Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

CD8+CD103+ Tregs verminderen droge oogziekte door onderdrukking van door CD4+ T-cellen gemedieerde ontsteking en bescherming van de integriteit van het oogoppervlak bij muizen

319 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/69110

⸱

21 november 2025

 , 
1Department of Ophthalmology, Jinan Second People's Hospital

In dit artikel

Samenvatting

Hier presenteren we een protocol dat de adoptieve overdracht van CD8+CD103+ regulerende T-cellen demonstreert als een immunotherapeutische interventie om stress-geïnduceerde droge oogziekte te verlichten door de uitgebreide modulatie van pathogene CD4+ T-celresponsen.

Samenvatting

CD8+CD103+ regulerende T-cellen vormen een gespecialiseerde immunosuppressieve populatie met aangetoond therapeutisch potentieel bij auto-immuunziekten; hun rol bij ontsteking van het oculaire oppervlak blijft echter ononderzocht. Dit protocol beschrijft een systematische aanpak voor het isoleren van CD8+CD103+ T-cellen van muizen die zijn blootgesteld aan uitdrogende stress en het evalueren van hun therapeutische effectiviteit via adoptieve overdracht bij experimentele droge ogenziekten. De methodologie omvat magnetisch geactiveerde celsortering voor CD8+CD103+ T-celzuivering, gestandaardiseerde uitdrogende spanningsinductie en uitgebreide functionele beoordelingen, waaronder meting van traanproductie, testen van permeabiliteit van hoornvlintjes en moleculaire analyse van ontstekingsmediatoren. Representatieve resultaten tonen aan dat CD8+CD103+ T-celtherapie de traanproductie significant herstelde, conjunctivale gobletcelpopulaties behield en de integriteit van de corneale epitheliale barrière behield. De behandeling bereikte een aanzienlijke onderdrukking van de expressie van matrixmetalloproteïnase, verminderde apoptotische celdood en moduleerde cytokineprofielen van pro-inflammatoire naar weefselbeschermende patronen. Het protocol verminderde effectief de CD4+ T-celinfiltratie in oogweefsels, terwijl tegelijkertijd de productie van pathogene IL-17A en IFN-γ werd onderdrukt en de beschermende IL-13-niveaus werden verhoogd. Deze benadering biedt een robuust experimenteel kader voor het onderzoeken van CD8+CD103+ T-celgemedieerde immunomodulatie bij oculaire oppervlakteaandoeningen en legt een fundamentele methodologie vast voor het ontwikkelen van nieuwe celgebaseerde therapieën voor het beheer van droge ogen.

Inleiding

Droge oogziekte (DED) vormt een veelvoorkomende en slopende aandoening aan het oogoppervlak die is uitgegroeid tot een belangrijk wereldwijd gezondheidsprobleem, dat 10-30% van de wereldbevolking treft en de levenskwaliteit, werkproductiviteit en het psychisch welzijn van patiënten aanzienlijk aantast 1,2,3. De pathofysiologie van DED omvat een complexe wisselwerking tussen traanfilminstabiliteit, ontsteking van het oogoppervlak en neurosensorische afwijkingen, die samen een vicieuze cirkel van weefselschade en functionele beperkingen in stand houden4. Op moleculair niveau dient traanhyperosmolariteit als een centraal pathograafmechanisme, dat cascaderende ontstekingsgebeurtenissen veroorzaakt die stressreactieroutes activeren, de afgifte van proinflammatoire mediatoren induceren en uiteindelijk het kwetsbare homeostatische evenwicht van de micro-omgeving van het oogoppervlak aantasten 5,6,7.

Het immunologische landschap van DED wordt gedomineerd door adaptieve immuunresponsen, waarbij CD4+ T-celgemedieerde immuniteit een cruciale rol speelt bij het orkestreren van de achteruitgang van het oogoppervlak en het in stand houden van chronische ontsteking8. CD8+ T-cellen vormen een essentieel onderdeel van de normale homeostatische immuuncelpopulatie binnen oculaire weefsels, waarbij immuuntoezicht en weefselintegriteit onder fysiologische omstandighedenbehouden blijven. Baanbrekende onderzoeken hebben aangetoond dat uitdrogende stress (DS) antigeenpresentatieve cellen activeert en vervolgens CD4+ T-cellen voorbereidt op pathogene fenotypen, die autonoom auto-immuun traan-keratoconjunctivitis sicca (KCS) kunnen induceren wanneer ze adoptief worden overgedragen aan T-celdeficiënte naakte muizen, waardoor de belangrijkste kenmerken van menselijke DED10,11 worden herhaald.

