Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Het opzetten van een varkensmodel om het dynamische behoud en transplantatie van hele oogtransplantaties te bestuderen

622 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/69179

⸱

25 november 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Center for Engineering in Medicine and Surgery, Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School, 2Shriners Children's Boston, 3Plastic Surgery Research Laboratory, Department of Plastic and Reconstructive Surgery, Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School, 4Department of Plastic, Reconstructive and Aesthetic Surgery, Hospices Civils de Lyon, 5Department of Plastic, Reconstructive and Aesthetic Surgery, CHU de Rennes, University of Rennes, 6Faculty of Medicine and Health Sciences, University of Antwerp, 7Bioengineering Research Group, Cardiff Metropolitan University, 8Collaboration for the Advancement of Sustainable Medical Innovation, University College London, 9Division of Plastic Surgery Research, Vascularized Composite Allotransplantation Program Development, Cedars-Sinai Hospital

In dit artikel

Samenvatting

Er wordt een gedetailleerd en reproduceerbaar varkens-whole eye transplantatiemodel (WET) beschreven, van chirurgische aanschaf tot het initiëren van machineperfusie, waardoor het mogelijk is om WET-dynamische behoud bij transplantatie te bestuderen.

Samenvatting

De allereerste menselijke Whole Eye Transplant (WET) heeft nieuwe hoop gewekt voor patiënten die zijn gezichtsverlies door een ernstig oogletsel, maar er moeten nog aanzienlijke uitdagingen worden aangepakt voordat het herstel van het gezichtsvermogen via WET haalbaar kan worden. Een van de belangrijkste uitdagingen is ex vivo behoud. De oogbol, met name de neurale componenten zoals het netvlies en de oogzenuw, ondergaat binnen enkele minuten snelle en onomkeerbare degeneratie tenzij een juiste conservering wordt gegarandeerd. Statische koude opslag (SCS) blijft de gouden standaard in vasculariseerde composietallotransplantatie (VCA), maar is niet geschikt voor WET ex vivo behoud vanwege het onvermogen om metabolisme voldoende te onderdrukken of te ondersteunen, wat leidt tot verlies van levensvatbaarheid en functie van de transplantaat. Subnormotherme machine perfusie (SNMP) is naar voren gekomen als een veelbelovend alternatief voor SCS, met het potentieel om grafts niet alleen te behouden, maar ook om ze te herconditioneren. Onze groep heeft SNMP met succes vertaald van vaste orgaantransplantatie naar verschillende VCA-modellen, waarmee de haalbaarheid en voordelen ervan worden aangetoond. Hierin rapporteren we de toepassing van SNMP om een WET bij varkens te behouden, met details over het anatomische model en het conserveringsprotocol. Deze aanpak vertegenwoordigt een belangrijke stap vooruit in het optimaliseren van VET-conservering en transplantatietechnieken.

Inleiding

Vasculariseerde composietallotransplantaties (VCA's) vormen een belangrijke vooruitgang in reconstructieve chirurgie en bieden ongeëvenaarde esthetische en functionele resultaten voor patiënten met complexe laesies 1,2. Toch blijft oogverlies door oogbol een belangrijke bron van beperking bij gezichtsletsels. De recente eerste volledige oogtransplantatie (WET) heeft nieuwe hoop gewekt voor patiënten 3,4. Hoewel het zicht niet werd teruggewonnen, toonde functionele beeldvorming corticale activatie als reactie op lichtstimulatie, en elektroretinografie (ERG) gaf een afgezwakte maar herkenbare fotoreceptorrespons op licht5 aan. Ondanks uitzonderlijke technische prestaties blijven er aanzienlijke uitdagingen worden aangepakt om functioneel WET een klinische realiteit te maken. De oogbol is zeer gevoelig voor ischemie, en het netvlies en de oogzenuw ondervinden binnen enkele minuten na warme ischemie (WIT) onomkeerbare degeneratie, tenzij de juiste zuurstofvoorziening en pH-waardenworden gehandhaafd. Daarom brengt WET specifieke uitdagingen met zich mee binnen het VCA-veld, en moeten meerdere factoren worden meegenomen, waaronder zowel de posterieure als de anterieure segmenten, evenals de extraoculaire componenten. In het bijzonder is de spier cruciaal voor het bereiken van succesvolle functionele resultaten, omdat deze zeer gevoelig is voor warme ischemie-letsels, die verder worden verergerd door ischemie-reperfusie 7,8. Zuurstoftekort leidt tot celschade en de afgifte van schade-geassocieerde moleculaire patronen (DAMPs). Bij reperfusie activeren deze DAMPs het immuunsysteem van de ontvanger, wat ontsteking en infiltratie van immuuncellen veroorzaakt. Deze ontstekingsomgeving versnelt de afstoting door antigeenpresentatie en T-celactivatiete bevorderen. Naast het overwinnen van uitdagingen zoals de herverbinding van de oogzenuw, zal WET geoptimaliseerde ex vivo perfusietechnieken vereisen om schade door WIT of statische koude opslag (SCS) te voorkomen en uiteindelijk visuele herstelte bereiken 5,7,9,10,11.

