Methodenartikel

Amyloïde en de Cross-Beta Architectuur

454 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/69350

⸱

13 februari 2026

 ,  ,  ,  , 
1School of Life Sciences, University of Sussex

In dit artikel

Samenvatting

Amyloïde fibrillen worden gevormd door talrijke eiwitten, en de resulterende fibrillen delen een "kruis-β-sheet" structuur. Hier beschrijven we hoe amyloïdfibrillenmonsters kunnen worden voorbereid voor röntgenvezeldiffractie en hoe de patronen geanalyseerd kunnen worden.

Samenvatting

Amyloïde fibrillen bestaan uit een verkeerd gevouwen, zelfgeassembleerd eiwit dat is georganiseerd in een goed gedefinieerde, repetitieve structuur. Ze staan bekend om hun belangrijke rol bij eiwitmisvouwingsziekten, waaronder de ziekte van Alzheimer en type 2 diabetes, waarbij de onoplosbare amyloïde fibrillen in de weefsels worden afgezet. Bovendien is vastgesteld dat ze een belangrijke functionele rol spelen in veel organismen, door kracht, steigers en bescherming te bieden. De eerste structurele modellen van amyloïde werden geïnformeerd door röntgenvezeldiffractiegegevens uit bundels uitgelijnde amyloïde fibrillen. Dit resulteerde in vroege modellen van de generieke cross-β structuur, die is vervangen door meer gedetailleerde diffractieanalyse van sterk georiënteerde en halfkristallijne monsters, wat resulteert in details van de organisatie van peptiden in een repetitieve architectuur. Hier hebben we ons gericht op het beschrijven van methoden om de onderliggende architectuur van deze fibrillen te bepalen, en we hebben de gemeenschappelijke kenmerken van amyloïde fibrillen beschreven uit diverse pathogene, functionele en synthetische bronnen. We beschrijven de voorbereiding van de monsters, het verzamelen van gegevens en de daaropvolgende data-analyse om een modelstructuur te creëren die kan worden vergeleken met de experimentele data.

Inleiding

Amyloïde fibrillen werden voor het eerst geïdentificeerd binnen een groep ziekten die bekendstaat als Amyloïdosen, waarbij eiwitrijke fibrillen zich ophopen in de extracellulaire ruimtes van weefsels1. Elke ziekte wordt gekenmerkt door een bepaald precursoreiwit dat een conformationele verandering ondergaat om sterk geordende, stabiele eiwitfibrillente vormen 2,3. De recentere definitie van amyloïde fibrillen omvat nu fibrillen die zich ophopen in de cellulaire omgeving. Meer recentelijk zijn er een aantal functionele systemen geïdentificeerd die de amyloïdestructuur gebruiken om stabiliteit, hechting of zelfs informatieopslag te bieden. Ondanks het grote scala aan eiwitstructuren die zichzelf kunnen assembleren tot amyloïde fibrillen, delen ze allemaal een kruis-β structuur4. Deze kruis-β opstelling werd voor het eerst beschreven door Astbury voor henne-eiwit5 en later verder uitgelegd door Geddes voor kruis-β zijde6. In deze eiwitarchitectuur bestaan de fibrillen uit β-strengen die loodrecht op de fibrilas lopen, welke vervolgens zijn gerangschikt in β-sheets die via de zijketens samenkomen tot wat later sterische ritsen7 werd genoemd. Dit creëert een zeer stabiele organisatie die bij elkaar wordt gehouden door waterstofbruggen die parallel aan de vezel lopen, naast hydrofobe, elektrostatische en polaire interacties via zijketens8.

