Hier presenteren we een transplantatieprotocol voor wit en bruin vetweefsel dat een veelbelovende strategie biedt om subfertiliteit, obesitas en hyperglykemie om te keren en tegelijkertijd de nierfunctie bij diabetische en zwaarlijvige BTBR-muizen te verbeteren.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Witte en bruine vettransplantaten: een benadering om reproductieve, metabole en niertekorten te corrigeren bij zwarte en bruine brachyury (BTBR) zwaarlijvige muizen
* These authors contributed equally
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Transplantatie van wit vetweefsel (WAT) en bruin vetweefsel (BAT) is naar voren gekomen als een veelbelovende therapeutische strategie voor het omkeren van stofwisselingsstoornissen zonder de noodzaak van langdurige toediening van exogene middelen. WAT functioneert als een belangrijk endocrien orgaan dat betrokken is bij de energiehomeostase, terwijl BAT een thermogeen weefsel is dat cruciaal is voor thermoregulatie. Het Black and Tan Brachyuric (BTBR) obese muismodel bootst de belangrijkste kenmerken van obesitas, diabetes mellitus type 2 (T2DM) en diabetische nierziekte (DKD) nauwkeurig na, waaronder hyperglykemie, insulineresistentie, hypometabolisme en subfertiliteit.
Met behulp van het onderstaande protocol resulteerde gecombineerde transplantatie van WAT en BAT afgeleid van BTBR wildtype en heterozygote donoren in BTBR obese ontvangers in de omkering van subfertiliteit, verzwakking van gewichtstoename, normalisatie van glykemische controle en verbetering van nierparameters. Met name nierhypertrofie en apoptose waren verminderd, terwijl het aantal podocyten behouden bleef. Deze bevindingen suggereren dat gecombineerde WAT- en BAT-transplantatie een alternatieve therapeutische strategie kan zijn voor de behandeling van T2DM, met gelijktijdige voordelen bij het verminderen van DKD en obesitas. Bovendien kan deze aanpak helpen bij het vergroten van het aantal levensvatbare BTBR-zwaarlijvige muizen in vivariumkolonies. Verder onderzoek naar de onderliggende mechanismen kan de klinische vertaling van deze interventie vergemakkelijken.
Inleiding
Diabetische nierziekte (DKD), diabetes mellitus type 2 (T2DM) en obesitas vertegenwoordigen onderling gerelateerde, multifactoriële aandoeningen die aanzienlijke en groeiende wereldwijde gezondheidsuitdagingen vormen. DKD, gedefinieerd als het naast elkaar bestaan van diabetes mellitus (DM) en chronische nierziekte bij afwezigheid van andere aanwijsbare oorzaken van nierbeschadiging, treft ongeveer 20-40% van de personen met DM 1,2. T2DM is een systemische stofwisselingsstoornis die wordt gekenmerkt door chronische hyperglykemie en verstoringen van de homeostase van glucose, l....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle experimenten werden goedgekeurd door de Institutional Animal Care and Use Committees van Hospital Israelita Albert Einstein (HIAE) en geregistreerd bij het Joods Instituut voor Onderzoek en Onderwijs, São Paulo, SP, Brazilië (N°. 3309-18 en N°. 4900-21). De details van de gebruikte reagentia en apparatuur staan vermeld in de materiaaltabel.
OPMERKING: BTBR zwaarlijvige muizen (leptine-gen knock-out, homozygoot, ob/ob) werden gebruikt als model voor T2DM, DKD en obesitas. Vrouwelijke BTBR-zwaarlijvige muizen in de leeftijd van 4-5 weken dienden als ontvangers voor vetweefseltra....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Hoeveelheid getransplanteerd vet en effectiviteit van het protocol
Na standaardisatie van het protocol werden twee vettransplantatievolumes (5-9,9% en 10-15% ten opzichte van het lichaamsgewicht van de donor) geëvalueerd op effectiviteit, gedefinieerd als het bereiken van ten minste één zwangerschap met levensvatbare nakomelingen tot gevolg. De groep van 5-9,9% vertoonde een slagingspercentage van 23,8%, terwijl de groep van 10-15% 52,2% behaalde, wat overeenkomt met .......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Deze studie toont aan dat gecombineerde WAT- en BAT-transplantatie een effectieve therapeutische benadering is voor het beheersen van hyperglykemie, het voorkomen van gewichtstoename en hypertrofie van eilandcellen, het herstellen van vrouwelijke subfertiliteit en het verbeteren van de nierfunctie door apoptose te verminderen en het aantal podocyten te behouden in een preklinisch model van T2DM, DKD en obesitas.