Machineperfusie (MP) is goed gevestigd in vaste orgaantransplantatie als methode om ischemie-reperfusieletsel te voorkomen 12,13,14, waarbij subnormotherme machineperfusie (SNMP) superieure resultaten laat zien vergeleken met SCS in verschillende modellen 15,16,17. We hebben SNMP succesvol vertaald naar diermodellen, variërend van knaagdieren18,19 tot varkens 20,21,22 en, recentelijk, niet-menselijke primaten23. SNMP heeft niet alleen zijn effectiviteit bewezen in het langdurig bewaren van grafts, maar heeft ook potentieel getoond in het herconditioneren van grafts en het verminderen van warme ischemische schade, waardoor veilige herplanting tot 24 uur na aankoopmogelijk is. Vanwege het vermogen om celmetabolisme gedeeltelijk te behouden, opent SNMP ook nieuwe wegen door de behoudsfase te transformeren in een diagnostisch, therapeutisch en preconditionerend platform dat kan worden geïntegreerd in replantatie- en transplantatieprotocollen in VCA. We hebben een geoptimaliseerd SNMP-protocol ontwikkeld dat specifiek is afgestemd op VCA's en toegepast op dit uitdagende scenario van een oogtransplantatie met een hele oogtransplantatie.

In deze studie wordt SNMP gebruikt voor zuurstofhoudende, dynamische orgaanbehoud bij omgevingstemperatuur (ongeveer 20 °C). Deze techniek gebruikt een peristaltische pomp en zuurstof om het perfusaat te circuleren en te oxygeneren. Er wordt een varkensmodel gebruikt, dat zeer relevant is voor studies naar WET-transplantatie en behoud vanwege de fysiologische overeenkomsten met mensen, vergelijkbare vatgrootte en de unieke afwezigheid van een laterale orbitale wand 26,27,28. Deze eigenschap maakt het bijzonder geschikt voor ex vivo experimenten en allotransplantatiestudies, aangezien de arteria carotis external en de oftalmic arteria direct met elkaar verbonden zijn, waardoor de WET uitsluitend via de externe halsslagader en de halsslagader en de halsslagader kan worden verkregen zonder dat er een intracraniële dissectie nodig is voor ex vivo experimenten en in vivo orthotope of heterotopische herplanting. Inkoop vindt plaats na circulatoire dood, in overeenstemming met donatie na hartdoodsprotocollen, waardoor het uitstellen van de inkoop mogelijk wordt gemaakt totdat andere vaste organen zijn geoogst. Dit model onderzoekt daarom verder het potentieel van SNMP bij het reconditioneren van zeer gevoelige transplantaten na warme ischemie en ondersteunt de ontwikkeling van WET-conserveringstechnieken binnen gevestigde transplantatielaboratoria die zich al richten op andere organen, en zich houden aan de "3-R" principes van verfijning, reductie en vervanging29,30. Bovendien blijft het relevant voor hartkloppende aankopen die vergelijkbare stappen volgen. Het doel is om een betrouwbaar behoudsmodel op te zetten gebaseerd op de externe halsslagader en halsslagspeer, en de haalbaarheid ervan te beoordelen voor dynamisch behoud. Gedetailleerde procedurele stappen worden gegeven, waaronder de inkoop, het behoud van corrupties en de belangrijkste aspecten van de implementatie van SNMP.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Institutionele goedkeuring voor deze studie werd verkregen van het lokale Institutional Animal Care and Use Committee (protocol #2024N000205). Al het dierwerk volgde de richtlijnen31 van Animal Research: Reporting of In Vivo Experiments en was in overeenstemming met de aanbevelingen van het US Army Animal Care and Use Review Office (ACURO)32. Alle WETs werden aangeschaft van varkens die terminale orgaaninkoopprocedures ondergingen, volgens de "3-R" principes33. Dieren tussen de 30 kg en 50 kg werden geëuthanaseerd door exsanguinatie na ontvangst van 100 IE/kg heparine, en de resterende WET-transplantaten werden gebruikt voor experimenten. De rechter WET's dienden als bedieningselementen. Orgaanverwerving vond post-mortem plaats met minder dan 180 minuten warme ischemie. Zie de Materiaaltabel voor details over alle reagentia en apparatuur die in het protocol worden gebruikt.