Vroege structurele studies gebruikten röntgenvezeldiffractie om de structuur van amyloïde fibrillen te onderzoeken, waarbij de fibrillen werden uitgelijnd en georiënteerd om een bundel amyloïde fibrillen te vormen die in de röntgenbundel van een diffraktometer 9,10 konden worden geplaatst. Een generieke structuur van amyloïde fibrillen werd gegenereerd om te passen bij de diffractiepatronen van verschillende amyloïde fibrillen die uit menselijk ziekteweefsel waren gehaald of in vitrowaren gekweekt, en dit heeft een basis geboden voor verdere structurele beschrijvingen11. In de afgelopen jaren hebben vooruitgang in solid-state kernmagnetische resonantie (ssNMR), microkristal röntgenkristallografie en cryogene elektronenmicroscopie (CryoEM) atomaire details geleverd voor de cross-β structuur11. De röntgenvezeldiffractiemethode blijft echter belangrijk en nuttig, en geeft informatie over de repetitieve organisatie van de eiwitten. Bovendien kan in sommige gevallen informatie met betrekking tot een langere termijn opdracht toegankelijk zijn. Fundamenteel wordt röntgenvezeldiffractie vaak gebruikt om de aanwezigheid van amyloïdefibrillen gevormd uit verschillende eiwitten te bevestigen, en het cross-β patroon is een van de belangrijkste vereisten om een vezelige assemblage als amyloïde12 te classificeren.

Hier beschrijven we de methodologie die wordt gebruikt om amyloïde fibrillen te bereiden en deze uit te lijnen voor het verzamelen van röntgenvezeldiffractiegegevens. Daarnaast geven we details over hoe de diffractiegegevens verder geanalyseerd kunnen worden om een modelstructuur te genereren, het voorspelde diffractiepatroon en vergeleken met diffractiegegevens van ex-vivo-afgeleide fibrillen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

1. Voorbereiding van fibrillaire monsters voor röntgenvezeldiffractie

  1. Los het eiwit of peptide van belang op onder optimale omstandigheden voor fibrillenvorming voor het geselecteerde amyloïdogene peptide en beoordeel de fibrillenvorming met behulp van elektronenmicroscopie of atoomkrachtmicroscopie. Details over hoe monsters worden voorbereid en beeldvorming uitgevoerd worden elders beschikbaar13. Zorg ervoor dat de fibrillen lang, recht en onvertakt zijn zoals weergegeven in Figuur 1. Zo werden de fibrillen in Figuur 1 afgebeeld met behulp van transmissie-elektronenmicroscopie (TEM). Plaats een druppel met fibrillen op een elektronenmicroscooprooster en kleur vervolgens negatief met uranylacetat14.
    OPMERKING: Een gelijkmatige dekking en verdeling van de fibrillen op het rooster is wenselijk.
  2. Lijn uit om een bundel fibrillen te produceren waarvan de vezelassen idealiter allemaal parallel zijn (Figuur 2A).
    1. Smelt kaarswas tot het vloeibaar is met een hete plaat. Met een glassnijder zoals een diamantpen snijdt u 1 mm borosilicaatglascapillairen tot een lengte van ongeveer 2-3 cm en doop deze kort in de vloeibare was. Trek de kaarswas omhoog door capillairwerking (ongeveer 1-2 mm lang binnen de capillair). Zorg ervoor dat het wasoppervlak vlak is zodat de fibrille suspensie gelijkmatig kan rusten.
    2. Gebruik plasticine om de afgesloten haarvaten horizontaal te bevestigen in een petrischaal met een opening van 0,5 mm tot 2 mm tussen de met was gevulde uiteinden (Figuur 2A).
    3. Met een pipet laat je voorzichtig een druppel oplossing van 10 μL tussen de met was gevulde uiteinden van de twee haarvaten hangen. Zorg ervoor dat de oplossing beide wasuiteinden raakt, maar niet op het glas uitsteekt.
    4. Bescherm het monster tegen stof door de Petrischaal af te dekken. Laat het monster 's nachts verdampen, wat resulteert in uitlijning van de fibrillen (zie Figuur 2A).
      OPMERKING: Het kan enkele dagen duren voordat het monster volledig is opgedroogd, en dit hangt af van de omgevingstemperatuur, luchtvochtigheid en de viscositeit van het monster.
    5. Sluit het bord af; Broeden bij lagere temperaturen in een koelkast of incubeer met vochtigheid in een afgesloten doos om het drogen te vertragen, wat kan resulteren in een betere uitlijning van het monster.
  3. Lijn amyloïde fibrillen uit in een glazen capillair (Figuur 2B).
    1. Bevestig een 1 ml spuit met een klein stukje rubberen buis aan het brede uiteinde op een capillarlaag van 0,7 mm diameter en aspiraat 2-3 cm aan fibrille suspensie.
    2. Sluit één uiteinde van de capillaire af met gesmolten was en laat het andere uiteinde open blijven om verdamping mogelijk te maken. Rangschik de capillaire verticaal en laat deze enkele dagen of weken drogen totdat er een opgedroogde schijf in de capillairbuis is gevormd (Figuur 2B).
  4. Lijn fibrillen uit als een "mat" of dunne film (Figuur 2C).
    1. Breng een hoge concentratie (bijv. >10 mg/mL) fibrillemonster op een glazen glaasje, parafilm of stuk teflon, bedek en laat het minstens 24 uur aan de lucht drogen. Dit zou moeten drogen tot een dunne, platte laag laag op het oppervlak. Til dit voorzichtig op met een scalpel en bevestig het vervolgens aan een glazen capillairbuis met lijm of plasticine.
    2. De mat zal een willekeurige rangschikking van fibrillen hebben (zie Figuur 2C). Monteer het monster zorgvuldig op een goniometerkop zodat de röntgenbundel door de rand van het monster gaat en parallel aan het vlak van de film (Figuur 2C).
      OPMERKING: Diffractie door het oppervlak van de film levert diffractieringen op door willekeurige uitlijning (zie Figuur 2C).
  5. Onderzoek het monster.
    1. Onderzoek hoe goed het monster is uitgelijnd door het te bekijken via een kruispolarisator onder een lichtmicroscoop. Als dubbelbreking aanwezig is, kan dit wijzen op een goede uitlijning in de fibrillenbundel.
    2. Bevestig het capillaire vezelmonster op een goniometerkop met plasticine. Overweeg of het monster een vezelbundel, mat of schijf is wanneer het in de röntgenbundel wordt geplaatst.
      1. Let op dat de rotatieas van het monster rond de vezelas van een vezelbundel zal liggen (Figuur 2A), terwijl de vezels in schijven de neiging hebben om zich over de diameter van de buis uit te lijnen (Figuur 2B). Een mat heeft twee duidelijke richtingen (parallel aan het vlak van de film en loodrecht daarop) (Figuur 2C).
    3. Verzamel een diffractiepatroon (zoals weergegeven in Figuur 3A) met eigen röntgenapparatuur (CuKα voor eiwitkristallografie) of met synchrotronstraling. De belichtingstijden variëren afhankelijk van de intensiteit van de röntgenbundel; Pas dit aan op basis van de aanbevolen verzameltijden voor de diffractiebron.

