Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Onderzoeksartikel

Mechanisme van Jianpi Shengxue-aftrek bij het verlichten van door cyclofosfamide geïnduceerde myelosuppressie bij muizen

562 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/69542

⸱

2 januari 2026

 ,  ,  ,  ,  , 
1Hunan University of Chinese Medicine, 2Department of Traditional Chinese Medicine /Integrative Oncology, Hunan Cancer Hospital/The Affiliated Cancer Hospital of Xiangya School of Medicine, Central South University

In dit artikel

Samenvatting

Dit protocol verduidelijkt systematisch hoe Jianpi Shengxue-aftrek cyclofosfamide geïnduceerde myelosuppressie vermindert via een geïntegreerde netwerkfarmacologie en dierproeven, en onthult de multi-doelmechanismen en het potentieel als aanvullende therapie.

Samenvatting

Het artikel heeft als doel te onderzoeken hoe Jianpi Shengxue Decoctie (JPSXD) door chemotherapie veroorzaakte myelosuppressie verlicht via netwerkfarmacologie en dierproeven. Om dit te doen werden sleutelcomponenten en doelwitten geanalyseerd, en werden het Protein-Protein Interaction Network (PPI) en kruiden-component-doel-netwerken opgebouwd. Gene Ontology (GO) en de Verrijking van de Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) identificeerden belangrijke routes. Een door cyclofosphamide (CTX)-geïnduceerd myelosuppressiemodel werd ontwikkeld in 60 C57/BL6-muizen. JPSXD werd in verschillende doseringen toegediend gedurende 7 dagen. Perifere bloedtellingen, cytokines (trombopoëtine [TPO], erytropoëtine [EPO], granulocyt-macrofagen koloniestimulerende factor [GM-CSF]), thymusindex, beenmergmorfologie, CD34+-cellen, en expressie van AKT1, JAK2 en EGFR werden geëvalueerd. Netwerkanalyse identificeerde 172 verbindingen en 454 doelen, waarbij PI3K-Akt- en JAK-STAT-routes werden benadrukt. In vivo verlaagde CTX het leukocyten- en signaaleiwitniveau, terwijl JPSXD de tellingen herstelde, AKT1, JAK2 en EGFR upreguleerde en de thymusindex verbeterde (p < 0,05). Middel- en hoge doses JPSXD verhoogden TPO, EPO, GM-CSF, CD34+ cellen en verbeterde de beenmergstructuur, waarbij de hoge dosis het sterkste effect gaf. Concluderend verlicht JPSXD myelosuppressie via multi-target, multipathway regulatie, wat het potentieel als aanvullende therapie voor door chemotherapie veroorzaakte leukopenie ondersteunt.

Inleiding

Chemotherapie is een hoeksteen in de behandeling van verschillende maligniteiten, voornamelijk door het remmen van de proliferatie en overleving van kankercellen 1,2, waardoor de overleving van patiënten wordt verlengd. Door het gebrek aan selectiviteit bij het aanpakken van normale weefsels veroorzaken chemotherapiemiddelen echter vaak ernstige schade aan gezonde cellen en weefsels, wat leidt tot een reeks bijwerkingen3. Een van de meest voorkomende en ernstigste bijwerkingen van chemotherapie is myelosuppressie, gekenmerkt door een vermindering van de productie van bloedcellen, waaronder witte bloedcellen (WBC's), rode bloedcellen (RBC's) en bloedplaatjes (PLT's)2,4. Myelosuppressie verzwakt het immuunsysteem ernstig, waardoor het risico op infecties, bloedingen, bloedarmoede en andere complicaties toeneemt. Het vermindert ook aanzienlijk de kwaliteit van leven van patiënten en kan zelfs levensbedreigendzijn 5. Daarom is het verlichten en voorkomen van door chemotherapie veroorzaakte myelosuppressie cruciaal om de tolerantie voor chemotherapie en de algehele overleving van patiënten te verbeteren.