OPMERKING: Gegevens werden vastgelegd in een spreadsheet (bijv. Excel), en statistische analyses werden uitgevoerd met een geschikte statistische software (bijv. GraphPad Prism). Het alfa-risico was vastgesteld op 5% en was tweestaartig. Voor elke gemonitorde variabele werden het gemiddelde en de standaardfout van het gemiddelde bepaald. De Spearman-test werd gebruikt om correlaties tussen perfusieparameters te bestuderen.

1. Machineperfusievoorbereiding (1 dag voor het experiment)

  1. Stel het perfusiesysteem van de machine34 in (zie Figuur 1).
    1. Assembleer de onderdelen van het perfusiesysteem: pomp, oxygenator, bellenvanger, continue druksensor en gewichtssensor.
      OPMERKING: De buislengte moet tot het minimum worden beperkt dat nodig is om alle onderdelen van de opstelling te assembleren. Eenmaal gemonteerd, houd er rekening mee dat drukkalibratie specifiek is voor het systeem, met name voor de lengtes van de buis.
    2. Verbind het systeem als een halfgesloten circulatief circuit zodat het perfusaat uit het reservoir naar de oxygenator wordt gepompt, gevolgd door de transplantaatinstroom (halsslagader). De veneuze uitvoer loopt terug in het reservoir (Aanvullende Figuur 1 en Aanvullende Video 1).
    3. Bevestig de druksensor aan de instroombuis.
    4. Plaats de transplantatie op het driedimensionale (3D)-geprinte platform dat op de elektronische weegschaal is geplaatst.
    5. Verbind zowel de weegschaal als de druksensor op de microcontroller.
    6. Koppel de microcontroller aan de computer van de operator voor realtime monitoring en continue gegevensregistratie.
    7. Maak de thermische camera klaar voor temperatuurmeting.
      OPMERKING: Gewichtsmonitoring, als surrogaat voor oedemvorming, is cruciaal omdat het dient als een vroege indicator van transplantaatletsel tijdens perfusie35.
  2. Maak de circuitcomponenten grondig schoon voordat je perfusie start en let extra goed op de oxygenator, vooral als deze meerdere keren is gebruikt.
    1. Begin met het afzonderlijk doorspoelen van alle buizen met 70% ethanol, daarna met steriel gedeïoniseerd water.
    2. Assembleer het systeem en circuleer 2 L steriel gedeïoniseerd water om de oxygenator te spoelen met een debiet van 50-100 mL/min als deze al is gebruikt.
      OPMERKING: Voor replantatiestudies van levende dieren gebruik je een nieuwe steriele oxygenator en steriliseer je alle andere perfusiecomponenten met ethyleenoxide (ETO)
  3. Bereid de perfusatieoplossing voor. Voor subnormotherme machineperfusie gebruik je een VCA-geoptimaliseerde Steen+ oplossing 24,34,36. In totaal gebruik je 1,5 L per graft, volgens de eerder gerapporteerdegedetailleerde samenstelling van 34.
  4. Voeg natriumhydroxideoplossing toe aan het perfusaat om een pH van 7,5-7,6 te bereiken. Stel deze beginwaarde bewust hoog in, omdat de pH tijdens de circulatie zal dalen wanneer het carbogenmengsel (95% zuurstof, 5% kooldioxide) oplost.
  5. Kalibreer de gewichts- en druksensoren om nauwkeurige metingen te garanderen.
    1. Moet de weegschaal aanpassen aan het gewicht van het platform.
    2. Om de vasculaire druk nauwkeurig te meten, kalibreer je het systeem volgens de kathetermeter en de gebruikte debietsnelheid: meet de systeemdruk voor elke kathetergrootte die gebruikt kan worden bij regelmatige debietintervallen (elke 0,5 mL increment, van 0 tot 20 mL/min).
    3. Tijdens experimenten trekt u om de arteriële druk te berekenen de kalibratiedruk af van de totale gemeten druk. De kalibratietabel die in deze experimenten wordt gebruikt, wordt als voorbeeld gegeven (Aanvullende Figuur 2).
      OPMERKING: Kalibratie is specifiek voor elke opstelling. Herhaal de kalibratie na elke wijziging in de buis, oxygenator of perfusatie, omdat deze aanpassingen de systeemdruk kunnen veranderen.

