Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Onderzoeksartikel

Effect en mechanisme van tauroursodeoxycholzuur in blauwe vossengal op acute alcoholgerelateerde leverbeschadiging bij muizen

743 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/68763

⸱

17 oktober 2025

 ,  , 
1School of Pharmacy, Heilongjiang University of Chinese Medicine

In dit artikel

Samenvatting

Deze studie evalueerde de hepatoprotectieve effecten van blauwe vossengal op door alcohol veroorzaakte leverbeschadiging bij muizen. Blauwe vossengal, die TUDCA, UDCA, bilirubine en TCDCA bevat, verminderde leverschademarkers en werkte via de AGE-RAGE-route, AKT1 en PPARG, waarbij ontstekingsremmende en antioxiderende eigenschappen werden aangetoond.

Samenvatting

Dierlijke gal, zoals berengal Blauwe vossengal, vergelijkbaar met berengal Deze studie onderzocht de componenten en effecten van blauwe vossengal op alcohol-geassocieerde leverbeschadiging bij muizen. Gal werd verzameld van 30 blauwe vossen en verwerkt tot gedroogd poeder. De chemische samenstelling van blauwe vossengal werd geanalyseerd met behulp van hoogwaardige vloeistofchromatografie en ultra-performance vloeistofchromatografie in combinatie met quadrupool time-of-flight massaspectrometrie. Netwerkfarmacologie werd gebruikt om potentiële bioactieve stoffen, doelen en routes te identificeren die verband houden met alcohol-geassocieerde leverbeschadiging. Een muismodel van alcohol-geassocieerde leverbeschadiging werd opgesteld met behulp van Kunming-muizen, die blauwe vossengalpoeder in lage en hoge doses kregen toegediend. Serum alanineaminotransferase, aspartaataminotransferase en totaal cholesterolgehalte werden gemeten. Leverweefsels werden beoordeeld door middel van hematoxyline- en eosinekleuring en malondialdehyde-assay. Moleculaire docking werd uitgevoerd om de bindingsaffiniteit tussen actieve verbindingen en kerndoelen te voorspellen. Blauwe vossengal bleek tauroursodeoxycholzuur (TUDCA), ursodeoxycholzuur, bilirubine en taurochenodeoxycholzuur te bevatten. Histopathologische analyse bracht geen significante afwijkingen of toxische effecten in de belangrijkste organen aan het licht na orale toediening van blauwe vossengalpoeder. De kerndoelen van blauwe vossengal waren eiwit AKT1, PPARG, IGF1, MMP9 en CASP3. Behandeling met gal bij blauwe vossen verlaagde de serum ALAT-, ASAT-, cholesterol- en MDA-spiegels in muismodellen van alcoholgerelateerde leverbeschadiging. Netwerkfarmacologie en moleculaire docking suggereren dat de hepatoprotectieve effecten van blauwe vossengal verband kunnen houden met de geavanceerde glycatie-eindproductreceptor voor geavanceerde glycatie-eindproductsignaleringsroute. Over het algemeen richt blauwe vossengal, met een TUDCA-gehalte dat vergelijkbaar is met dat van berengal, zich op eiwitten zoals AKT1 en PPARG, en vertoont het potentiële ontstekingsremmende en antioxiderende effecten bij de behandeling van alcoholgerelateerde leverbeschadiging.

Inleiding

Alcohol-geassocieerde leverziekte (ALD) omvat een spectrum van leverbeschadigingen, variërend van asymptomatische laboratoriumafwijkingen tot gevorderde leverziekte met cirrose en, in de meest ernstige vorm, levensbedreigende leverziekte in het eindstadium die gepaard gaat met multi-orgaanfalen1. De prevalentie van ALD, inclusief alcoholgerelateerde leververvetting, vertegenwoordigt een relatief milde en mogelijk omkeerbare vorm van ALD1. Alcohol-geassocieerde hepatitis wordt gekenmerkt door ontsteking, met klinische presentaties variërend van asymptomatische steatohepatitis tot acute alcoholische hepatitis, die zich presenteert met acute geelzucht en kan evolueren naar leverfalen met hoge mortaliteit op korte termijn1. Alcohol en zijn metabolieten veranderen het lipidenmetabolisme en bevorderen de accumulatie van lipiden (steatose) via verschillende mechanismen, waaronder de remming van mitochondriaal vetzuur β-oxidatie en de stimulatie van lipogenese2. Ethanol reguleert de expressie van transferrinereceptor 1, waardoor de ijzeropname in de lever toeneemt2. Zowel alcohol als acetaldehyde kunnen hepatocyten direct beschadigen, wat leidt tot verhoogde oxidatieve stress, remming van de regeneratie van s-adenosylmethionine, afgifte van schade-geassocieerde moleculaire patronen (DAMPS), blootstelling aan bacteriële endotoxinen in de portaalcirculatie en vorming van eiwitadducten2. De behandeling van ALD blijft een uitdaging vanwege de vele pathogene routes die erbij betrokken zijn3. Toekomstige strategieën die worden onderzocht, zijn onder meer empirische probiotica, groeifactoren, antioxidanten, monoklonale antilichamen gericht op ontstekingsgerelateerde factoren en door technologie ondersteunde gedragsinterventies. Aanvullende uitgebreide therapeutische strategieën moeten echter nog worden onderzocht.