Gezien de centrale rol van gedisreguleerde CD4+ T-celresponsen in de pathogenese van DED, zijn therapeutische strategieën die gericht zijn op de modulatie van pathogene T-celimmuniteit naar voren gekomen als veelbelovende methoden voor de behandeling van deze ziekte. In deze context hebben CD8+ regulerende T-cellen (Tregs), met name de CD8+CD103+ subset, veel aandacht gekregen vanwege hun krachtige immunosuppressieve eigenschappen en weefselbeschermende functies bij diverse auto-immuun- en ontstekingsaandoeningen. Deze gespecialiseerde regulerende populaties moduleren immuunresponsen via meerdere mechanismen, waaronder cytokine-gemedieerde suppressie, directe cel-tot-cel contactremming en metabole regulatie van de effectorlymfocytfunctie 12,13,14. Integrine αEβ7 (CD103) fungeert als een cruciale homingreceptor die de positionering van intra-epitheliale lymfocyten over mucosale weefsels faciliteert, waardoor CD8+CD103+ Tregs gelokaliseerde immunoregulerende effecten kunnen uitoefenen op ontstekingsplaatsen15.

Er is groeiend bewijs dat CD8+CD103+ Tregs een aanzienlijk therapeutisch potentieel hebben om schadelijke immuunreacties bij een reeks auto-immuun mucosale aandoeningen te beperken 16,17,18. Deze cellen vertonen unieke transportpatronen die hun voorkeursophoping op mucosale plaatsen mogelijk maken, waar ze effectief weefselvernietigende immuunresponsen kunnen tegengaan en genezing en homeostase bevorderen. Recente onderzoeken zijn begonnen de rol van CD8+CD103+ T-cellen in de immuniteit van het oogoppervlak te verduidelijken, waarbij hun numerieke uitbreiding in cervicale lymfeklieren na blootstelling aan de DS en hun vermogen om te migreren naar conjunctivale weefsels 19,20,21,22 is aangetoond. Ondanks deze intrigerende observaties blijven de specifieke functionele bijdragen van CD8+CD103+ T-cellen aan de pathogenese van droge ogen en hun therapeutisch potentieel bij het moduleren van door CD4+ T-cellen gemedieerde oculaire oppervlakteschade onvolledig begrepen.

Adoptieve overdracht van CD8+CD103+ Tregs vertegenwoordigt een duidelijke vooruitgang ten opzichte van conventionele DED-therapeutische benaderingen, waaronder kunsttranen, ontstekingsremmers en immunosuppressieve middelen, door zich te richten op de onderliggende pathogene immuunmechanismen in plaats van alleen symptomatische manifestatiesaan te pakken 23. In tegenstelling tot systemische immunosuppressieve therapieën die de immuunfunctie breed onderdrukken, biedt CD8+CD103+ Treg-gebaseerde interventie gerichte modulatie van pathogene CD4+ T-celresponsen terwijl beschermende immuniteitbehouden blijft. Deze aanpak vult bestaande celgebaseerde therapieën aan, zoals mesenchymale stamceltoepassingen en CD4+CD25+ Treg-transfer, door verbeterde mukosale weefselspecificiteit te bieden via CD103-gemedieerde homingmechanismen25.