2. Post-mortem WET inkoop

OPMERKING: Om donatie na hartdood en/of postmortale aanschaf te simuleren, moet het dier worden geëuthanaseerd volgens de lokale IACUC-richtlijnen. Geef de voorkeur aan exsanguinatie boven intraveneuze injectie van pentobarbital om medicijntoxiciteit te voorkomen die het onderzoek kan verstoren.

  1. Houd het geëuthanaseerde dier in de buikliggend. Schaf en schrob het hoofd- en nekgebied en leg steriele gordijnen neer.
    OPMERKING: Het anatomische model wordt weergegeven in Figuur 2, en een stapsgewijze dissectiegids is opgenomen in Aanvullend Dossier 1.
  2. Teken de cutane markeringen van de klep.
    1. Zorg ervoor dat de markeringen bestaan uit een lijn rond de oogkas, 2 cm vanaf de oogkasrand, en een incisie die 1 cm onder de laterale kantus naar de hals loopt.
    2. Voer de incisie uit met een scalpel nr. 23 door de huid en het subcutane weefsel tot aan het bot aan de boven- en onderkant van de oogcel, inclusief het periost. Aan de voorste en achterste zijde van de klep zorg ervoor dat de incisie het fasciale vlak bereikt.
  3. Begin met de dissectie aan de voorkant van de oogkas met een Stevens-schaar en een Ason-tang.
    1. Verhoog de orbitale inhoud in een subperiosteaal vlak naar de orbitale wanden met een periostale lift.
    2. Identificeer en verdeel structuren dicht bij de oogkas met een scalpel van 15 blad, waaronder de schuine spierinserties en de plexus orbitale veneuze plexus, die uit de oogkas komt om bij de frontale ader te komen.
      OPMERKING: De frontale ader loopt af in de gezichtsven, die kan worden opgeofferd om tijd te besparen, mits de anastomotische tak met de oogvene behouden blijft.
  4. Ga verder met de dissectie aan het achterste deel van de oogklap. Met een scalpel verwijder je de masseterspier bij de jukaanplaatsing, gevolgd door de opstijgende tak van de onderkaak met een Liston-botsnijder. Ontleed de condylus handmatig door het onderkaakfragment extern te draaien.
  5. Verdeel het orbitale ligament dat zich uitstrekt van het jukbeen tot het frontale been om toegang te krijgen tot het orbitale gedeelte van de temporalisspier. Verwijder de temporalisspier.
  6. Met een periostale lift wordt een subperiostale tunnel onder de jukboog naar de voorste oogkas gecreëerd. Gebruik een reciprozaag om het bot te zagen. Identificeer de oogslagader die zich bevindt in het inferolaterale deel van de oogkegel onder de musculus temporalis.
  7. Verwijder de jukboog en de antero-inferieure oogwanden met behulp van een rongeur.
    OPMERKING: Deze stappen bieden toegang tot het inferolaterale aspect van de orbitale kegel en zijn vasculaire pedicle.
  8. Identificeer en ontleed beide takken van de oogslagader met fijne Stevens-schaar en microchirurgische pincetten wanneer ze de orbitale inhoud binnenkomen.
    OPMERKING: De meeste vaten (externe halsslagader en oppervlakkige vena jugularis) bevinden zich onder de onderkaak, behalve de veneuze gezichtsblad, die oppervlakkig is ten opzichte van de onderkaak.
  9. Na het isoleren van de gewenste lengte van de externe halsslagader en de halsvenader voltooit u de dissectie door de oogzenuw, oculomotorische zenuwen en de vaatpediculus met een scalpel te snijden.