Huidige klinische behandelingen voor myelosuppressie omvatten voornamelijk hematopoëtische groeifactoren zoals granulocytenkoloniestimulerende factor [G-CSF], erytropoëtine [EPO]) en transfusietherapie 6,7. Deze benaderingen gaan echter vaak gepaard met hoge kosten, mogelijke bijwerkingen en beperkte effectiviteit. Daarom blijft het verkennen van veiligere en effectievere methoden om myelosuppressie te voorkomen en te verlichten een belangrijk onderzoeksgebied. In de afgelopen jaren heeft traditionele Chinese geneeskunde (TCM) veel aandacht gekregen vanwege haar rol in kankerbehandeling en het beheer van door chemotherapie veroorzaakte bijwerkingen 8,9. Veel TCM-formuleringen worden verondersteld tonifying en immuunregulerende effecten te hebben, zoals Shengxuebao decoctie10, Dihuang Shengbai tabletten11 en ginsenosideverbindingen 12, die niet alleen normale cellen beschermen en toxische bijwerkingen verminderen, maar ook de antitumoreffectiviteit verbeteren.

Jianpi Shengxue Decoctie (JPSXD) is een klassieke TCM-formule die de therapeutische principes van het versterken van Qi en het voeden van bloed13 illustreert. Deze formule is een geavanceerde modificatie van het Sijunzi-aftrek, gecombineerd met Er Zhi Wan, waarbij de synergetische effecten van meerdere kruiden worden geïntegreerd om Qi en bloedtekort14 aan te pakken. De formule bestaat uit ginseng (Ren Shen), astragalus (Huang Qi), epimedium (Yin Yang Huo), atractylodes (Bai Zhu), yam (Shan Yao), salvia (Dan Shen), bereide rehmannia (Shu Di Huang), dodderzaad (Tu Si Zi), wolfberry (Gou Qi Zi), ligustrum (Nv Zhen Zi), angelica (Dang Gui), gefrituurde gerst (Chao Mai Ya), gefrituurde kipmaag (Chao Ji Nei Jin), gedroogde mandarijnenschil (Chen Pi), coixzaad (Yi Yi Ren) en verschillende andere kruiden. Elk kruid speelt een specifieke rol in de formule, in overeenstemming met het TCM-principe van soevereine, minister-, assistent- en gidskruiden, wat zorgt voor een evenwichtig en gericht therapeutisch effect.

Het Sijunzi-aftrek, een fundamentele formule in TCM, staat bekend om zijn vermogen om Qi te versterken en de milt te versterken. Het is veel gebruikt om aandoeningen te behandelen die geassocieerd worden met Qi en bloedtekort, zoals vermoeidheid, slechte eetlust en een verzwakte immuniteit. Moderne farmacologische studies hebben aangetoond dat Sijunzi Decoctie de immuunfunctie verbetert, hematopoëse bevordert en de zelfherstelcapaciteiten van het lichaam verbetert 15,16. Voortbouwend op deze basis bevat JPSXD extra kruiden om de effectiviteit in het voeden van bloed verder te vergroten en complexere tekorten aan te pakken. Zo zijn bereide rehmannia en angelica belangrijke bloedvoedende kruiden17, terwijl astragalus en ginseng synergetisch werken om Qi te verhogen en de algehele vitaliteitte verbeteren.

Recente studies hebben de potentiële anti-tumoreffecten van JPSXD benadrukt, wat suggereert dat de multicomponenten, multi-target aanpak tumorgroei kan remmen en de effectiviteit van conventionele kankerbehandelingen kan vergroten19,20. Het vermogen van de formule om immuunresponsen te moduleren en de hematopoëtische functie te verbeteren, maakt het bijzonder waardevol bij het ondersteunen van patiënten die chemotherapie of bestraling ondergaan, en die vaak Qi en bloedtekort ervaren als bijwerking van de behandeling21. Bovendien is aangetoond dat de opname van kruiden zoals salvia en epimedium de microcirculatie verbetert en de cellulaire herstelmechanismen versterkt, wat bijdraagt aan de algehele therapeutische voordelen van de formule22.