2. Data-analyse

  1. Gebruik van CLEARER voor data-analyse15.
    OPMERKING: Het röntgenvezeldiffractiepatroonanalyseprogramma is gratis beschikbaar voor academische gebruikers via de corresponderende auteur. Andere methoden voor diffractieanalyse zijn beschikbaar16,17 (www.esrf.fr/computing/expg/subgroups/data_analysis/FIT2D)18. Cursief tussen haakjes geeft menucommando's aan.
    1. Converteer het diffractiepatroon naar een .tiff bestand en upload het bestand naar CLEARER (Figuur 4).
    2. Voer de diffractie-instellingen in (Diffractiepatroon: Diffractie-instellingen), inclusief de pixelgrootte in het TIFF-beeld, de röntgenbron en de afstand tussen monster en detector.
    3. Zorg ervoor dat het diffractiepatroon zo is georiënteerd dat de meridiaan verticaal is (Beeldverwerking: Roteren). Gebruik de Centering-module (Diffractiepatroon: Centraal Beeld) om het beeld te centreren. Definieer de twee hoofdassen (meridiaan en evenaar): Deze module vergelijkt de intensiteit langs deze twee assen van het patroon. Zodra het centreren is voltooid, sla je de afbeelding op en zorg je ervoor dat deze wordt gebruikt voor volgende stappen.
    4. Specificeer een geschikte hoek (ingesteld langs de twee hoofdassen [meridiaan en evenaar]) en geef een grafiek uit die de positie van het diffractiesignaal tegenover intensiteit toont met behulp van de Radially Average-module (Diffractiepatroon: Radially Average) (Figuur 4A).
    5. Meet en geef automatisch de posities van het diffractiesignaal uit met behulp van de Peak Find-module (Diffractiepatroon: Radiaal Gemiddeld: Piekvind) (Figuur 4B). Zorg ervoor dat alle diffractiesignalen nauwkeurig worden gedetecteerd door de piekzoekbreedte aan te passen, terwijl je ervoor zorgt dat ruis niet wordt gedetecteerd.
    6. Controleer de signaalposities die door Peak Find worden uitgegeven met behulp van de Zoom & Measure-module (Diffraction Pattern: Zoom & Measure). Controleer of alle seinposities zijn vermeld en toegewezen aan de juiste as.
    7. Verken eenheidsceldimensies (b en c) die de waargenomen diffractiesignalen genereren met behulp van de Unit Cell Optimization-module (Diffraction Pattern: Unit Cell Optimization) (Figuur 5A). Onderzoek de sterke signalen die op de evenaar zijn gevonden om een eerste gok te genereren die in de eenheidscel-invoertabel wordt ingevoerd en specificeer de min- en max [hkl] -indices waarover CLEARER zoekt naar potentiële cellen (een dimensie is meridioneel en standaard 4,76 Å).
    8. Bereken de afmetingen van potentiële eenheidscel en vergelijk de voorspelde posities van het diffractiesignaal met de waargenomen reflecties. Eenheidscellen worden beoordeeld op basis van de mate van overeenstemming tussen de voorspelde en experimentele signalen. De top twintig wedstrijden worden vervolgens getoond. Beschouw de lengte van de peptidevoorloper en andere informatie uit elektronenmicroscopie, AFM of solid-state kernmagnetische resonantie (ssNMR) om de best mogelijke eenheidscellen te selecteren die passen bij de data en het monster.

3. Structurele modellering en testen van het model met CLEARER

  1. Constructeer moleculaire modellen (PDB-formaat).