Opkomend bewijs suggereert dat dierlijke gal therapeutisch potentieel kan hebben bij de behandeling van alcohol-geassocieerde leverziekte (ALD) vanwege de ontstekingsremmende en antioxiderende eigenschappen 4,5. Dierlijke gal is een belangrijk onderdeel van de traditionele Chinese geneeskunde (TCM)6. In TCM wordt dierlijke gal gebruikt om de lever- en galblaasfunctie te versterken en pijn, koorts, hoesten en ontsteking te verlichten. Het is gebruikt bij de behandeling van leveraandoeningen, waaronder cirrose6. Dierlijke gal heeft ontstekingsremmende en antioxiderende eigenschappen6, en ontsteking en oxidatieve stress spelen een centrale rol in de pathogenese van ALD7. Er is ook gemeld dat suppletie met galzuur de leversteatose verbetert8. Momenteel is berengal het meest gebruikte geneesmiddel op basis van gal, met ursodeoxycholzuur (UDCA) en taurocholiczuur (TUDCA) als belangrijkste actieve componenten 6,9. TUDCA is met name afwezig in de gal van andere dieren, zoals schapen, koeien, kippen en slangen6. TUDCA heeft therapeutisch potentieel aangetoond bij de behandeling van acuut leverletsel10. Op dit moment wordt TUDCA verkregen door drainage van berengal (wat aanleiding geeft tot bezorgdheid over dierenwelzijn), chemische synthese (wat kostbaar is) of biotransformatie van kippengalpoeder in een berengal (dat niet equivalent blijft aan authentieke berengal De blauwe vos (Alopex lagopus), ook wel poolvos genoemd, wordt in gevangenschap voornamelijk grootgebracht voor zijn vacht. China is een van de drie grootste exporteurs van bontkleding ter wereld, en de interne organen van geoogste blauwe vossen worden meestal weggegooid13. Dit biedt een kans om de galblaas te valoriseren als een potentiële medische hulpbron. Blauwe vossen en beren zijn beide carnivoren en delen overeenkomsten in spijsverteringsfysiologie, metabolisme en dieet, wat suggereert dat hun galsamenstelling en effecten ook vergelijkbaar kunnen zijn. Deze mogelijkheid is echter nog niet onderzocht.

Daarom was deze studie gericht op het onderzoeken van de farmacologische werking en onderliggende mechanismen van blauwe vossengal in modellen van ALD. De bevindingen kunnen nieuwe onderzoeksmogelijkheden bieden voor het ontwikkelen van berengalisvervangers, een wetenschappelijke basis leggen voor het gebruik van blauwe vossengalblaas als medisch hulpmiddel, industrieel afval omzetten in waardevolle producten en toekomstige therapeutische ontwikkeling informeren.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Het onderzoeksprotocol werd beoordeeld en goedgekeurd door de Ethische Commissie voor Dierproeven van de Heilongjiang University of Chinese Medicine (goedkeuring #2023021101). Alle dierproeven zijn uitgevoerd in overeenstemming met de ARRIVE-richtlijnen (Animal Research: Reporting of In Vivo Experiments) en relevante nationale en institutionele richtlijnen voor de verzorging en het gebruik van proefdieren. Aangezien in dit onderzoek dierproeven werden uitgevoerd, was geïnformeerde toestemming niet van toepassing. Alle procedures voor het fokken en oogsten van dieren houden zich strikt aan de Chinese technische voorschriften voor het beheer van het fokken van wilde dieren. De studie werd goedgekeurd door de Ethische Commissie voor Dierproeven van de Heilongjiang University of Chinese Medicine, China (goedkeuring #2023021101).

Voorbereiding van het blauwe vosgalmonster
De bron van blauwe vossengal wordt gegeven in de Tabel van Materialen. In totaal werden 30 blauwe vossen (Vulpes lagopus) geëuthanaseerd door elektrische schokken, gevolgd door het oogsten van vacht en het verzamelen van de galblaas. De galblaas van de blauwe vos is ovaal van vorm, met een smal bovengedeelte en een gezwollen ondergedeelte. Het buitenoppervlak is donkerbruin met zichtbare plooien en het capsulemembraan is dun. Gal werd onmiddellijk opgezogen met behulp van een steriele wegwerpspuit van 1 ml en leek donkerzwart of donkergroen van kleur. De galblaas werd vervolgens gedurende 48 uur bij 37 °C gedroogd om gedroogd blauw vossengalpoeder te verkrijgen (Figuur 1). Het resulterende galpoeder vertoonde een geelbruine tint met een glanzende, brokkelige textuur. De gemiddelde opbrengst van gedroogd galpoeder per galblaas was ongeveer 0,82 ± 0,30 g. Voor de voorbereiding van het monster werd 250 mg gedroogd galpoeder van blauwe vos (zoals hierboven beschreven) of beer (zie materiaaltabel) opgelost in 1 ml 70% methanol van chromatografiekwaliteit. De oplossing werd ultrasoon gesonificeerd (40 kHz, 300 W), gefilterd door een membraan van 0,22 μm, verdund tot een eindvolume van 50 ml (d.w.z. tot 5 mg/ml) en verder verdund tot een werkconcentratie van 0,5 mg/ml voor latere analyse. De algemene experimentele workflow is samengevat in aanvullende figuur 1.