De cruciale kenniskloof over de regulerende mechanismen waarmee CD8+CD103+ T-cellen de pathogenese van droge ogen kunnen beïnvloeden, vormt een aanzienlijke barrière voor het ontwikkelen van gerichte immunotherapeutische interventies voor deze slopende aandoening. Bovendien vereist de complexe wisselwerking tussen regulatoire en effector T-celpopulaties bij ontsteking van het oogoppervlak systematisch onderzoek om nieuwe therapeutische doelwitten te identificeren en behandelstrategieën te optimaliseren. Deze studie heeft als doel CD8+CD103+ T-celgemedieerde regulatie van CD4+ T-cel-gedreven pathogene processen volledig te karakteriseren in een goed gevestigd muismodel van droge oogziekte. De kern van de methodologische innovatie omvat de sequentiële isolatie van CD8+CD103+ regulerende cellen, gevolgd door adoptieve overdracht en uitgebreide beoordeling van functionele, histologische en moleculaire uitlezingen om therapeutische effectiviteit vast te stellen en onderliggende mechanismen te verduidelijken. Het uiteindelijke doel was om ons begrip van immuunresponsen op het oogoppervlak te vergroten en mogelijke behandelstrategieën te ontdekken voor het beheersen van DED bij mensen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Alle experimentele procedures waarbij dieren betrokken waren, werden uitgevoerd in strikte overeenstemming met de ARVO-verklaring voor het gebruik van dieren in oogheelkundig en visueel onderzoek en werden goedgekeurd door de Ethische Commissie voor Experimentele Dieren van het Jinan Tweede Volksziekenhuis. Alle inspanningen werden geleverd om het lijden van dieren te minimaliseren en het aantal gebruikte dieren te verminderen volgens het 3R-principe (Vervanging, Vermindering en Verfijning).

1. Diervoorbereiding en experimenteel ontwerp

  1. Verkrijg vrouwelijke C57BL/6 muizen van 6-8 weken oud van een goedgekeurde laboratoriumdierfaciliteit (stamcode: 027) met een specifieke ziekteverwekkervrije gezondheidsstatus.
  2. Huisdieren in een gecontroleerde omgeving, met een licht-donkercycli van 12 uur (lichten aan 06:00-18:00), temperatuur van 22 ± 2 °C en een relatieve luchtvochtigheid van 50-60% met behulp van milieumonitoringsystemen.
  3. Laat dieren zich 1 week laten acclimatiseren voordat de experimentele procedures plaatsvinden, terwijl je standaard laboratoriumvoedsel en water ad libitum verstrekt.
  4. Randomiseer 32 muizen in vier experimentele groepen (n = 8 per groep) met behulp van computergegenereerde randomisatie: niet-gestreste controles (NS), alleen desiccating stress (DS), desiccating stress met voertuigcontrole (DS + VC), en desiccating stress met CD8+CD103+ T-celbehandeling (DS + CD8+CD103+).
    OPMERKING: Houd dieren dagelijks in de gaten op tekenen van stress, zoals verminderde activiteit of gewichtsverlies van meer dan 10%.

2. Inductie van uitdrogingsspanning

  1. Bereid scopolaminehydrobromideoplossing voor door 0,5 mg op te lossen in 0,2 mL steriele fosfaatgeboterde zoutoplossing (PBS) direct voor gebruik, waarbij een uiteindelijke concentratie van 2,5 mg/mL wordt bereikt.
  2. Dien scopolamine subcutaan toe in een dosis van 0,5 mg/kg lichaamsgewicht (ongeveer 0,04 mL per 20 g muis) vier keer per dag om 8:00, 12:00, 15:00 en 18:00 uur gedurende vijf opeenvolgende dagen met 27-G naalden.
  3. Plaats variabele snelheidsventilatoren om een continue luchtstroom te genereren met een gestandaardiseerde snelheid van 15 m/s, gemeten op kooiniveau met behulp van een digitale anemometerkalibratie.
  4. Houd de luchtvochtigheid onder de 40% met behulp van droogkamers met geactiveerde silicagel (graad 40, 6-12 mesh) terwijl je de omgevingsomstandigheden continu monitort met digitale hygrometers (nauwkeurigheid ±2% RH).
  5. Houd de temperatuur gedurende de gehele blootstellingsperiode op 22 ± 1 °C met behulp van precisie-omgevingscontrolesystemen met continue monitoring.
  6. Houd dieren twee keer per dag in de gaten op tekenen van uitdroging, gewichtsverlies (>15% rechtvaardigt uitsluiting) of stressgedrag, waaronder overmatig verzorgen of verminderde activiteit.