    OPMERKING: Maak gebruik van eiwitmodelleringsprogramma's zoals Pymol (DeLano)19 of Insight II (Accelerys) en andere om PDB-coördinaten van het precursorpeptide in β-streng conformatie en in een β-sheet opstelling te genereren. Deze sectie beschrijft een eenvoudig proces dat wordt gebruikt voor een orthorhombische eenheidscel (alle hoeken van 90°). Niet-orthogonale organisaties zijn mogelijk waar meer deskundige kennis van diffractie vereist is. Deze kunnen worden onderzocht in CLEARER voor complexere eenheidscellen.
    1. Bouw driedimensionale opstellingen van peptiden in een β-sheet opstelling om in de bepaalde eenheidscel(s) te passen. Zorg ervoor dat dit model alle symmetriegerelateerde objecten binnen de cel bevat.
    2. Laad het PDB-model in de Structure Chain Generator-module (Diffraction Simulation: Structures: Structure Chain Generator) om de geconstrueerde structuurcoördinaten te controleren. Zorg ervoor dat de vezelas en de balkas correct zijn toegewezen. Voer de bepaalde eenheidscelafmetingen in. Controleer of er clashing optreedt voor de geselecteerde celafmetingen (Figuur 5B).
    3. Upload PDB-modelcoördinaten naar de Fiber Diffraction Simulation module (Diffractie Simulation: Fiber Diffraction Simulation).
      1. Voer de richting van de vezelas, bundelrichting, eenheidscelafmetingen geselecteerd in stap 3.1.2, röntgenbron- en detectorinstellingen in, en klik op simuleren. Voor een orthorhombische eenheidscelsimulatie wordt de vezelas gedefinieerd door de Cartesische as die gerelateerd is aan de oriëntatie van de vezelas in het gebruikte model.
      2. Zorg ervoor dat de bundelassen loodrecht op de vezelas staan, dat wil zeggen op een van de andere twee mogelijke assen. Sla de simulatie-instellingen op als .html bestanden (Bestand: Opslaan als). Deze kunnen later worden geüpload en bewerkt om iteratief de optimale modelstructuur te verkennen.
      3. Sla het resulterende gesimuleerde patroon op in een rauw formaat, dat later kan worden geüpload voor verdere analyse, of als een .tiff (dit formaat bevat extra contrastinformatie weggelaten) (Simulatie: Bewaar Viewable Image als TIFF). Vergelijk deze vervolgens met het experimentele patroon.
  2. Vergelijk gesimuleerde diffractiepatronen met experimentele patronen voor presentatie.
    1. Gebruik stappen 2.1.5-2.1.6 om gesimuleerde diffractiesignalen te meten en te vergelijken met die gemeten uit experimentele patronen (Figuur 6). Noteer deze in een tabel.
    2. Gebruik een module genaamd Layers (Diffraction Pattern: Layers) om gesimuleerde en experimentele patronen over elkaar te leggen en signaalposities te vergelijken ( Figuur 6C).
    3. Vergelijk signaalposities en relatieve intensiteiten tussen het experimentele en gesimuleerde patroon door een kwadrant van het gesimuleerde patroon naast het experimentele patroon te rangschikken (zoals weergegeven in Figuur 6B)8,20,21.
    4. Evalueer de geldigheid van een voorgestelde eenheidscel en model, en pas vervolgens het model en de cel iteratief aan om de gelijkenis tussen het gesimuleerde patroon en het experimentele diffractiepatroon te verbeteren.
    5. Vergelijk uitgebreid de resultaten van verschillende modellen en cellen met behulp van de procedure beschreven in stap 3.1 om verschillende alternatieven te testen. Zorg ervoor dat informatie verzameld uit andere technieken, zoals TEM, AFM en NMR, wordt meegenomen om modellering te beperken en tot de best mogelijke structurele representatie te komen die past bij de data 8,21,22,23.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