Moderne farmacologische studies hebben aangetoond dat elk individueel kruid in JPSXD farmacologische activiteiten heeft die verband houden met hematopoëtische functie, anti-myelosuppressie, immunomodulatie en antioxidatie, evenals microcirculatieverbetering, wat indirect onderzoeksondersteuning biedt voor het gebruik van JPSXD bij het verlichten van door chemotherapie veroorzaakte myelosuppressie. Tabel 1 vat de primaire farmacologische effecten van elk kruid samen met de bijbehorende referenties, met de nadruk op studies die hematopoëse, antimyelosuppressieve werking, immunomodulatie en antioxidatieve of microcirculatiebevorderende eigenschappen onderzoeken. De complexe synergie van componenten in JPSXD omvat zowel coöperatieve als antagonistische interacties tussen de kruiden, waarbij meerdere routes worden gericht om een holistisch therapeutisch effect te bereiken. Zo werken ginseng en astragalus samen om Qi te versterken, terwijl salvia en bereide rehmannia samen het bloed voeden en de circulatie verbeteren. Tegelijkertijd helpen kruiden zoals gedroogde mandarijnenschil en gefrituurde gerst de spijsvertering te reguleren en stagnatie te voorkomen, waardoor de versterkende effecten van de formule effectief worden opgenomen en benutdoor het lichaam. Deze veelzijdige benadering sluit aan bij de TCM-filosofie om de onderliggende oorzaak van ziekte te behandelen terwijl de symptomen worden aangepakt.

Samenvattend is JPSXD een goed uitgebalanceerde en wetenschappelijk onderbouwde TCM-formule die de principes van Qi en bloeddetoxificatie belichaamt. De potentiële toepassingen in het versterken van de immuniteit, het bevorderen van hematopoëse en het ondersteunen van anti-tumortherapie maken het tot een waardevolle aanvulling op zowel traditionele als moderne medische praktijken. Echter, hoogkwalitatief klinisch bewijs dat direct de effectiviteit van JPSXD evalueert bij het verlichten van door chemotherapie veroorzaakte myelosuppressie ontbreekt. Verder onderzoek is nodig om de onderliggende mechanismen te verduidelijken en de klinische toepassingsstrategieën te optimaliseren. Daarom is deze studie bedoeld om een bewijs van concept te leveren voor de potentiële therapeutische effecten van JPSXD vanuit een preklinisch mechanistisch perspectief.

Netwerkfarmacologie, met haar systemische en integratieve aard, is veelvuldig gebruikt om de werkzame bestanddelen van Chinese geneesmiddelen te identificeren en hun werkingsmechanismen te verduidelijken24,25. In deze studie werd netwerkfarmacologie ingezet om de potentiële signaalroutes en belangrijkste doelwitten te analyseren die door JPSXD worden beïnvloed in de context van myelosuppressie. Daarnaast werd een door cyclofosfamide (CTX) geïnduceerd myelosuppressiemuismodel ontwikkeld om relevante indicatoren te beoordelen en de effecten van JPSXD op myelosuppressie te evalueren. Er werd ook voorlopige validatie uitgevoerd van de belangrijkste doelen en routes die via netwerkfarmacologie waren geïdentificeerd. Dit is de eerste studie die systematisch netwerkfarmacologie integreert met dierproeven om het moleculaire mechanisme te verduidelijken waarmee JPSXD door chemotherapie geïnduceerde myelosuppressie verlicht via de multi-target regulatie van signaalroutes, zoals de PI3K-AKT-route, en zo een leemte vult in het mechanistische begrip van de hematopoëtische beschermende effecten van deze stofformule.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Alle dierproeven werden uitgevoerd in strikte overeenstemming met de Reglementen voor het Beheer van Proefdieren en de ethische richtlijnen van het Experimenteel Dierencentrum van het Hunan Kankerziekenhuis. Het onderzoeksprotocol werd goedgekeurd door de Animal Ethics Committee van het Hunan Cancer Hospital (Goedkeuringsnummer: KNZY-202416). Gedurende het onderzoek deden onderzoekers er alles aan om het aantal gebruikte dieren te minimaliseren en hun lijden te verlichten.