3. CD8+CD103+ T-celisolatie en zuivering

  1. Offeren donormuizen die eerder waren blootgesteld aan uitdrogende stress door CO₂-verstikking, gevolgd door cervicale dislocatie, volgens goedgekeurde euthanasieprotocollen.
  2. Oogst milten en oppervlakkige cervicale lymfeklieren onder steriele omstandigheden met steriele instrumenten in een biologische veiligheidskast, waarbij weefsels worden geplaatst in ijskoude RPMI-1640 medium aangevuld met 10% foetaal rundserum.
  3. Bereid single-cell suspenties voor door mechanisch weefsels te verstoren via 70 μm celstrainers met steriele spuiten, cellen twee keer te wassen met PBS dat 2% FBS en 1 mM ethyleendiaminetetraazijnzuur (EDTA) bevat.
  4. Isoleer CD8+ T-cellen met magnetisch geactiveerde celsortering met anti-CD8 antilichaam-geconjugeerde magnetische microkorrels volgens de instructies van de fabrikant.
  5. Beoordeel de levensvatbaarheid van cellen met behulp van de trypan blue exclusion assay (0,4% oplossing), waarbij levensvatbare en niet-levensvatbare cellen worden geteld met een geautomatiseerde celteller, en alleen worden uitgevoerd bij preparaten die boven de 95% levensvatbaarheid uitkomen.
  6. Verrijk voor CD103+ expressie door sequentiële incubatie met anti-CD103-APC antilichaam bij 1:100 verdunning gedurende 30 minuten bij 4 °C in het donker.
  7. Voer secundaire magnetische scheiding uit met anti-allofycocyanine (anti-APC) microkorrels met LS-kolommen om CD8+CD103+ dubbel-positieve cellen te verkrijgen volgens de protocollen van de fabrikant.
  8. Valideer celzuiverheid met flowcytometrie door aliquoten te kleuren met anti-CD8-FITC en anti-CD103-APC antilichamen, zodat een populatie van >90% CD8+CD103+ dubbel-positieve cellen wordt gegarandeerd voordat er verder gaat.

4. Adoptieoverdrachtprotocol

  1. Bereid CD8+CD103+ T-celsuspensies voor bij een concentratie van 5 × 106 cellen /mL in steriele fosfaatgebuffte zoutoplossing door cellen te centrifugeren op 300 × g gedurende 5 minuten en opnieuw te suspenderen in een passend volume.
  2. Injecteer 1 × 10à 6 cellen in 200 μL steriel PBS intraperitoneaal op dagen -2, 0 en +2 ten opzichte van de start van uitdrogende stress, waarbij je voor elke injectie voorzichtig mengt.
  3. Geef gelijkwaardige hoeveelheden steriele PBS aan voertuigcontrolegroepen met een identiek injectieschema en techniek om experimentele consistentie te behouden.
  4. Houd celpreparaten op ijs en voltooi overdrachten binnen 2 uur isolatie om optimale levensvatbaarheid en functie te behouden.
  5. Wissel injectieplaatsen tussen de linker- en rechteronderbuik om lokale ontsteking te minimaliseren en houd dieren 24 uur na de injectie in de gaten op bijwerkingen.

5. Functionele beoordelingsprocedure

  1. Meting van scheurproductie
    1. Voer consequent metingen uit om 20:00 uur om rekening te houden met circadiane variaties in de scheurproductie.
    2. Beperk de muis voorzichtig met geschikte fixeringsmiddelen zonder verdoving om verstoring van natuurlijke traanproductiemechanismen te voorkomen.
    3. Plaats fenolrood geïmpregneerde katoendraad precies 15 seconden in de onderste conjunctivale fornix met fijne pincetten.
    4. Meet de lengte van de nat draad onmiddellijk met precisie-digitale schuifklampen (nauwkeurigheid ± 0,01 mm) onder gestandaardiseerde fluorescentieverlichting.
  2. Beoordeling van de functie van de hoornvliesbarrières26
    1. Verdoof de muis kort met 2% isoflurane inhalatie tijdens het aanbrengen van tracer om precieze instillatie te garanderen.
    2. Breng 0,5 μL van 50 mg/mL Oregon green-dextran oplossing in op het centrale hoornvliesoppervlak met een precisie-micropipet met positieve verplaatsingstips.
    3. Spoel het hoornvlies vijf keer grondig met steriele zoutoplossing na 1 minuut incubatie om overtollige tracer te verwijderen, zodat de fluorescentie volledig wordt verwijderd.
    4. Neem direct foto's van hoornvliezen met fluorescentiemicroscopie met een Fluorescein isothiocyanaat (FITC) filterset (excitatie 490 nm, emissie 525 nm) en gestandaardiseerde belichtingsparameters.
    5. Kwantificeer fluorescentieintensiteit met ImageJ-software met consistente regio-van-interesse-selectie en achtergrondsubtractieprotocollen.
      1. Converteer beelden naar 8-bits grijstinten, definieer een gestandaardiseerde cirkelvormige regio van belang (ROI) die de centrale diameter van 3 mm van het hoornvlies beslaat.
      2. Meet de gemiddelde grijze waarde, trek achtergrondfluorescentie af van een aangrenzend niet-corneaal gebied, en geef de resultaten uit als gecorrigeerde totale fluorescentie (CTF) berekend als: CTF = Geïntegreerde Dichtheid - (Gebied van ROI × Gemiddelde achtergrondfluorescentie)22.