Hoewel eerdere studies WAT- en BAT-transplantati.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs verklaren geen belangenconflicten.
Dankbetuigingen
We danken de technische teams van het Experimenteel en Chirurgisch Trainingscentrum (CETEC) en het Joods Instituut voor Onderzoek en Onderwijs (IIEP) voor hun steun. Dit werk werd ondersteund door een masters research fellowship beurs van CAPES (Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior/Coordination for the Improvement of Higher Education Personnel) aan S.B, een Direct Doctorate research fellowship beurs van CAPES (Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior/Coordination for the Improvement of Higher Education Personnel) aan M.L.F, een masters research fellowship beurs van FAPESP (Fundação de Amparo ....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 0.5% alcoholische chloorhexidine digluconaat oplossing | Rioquímica | SKU 1068253 | |
| 16-gauge naald | Becton Dickinson | SKU 305198 | |
| 2.0% niet-alcoholische chloorhexidine digluconaat oplossing | Rioquímica | SKU 1113045 | |
| 3 mL spuit | Becton Dickinson | SKU 309657 | |
| Accu-Check strips – Performa | Roche | EAN 4015630981960 | |
| Alcian Blauw PAS Kit | EasyPath | SKU EP-11-20019 | |
| Bovine Serum Albumine (BSA) | Sigma-Aldrich | A4612 | |
| CellSens software | Olympus | CELLSENS | |
| Citraat Buffer pH 6.0: Citroenzuur monohydraat + Natriumhydroxide | Sigma-Aldrich | C1909 + 28-3010 | |
| Gekloofde Caspase-3 antilichaam | Cell Signaling Technology | 9661 | |
| Cobas C 111 analyzer | Roche | 4528778001 | |
| Creatinine K | Labtest | 96-300 | |
| EnVision FLEX DAB+ Chromogen | Agilent-Dako | K3468 | |
| EnVision FLEX /HRP detectiereagens | Agilent-Dako | SM802 | |
| Envision FLEX Peroxidase-Blocking Reagens | Agilent-Dako | SM801 | |
| EnVision FLEX Substraat Buffer | Agilent-Dako | SM803 | |
| EnVision FLEX Was Buffer 20x | Agilent-Dako | K800721-2 | |
| Eosine | Agilent-Dako | CS701 | |
| GloMax Discover Microplate Reader | Promega | GM3000 | |
| Glucometer Accu-Check - Performa | Roche | EAN 4015630980512 | |
| GraphPad Prism 8 software (statistische software) | GraphPad by Dotmatics | - | |
| 100% v/v Isoforine (Isoflurane) | Cristália | - | |
| Hematoxiline | Agilent-Dako | CS700 | |
| IX51 lichtmicroscoop | Olympus | IX51 | |
| Metabolische Kooi voor enkele muis | Tecniplast | 3600M021 | |
| Montage medium - Entellan | Sigma-Aldrich | 100869 | |
| Muis Albumine ELISA Kit | Abcam | Ab207620 | |
| Muis stam: BTBR.Cg-Lepob/WiscJ | JAX Laboratories | 4824 | |
| Periodic Acid Schiff (PAS) Kit | EasyPath | EP-11-20014 | |
| RM255 Microtoom | Leica Biosystems | 14050237960 | |
| TP1020 Weefselprocessor | Leica Biosystems | TP-1020 | |
| Tramadol 50 mg/mL | Grünenthal | 4022444 | |
| WT-1 antilichaam | Santa Cruz | SC-192 |
Referenties
- Zhao, M., Cao, Y., Ma, L. New insights in the treatment of DKD: recent advances and future prospects. BMC Nephrol. 26 (1), 72(2025).
- van Raalte, D. H., et al. Combination therapy for kidney disease in people with diabetes mellitus. Nat Rev Nephrol
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