Dierlijke bereiding
In totaal werden 60 mannelijke C57/BL6-muizen van 10 weken oud verkregen bij Hunan Slack Jingda Laboratory Animal Co., Ltd. (Licentienummer: SCXK [Hu] 2021-0002). Alle muizen werden ondergebracht in het Experimenteel Dierencentrum van het Hunan Kankerziekenhuis onder gecontroleerde omgevingsomstandigheden: temperatuur: 23 ± 2 °C, luchtvochtigheid: 50% ± 10%, en een licht/donkercyclus van 12 uur (8:30-20:30). Muizen hadden ad libitum toegang tot voedsel en water. Voor de experimenten werden ze dagelijks gewend aan de omgeving door dagelijks 5 minuten over een periode van 3 dagen te hanteren. Na acclimatisatie werden alle 60 muizen gestratificeerd op lichaamsgewicht en willekeurig ingedeeld in zes groepen (n = 10 per groep) met behulp van een computergegenereerde willekeurige getalletabel. De groepen omvatten: blanke controle, model, normale zoutoplossing (NS) controle, hoge dosis JPSXD (40 mg/kg), middelhoge dosis JPSXD (30 mg/kg) en lage dosis JPSXD (20 mg/kg). Het randomisatieproces zorgde voor geen significante verschillen in gemiddeld lichaamsgewicht tussen groepen (p > 0,05). De randomisatiesequentie werd gegenereerd en uitgevoerd door onderzoekers die niet betrokken waren bij latere experimentele procedures om bias te minimaliseren.

Materiaalvoorbereiding
Veiligheid en afvalverwijdering: Deze studie betrof CTX, een zeer giftig chemotherapeutisch middel. Alle procedures werden uitgevoerd in strikte overeenstemming met de Reglementen voor het Veiligheidsbeheer van Gevaarlijke Chemicaliën en de laboratoriumnormen van Biosafety Level 2. Specifieke voorzorgsmaatregelen omvatten het gebruik van wegwerpkleding, nitrilhandschoenen, N95-ademhalingsmaskers en beschermende bril door al het personeel. CTX-voorbereiding en -administratie werden uitgevoerd in een klasse II bioveiligheidskast. De bereiding van de CTX-injectieoplossing vond plaats in een dampkap met speciale instrumenten om de vorming van aerosolen te voorkomen. Scherpe voorwerpen en voorwerpen besmet met CTX, zoals spuiten en handschoenen, werden weggegooid in prikbestendige scherpe containers met scherpe voorwerpen. Andere besmette materialen (bijv. bodembedekking, dierlijke weefsels) werden geïnactiveerd door 24 uur lang onderdompeling in 10% natriumhypochloriet en vervolgens verbrand door een gecertificeerde leverancier van medische afvalverwijdering. Bij CTX-morsing werd het gebied onmiddellijk bedekt met absorberend katoen en geneutraliseerd met een oplossing van 1% natriumthiosulfaat. Het incident werd vervolgens gemeld bij de veiligheidssupervisor.

Geneesmiddelen en reagentia: CTX-injectie werd verkregen bij Baxter Oncology GmbH, Duitsland (batch nr.: HJ20160467). JPSXD werd voorbereid door de afdeling Traditionele Chinese Geneeskunde van het Hunan Kankerziekenhuis. Het bestond uit 15 traditionele kruiden – Panax ginseng, Astragalus membranaceus, Epimedium brevicornum, Atractylodes macrocephala, Dioscorea opposita, Salvia miltiorrhiza, Rehmannia glutinosa, Cuscuta chinensis, Lycium barbarum, Ligustrum lucidum, Angelica sinensis, gefrituurde mout, kippenverzorging, gedroogde mandarijnenschil en Coix-zaad – gecombineerd volgens klassieke compatibiliteitsverhoudingen20. Het aftreksel werd geconcentreerd tot een uiteindelijke concentratie van 3 kg/L (d.w.z. 3 g/mL). Voor de gavage werd het concentraat verdund met NS om de vereiste concentraties voor elke dosisgroep te bereiken: 4 mg/mL voor de hogedosisgroep (40 mg/kg), 3 mg/mL voor de middeldosisgroep (30 mg/kg), en 2 mg/mL voor de laagdosisgroep (20 mg/kg)26. Het gavagevolume werd berekend als 0,1 mL per 10 g lichaamsgewicht, wat resulteerde in een uiteindelijk toedieningsvolume van 0,2-0,25 mL per muis (gebaseerd op een gewichtsbereik van 20-25 g)27.