6. Histologische verwerking en analyse

  1. Verwijder ogen en omliggende structuren direct na euthanasie, en doe vervolgens 4% paraformaldehyde voor 24 uur of voeg het in optimale snijtemperatuur (OCT) voor bevroren secties, zodat de juiste oriëntatie voor sagittale doorsnijdingen wordt gegarandeerd.
  2. Bereid seriële sagittale doorsneden voor (6 μm voor bevroren, 5 μm voor paraffine) met behulp van gestandaardiseerde anatomische herkenningspunten (de oogzenuw als referentiepunt) voor consistente doorsnedevlakken over alle monsters.
  3. Voer periodieke zuur-Schiff (PAS) kleuring uit voor de kwantificatie van gobletcellen met gestandaardiseerde protocollen en passende positieve en negatieve controles.
  4. Voer immunofluorescentiekleuring uit met primaire antilichamen: anti-MMP-3 (1:200), anti-MMP-9 (1:100), anti-geactiveerde caspase-3 (1:300), anti-geactiveerde caspase-8 (1:200) en anti-CD4 (1:100) met nachtelijke incubatie bij 4 °C.
  5. Kwantificeer bekercellen per millimeter conjunctivale lengte met systematische bemonsteringsmethoden, waarbij cellen worden geteld in vijf niet-overlappende hoogvermogenvelden per sectie en resultaten worden gemiddeld.

7. Moleculaire analyse

  1. Extractie van totaal RNA uit gepoolde conjunctivale en hoornvlierenweefsel met behulp van gevalideerde extractieprotocollen27.
  2. cDNA-synthese en kwantitatieve real-time PCR28
    1. Bereid omgekeerde transcriptie-reactiemengsels voor die 1 μg totaal RNA bevatten, oligo-dT primers (50 μM), willekeurige hexamerprimers (100 μM), reverse transcriptase-enzym, reactiebuffer en nucleasevrij water in een eindvolume van 20 μL.
    2. Incubeer reactiemengsels in een thermische cycler bij 37 °C gedurende 15 minuten om de synthese van eerstestreng cDNA mogelijk te maken.
    3. Inactiveer het enzym van reverse transcriptase door het 5 seconden te verhitten op 85 °C, daarna af te koelen tot 4 °C en cDNA op te slaan bij -20 °C tot gebruik.
    4. Verdunde gesynthetiseerde cDNA 1:10 met nucleasevrij water voor gebruik als sjabloon in latere PCR-reacties.
    5. Bereid realtime PCR-reactiemengsels voor (20 μL eindvolume) met 1 μL verdund cDNA-template, voor- en achteruitprimers (elk 0,2 μM eindconcentratie), SYBR Green mastermix en nucleasevrij water.
    6. Laad monsters in drievoudig vorm in 96-put optische reactieplaten, inclusief no-template besturing voor elk primerpaar.
    7. Programmeer de thermische cycler met de volgende voorwaarden: initiële denaturatie bij 95 °C gedurende 10 minuten, gevolgd door 40 cycli van denaturatie (95 °C voor 15 s), annealing (60 °C voor 30 s) en verlenging (72 °C voor 30 s).
    8. Voeg direct na de versterking een fase van de dissociatiecurve op: 95 °C voor 15 seconden, 60 °C voor 1 minuut, daarna geleidelijke temperatuurstijging naar 95 °C met een snelheid van 0,3 °C/s om de versterking van één product te verifiëren.
    9. Analyseer amplificatiecurves en cyclusdrempelwaarden (Ct) met behulp van instrumentsoftware, zodat een amplificatie-efficiëntie tussen 90-110% voor alle primerparen ligt.
    10. Normaliseer de expressie van het doelgenen (IL-17A, IFN-γ, IL-13, MMP-3 en MMP-9) aan het huishoudgen GAPDH met behulp van de 2-ΔΔCt-methode .
    11. Gebruik primersequenties zoals gespecificeerd in Tabel 1 voor alle doel- en referentiegenen.
  3. Kwantificeer cytokine-eiwitniveaus in weefselextracten met commercieel verkrijgbare ELISA-kits met passende standaardcurves en kwaliteitscontroles.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