In deze studie was het doseringsbereik van blauwe vossengalpoeder dat werd gebruikt voor dierproeven 5-10 g/kg op basis van eerdere toxiciteitsevaluaties en farmacologische studies, waarbij geen significante nadelige effecten werden waargenomen bij deze concentraties 14,15. Tijdens de bereiding van galpoeder werden de galblazen gedurende 48 uur bij 37 °C gedroogd; De droogtijd kan echter variëren, afhankelijk van de lokale vochtigheid en het monstervolume, dus het vochtgehalte moet worden gecontroleerd om volledige uitdroging te garanderen. Voor oplossing was een concentratie van 5 mg/ml in methanol van chromatografiekwaliteit optimaal voor HPLC- en UPLC-Q-TOF-MS-analyses; Onvolledige oplossing of deeltjesresidu kan de analytische nauwkeurigheid beïnvloeden, waardoor extra sonicatie of filtratie nodig is. Een bekende beperking is de variabiliteit in galsamenstelling als gevolg van seizoensgebonden, dieet- en individuele fysiologische verschillen tussen blauwe vossen, die de relatieve overvloed aan actieve verbindingen zoals TUDCA en UDCA16 kunnen beïnvloeden. Daarom wordt batchvalidatie door chromatografische profilering aanbevolen vóór farmacologisch gebruik om consistente componentprofielen te garanderen.

Farmacologische analyse van het netwerk
De chemische samenstelling van blauwe vossengal werd geanalyseerd met behulp van hoogwaardige vloeistofchromatografie (zie materiaaltabel) en ultrakrachtige vloeistofchromatografie in combinatie met quadrupool time-of-flight massaspectrometrie (UPLC-Q-TOF-MS). HPLC werd uitgevoerd met behulp van een SB-C18-kolom (4,6 mm x 150 mm, 5 μm) met een mobiele fase bestaande uit 0,03 M natriumdiwaterstoffosfaat (pH aangepast aan 4,4 met behulp van fosforzuur) als fase A en methanol (zie materiaaltabel) als fase B (tabel 1). De detectiegolflengte werd ingesteld op 210 nm, met een mobiel fasedebiet van 1,0 ml/min, en de kolomtemperatuur was 40 °C. Het injectievolume was 10 μL. UPLC-Q-TOF/MS-analyse werd uitgevoerd met behulp van een UPLCTM HSS T3-kolom (zie materiaaltabel). De mobiele fase bestond uit acetonitril (A)-0,1% mierenzuur waterige oplossing (B; zie materiaaltabel). Het gradiënt-elutieprogramma was als volgt: 0-25,0 min, 98%-2% A en 25,0-28,0 min, 2%-2% A bij een debiet van 4 ml/min. De kolomtemperatuur werd op 35 °C gehouden. Massaspectrometrie werd uitgevoerd met behulp van een elektrospray-ionisatiebron (ESI) met de volgende parameters: oplosmiddelgasdebiet van 650 l/u, oplosmiddelgastemperatuur van 350 °C, conusgasdebiet van 50 l/u, ionenbrontemperatuur van 120 °C, capillaire spanning van 2,8 kV (positieve ionenmodus) en 2,0 kV (negatieve ionenmodus), conusspanning van 25 V en botsingsenergie van 6 eV. Spectra werden elke 0,2 s verzameld met een interval van 0,02 s. Leucine-enkefaline (zie Materiaaltabel; [M+H]+=556.2771) werd gebruikt als referentiekalibratieoplossing in een concentratie van 40 fmol/μl en een debiet van 15 μl/min17.

Analyse van de chemische samenstelling en voorspelling van doelen
De actieve componenten van blauwe vossengal werden geïdentificeerd met behulp van HPLC en UPLC-Q-TOF/MS, met aurocholiczuur en natriumtauroursodeoxycholaat (zie materiaaltabel) als interne standaarden18. Structuurformules van de geïdentificeerde verbindingen werden opgehaald uit de PubChem-database (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/). Om potentiële bioactieve doelen te onderzoeken, werden de actieve componenten van blauwe vossengal opgevraagd in de PharmMapper-database (http://www.lilab-ecust.cn/pharmmapper/) om geassocieerde gendoelen te identificeren.

