Patiëntafgeleid driedimensionaal tumororganoïdemodel voor in vitro screening van chimere antigeenreceptor T-cel in vitro chimere antigeenreceptor

Linjun Liang; Yue Shi; Minzhu Ji; Yang Xu; Ru Zhang; Yong Cui; Liang Li

doi:10.3791/69113

Methodenartikel

Patiëntafgeleid driedimensionaal tumororganoïdemodel voor in vitro screening van chimere antigeenreceptor T-cel in vitro chimere antigeenreceptor

546 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/69113

⸱

30 december 2025

Linjun Liang¹ , Yue Shi² , Minzhu Ji³ , Yang Xu⁴ , Ru Zhang⁵^,⁶^,⁷ , Yong Cui¹ , Liang Li²

¹Department of Oncology, Shenzhen Qianhai Shekou Free Trade Zone Hospital, ²Department of Pharmacology, Joint Laboratory of Guangdong-Hong Kong Universities for Vascular Homeostasis and Diseases, School of Medicine, Southern University of Science and Technology, ³Department of Digestive Disease, Shenzhen Qianhai Shekou Free Trade Zone Hospital, ⁴Department of Human Cell Biology and Genetics, School of Medicine, Southern University of Science and Technology, ⁵Department of Surgical Endoscopy, Shenzhen People's Hospital (The First Affiliated Hospital, Southern University of Science and Technology; The Second Clinical Medical College, Jinan University), ⁶Department of Medicine and Therapeutics, Faculty of Medicine, The Chinese University of Hong Kong, ⁷Institute of Digestive Disease, State Key Laboratory of Digestive Disease, Faculty of Medicine, The Chinese University of Hong Kong

In dit artikel

Samenvatting

Dit protocol stelt een in vitro co-kweekmodel op met patiëntafgeleide tumororganoïden en chimerische antigeenreceptor T (CAR-T) cellen om de specifieke cytotoxische activiteit van CAR-T-cellen tegen solide tumorcellen te evalueren.

Samenvatting

Chimerische antigeen receptor T (CAR-T) celtherapie heeft een indrukwekkende klinische effectiviteit behaald bij hematologische maligniteiten, maar CAR-T-celtherapie voor solide tumoren vereist nog verdere ontwikkeling. Patiëntafgeleide tumororganoïden zijn in vitro ziektemodellen die de heterogeniteit van de patiënt behouden en zijn gebruikt om de effectiviteit en veiligheid van chemotherapie en gerichte medicijnen te testen. Deze methode beschrijft een in vitro effectiviteitstestmodel waarbij tumororganoïden co-cultureren met CAR-T-cellen. Colorectale kankermonsters van patiënten worden geconstrueerd tot tumororganoïden met een driedimensionale (3D) structuur in een basale membraanmatrix. De tumororganoïden kunnen stabiel groeien en continu worden doorgevoerd. Volwassen tumororganoïden worden door washing en centrifugatie van de matrix gescheiden, en CAR-T-cellen worden toegevoegd bij verschillende effector-doelverhouding (E:T) om een immuun-organoïde co-kweeksysteem te vormen. Na 6-24 uur worden de morfologie en intercellulaire structuren van de organoïden waargenomen door bright-field imaging. Dit experiment voert verder dode celkleuring uit in het co-kweeksysteem, wat de levensvatbaarheid van de organoïden kan weerspiegelen en het cytotoxische effect van CAR-T-cellen op tumororganoïden kan evalueren. Dit experiment kan effectief de interactie tussen CAR-T-cellen en 3D-tumororganoïden observeren, en de resultaten kunnen worden gebruikt om de tumordodende activiteit van CAR-T-cellen te beoordelen.

Inleiding

Chimerische antigeenreceptor T (CAR-T) celtherapie heeft opmerkelijk klinisch succes getoond bij de behandeling van hematologische maligniteiten¹. De toepassing ervan in solide tumoren blijft echter beperkt vanwege verschillende grote obstakels, waaronder tumorheterogeniteit en antigeenverlies, fysieke en chemische barrières binnen de tumormassa, en de immunosuppressieve tumormicro-omgeving ^2,3. Deze uitdagingen dragen bij aan de beperkte effectiviteit van CAR-T-celtherapie in solide tumoren.

In vitro-evaluatie van d....