De succesvolle implementatie van dit protocol levert een uitgebreide verbetering op van uitdrogende stress-geïnduceerde oogoppervlaktepathologie via CD8+CD103+ T-celgemedieerde immunomodulatie. Positieve resultaten tonen een significante herstel van scheurproductie, waarbij doorgaans 60-80% herstel wordt bereikt vergeleken met niet-gestreste controlegroepen, terwijl dieren met een voertuig behandelde dieren aanhoudende lacrimatietekorten vertonen (

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Dit onderzoek stelt CD8+CD103+ regulerende T-cellen vast als krachtige therapeutische middelen die stress-geïnduceerde droge oogziekte uitdrogen door middel van uitgebreide modulatie van door CD4+ T-cellen gemedieerde pathogene reacties. De bevindingen tonen aan dat adoptieve overdracht van CD8+CD103+ T-cellen multifacette bescherming van de integriteit van het oogoppervlak bereikt, inclusief functioneel herstel van traanproductie, behoud van de mucosale architectuur, behoud van de epith...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende belangen, financieel of anderszins, hebben die het werk dat in dit manuscript wordt beschreven op ongepaste wijze kunnen beïnvloeden.

Dankbetuigingen

Wij erkennen de technische ondersteuning die wordt geleverd door het laboratoriumpersoneel van Jinan 2nd People's Hospital en het personeel van de dierenverzorgingsfaciliteiten die gedurende de hele experimentele periode optimale huisvestingsomstandigheden hebben gehandhaafd.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Anti-CD103-APC antibodyBiolegendClone 2E7Flow cytometry en celsortering
Anti-CD8 magnetische microbeadsMiltenyi Biotec-Magnetische celscheiding
Corneal Oregon groen-dextranInvitrogenD7172Molecuulgewicht 70.000
ELISA-kit IFN-γeBioscienceBMS606Cytokine kwantificering
ELISA-kit IL-13eBioscienceBMS6015Cytokine kwantificering
ELISA-kit IL-17AeBioscienceBMS6001Cytokine kwantificering
ImageJNational Institutes of Healthversie 1.53k
Fenolrode katoenen dradenZone-Quick, Yokota-Tranenproductie meting
ScopolaminehydrobromideMelonepharmaMB5860Muscarine antagonist