Met behulp van alcoholische leverbeschadiging en door alcohol geïnduceerde leverbeschadiging als trefwoorden, werden ziektegerelateerde genen verkregen uit de GeneCards (https://www.genecards.org/) en OMIM (https://omim.org/) databases. In de GeneCards-database werden doelen gescreend op basis van de relevantiescore, met een drempel van ≥ 20. Deze veelgebruikte empirische cutoff zorgt voor een evenwicht tussen gevoeligheid en specificiteit, waarbij de meeste potentieel relevante genen behouden blijven (hoge recall) en zwak verwante of luidruchtige genen worden uitgefilterd (hoge precisie). Daarentegen werd er geen extra filtering toegepast in de OIM-database, omdat deze doelen vastlegt met sterk genetisch bewijs, waardoor de computationele relevantiescores van GeneCards worden aangevuld. De verkregen doelgegevens werden samengevoegd en gedupliceerd om doelen te identificeren die verband houden met ALD. De doelen voor actieve ingrediënten en ziektedoelen werden vergeleken met behulp van Venny 2.1.0 (https://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html) voor visualisatie. De kruispunten werden geïdentificeerd als potentiële doelwitten van blauwe vossengal tegen ALD en werden geïmporteerd in de STRING-database (http://version10.string-db.org/). In de STRING-database werd het interactienetwerk geconstrueerd met de standaardparameters (gemiddelde betrouwbaarheidsscore ≥ 0,4) en werden vrije knooppunten verborgen om de helderheid van de visualisatie te verbeteren. Vrije knooppunten werden verborgen om het eiwit-eiwitinteractie (PPI) netwerkdiagram te genereren, dat werd gevisualiseerd met behulp van de Cytoscape-software (versie 3.9.1). De topologische analyse werd uitgevoerd om graadwaarden te berekenen, en de zes doelen met de hoogste graadwaarden werden geïdentificeerd met behulp van de Database for Annotation, Visualization, and Integrated Discovery (DAVID, https://david.ncifcrf.gov/) met een significantiedrempel van p < 0,05. De Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) database werd gebruikt voor de analyse van de verrijking van routes.

Moleculair docken
Moleculaire docking werd uitgevoerd om de interacties tussen de kerndoeleiwitten en de bioactieve componenten van blauwe vossengal te beoordelen. De driedimensionale structuren van de kerndoeleiwitten werden opgehaald uit de Research Collaboratory for Structural Bioinformatics (RCSB) Protein Data Bank (https://www.rcsb.org/), en de structuren van de galcomponenten werden verkregen uit de PubChem-database (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/). Docking-simulaties werden uitgevoerd met behulp van Molecular Operating Environment (MOE)-software (versie 2022.02). Voor AKT1 werd de kristalstructuur (PDB-ID: 4EKL) gedownload en de voorverwerking in MOE omvatte verwijdering van watermoleculen en originele liganden, toevoeging van waterstof met protonering bij fysiologische pH (7,0) en energieminimalisatie. Ligandstructuren (TUDCA, UDCA, TCDCA, TCA en bilirubine) werden opgehaald uit PubChem en de energie werd geminimaliseerd voordat ze werden aangemeerd. Tijdens het dockingproces werden meerdere ligandconformaties gegenereerd en elke conformatie werd in verschillende ruimtelijke oriëntaties in de bindingszak van de receptor geplaatst. Het aanmeren werd uitgevoerd met behulp van het Induced Fit-protocol, met London dG voor de eerste plaatsing en Affinity dG als scorefunctie. Voor elk ligand werden dertig conformaties gegenereerd en de uiteindelijke houdingen werden verfijnd door optimalisatie van het krachtveld. Alle andere parameters werden zonder verdere finetuning ingesteld op MOE-standaardinstellingen. De affiniteit tussen elke ligandconformatie en de receptor werd geëvalueerd met behulp van de scorefunctie van de software. De resultaten van de docking werden geëvalueerd door vrije energie te binden, waarbij de meest negatieve energie in de grootste cluster werd gekozen als de representatieve bindingsmodus. Voor visualisatie werd de bindingsmodus met de sterkste affiniteit en optimale conformatie geselecteerd. Affiniteitswaarden onder -4,25 kcal/mol duiden op ligand-doelbinding, waarden onder -5,0 kcal/mol duiden op matige binding en waarden onder -7,0 kcal/mol duiden op sterke bindingsaffiniteit 19.

Muismodellen van ALD
Voor deze studie werden 30 specifieke pathogeenvrije (SPF) Kunming-muizen (18-22 g, 6-8 weken oud, 15 mannetjes, 15 vrouwtjes) gekocht. De dieren werden gehuisvest onder gecontroleerde omstandigheden bij 25 ± 2 °C met een relatieve luchtvochtigheid van 60% ± 10%, met ad libitum toegang tot voedsel en water. Voorafgaand aan het experiment werden de muizen 1 week geacclimatiseerd.

