeligheid voor RNA-degradatie, overfixatie en sondefouten, moeten we de voorbehandeling, het ontwerp van de sonde en de controles optimaliseren om de specificiteit te maximaliseren en de achtergrond te minimaliseren. Hier hebben we deze Duplex ISH-test toegepast om de expressiepatronen van IR-A en IR-B in de muizen CP te karakteriseren, wat nieuwe inzichten biedt in de ruimtelijke biologie van IR-isovormen en hun mogelijke rol in de gezondheid en ziekte van de hersenen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Alle dierprocedures werden uitgevoerd in overeenstemming met protocollen die zijn goedgekeurd door het National Institute on Aging (NIA), dat volledig is geaccrediteerd door de American Association for Accreditation of Laboratory Animal Care (AAALAC). Protocollen werden beoordeeld en goedgekeurd door de Animal Care and Use Committee van het NIA Intramural Research Program (IRP/NIA). Muizen werden gehuisvest in een temperatuurgecontroleerde faciliteit onder een licht/donker-cyclus van 12 uur, met ad libitum toegang tot water en standaard voedsel, tenzij anders aangegeven. C57BL/6J mannelijke muizen werden verkregen van het Jackson Laboratory en gebruikt voor experimenten op de leeftijd van 3-4 maanden.

1. Vaste bevroren monstervoorbereiding

  1. Verfuseer de muis met vers bereide 4% PFA in 1x PBS en plaats de hele hersenen in vers bereide 4% PFA gedurende 17-24 uur bij 4 °C.
    OPMERKING: Weefsel geplaatst in 4% PFA (10 ml voor elk brein) gedurende niet langer dan 24 uur.
  2. Dompel het weefsel onder in 10% (10 ml) sucrose in 1x PBS bij 4 °C totdat het weefsel naar de bodem van de container zakt. Breng het weefsel vervolgens achtereenvolgens over naar 20% sucrose en ten slotte naar 30% sucrose, zodat het bij elke stap kan zinken.
    OPMERKING: De tijd die het weefsel nodig heeft om te zinken, is afhankelijk van het weefseltype en de grootte. Voor hersenweefsel duurt het ongeveer 18 uur.
  3. Vries het weefsel in OCT-inbeddingsmedia in en bewaar weefselblokken in een luchtdichte verpakking bij -80 °C.
  4. Snijd formaldehyde-gefixeerd bevroren hersenweefsel in coönale sneden in plakjes van 10 μm en bewaar bij -80 °C tot gebruik.
    OPMERKING: Monteer de secties op positief geladen microscoopglaasjes; Andere soorten objectglaasjes kunnen leiden tot weefselverlies. Als objectglaasjes niet onmiddellijk worden gebruikt, bewaar ze dan maximaal 3 maanden bij -80 °C.

2. Doorsnedevoorbehandeling voorafgaand aan duplexdetectietest

  1. Was de objectglaasjes op de dag van de test in 1x PBS gedurende 5 minuten en beweeg het glaasjesrek voorzichtig op en neer om eventuele resterende OCT te verwijderen.
  2. Bak de glaasjes 30 minuten op 60 °C.
  3. Fixeer de dia's in voorgekoelde 4% PFA in 1x PBS gedurende 15 minuten bij 4 °C.
  4. Breng de dia's achtereenvolgens over via een EtOH-reeks: 50% EtOH gedurende 5 minuten bij RT, 70% EtOH gedurende 5 minuten bij RT, 100% EtOH gedurende 5 minuten bij RT, 100% EtOH opnieuw gedurende 5 minuten bij RT.
  5. Laat de dia's 5 minuten aan de lucht drogen bij RT.
  6. Breng 2-4 druppels waterstofperoxide aan op elke sectie en incubeer gedurende 10 minuten bij RT. Spoel eenmaal af met gedestilleerd water.
  7. Bereid 700 ml verse 1x Target Retrieval-oplossing in een bekerglas. Dek af met folie en breng aan de kook (99-100 °C).
    OPMERKING: Kook niet langer dan 30 minuten voor gebruik. Verwarm intussen de oven voor (zie de materiaaltabel) op 40 °C.
  8. Dompel het glaasjesrek voorzichtig onder in de kokende Target Retrieval-oplossing en incubeer gedurende 5 minuten. Houd de temperatuur tussen 98–102 °C en houd deze nauwlettend in de gaten.
    NOTITIE: Afhankelijk van het weefseltype moet de kooktijd mogelijk worden aangepast (5-15 min).
  9. Breng het hete schuifrek onmiddellijk over in een schaal met gedestilleerd water en beweeg het rek 3-5x op en neer. Herhaal met vers gedestilleerd water.
  10. Spoel de glaasjes 100% EtOH vers uit en beweeg ze 3-5x op en neer. Laat de glaasjes aan de lucht drogen.
  11. Gebruik een hydrofobe barrièrepen om 2-3x rond elk weefselgedeelte te tekenen. Laat de barrière volledig drogen bij RT.
  12. Plaats de dia's in de Batch Slide Tray. Voeg protease (zie de materiaaltabel) toe aan elke sectie en zorg ervoor dat het weefsel volledig bedekt is. Incubeer in de oven op 40 °C gedurende 15 min.
    OPMERKING: De incubatietijd van protease moet mogelijk worden aangepast, afhankelijk van het weefseltype en het doelgen.
  13. Haal de glijschaal uit de oven en plaats deze in gedestilleerd water. Was de dia's voorzichtig door ze 2 minuten op en neer te bewegen en herhaal deze stap 2x met vers gedestilleerd water.