3. Voorbereiding op perfusie

  1. Op een bijzettafeltje verwijd de halsslagader met een microchirurgische dilatator en plaats je een angiokatheter. Bevestig de canulatie met 3-0 zijden banden.
    OPMERKING: In dit protocol werd voor alle slagaders een 18-G angiokatheter gebruikt. Als de arteriële pedikel kort is, moet worden opgelet de katheter niet te ver in te brengen om selectieve canulatie van slechts één van de twee oogvertakkingen te voorkomen. De halsslagvene hoeft niet gecanuleerd te worden, tenzij er een gesloten perfusiesysteem wordt gebruikt, wat in dit protocol niet het geval was.
  2. Om de halsslagader te spoelen, gebruik je een 10 mL spuit met een druksensor identiek aan die voor de perfusieopstelling wordt gebruikt. Gebruik 10 mL heparine (100 IE eenheden/mL) om de vaten schoon te wassen zodat de uitlaat vrij is. Blijf onder de 35 ± 5 mmHg, want hoge druk kan leiden tot microvasculaire letsels en perfusiefalen.

4. Subnormotherme machineperfusie

  1. Verbind de canuleuze slagader van het transplantaat met de inflowbuis van het perfusiesysteem van de machine en plaats het transplantaat in de weegschaal.
  2. Start de pomp die staat ingesteld op 2-4 mL/min.
    OPMERKING: De perfusiestroom en druksnelheid hangen af van het gebruikte protocol. Voor VCA wordt een stabiel en laagdebiet regime gebruikt om capillaire schade en oedemvorming te voorkomen.
  3. Beoordeel levensvatbaarheidsparameters op elk vooraf bepaald tijdstip in zowel in- als uitstroom met een 1 mL spuit en analyseer monsters met het bloedgassysteem (bijv. bloedgasmetingen [pH, pCO2, pO2, lactaten, basenoverschot, bicarbonaat], glucose, natrium, kalium, calcium, chloride). Dit stelt ons in staat de metabole toestand van de transplantatie te berekenen volgens de vergelijkingen in Tabel 1.
    OPMERKING: In dit protocol duurt de perfusie 18 uur, en worden monsters van de in- en uitstroom elk uur genomen gedurende de eerste 6 uur en vervolgens elke 3 uur de resterende 12 uur.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Er werd een voorlopige haalbaarheidstest uitgevoerd over een periode van 6 uur met SNMP, gevolgd door 2 uur normotherme machine perfusie (NMP) met volbloed om de juiste reperfusie van de gehele transplantatie te beoordelen en de replantatie te simuleren. Tijdens de SNMP-fase werd een gestage uitstroom waargenomen, en de daaropvolgende reperfusiesimulatie van het hele bloed toonde succesvolle herkleuring van het hele transplantaat. De perfusieparameters bevestigden verder de haalbaarheid ...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Meer dan twee decennia na de eerste klinische gevallen blijft VCA geconfronteerd met aanzienlijke immunologische en ex vivo behoudsuitdagingen, waardoor de brede beschikbaarheid beperkt istot 37. Deze uitdagingen zijn nog duidelijker bij WET, dat spannende vooruitzichten biedt voor het herstel van het gezichtsvermogen maar unieke obstakels met zich meebrengt, zoals het bereiken van succesvolle herverbinding van de oogzenuw, het behouden van de functionali...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

Sommige auteurs verklaren concurrerende belangen. Drs. Uygun, Lellouch en Cetrulo hebben octrooiaanvragen die relevant zijn voor deze studie. Drs. Korkut Uygun en Basak Uygun hebben een financieel belang in en zitten in de Wetenschappelijke Adviesraad van Sylvatica Biotech Inc., een bedrijf dat zich richt op de ontwikkeling van high-subzero orgaanbehoudstechnologie. Concurrerende belangen voor MGH-onderzoekers worden beheerd door het MGB in overeenstemming met hun belangenconflictbeleid. Alle overige auteurs geven geen belangenconflict aan.