Het ALD-model is als volgt opgesteld. Een 70% v/v ethanoloplossing werd bereid door 70,21 ml watervrije ethanol in een volumetrische kolf te meten en ultrapuur water toe te voegen tot een eindvolume van 100 ml. De oplossing werd 1 minuut met een magnetische roerder geroerd en 5 minuten laten staan totdat er geen fasescheiding meer werd waargenomen. De maagsondedosis was 2 ml/kg lichaamsgewicht, eenmaal daags toegediend gedurende 7 opeenvolgende dagen. Op de ochtend van dag 7, 4 uur na de laatste maagsonde, werden bloedmonsters en leverweefsel verzameld voor verdere analyse. De modelvorming werd bevestigd door evaluatie van typische indicatoren van leverbeschadiging. Serumspiegels van alanineaminotransferase (ALAT), aspartaataminotransferase (ASAT), totaal cholesterol (T-CHO) en malondialdehyde (MDA) werden gemeten. Bovendien werden leverweefsels onderworpen aan histopathologisch onderzoek met behulp van hematoxyline- en eosine (H&E)-kleuring om de morfologie van hepatocyten, cytoplasmatische vacuolisatie, necrose en infiltratie van ontstekingscellen te beoordelen. De muizen werden willekeurig toegewezen aan vijf groepen (n=6 per groep): Blanco controlegroep kreeg 2 ml/kg gedestilleerd water; modelgroep ontving 2 ml/kg 70% ethanol zonder behandeling; de positieve controlegroep kreeg hepatoprotectieve tabletten toegediend in een dosis van 0,4 g/kg (zie tabel met materialen); Hooggedoseerde Blue Fox Gal Powder Group kreeg 10 g/kg Blue Fox Galpoeder toegediend; Laaggedoseerde Blue Fox Gal Powder Group kreeg 5 g/kg Blue Fox Galpoeder toegediend. Alle groepen, behalve de blancocontrolegroep, kregen oraal 70% ethanol (2 ml/kg) toegediend eenmaal daags gedurende 7 opeenvolgende dagen om alcoholische leverbeschadiging te veroorzaken. Op dag 7, 4 uur na toediening van ethanol, werden de respectievelijke behandelingen (hepatoprotectieve tabletten of blauwe vossengalpoeder) gegeven en werden daaropvolgende experimenten uitgevoerd. De blanco controlegroep kreeg gedurende het hele experiment gedestilleerd water.

Meting van serumtransaminasen (ALAT en ASAT) en totaal cholesterol kit (T-CHO)
Bloedmonsters werden gedurende 15 minuten bij 4 °C gecentrifugeerd bij 1.000 x g om serum te verkrijgen. De monsters werden tot analyse bewaard bij -20 °C. Commerciële kits werden gebruikt om ALT-, AST- en T-CHO-niveaus te meten (zie materiaaltabel) volgens de instructies van de fabrikant.

Monitoring van het lichaamsgewicht
Na 7 opeenvolgende dagen toediening van ethanol werden de behandelingen op dag 7 gegeven en werden de experimenten 4 uur na de ochtenddosering uitgevoerd. Het lichaamsgewicht werd tijdens de observatieperiode 2x per dag geregistreerd. Het niet-nuchtere lichaamsgewicht werd gemeten met behulp van een elektronische analytische balans op dag 1, 2, 3, 5, 7, 10 en 14 na toediening.

Verwerking van weefselmonsters
Op dag 14 na toediening werden het lichaamsgewicht en de resterende voedselinname geregistreerd. De dieren werden vervolgens 's middags gevast met vrije toegang tot water. De volgende dag (na een vastenperiode van 12-16 uur) werd het nuchtere lichaamsgewicht vóór euthanasie gemeten door cervicale dislocatie. Macroscopische pathologische onderzoeken werden uitgevoerd om morfologische veranderingen in belangrijke organen te beoordelen, inclusief maar niet beperkt tot het hart, de lever, de milt, de longen, de nieren, de bijnieren, de hersenen, de maag, de darmen, de teelballen, de prostaat, de eierstokken en de baarmoeder. Weefselmonsters uit het hart, de lever, de milt, de longen, de nieren, de maag en de darmen werden willekeurig verzameld uit de blanco controlegroep (CN) en de laaggedoseerde blauwe vossengalgroep (LH), gefixeerd in 4% paraformaldehyde, ingebed in paraffine, doorgesneden en gekleurd met hematoxyline en eosine (H&E) voor histopathologische evaluatie. Weefselcoupes werden onderzocht en onder een microscoop in beeld gebracht.

H&E-kleuring
Levermonsters werden gefixeerd met 4% paraformaldehyde in fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS), ingebed in paraffine en doorgesneden. Secties werden gedeparaffineerd in xyleen I en II, gerehydrateerd in dalende ethanolconcentraties (100%, 95%, 85% en 75%) en gewassen met water, gedifferentieerd, opnieuw gewassen en geblauwd met behulp van blauwoplossing. Na het spoelen werden de secties elk 5 minuten gedehydrateerd in 85% en 95% ethanol, 5 minuten gekleurd met eosine en gedehydrateerd in watervrije ethanol I, II en III (elk 5 minuten). Ten slotte werden secties geklaard in xyleen I en II (elk 5 minuten) en gemonteerd met neutrale gom. Beelden werden verkregen met behulp van een lichtmicroscoop (100×).

Bepaling van malondialdehyde (MDA) in leverweefsels
Levermonsters werden gehomogeniseerd in 9 volumes fysiologische zoutoplossing met behulp van een weefselmolen. Het homogenaat werd gedurende 10 minuten bij 4 °C gecentrifugeerd bij 700 x g . De MDA-test werd uitgevoerd op het supernatans met behulp van een in de handel verkrijgbare kit (zie materiaaltabel) volgens de instructies van de fabrikant.