3. Duplex opsporingstest

  1. Sondes
    1. Bereid twee extra secties voor voor positieve en negatieve controlesondes.
    2. Selecteer controletasters met hetzelfde aantal ZZ-paren als de doelsonde. Gebruik voor 1 ZZ-paar een positieve controle en een negatieve controle (zie de materiaaltabel).
    3. Breng de sondes vóór gebruik gedurende 10 minuten in evenwicht bij 40 °C en breng de AMP1-12-reagentia op RT.
  2. Hybridisatie van sondes
    1. Draai de C2-sonde kort af en meng in een verhouding van 1:50 met de C1-sonde. Voeg voldoende sonde (100-200 μL) toe, meng om elk deel volledig te bedekken en incubeer de glaasjes gedurende 2 uur in de oven op 40 °C. Was de dia's 2 x 2 min in 1x Wasbuffer bij RT.
    2. Basiswerkingsgebied Duplex AMP1-toepassing
      1. Verwijder overtollige wasbuffer van de dia's en voeg AMP1 (100-200 μl) toe om elke sectie volledig te bedekken. Keer terug naar de oven en broed gedurende 30 minuten op 40 °C.
      2. Was 2 x 2 min in 1x wasbuffer.
    3. Basiswerkingsgebied Duplex AMP2-toepassing
      1. Verwijder overtollige wasbuffer van de objectglaasjes en voeg AMP2 (100-200 μl) toe om elke sectie volledig te bedekken. Keer terug naar de oven en broed gedurende 30 minuten op 40 °C.
      2. Was 2 x 2 min in 1x wasbuffer.
    4. Basiswerkingsgebied Duplex AMP3-toepassing
      1. Verwijder overtollige wasbuffer van de glaasjes en voeg AMP3 (100-200 μl) toe om elke sectie volledig te bedekken. Keer terug naar de oven en broed gedurende 15 minuten op 40 °C.
      2. Was 2 x 2 min in 1x wasbuffer.
        OPMERKING: Niet langer dan 15 minuten incubatie.
    5. Basiswerkingsgebied Duplex AMP4-toepassing
      1. Verwijder overtollige wasbuffer van de dia's en voeg AMP4 (100-200 μl) toe om elke sectie volledig te bedekken. Keer terug naar de oven en broed gedurende 15 minuten op 40 °C.
      2. Was 2 x 2 min in 1x wasbuffer.
    6. Basiswerkingsgebied Duplex AMP5-toepassing
      1. Verwijder overtollige wasbuffer van de glaasjes en voeg AMP5 (100-200 μl) toe om elke sectie volledig te bedekken. Keer terug naar de oven en broed gedurende 30 minuten op 40 °C.
      2. Was 2 x 2 min in 1x wasbuffer.
    7. Basiswerkingsgebied Duplex AMP6-toepassing
      1. Verwijder overtollige wasbuffer van de dia's en voeg AMP6 (100-200 μl) toe om elke sectie volledig te bedekken. Keer terug naar de oven en broed gedurende 15 minuten op 40 °C.
      2. Was 2 x 2 min in 1x wasbuffer.
        OPMERKING: Wat AMP3 betreft, overschrijd de incubatietijd niet gedurende 15 minuten.
    8. Basiswerkingsgebied Duplex AMP7-toepassing
      1. Verwijder overtollig wasbuffer van de glaasjes en voeg AMP7 (100-200 μl) toe om elke sectie volledig te bedekken en incubeer gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur.
        1. Was 2 x 2 min in 1x wasbuffer.
          OPMERKING: Incubeer met AMP7 bij kamertemperatuur (RT) gedurende 30 minuten.
    9. Basiswerkingsgebied Duplex AMP8-toepassing
      1. Verwijder overtollige wasbuffer van de glaasjes en voeg AMP8 (100-200 μl) toe om elke sectie volledig te bedekken en incubeer gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur.
      2. Was 2 x 2 min in 1x wasbuffer.
        OPMERKING: Incubeer met AMP8-incubatie gedurende 15 minuten bij RT.
    10. Detectie van rood signaal (C2)
      1. Draai de Fast Red-B kort af en meng met Fast Red-A in een verhouding van 1:60.
      2. Breng aan op elke sectie (100-200 μl), dek de lade af en incubeer gedurende 10 minuten bij RT in het donker.
      3. 2x wassen in 1x wasbuffer.
        OPMERKING: Gebruik de gemengde Fast Red-oplossing binnen 5 minuten. Beschermen tegen licht (zonlicht of UV).
    11. Basiswerkingsgebied Duplex AMP9-toepassing
      1. Verwijder overtollige wasbuffer van de glaasjes en voeg AMP9 (100-200 μl) toe om elke sectie volledig te bedekken. Keer terug naar de oven en broed gedurende 15 minuten op 40 °C.
      2. Was 2 x 2 min in 1x wasbuffer.
    12. Basiswerkingsgebied Duplex AMP10-toepassing
      1. Verwijder overtollige wasbuffer van de glaasjes en voeg AMP10 (100-200 μl) toe om elke sectie volledig te bedekken. Keer terug naar de oven en broed gedurende 15 minuten op 40 °C.
      2. Was 2 x 2 min in 1x wasbuffer.
    13. Basiswerkingsgebied Duplex AMP11-toepassing
      1. Verwijder overtollig wasbuffer van de glaasjes en voeg AMP11 (100-200 μl) toe om elke sectie volledig te bedekken. Incubeer 30 minuten bij RT.
      2. Was 2 x 2 min in 1x wasbuffer.
        OPMERKING: Incubeer met AMP11 op RT gedurende 30 minuten.
    14. Basiswerkingsgebied Duplex AMP12-toepassing
      1. Verwijder overtollig wasbuffer van de objectglaasjes en voeg AMP12 (100-200 μl) toe om elke sectie volledig te bedekken. Incubeer 15 minuten bij RT.
      2. Was 2 x 2 min in 1x wasbuffer.
        OPMERKING: Niet langer dan 15 minuten incubatie.
    15. Detectie van groen signaal (C1)
      1. Draai de Fast Green-B tube kort af en meng met Fast Green-A in een verhouding van 1:50.
      2. Breng de GROENE oplossing aan op elke sectie (100-200 μL), dek de bak af en incubeer gedurende 10 minuten bij RT.
      3. Was gedurende 5 minuten in 1x Wash Buffer en spoel kort af in gedestilleerd water.
        OPMERKING: Gebruik de gemengde Fast Green-oplossing binnen 5 minuten. Beschermen tegen licht. De verhouding tussen groen B en A is 1:50. Zowel RED als GREEN substraten zijn alcoholgevoelig. Gebruik geen reagentia die alcohol bevatten.