Dankbetuigingen

Dit werk werd gedeeltelijk gefinancierd door de National Institutes of Health onder toekenning nr. R01AR082825 (BEU), R01EB028782 (KU), DoD RTRP RT240044 (KU, AGL, CLC), Shriners Children's 84308 (YB) en ARPA-H sub-award FY25.1065.001 (CLC), en door de National Science Foundation onder subsidienummer EEC 1941543 (KU). HO en YB ontvingen financiering van de Fondation des Gueules Cassées. Steun van Société Française de Chirurgie Plastique, Reconstructrice et Esthétique (SOFCPRE, Frankrijk) aan HO en YB wordt zeer gewaardeerd.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Adson ForcepsFine Science Tools11019-12Chirurgisch instrument
Affinity Pixie Oxygenation SystemMedtronicBBP241Oxygenator
Angiocath (24 G)Becton Dickinson381112Canuleringskatheter
Bovin serum albumineSigma-AldrichA9647Perfusaatcomponent
Calcium chloride dihydrateSigma-Aldrich223506Perfusaatcomponent
Carbon Dioxide OxygenAirgasUN3156Carbon Dioxide Oxygen mix gas
Catheter 24 GDutscher921048Arteriale canulerings
D-(+)-Glucose monohydrateSigma-Aldrich49159Perfusaatcomponent
DexamethasonSigma-AldrichD2915Perfusaatcomponent
DextranThermo scientific406271000Perfusaatcomponent
Dilator forcepsAROSurgical11.946.1102Chirurgisch instrument
ExcelMicrosoftSpreadsheet
Heparine natrium injectieEugia Pharma63739-953-25Perfusaatcomponent
Humulin Regular Insulin humanLilly0002-8215-01Perfusaatcomponent
Hydrocortison natriumsuccinaatPfizer0009-0011-03Perfusaatcomponent
LigaclipEthiconMCS20Chirurgische vasculaire clips
Liston boten snijderFine Science Tools16104-19Chirurgisch instrument
Magnesium chloride hexa-hydraatSigma-AldrichM9272Perfusaatcomponent
MasterFlex L/SCole-Parmer77200-32Rollerpomp
Microsurgical forcepsFine Science Tools11253-20Chirurgisch instrument
Periosteal elevatorAROSurgical46.415.18Chirurgisch instrument
Polyethyleenglycol 35000Sigma-Aldrich25322-68-3Perfusaatcomponent
Potassium chlorideSigma-Aldrich7447-40-7Perfusaatcomponent
Pressure Monitor, Portable, PM-P-1Living Systems InstrumentationPM-P-1Druksensor
PrismGraphPadv. 10.1.1Statistische analysesoftware
Radnoti Bubble Trap Compliance ChamberRadnoti130149Bubble trap
RAPIDPoint 500Siemens500Bloedgassysteem
Reiprocating sawStryker5100-37Chirurgisch instrument
RongeurFine Science Tools16002-18Chirurgisch instrument
Scalpel blade (n15)Fine Science Tools10015-00Chirurgisch instrument
Scalpel blade (n23)Fine Science Tools10023-00Chirurgisch instrument
Silk suture 3-0EthiconP683HHechtdraad
Sodium bicarbonateSigma-AldrichS5761Perfusaatcomponent
Sodium chlorideSigma-AldrichS9888Perfusaatcomponent
Sodium hydroxideSigma-Aldrich72068Perfusaatcomponent
Sodium phosphate monobasique dihydrateSigma-Aldrich71505Perfusaatcomponent
Stevens scissorsAROSurgical07.367.13Chirurgisch instrument
Syringe 1 mLBD309659Steekproefverwerving
Syringe 10 mLDutscher300912Graft flush
Thermal cameraFlir Onehttps://www.flir.fr/products/flir-one-gen-3/?vertical=condition+monitoring&segment=solutionsPerfusietemperatuurbewaking
Tubing (n°16)Masterflex13-310-282Machineperfusie-opstelling
Vancomycine hydrochlorideSlate run pharmaceuticals70436-021-82Perfusaatcomponent