Statistische analyse
Gegevens worden gepresenteerd als gemiddelden ± standaarddeviaties (SD's). Groepsvergelijkingen werden uitgevoerd met behulp van variantieanalyse (ANOVA) gevolgd door de minst significante verschil (LSD) post hoc test. Tweezijdige p-waarden <0,05 werden als statistisch significant beschouwd.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Identificatie van de actieve bestanddelen in de gal van blauwe vossen
Blauwe vossen en beren zijn beide carnivoren en delen een vergelijkbare spijsverteringsfysiologie en metabolisme20. Daarom kan hun gal een vergelijkbare samenstelling hebben. Met behulp van de hierboven beschreven chromatografische omstandigheden werd elke verbinding goed gescheiden (Figuur 2). In dit experiment werd de retentietijd van de TUDCA-...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Volgens het Global Status Report on Alcohol and Health van de Wereldgezondheidsorganisatie (WHO) uit 2018 is de alcoholconsumptie per hoofd van de bevolking in China gestegen van 4,1 liter in 2005 tot 7,2 liter in 2016, wat neerkomt op een stijging van 76%. ALD veroorzaakt door chronisch alcoholgebruik blijft een belangrijke etiologie van levergerelateerde morbiditeit en mortaliteit22. Bo et al. stelden een tetrachloorkoolstof (CCl4)-geïnduceerd leverbe...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

Auteurs verklaren geen belangenconflicten.

Dankbetuigingen

Dit werk werd ondersteund door de National Natural Science Foundation van China Youth Science Foundation (NO.82204562).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
0.03M Sodium dihydrogen phosphateN/AN/AHPLC mobiele fase A
0.1% Mierenzuur in waterFisher Scientific, USAN/AMobiel medium voor UPLC
0.22 μm membraanfilterN/AN/AStaalfiltratie
4% ParaformaldehydeN/AN/AWeefselfixatie
Acetonitril, ChromatografiekwaliteitFisher Scientific, USAN/AMobiel medium voor UPLC
ALT, AST, T-CHO kitsShanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd., ChinaN/ASerum biochemische analyse
Analytische balansN/AN/ADiergewicht meting
AurocholzuurChina Institute for Food and Drug ControlN/AInterne standaard voor HPLC/MS
BeergalpoederChina Institute for Food and Drug Control, BeijingN/AReferentiemateriaal
BilirubineNiet gespecificeerdN/AGeïdentificeerd actief bestanddeel in gal
Blauwe vosSuihua Fox Farm, Heilongjiang, ChinaN/AGalbron
Blauwe vos galpoederInterne bereidingN/AStaal voor componentanalyse
C18 HPLC-kolomAgilent Technologies, USAZORBAX SB-C18 (4,6×150 mm, 5 μm)HPLC-scheiding
Cytoscapehttps://cytoscape.org/Versie 3.9.1Netwerkvisualisatie en topologische analyse
DAVIDNIHhttps://david.ncifcrf.gov/GO/KEGG verrijkingsanalyse
GeneCardsWeizmann Institutehttps://www.genecards.org/Ziekgerelateerde genverkrijging
Hematoxyline en Eosine (H&E)N/AN/AHistologische kleuring
HPLC-systeemAgilent Technologies, USA1200 InfinitySamenstellingsanalyse van gal
Kunming muizen (SPF, 18–22g)Liaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd.SCXK (Liao) 2020-0010Alcoholisch leverletselmodel
Leucine-enkephalineSigma, USAN/AMS-kalibratiestandaard (40 fmol/μL)
MDA detectiekitShanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd., ChinaN/ALeveroxidatieve stressmeting
Methanol, ChromatografiekwaliteitFisher Scientific, USAN/AOplosmiddel voor staalvoorbereiding
MOEChemical Computing GroupMOE 2022.02Moleculair docking-analyse
OMIMNIHhttps://omim.org/Ziekgerelateerde genverkrijging
Optische microscoopN/AN/AHistologische observatie
PharmMapperECUSThttp://www.lilab-ecust.cn/pharmmapper/Voorspelling van actieve verbindingsdoelen
FosforzuurN/AN/ApH-aanpassing van mobiel medium
PubChemNCBIhttps://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/Structuuropvragen van verbindingen
RCSB Protein Data Bankhttps://www.pdbus.org/N/ABron voor 3D-eiwitstructuren
Gekoelde centrifugeN/AN/ASerum- en weefselscheiding
Natriumtauroursodeoxchoylaat (TUDCA)China Institute for Food and Drug ControlN/AInterne standaard voor HPLC/MS
STRINGEMBLhttp://version10.string-db.org/Eiwit-eiwitinteractieanalyse
UniProtEMBL-EBIhttps://www.uniprot.org/Doelstandaardisatie
UPLC-Q-TOF-MS-systeemWaters, USAUPLC HSS T3 (100×2,1 mm, 1,8 μm)Componentidentificatie
VennyCSIChttps://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.htmlVisualisatie van doeloverlap