4. Tegenvlek

  1. Dompel de dia's 1 minuut onder in 50% hematoxyline-kleuringsoplossing bij RT totdat de secties paars lijken.
  2. Spoel 3-5x af met kraanwater door op en neer te bewegen. Herhaal met vers kraanwater totdat de achtergrond verdwijnt, maar de secties paars blijven.
  3. Dip glijdt in 0,02% ammoniakwater 3x op en neer totdat de secties blauw worden.
  4. Spoel opnieuw 3-5x af met kraanwater.

5. Bevestiging

  1. Volledig droge dia's in een droge oven van 60 °C gedurende ~15 min.
  2. Dip dia's in vers xyleen.
    OPMERKING: Omdat het montagemedium vrij stroperig is, zorgt een korte dip in xyleen voorafgaand aan de montage voor een soepelere verspreiding van het medium over het weefselgedeelte en vermindert het de vorming van luchtbellen onder het dekglaasje.
  3. Breng het montagemedium (zie de materiaaltabel) aan op de objectglaasje en het dekglaasje, vermijd luchtbellen.
  4. Laat de dia's minstens 5 minuten aan de lucht drogen.

6. Evalueer de monsters

  1. Beeld de secties af onder een standaard helderveldmicroscoop met een vergroting van 20x of 40x. (Figuur 1).
    OPMERKING: Positieve controles moeten leestekens in cellen vertonen. Negatieve controles zijn acceptabel als er niet meer dan 1 dot per 20 cellen is bij een vergroting van 20x.