ELISA-kits: Commercieel verkrijgbare ELISA-kits voor muis Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor (GM-CSF), EPO en Thrombopoëtine (TPO) werden gebruikt. Serummonsters werden voor het testen verdund met 1:5 in PBS-buffer (pH 7,4). Standaarden werden opnieuw samengesteld in 100 μL per put.

Secundair antilichaam: HRP-geconjugeerde geitenanti-konijn IgG werd verdund met 1:5000 (eindconcentratie: 0,04 μg/mL) in TBST-buffer die 5% magere droge melk en 0,05% Tween-20 bevatte. De oplossing werd vers bereid en 1 uur op kamertemperatuur geïncubeerd.

Primaire antilichamen tegen Western blot: GAPDH (konijn polyklonaal), AKT (konijn polyklonaal), JAK2 (konijn monoklonaal) en EGFR (muis monoklonaal) werden gebruikt. Alle antilichamen werden verdund in een TBST-buffer met 5% BSA: GAPDH (1:1000), AKT (1:1000), JAK2 (1:800) en EGFR (1:800). Het incubatievolume was 100 μL per membraan.

Weefselfixatie: Een 4% paraformaldehyde (PFA) oplossing werd bereid door PFA-poeder op te lossen in PBS (pH 7,4). Weefsels werden 24 uur gecorrigeerd.

Hematoxyline- en eosine (H&E) kleuringsoplossing: Hematoxyline-oplossing (0,1% Harris-hematoxyline) en eosine Y-oplossing (0,5%) werden bereid volgens standaard pathologieprotocollen28. De kleuringsduur was 5 minuten voor hematoxyline en 3 minuten voor eosine.

Immunofluorescentieblokkerende buffer: PBS-buffer met 10% geitenserum en 1% BSA werd gebruikt voor blokkering, met een incubatie van 30 minuten.

Antilichaamverdunningsbuffer voor immunofluorescentie: Primaire antilichamen (CD34+, TPO, EPO, GM-CSF) voor immunofluorescentie werden verdund in PBS-buffer met 1% BSA, volgens de door de fabrikant aanbevolen verdunningsverhouding (1:200), wat resulteerde in een uiteindelijke concentratie van 2,5 μg/mL. Het incubatievolume was 50 μL per weefselsectie.

Inductie van een diermodel
60 muizen werden willekeurig verdeeld in zes groepen (n = 10 per groep): blanke controle, model, hoge dosis, middendosis, lage dosis en NS controle. Behalve de blanke controlegroep kregen alle muizen intraperitoneale injecties van CTX (20 mg/kg) één keer per dag gedurende 3 opeenvolgende dagen om een myelosuppressiemodel op te stellen. Alle modelmuizen vertoonden witte bloedcellen < 1,8 × 109/L, PLT < 85 × 10⁹/L, en >55% vermindering van beenmergkerncellen 24 uur na de laatste injectie. Dit protocol sluit aan bij gevestigde CTX-geïnduceerde myelosuppressiemodellen29,30. Na injectie werden muizen dagelijks gecontroleerd op algemene toestand, waaronder activiteitsniveau, uiterlijk van de vacht en veranderingen in lichaamsgewicht. Vanaf het begin van het modelleren tot het einde van het experiment werd het lichaamsgewicht elke dag op hetzelfde tijdstip geregistreerd met een elektronische weegschaal. De verandering in het lichaamsgewicht werd als volgt berekend: (eindgewicht / begingewicht) x 100%, om de algemene fysiologische status en het potentiële beschermende effect van JPSXD te evalueren. Na de injectie werden muizen gehuisvest in individueel geventileerde kooien (IVC's), elk duidelijk gelabeld als CTX-besmet. Het beddengoed werd elke 2 dagen vervangen en al het gebruikte beddengoed werd afgevoerd volgens de hierboven beschreven protocollen voor gevaarlijk afval.