CcbMet voorbeeld24: Figuur 1 toont elektronenmicrografieën die een hoge dichtheid van amyloïde fibrillen op een rooster laten zien dat geschikt is voor de voorbereiding van een röntgenvezelmonster. Figuur 2 beschrijft de verschillende texturen die kunnen worden gegenereerd uit vezelmonsters: vezelbundel (Figuur 2A), schijf (

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Röntgenvezeldiffractie kan worden gebruikt om te evalueren of een monster een amyloïdestructuur vormt en om meer inzicht te krijgen in de moleculaire organisatie van het precursoreiwit of peptide binnen de vezels. Hier hebben we de methoden beschreven waarmee vezelige monsters kunnen worden voorbereid voor röntgenvezeldiffractie, gegevens kunnen worden verkregen en vervolgens geanalyseerd. Cruciaal is dat de kwaliteit van de verkregen data afhangt van zowel de volgorde binnen de afzonder...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben geen belangenconflicten om te melden

Dankbetuigingen

De auteurs willen graag de hulp van Dr. Pawel Sikorski en professor Edward Atkins bedanken bij de ontwikkeling van het CLEARER-programma en de analyse van patronen. Het programma is geschreven door Dr. O Sumner Makin. Dit werk is ondersteund door financiering van de Alzheimer's Research Trust en de BBSRC.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
0.7 mm diameter X-ray  kwartsglas capillairen GLAS, W. Muller, D-13503, Berlijn, DuitslandQ-07-001-80
Glas capillairen 1,5 mm borosilicaatHarvard apparaat Ltd, (Edenbridge, Kent, UK)BS4 30-0074voorbeeld, verkrijgbaar bij andere fabrikanten
Eiwitkristallografie X-ray diffractometerVerschillendeVerschillende fabrikanten