Referenties

  1. Tang, Q., et al. Selective decrease of donor-reactive T(regs) after liver transplantation limits T(reg) therapy for promoting allograft tolerance in humans. Sci Transl Med. 14 (669), eabo2628(2022).
  2. Harrell, C. R., Feulner, L., Djonov, V., Pavlovic, D., Volarevic, V. The molecular mechanisms responsible for tear hyperosmolarity-induced pathological changes in the eyes of dry eye disease patients. Cells. 12 (23), 2755(2023).
  3. Britten-Jones, A. C., et al. Epidemiology and risk factors of dry eye disease: considerations for clinical management. Medicina (Kaunas). 60 (9), 1458(2024).
  4. Bhujbal, S., Rupenthal, I. D., Steven, P., Agarwal, P. Inflammation in dry eye disease-pathogenesis, preclinical animal models, and treatments. J Ocul Pharmacol Ther. 40 (10), 638-658 (2024).
  5. Nieto-Aristizabal, I., Mera, J. J., Giraldo, J. D., Lopez-Arevalo, H., Tobon, G. J. From ocular immune privilege to primary autoimmune diseases of the eye. Autoimmun Rev. 21 (8), 103122(2022).
  6. Sheppard, J., Shen Lee, B., Periman, L. M. Dry eye disease: identification and therapeutic strategies for primary care clinicians and clinical specialists. Ann Med. 55 (1), 241-252 (2023).
  7. Rolando, M., Merayo-Lloves, J. Management strategies for evaporative dry eye disease and future perspective. Curr Eye Res. 47 (6), 813-823 (2022).
  8. Vereertbrugghen, A., et al. CD4+ T cells drive corneal nerve damage but not epitheliopathy in an acute aqueous-deficient dry eye model. Proc Natl Acad Sci U S A. 121 (48), e2407648121(2024).
  9. Yaman, E., et al. Mouse corneal immune cell heterogeneity revealed by single-cell RNA sequencing. Invest Ophthalmol Vis Sci. 65 (12), 29(2024).
  10. Niederkorn, J. Y., et al. Desiccating stress induces T cell-mediated Sjogren's syndrome-like lacrimal keratoconjunctivitis. J Immunol. 176 (7), 3950-3957 (2006).
  11. Ogawa, Y., Takeuchi, T., Tsubota, K. Autoimmune epithelitis and chronic inflammation in Sjogren's syndrome-related dry eye disease. Int J Mol Sci. 22 (21), 11820(2021).
  12. Flippe, L., Bezie, S., Anegon, I., Guillonneau, C. Future prospects for CD8+ regulatory T cells in immune tolerance. Immunol Rev. 292 (1), 209-224 (2019).
  13. Olson, K. E., Mosley, R. L., Gendelman, H. E. The potential for Treg-enhancing therapies in nervous system pathologies. Clin Exp Immunol. 211 (2), 108-121 (2023).
  14. Boonpiyathad, T., Sozener, Z. C., Akdis, M., Akdis, C. A. The role of Treg cell subsets in allergic disease. Asian Pac J Allergy Immunol. 38 (3), 139-149 (2020).
  15. Xu, W., Bergsbaken, T., Edelblum, K. L. The multifunctional nature of CD103 (αEβ7 integrin) signaling in tissue-resident lymphocytes. Am J Physiol Cell Physiol. 323 (4), C1161-C1167 (2022).
  16. Zhang, X., et al. CD8+CD103+ iTregs inhibit chronic graft-versus-host disease with lupus nephritis by the increased expression of CD39. Mol Ther. 27 (11), 1963-1973 (2019).
  17. Liu, Y., et al. Phenotypic and functional characteristic of a newly identified CD8+ Foxp3- CD103+ regulatory T cells. J Mol Cell Biol. 6 (1), 81-92 (2014).
  18. Chen, Q., et al. CD8+ CD103+ iTregs protect against ischemia-reperfusion-induced acute kidney injury by inhibiting pyroptosis. Apoptosis. 29 (9-10), 1709-1722 (2024).
  19. Kaneko, N., et al. Cytotoxic CD8+ T cells may be drivers of tissue destruction in Sjogren's syndrome. Sci Rep. 12 (1), 15427(2022).
  20. Kudryavtsev, I., et al. Circulating CD8+ T cell subsets in primary Sjogren's syndrome. Biomedicines. 11 (10), 2778(2023).
  21. Heidari, M., Noorizadeh, F., Wu, K., Inomata, T., Mashaghi, A. Dry eye disease: emerging approaches to disease analysis and therapy. J Clin Med. 8 (9), 1439(2019).
  22. Ibiayo, A. G., Varinthra, P., Nagarajan, M., Liu, I. Y. Coniferaldehyde reverses 3-nitropropionic acid-induced Huntington's disease pathologies via PKM2 restoration and JAK2/STAT3 inhibition. Mol Med. 31 (1), 271(2025).
  23. Loi, J. K., et al. Corneal tissue-resident memory T cells form a unique immune compartment at the ocular surface. Cell Rep. 39 (8), 110852(2022).
  24. Kennedy-Batalla, R., et al. Treg in inborn errors of immunity: gaps, knowns and future perspectives. Front Immunol. 14, 1278759(2023).
  25. Suffia, I., Reckling, S. K., Salay, G., Belkaid, Y. A role for CD103 in the retention of CD4+CD25+ Treg and control of Leishmania major infection. J Immunol. 174 (9), 5444-5455 (2005).