Intragastrische toediening
Muizen in de hoge-, middel- en laagdosisgroepen kregen JPSXD via gavage in doses van respectievelijk 40 mg/kg, 30 mg/kg en 20 mg/kg. De zoutregelgroep ontving een gelijk volume NS. Gavage-oplossingen werden bereid bij concentraties van respectievelijk 4 mg/mL, 3 mg/mL en 2 mg/mL en toegediend met een volume van 0,1 mL per 10 g lichaamsgewicht. Alle muizen werden twee keer per dag 7 dagen lang gegaafd. De zoutoplossingscontrolegroep ontving 0,2-0,25 mL per muis NS. Er werd geen behandeling gegeven aan de blank- en modelgroepen. Het ontbreken van hoesten of worstelen tijdens de gavage wees op de juiste toedieningsmethode.

Bloedafname en serumbereiding
Op dederde dag na CTX-injectie werd 0,2 mL bloed afgenomen uit de staartader om het succes van modelopbouw te evalueren door perifere bloedceltellingen te meten met een volledig geautomatiseerde hematologie-analyzer. 24 uur na de laatste gavage van JPSXD werd bloed verzameld uit de orbitale sinus van willekeurig geselecteerde muizen (n = 10 per groep). Een deel van het bloed werd gebruikt voor een volledige bloedtellinganalyse, terwijl de rest werd verwerkt voor serumvoorbereiding. Monsters werden gecentrifugeerd op 3.000 x g gedurende 15 minuten bij 4 °C. Het supernatant (een heldere, lichtgele bovenlaag) werd als serum verzameld en gealiquoteerd voor opslag bij -80 °C voor latere ELISA-assays en lever-/nierfunctietests. De serumlaag werd duidelijk gescheiden van de bloedcellaag, zonder tekenen van hemolyse of troebelheid. Gemeten hematologische parameters omvatten de WBC, RBC, PLT en hemoglobine (Hb) niveaus.

Lever- en nierfunctiebeoordeling
Een volledig geautomatiseerde biochemische analyzer werd gebruikt om serumleverfunctiemarkers te meten -- alanine-aminotransferase (ALT) en aspartaat-aminotransferase (AST) -- en nierfunctiemarkers - bloedureumstikstof (BUN) en creatinine (Cre). Alle procedures volgden het standaard gebruiksprotocol van het instrument. Specifiek werd 100 μL serum gemengd met de bijbehorende assay-kits (ALT, AST, BUN en Cre) en 5 minuten geïncubeerd bij 37 °C. De absorptie werd gemeten bij 340 nm. Elk monster werd dubbel getest en de gemiddelde waarde werd gebruikt voor de analyse.

Orgaanindexberekening
24 uur na de laatste gavage van JPSXD werden muizen geëuthanaseerd door geleidelijke inhaaling van kooldioxide (CO2) (debietsnelheid: 20% kamervolume/min), gevolgd door cervicale dislocatie als secundaire methode31. Direct na euthanasie werden de lever, nieren, milt en thymus aseptisch geoogst via een ventrale middenlijnincisie. Organen werden voorzichtig ontleed van omliggende bindweefsel en vet, en vervolgens afgespoeld in ijskoude normale zoutoplossing (NS) om het resterende bloed te verwijderen. Organen werden droog gedroogd met voorgewogen filterpapier onder gestandaardiseerde druk (3 zachte persen) en onmiddellijk gewogen op een gekalibreerde elektronische weegschaal (nauwkeurigheid: ±0,1 mg) bij kamertemperatuur (22 ± 1°C).

Alle procedures werden uitgevoerd op een voorgekoelde roestvrijstalen bak om autolyse te minimaliseren. De orgaanindex werd berekend als orgaangewicht (mg) gedeeld door lichaamsgewicht (g) om de effecten van JPSXD op belangrijke organen te evalueren. Delen van elk weefsel werden gereserveerd voor Western blot-analyse, terwijl de resterende monsters werden vastgesteld in 4% PFA voor latere histologische evaluatie.

ELISA
Serumconcentraties van TPO, EPO en GM-CSF werden gemeten met ELISA-kits volgens de instructies van de fabrikant. Alle centrifugatiestappen, inclusief het reinigen van monsters en reagensa-reconstitutie, werden uitgevoerd bij kamertemperatuur op 1.000 x g gedurende 5 minuten. Wasstappen werden uitgevoerd met PBST-buffer (PBS bevat 0,05% Tween-20), waarbij 300 μL wasoplossing per put werd toegevoegd en 3x herhaald werd. Na het wassen bleef er geen restvloeistof achter op de bodem van de putjes. Na de kleurontwikkeling was een duidelijk blauwe neerslag zichtbaar. De absorptie werd gemeten bij 450 nm met een microplaatlezer nadat de reactie was beëindigd.