Referenties

  1. Thursz, M., et al. EASL Clinical Practice Guidelines: Management of alcohol-related liver disease. J Hepatol. 69 (1), 154-181 (2018).
  2. Sugimoto, K., Takei, Y. Pathogenesis of alcoholic liver disease. Hepatol Res. 47 (1), 70-79 (2017).
  3. Adekunle, A. D., Adejumo, A., Singal, A. K. Therapeutic targets in alcohol-associated liver disease: progress and challenges. Therap Adv Gastroenterol. 16, 17562848231170946(2023).
  4. Wang, Y., et al. bile powder prevents drunkenness and alcohol-induced liver injury in mice via the gut microbiota and metabolic modulation. Chin Med. 19 (1), 39(2024).
  5. Li, L., Liu, C., Mao, W., Tumen, B., Li, P. Taurochenodeoxycholic Acid Inhibited AP-1 Activation via Stimulating Glucocorticoid Receptor. Molecules. 24 (24), 4513(2019).
  6. Wang, D. Q., Carey, M. C. Therapeutic uses of animal biles in traditional Chinese medicine: an ethnopharmacological, biophysical chemical and medicinal review. World J Gastroenterol. 20 (29), 9952-9975 (2014).
  7. Yang, Y. M., Cho, Y. E., Hwang, S. Crosstalk between Oxidative Stress and Inflammatory Liver Injury in the Pathogenesis of Alcoholic Liver Disease. Int J Mol Sci. 23 (2), 774(2022).
  8. Quintero, P., et al. Bile acid supplementation improves established liver steatosis in obese mice independently of glucagon-like peptide-1 secretion. J Physiol Biochem. 70 (3), 667-674 (2014).
  9. Feng, Y., et al. Bear bile: dilemma of traditional medicinal use and animal protection. J Ethnobiol Ethnomed. 5, 2(2009).
  10. Song, G., et al. Potential therapeutic action of tauroursodeoxycholic acid against cholestatic liver injury via hepatic Fxr/Nrf2 and CHOP-DR5-caspase-8 pathway. Clin Sci (Lond). 137 (7), 561-577 (2023).
  11. Li, J., et al. Pharmacological studies on the comparison between the drainage and certified Fel Ursi. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 16 (12), 749-763 (1991).
  12. Allegri, F. Respect, Inherent Value, Subjects-of-a-Life Some. Reflections on the Key Concepts of Tom Regan's Animal Ethics. Relations Beyond Anthropocentrism. 7, 1-2 (2020).
  13. Underwood, L. S., Reynolds, P. Photoperiod and fur lengths in the arctic fox (Alopex lagopus L). Int J Biometeorol. 24 (1), 39-48 (1980).
  14. Wu, L., et al. Toxicological evaluation of porcine bile powder in Kunming mice and Sprague-Dawley rats. Front Pharmacol. 15, 1424940(2024).
  15. Chen, D. X., et al. Therapeutic Effects of Different Animal Bile Powders on Lipid Metabolism Disorders and Their Composition Analysis. Chin J Integr Med. 28 (10), 918-923 (2022).
  16. Liu, J., et al. Effect of Dietary Supplementation with Calcium, Phosphorus and Vitamin D(3) on Growth Performance, Nutrient Digestibility, and Serum Biochemical Parameters of Growing Blue Foxes. Animals (Basel). 12 (14), 1814(2022).
  17. Desiderio, D. M., Dass, C. The Measurement of Leucine Enkephalin at the Femtomole Level by Fast Atom Bombardment Mass Spectrometry/Mass Spectrometry Methods. Anal Lett. 19 (19-20), 1963-1971 (1986).
  18. Li, S., et al. Substitutes for Bear Bile for the Treatment of Liver Diseases: Research Progress and Future Perspective. Evid Based Complement Alternat Med. 2016, 4305074(2016).
  19. Ji, L., et al. Identification of bioactive compounds and potential mechanisms of Scutellariae Radix-Coptidis Rhizoma in the treatment of atherosclerosis by integrating network pharmacology and experimental validation. Biomed Pharmacother. 165, 115210(2023).
  20. Shi, J., Zhou, B., Ding, C. Study on the Chemical Components of Blue Fox Gall Powder. J Trad Chinese Med Herald. 31 (03), 83-88 (2025).
  21. Gómez, C., Stücheli, S., Kratschmar, D. V., Bouitbir, J., Odermatt, A. Development and Validation of a Highly Sensitive LC-MS/MS Method for the Analysis of Bile Acids in Serum, Plasma, and Liver Tissue. Metabolites. 10 (7), 282(2020).
  22. Wu, M., et al. Estimated projection of incidence and mortality of alcohol-related liver disease in China from 2022 to 2040: a modeling study. BMC Med. 21 (1), 277(2023).
  23. Bo, Z., Rui, W., Jingbo, J. Arctic fox bile can alleviate carbon tetrachloride-induced acute liver injury. Intl J Clin Exp Med. 9 (2), 5050-5055 (2016).
  24. Zhou, C. F., Gao, G. J., Liu, Y. Advances in studies on bear bile powder. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 40 (7), 1252-1258 (2015).