  26. De Paiva, C. S., et al. IL-17 disrupts corneal barrier following desiccating stress. Mucosal Immunol. 2 (3), 243-253 (2009).
  27. Rio, D. C., Ares, M. Jr, Hannon, G. J., Nilsen, T. W. Purification of RNA using TRIzol (TRI reagent). Cold Spring Harb Protoc. 2010 (6), (2010).
  28. Livak, K. J., Schmittgen, T. D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(−ΔΔC(T)) method. Methods. 25 (4), 402-408 (2001).
  29. Zareh, H., et al. Doxycycline versus curcumin for inhibition of matrix metalloproteinase expression and activity following chemically induced inflammation in corneal cells. J Ophthalmic Vis Res. 19 (3), 273-283 (2024).
  30. Yang, X., et al. IFN-gamma facilitates corneal epithelial cell pyroptosis through the JAK2/STAT1 pathway in dry eye. Invest Ophthalmol Vis Sci. 64 (3), 34(2023).
  31. Lollett, I. V., Galor, A. Dry eye syndrome: developments and lifitegrast in perspective. Clin Ophthalmol. 2018, 125-139 (2018).
  32. Zhang, X., et al. CD8+ cells regulate the T helper-17 response in an experimental murine model of Sjogren syndrome. Mucosal Immunol. 7 (2), 417-427 (2014).
  33. Zhou, H., Yang, J., Tian, J., Wang, S. CD8+ T lymphocytes: crucial players in Sjogren's syndrome. Front Immunol. 11, 602823(2020).
  34. Lu, Z., et al. Rapid and quantitative detection of tear MMP-9 for dry eye patients using a novel silicon nanowire-based biosensor. Biosens Bioelectron. 214, 114498(2022).
  35. Burgalassi, S., et al. Functionalized hyaluronic acid for "in situ" matrix metalloproteinase inhibition: a bioactive material to treat the dry eye syndrome. ACS Macro Lett. 11 (10), 1190-1194 (2022).
  36. Chen, X., et al. Tc17/IL-17A up-regulated the expression of MMP-9 via NF-kappaB pathway in nasal epithelial cells of patients with chronic rhinosinusitis. Front Immunol. 9, 2121(2018).
  37. Alam, J., et al. IL-17 producing lymphocytes cause dry eye and corneal disease with aging in RXRalpha mutant mouse. Front Med (Lausanne). 9, 849990(2022).
  38. Flores-Pliego, A., et al. Matrix metalloproteinase-3 (MMP-3) is an endogenous activator of the MMP-9 secreted by placental leukocytes: implication in human labor. PLoS One. 10 (12), e0145366(2015).
  39. You, Y., et al. Investigation of conjunctival goblet cell and tear MUC5AC protein in patients with Graves' ophthalmopathy. Transl Vis Sci Technol. 12 (10), 19(2023).
  40. Tukler Henriksson, J., Coursey, T. G., Corry, D. B., De Paiva, C. S., Pflugfelder, S. C. IL-13 stimulates proliferation and expression of mucin and immunomodulatory genes in cultured conjunctival goblet cells. Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (8), 4186-4197 (2015).
  41. Fang, Z., et al. Clinical ocular surface characteristics and expression of MUC5AC in diabetics: a population-based study. Eye (Lond). 38 (16), 3145-3152 (2024).
  42. Garcia-Posadas, L., et al. Interaction of IFN-gamma with cholinergic agonists to modulate rat and human goblet cell function. Mucosal Immunol. 9 (1), 206-217 (2016).
  43. Volpe, E. A., et al. Interferon-gamma deficiency protects against aging-related goblet cell loss. Oncotarget. 7 (40), 64605-64614 (2016).
  44. Gustafsson, J. K., Hansson, G. C. Immune regulation of goblet cell and mucus functions in health and disease. Annu Rev Immunol. 43 (1), 169-189 (2025).
  45. Lin, N., et al. Ectoine enhances mucin production via restoring IL-13/IFN-gamma balance in a murine dry eye model. Invest Ophthalmol Vis Sci. 65 (6), 39(2024).
  46. Ogawa, Y., Shimizu, E., Tsubota, K. Interferons and dry eye in Sjogren's syndrome. Int J Mol Sci. 19 (11), 3548(2018).
  47. Zhang, X., et al. Interferon-gamma exacerbates dry eye-induced apoptosis in conjunctiva through dual apoptotic pathways. Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (9), 6279-6285 (2011).
  48. Hassan, M., Elzallat, M., Mohammed, D. M., Balata, M., El-Maadawy, W. H. Exploiting regulatory T cells (Tregs): cutting-edge therapy for autoimmune diseases. Int Immunopharmacol. 155, 114624(2025).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Trefwoorden

Ontsteking van het oogoppervlakregulatoire T cellenadoptieve transfermagnetische cel sorteringtraanproductieintegriteit van de corneaalbarri reCD4 T cellencytokinemodulatie
Video binnenkort beschikbaar
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleid

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.