7. Puntentelling (optioneel)

  1. Gebruik beeldanalysesoftware (bijv. Halo of QuPath) om de RNA-punten per cel te kwantificeren.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

De insulinereceptor (IR) is een transmembraan tyrosinekinasereceptor die bestaat uit twee extracellulaire α-subeenheden en twee transmembraan β-subeenheden, die een functioneel heterotetrameer vormen. De α-subeenheden bemiddelen insulinebinding, terwijl de β-subeenheden intrinsieke tyrosinekinase-activiteit bezitten die stroomafwaartse signalering initieert. IR mRNA alternatieve splicing van exon 11 genereert twee isovormen van de IR, IR-A en IR-B. Als zo...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

In de hersenen is de expressie van insulinereceptoren (IR) heterogeen, met hoge dichtheden waargenomen in regio's zoals de bulbus olfactorius, hypothalamus, hippocampus en plexuschoroideus 10. Uitgebreide karakterisering van de variante expressiepatronen in specifieke hersengebieden en celtypen zou cruciale informatie opleveren, waardoor we de specifieke rol van insuline en IGF-II-signalering in synaptische plasticiteit, leren en geheugen kunnen bestuderen en begr...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben geen belangenconflicten te onthullen.

Dankbetuigingen

Dit werk werd ondersteund door het Intramural Research Program/National Institute on Aging/National Institutes of Health.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Ammonium WaterElectron Microscope Science 26754-4A
BaseScope Dulplex Detection Reagent KitACD Bio323810
BaseScope Dulplex Duplex Positive Control Probe- Mouse(Mm)-C1-Ppib-1ZZ/C2-Polr2a-1ZZACD Bio700121
BaseScope Dulplex Duplex Positive Control Probe-C1-DapB-1ZZ/C2-DapB-1ZZACD Bio700141
Gill's Hematoxylin ISigma-AldrichGHS132-1L
Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor Plus 488InvitrogenA32731
HybEZ OVEN, Tray, Rack and Wash TrayACD Bio321721, 310012, 321716, 321717
ImmEdge Hydrophobic Barrier PenVector LaboratoryH-4000
INSR isoform Aand B probes: BA-Mm-Insr-tv1-E10E11, BA-Mm-Insr-tv2-E11E12-C2ACD Bio717411, 717421-C2
Insulin Receptor antibodyCell Signaling 23413
RNAscope 10x Target RetrivalACD Bio322000
RNAscope Hydrogen Peroxide, Protease PlusACD Bio322381
Saline-Sodium Citrate (SSC) 20xFisher ScientificBP1325-1
SuperFrost Plus slidesFisher Scientific12-550-18
VectaMount Permanent Mounting MediumVector LaboratoryH-5000

Referenties

  1. Häring, H. U. The insulin receptor: signalling mechanism and contribution to the pathogenesis of insulin resistance. Diabetologia. 34 (12), 848-861 (1991).
  2. Benecke, H., Flier, J. S., Moller, D. E. Alternatively spliced variants of the insulin receptor protein: expression in normal and diabetic human tissues. J Clin Invest. 89 (6), 2066-2070 (1992).
  3. Vella, V., Malaguarnera, R., Nicolosi, M. L., Morrione, A., Belfiore, A. Insulin/IGF signalling and discoidin domain receptors: an emerging functional connection. Biochim Biophys Acta Mol Cell Res. 1866 (11), 118522(2019).
  4. Galal, M. A., et al. Insulin receptor isoforms and insulin growth factor-like receptors: implications in cell signaling, carcinogenesis, and chemoresistance. Int J Mol Sci. 24 (19), 15006(2023).
  5. Starks, E. J., et al. Insulin resistance is associated with higher cerebrospinal fluid tau levels in asymptomatic APOEɛ4 carriers. J Alzheimers Dis. 46 (2), 525-533 (2015).
  6. Belfiore, A., et al. Insulin receptor isoforms in physiology and disease: an updated view. Endocr Rev. 38 (5), 379-431 (2017).
  7. Wang, F., et al. RNAscope: a novel in situ RNA analysis platform for formalin-fixed, paraffin-embedded tissues. J Mol Diagn. 14 (1), 22-29 (2012).
  8. BaseScope assays. , Advanced Cell Diagnostics, Inc. https://acdbio.com/basescope-duplex-assay (2025).
  9. Dani, N., et al. A cellular and spatial map of the choroid plexus across brain ventricles and ages. Cell. 184 (11), 3056-3074.e21 (2021).
  10. Schulingkamp, R. J., Pagano, T. C., Hung, D., Raffa, R. B. Insulin receptors and insulin action in the brain: review and clinical implications. Neurosci Biobehav Rev. 24 (8), 855-872 (2000).
  11. Milstein, J. L., Ferris, H. A. The brain as an insulin-sensitive metabolic organ. Mol Metab. 52, 101234(2021).
  12. Moruzzi, N., et al. Tissue-specific expression of insulin receptor isoforms in obesity/type 2 diabetes mouse models. J Cell Mol Med. 25 (10), 4800-4813 (2021).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Insulinereceptor isovormenIR AIR Bduplex ISHRNA hybridisatie assayplexus choroideusruimtelijke genexpressie

Gerelateerde artikelen