Referenties

  1. Shirahama, T., Cohen, A. S. High resolution electron microscopic analysis of the amyloid fibril. J Cell Biol. 33, 679-706 (1967).
  2. Buxbaum, J. N., et al. Amyloid nomenclature 2024: Update, novel proteins, and recommendations by the International Society of Amyloidosis (ISA) Nomenclature Committee. Amyloid. 31 (4), 249-256 (2024).
  3. Dobson, C. M. The structural basis of protein folding and its links with human disease. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 356 (1406), 133-145 (2001).
  4. Sunde, M., et al. Common core structure of amyloid fibrils by synchrotron X-ray diffraction. J. Mol. Biol. 273, 729-739 (1997).
  5. Astbury, W. T., Woods, H. J., Bragg, W. L. X-ray studies of the structure of hair, wool, and related fibers. II. The molecular structure and elastic properties of hair keratin. Philos Trans R Soc Lond A. 232, 333-394 (1934).
  6. Geddes, A. J., Parker, K. D., Atkins, E. D., Beighton, E. "Cross-beta" conformation in proteins. J Mol Biol. 32 (2), 343-358 (1968).
  7. Sawaya, M. R., et al. Atomic structures of amyloid cross-beta spines reveal varied steric zippers. Nature. 447 (7143), 453-457 (2007).
  8. Makin, O. S., Atkins, E., Sikorski, P., Johansson, J., Serpell, L. C. Molecular basis for amyloid fibril formation and stability. Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (2), 315-320 (2005).
  9. Eanes, E. D., Glenner, G. G. X-ray diffraction studies on amyloid filaments. J Histochem Cytochem. 16 (11), 673-677 (1968).
  10. Kirschner, D. A., Abraham, C., Selkoe, D. J. X-ray diffraction from intraneuronal paired helical filaments and extraneuronal amyloid fibers in Alzheimer disease indicates cross-beta conformation. Proc Natl Acad Sci U S A. 83 (2), 503-507 (1986).
  11. Ke, P. C., et al. Half a century of amyloids: Past, present and future. Chem Soc Rev. 49 (15), 5473-5509 (2020).
  12. Sipe, J. D., et al. Nomenclature 2014: Amyloid fibril proteins and clinical classification of the amyloidosis. Amyloid. 21 (4), 221-224 (2014).
  13. Morris, K. L., Serpell, L. C. X-ray fiber diffraction studies of amyloid fibrils. Methods Mol Biol. 849, 121-135 (2012).
  14. Al-Hilaly, Y. K., et al. Tau (297-391) forms filaments that structurally mimic the core of paired helical filaments in alzheimer's disease brain. FEBS Lett. 594 (5), 944-950 (2020).
  15. Makin, O. S., Sikorski, P., Serpell, L. C. Clearer: A new tool for the analysis of X-ray fiber diffraction patterns and diffraction simulation from atomic structural models. Appl Cryst. 40 (5), 966-972 (2007).
  16. Winn, M. D. An overview of the CCP4 project in protein crystallography: An example of a collaborative project. J Synchrotron Radiat. 10 (Pt 1), 23-25 (2003).
  17. Squire, J., et al. New CCP13 software and the strategy behind further developments: Stripping and modelling of fiber diffraction data. Fibre Diffr Rev. 11, 7-19 (2003).
  18. Makin, O. S., Serpell, L. C. Amyloid Proteins: Methods and Protocols. , Humana Press. Totowa, NJ. (2005).
  19. The pymol molecular graphics system. , DeLano Scientific. San Carlos, USA. (2002).
  20. Jahn, T. R., et al. The common architecture of cross-beta amyloid. J Mol Biol. 395 (4), 717-727 (2009).
  21. Madine, J., et al. Structural insights into the polymorphism of amyloid-like fibrils formed by region 20-29 of amylin revealed by solid-state NMR and X-ray fiber diffraction. J Am Chem Soc. 130 (45), 14990-15001 (2008).
  22. Madine, J., Copland, A., Serpell, L. C., Middleton, D. A. Cross-β spine architecture of fibrils formed by the amyloidogenic segment nfgsvqfv of medin from solid-state NMR and X-ray fiber diffraction measurements. Biochemistry. 48 (14), 3089-3099 (2009).
  23. Papapostolou, D., et al. Engineering nanoscale order into a designed protein fiber. Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (26), 10853-10858 (2007).
  24. Steinmetz, M. O., et al. Atomic models of de novo designed ccβ-met amyloid-like fibrils. J Mol Biol. 376 (3), 898-912 (2008).
  25. Blake, C., Serpell, L. Synchrotron x-ray studies suggest that the core of the transthyretin amyloid fibril is a continuous β-helix. Structure. 4, 989-998 (1996).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Amylo de fibrilleneiwitmisfoldingr ntgendiffractieziekte van Alzheimerdiabetes type 2fibrilstructuurmonstervoorbereidingdata analysepeptideorganisatie

Gerelateerde artikelen