Referenties

  1. Lellouch, A. G., Lantieri, L. A second chance at life. Camb Q Healthc Ethics. 28 (3), 463-467 (2019).
  2. Tchiloemba, B., et al. Long-term outcomes after facial allotransplantation: Systematic review of the literature. Transplantation. 105 (8), 1869-1880 (2021).
  3. Nowogrodzki, J. World's first whole-eye transplant: The innovations that made it possible. Nature. 633 (8030), 500-501 (2024).
  4. Lico, M., et al. Swallowing function after pioneering partial face and whole eye transplant: Clinical insights. Am J Speech Lang Pathol. 34 (4), 1921-1930 (2025).
  5. Ceradini, D. J., et al. Combined whole eye and face transplant: Microsurgical strategy and 1-year clinical course. JAMA. 332 (18), 1551-1558 (2024).
  6. Abbas, F., et al. Revival of light signalling in the postmortem mouse and human retina. Nature. 606 (7913), 351-357 (2022).
  7. Paradis, S., et al. Chronology of mitochondrial and cellular events during skeletal muscle ischemia-reperfusion. Am J Physiol Cell Physiol. 310 (11), C968-C982 (2016).
  8. Kruit, A. S., et al. Ex-vivo perfusion as a successful strategy for reduction of ischemia-reperfusion injury in prolonged muscle flap preservation: A gene expression. Gene. 701, 89-97 (2019).
  9. He, J., Khan, U. Z., Qing, L., Wu, P., Tang, J. Improving the ischemia-reperfusion injury in vascularized composite allotransplantation: Clinical experience and experimental implications. Front Immunol. 13, 998952(2022).
  10. Dickey, R. M., et al. Composite tissue preservation. Ann Plast Surg. 84 (6), 711-716 (2020).
  11. Messner, F., Grahammer, J., Hautz, T., Brandacher, G., Schneeberger, S. Ischemia/reperfusion injury in vascularized tissue allotransplantation. Curr Opin Organ Transplant. 21 (5), 503-509 (2016).
  12. Markmann, J. F., et al. Impact of portable normothermic blood-based machine perfusion on outcomes of liver transplant. JAMA Surg. 157 (3), 189(2022).
  13. Van Rijn, R., et al. Hypothermic machine perfusion in liver transplantation: A randomized trial. N Engl J Med. 384 (15), 1391-1401 (2021).
  14. Pitchaimuthu, M., Crochet, C., Battula, N. R., Faria, I., Martins, P. N. Machine perfusion organ preservation: Highlights from the American Transplant Congress 2024. Artif Organs. 49 (2), 326-331 (2025).
  15. Berendsen, T. A., et al. A simplified subnormothermic machine perfusion system restores ischemically damaged liver grafts in a rat model of orthotopic liver transplantation. Transplant Res. 1 (1), 6(2012).
  16. Karangwa, S. A., et al. Machine perfusion of donor livers for transplantation: A proposal for standardized nomenclature and reporting guidelines. Am J Transplant. 16 (10), 2932-2942 (2016).
  17. Agius, T., et al. Subnormothermic ex vivo porcine kidney perfusion improves energy metabolism: Analysis using 31P magnetic resonance spectroscopic imaging. Transplant Direct. 8 (10), e1354(2022).
  18. Goutard, M., et al. Exceeding the limits of static cold storage in limb transplantation using subnormothermic machine perfusion. J Reconstr Microsurg. 39 (5), 350-360 (2023).
  19. Burlage, L. C., et al. Optimization of ex vivo machine perfusion and transplantation of vascularized composite allografts. J Surg Res. 270, 151-161 (2022).
  20. Berkane, Y., et al. Towards optimizing sub-normothermic machine perfusion in fasciocutaneous flaps: A large animal study. Bioeng (Basel). 10 (12), 1415(2023).
  21. Berkane, Y., et al. Continuous oxygen monitoring to enhance ex-vivo organ machine perfusion and reconstructive surgery. Biosens Bioelectron. 262, 116549(2024).
  22. Tawa, P., et al. Continuous versus pulsatile flow in 24-hour vascularized composite allograft machine perfusion in swine: A pilot study. J Surg Res. 283, 1145-1153 (2023).
  23. Oubari, H., et al. Development of a 24-h preservation protocol of forearm vascularized composite allotransplants in nonhuman primates using subnormothermic machine perfusion. Transplant Direct. 11 (9), e1849(2025).