  25. Zhou, C. S., Yin, Z. Y., Zhao, W. X. Bear bile affects immunologic feature of hepatic stellate cells. J Hepatol Surg. 20 (3), 204-208 (2012).
  26. Wang, N., et al. A comparative study on the hepatoprotective action of bear bile and Coptidis Rhizoma aqueous extract on experimental liver fibrosis in rats. BMC Complement Altern Med. 12, 239(2012).
  27. Ratziu, V., et al. A randomized controlled trial of high-dose ursodesoxycholic acid for nonalcoholic steatohepatitis. J Hepatol. 54 (5), 1011-1019 (2011).
  28. Moorhouse, T. P., et al. Substitutes for wildlife-origin materials as described in China's "TCM" research literature. Global Ecol Conservation. 34 (April), e02042(2022).
  29. Steyn, W. J., Wand, S. J., Jacobs, G., Rosecrance, R. C., Roberts, S. C. Evidence for a photoprotective function of low-temperature-induced anthocyanin accumulation in apple and pear peel. Physiol Plant. 136 (4), 461-472 (2009).
  30. Intagliata, S., et al. Discovery of a Highly Selective Sigma-2 Receptor Ligand, 1-(4-(6,7-Dimethoxy-3,4-dihydroisoquinolin-2(1H)-yl)butyl)-3-methyl-1H-benzo[d]imidazol-2(3H)-one (CM398), with Drug-Like Properties and Antinociceptive Effects In Vivo. AAPS J. 22 (5), 94(2020).
  31. Contreras-Zentella, M. L., Villalobos-Garcia, D., Hernandez-Munoz, R. Ethanol Metabolism in the Liver, the Induction of Oxidant Stress, and the Antioxidant Defense System. Antioxidants (Basel). 11 (7), 1258(2022).
  32. Lala, V., Zubair, M., Minter, D. A. Liver Function Tests. , StatPearls Publishing. Treasure Island, FL. (2023).
  33. Seo, E., Kang, H., Choi, H., Choi, W., Jun, H. S. Reactive oxygen species-induced changes in glucose and lipid metabolism contribute to the accumulation of cholesterol in the liver during aging. Aging Cell. 18 (2), e12895(2019).
  34. Freitas, I. N., et al. Insights by which TUDCA is a potential therapy against adiposity. Front Endocrinol (Lausanne). 14, 1090039(2023).
  35. Lu, W., Xi, R., Huaiwu, H. Ursodeoxycholic acid (UDCA) reduces hepatocyte apoptosis by inhibiting farnesoid X receptor (FXR) in hemorrhagic shock (HS). Curr Mol Med. 23 (6), 550-558 (2022).
  36. Reyes-Gordillo, K., et al. Akt1 and Akt2 Isoforms Play Distinct Roles in Regulating the Development of Inflammation and Fibrosis Associated with Alcoholic Liver Disease. Cells. 8 (11), 1337(2019).
  37. Li, J., Guo, C., Wu, J. The Agonists of Peroxisome Proliferator-Activated Receptor-gamma for Liver Fibrosis. Drug Des Devel Ther. 15, 2619-2628 (2021).
  38. Dichtel, L. E., Cordoba-Chacon, J., Kineman, R. D. Growth Hormone and Insulin-Like Growth Factor 1 Regulation of Nonalcoholic Fatty Liver Disease. J Clin Endocrinol Metab. 107 (7), 1812-1824 (2022).
  39. Takahashi, Y. The Role of Growth Hormone and Insulin-Like Growth Factor-I in the Liver. Int J Mol Sci. 18 (7), 1447(2017).
  40. Feng, M., et al. Kupffer-derived matrix metalloproteinase-9 contributes to liver fibrosis resolution. Int J Biol Sci. 14 (9), 1033-1040 (2018).
  41. Ma, X. Y., et al. Ursolic acid reduces hepatocellular apoptosis and alleviates alcohol-induced liver injury via irreversible inhibition of CASP3 in vivo. Acta Pharmacol. 42 (7), 1101-1110 (2021).
  42. Taguchi, K., Fukami, K. RAGE signaling regulates the progression of diabetic complications. Front Pharmacol. 14, 1128872(2023).
  43. Lino Rodrigues, K., et al. Aerobic Exercise Training Improves Microvascular Function and Oxidative Stress Parameters in Diet-Induced Type 2 Diabetic Mice. Diabetes Metab Syndr Obes. 15, 2991-3005 (2022).
  44. Wilkening, S., Stahl, F., Bader, A. Comparison of primary human hepatocytes and hepatoma cell line Hepg2 with regard to their biotransformation properties. Drug Metab Dispos. 31 (8), 1035-1042 (2003).
  45. Takebe, T., et al. Vascularized and functional human liver from an iPSC-derived organ bud transplant. Nature. 499 (7459), 481-484 (2013).
  46. Goessling, W., Sadler, K. C. Zebrafish: an important tool for liver disease research. Gastroenterology. 149 (6), 1361-1377 (2015).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Tags

Hepatoprotectieve effectennetwerkfarmacologiemoleculaire dockinghogedrukvloeistofchromatografieleverhistopathologieantioxidatieve effecteninflammatoire pathways
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.