  24. Goutard, M., et al. Machine perfusion enables 24-h preservation of vascularized composite allografts in a swine model of allotransplantation. Transpl Int. 37, e100(2024).
  25. Charlès, L., et al. Effect of subnormothermic machine perfusion on the preservation of vascularized composite allografts after prolonged warm ischemia. Transplantation. 108 (11), 2222-2232 (2024).
  26. Kyllar, M., et al. A porcine model: Surgical anatomy of the orbit for maxillofacial surgery. Lab Anim. 50 (2), 125-136 (2016).
  27. Rousou, C., et al. A technical protocol for an experimental ex vivo model using arterially perfused porcine eyes. Exp Eye Res. 181, 171-177 (2019).
  28. Bravo, M. G., Granoff, M. D., Johnson, A. R., Lee, B. T. Development of a new large-animal model for composite face and whole-eye transplantation: A novel application for anatomical mapping using indocyanine green and liquid latex. Plast Reconstr Surg. 145 (1), 67e-75e (2020).
  29. Dickens, B. M. Legal and ethical issues of uterus transplantation. Int J Gynaecol Obstet. 133 (1), 125-128 (2016).
  30. Díaz, L., et al. Ethical considerations in animal research: The principle of 3Rs. Rev Invest Clin. 73 (4), 199-209 (2021).
  31. ARRIVE guidelines. , https://arriveguidelines.org (2024).
  32. MRDC research protections. , https://mrdc.health.mil/index.cfm/collaborate/research_protections/acuro (2024).
  33. NCBI PMC. , https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6826930 (2024).
  34. Cabanel, L., et al. Establishing a swine model to study uterus dynamic preservation and transplantation. J Vis Exp. (214), e67357(2024).
  35. Meyers, A., et al. Weight gain is an early indicator of injury in ex vivo normothermic limb perfusion (EVNLP). Artif Organs. 47 (2), 290-301 (2023).
  36. Berkane, Y., et al. Towards optimizing sub-normothermic machine perfusion in fasciocutaneous flaps: A large animal study. Bioeng (Basel). 10 (12), 1415(2023).
  37. Berkane, Y., et al. Avancées et perspectives en préservation d'allotransplantations de tissus composites. Bull Acad Natl Med. 208 (9), 1299-1308 (2024).
  38. Brouwers, K., et al. 24-hour perfusion of porcine myocutaneous flaps mitigates reperfusion injury: A 7-day follow-up study. Plast Reconstr Surg Glob Open. 10 (2), e4123(2022).
  39. Cypel, M., et al. Normothermic ex vivo lung perfusion in clinical lung transplantation. N Engl J Med. 364 (15), 1431-1440 (2011).
  40. Agarwal, A., et al. Clinicopathological analysis of uterine allografts including proposed scoring of ischemia reperfusion injury and T-cell-mediated rejection: Dallas uterus transplant study. Transplantation. 106 (1), 167-177 (2022).
  41. Ponticelli, C. Ischaemia-reperfusion injury: A major protagonist in kidney transplantation. Nephrol Dial Transplant. 29 (6), 1134-1140 (2014).
  42. Berkane, Y., et al. VCA supercooling in a swine partial hindlimb model. Sci Rep. 14 (1), 12618(2024).
  43. Filz von Reiterdank, I., et al. Subzero non-freezing of vascularized composite allografts in a rodent partial hindlimb model. Cryobiology. 116, 104950(2024).
  44. Berkane, Y., et al. Supercooling: A promising technique for prolonged preservation in solid organ transplantation, and early perspectives in vascularized composite allografts. Front Transplant. 2, 1269706(2023).
  45. De Vries, R. J., et al. Subzero non-frozen preservation of human livers in the supercooled state. Nat Protoc. 15 (6), 2024-2040 (2020).
  46. De Vries, R. J., et al. Supercooling extends preservation time of human livers. Nat Biotechnol. 37 (10), 1131-1136 (2019).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Tags

Ex vivo preservatiemachineperfusiestatische koude bewaringoogzenuwretinapreservatiegevasculariseerde composiete allotransplantatiegraftviabiliteittransplantatietechnieken
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.