H&E-kleuring
Na euthanasie werden thymus en dijbeen geoogst. De thymus werd gewogen om de thymusindex te berekenen (thymusgewicht [mg]/lichaamsgewicht [g]). Na het wegen werd een deel van de thymus gebruikt voor de analyse van de Western blot, terwijl de rest, samen met het dijbeen, werd vastgesteld in 4% PFA. Dijbeenmonsters ondergingen een gradueel ethanoldehydratie (70%, 80%, 95% en 100% elk gedurende 1 uur). Goede uitdroging werd aangeduid door een uniform wit verschijnsel, zonder verzachting of vervorming. Paraffine-ingebedde weefselblokken werden gesneden op een dikte van 4 μm met behulp van een roterend microtoom voorzien van hoogprecisie wolfraamcarbidebladen (Type H31). Secties werden gefloten in een 40 °C waterbad met 0,5% gelatineoplossing om rimpels te elimineren, en vervolgens op microscoopglaasjes gemonteerd. Alle doorsneden vertoonden intacte morfologie, gladde randen en uniforme doorschijnendheid onder lichtmicroscopie, wat de optimale doorsnedekwaliteit bevestigde. H&E-kleuring werd uitgevoerd, gevolgd door montage met een waterig montagemedium28. Na de kleuring werden de kernen blauw en cytoplasma roze, met een goed gedefinieerde cellulaire architectuur onder microscopische observatie met een omgekeerde microscoop. Histomorfologische analyse werd uitgevoerd met behulp van software. Voor elke H&E-gekleurde sectie werden drie willekeurige velden geselecteerd met 200x vergroting. De software kwantificeerde automatisch het aantal nucleaire cellen per oppervlakte-eenheid na handmatige afbakening van het interessegebied, en de resultaten werden uitgedrukt als gemiddelde ± standaarddeviatie (x̄ ± s).

Westelijk vlek
Thymusweefsels (50 ± 2 mg/monster) werden gehomogeniseerd in een ijskoude RIPA-buffer met 1x proteaseremmercocktail in een precieze verhouding van 100 mg weefsel per 1 mL buffer, met behulp van een gemotoriseerde pellet-pester-homogenisator uitgerust met RNase-vrije stampers. Homogenisatie werd uitgevoerd op ijs met 15 pulsen (1 s puls/2 s pauze), gevolgd door 30 minuten incubatie op ijs met vortexen elke 10 minuten. Het homogenaat werd gecentrifugeerd op 12.000 x g gedurende 20 minuten bij 4 °C, en het resulterende supernatant werd verzameld voor eiwitkwantificatie. Het supernatant leek helder en transparant, vrij van neerslagen of lipidenlagen. De eiwitconcentratie werd gemeten met een BCA-eiwitassaykit, met een standaard curvebereik van 0-2000 μg/mL. Western blot werd uitgevoerd om de expressieniveaus van AKT1, JAK2 en EGFR in thymusweefsel te beoordelen, waarbij GAPDH als interne controle werd gebruikt. Na elektroforese en membraanoverdracht vertoonde de eiwitmarker (10-200 kDa) duidelijke banden, en de doelbanden waren uitgelijnd met de verwachte molecuulgewichten (AKT1: 60 kDa, JAK2: 130 kDa, EGFR: 170 kDa en GAPDH: 37 kDa).

Densitometrische analyse van Western blot-banden werd uitgevoerd met software. Voorafgaand aan de analyse werden de banden visueel geïnspecteerd om het ontbreken van uitsmeering of diffusie te bevestigen. De analyseprocedure omvatte: Handmatige selectie van doelbandgebieden na beeldimport, met geautomatiseerde randdetectie door de software, gevolgd door lokale achtergrondaftrekking met gebieden naast de banden om grijswaarden te corrigeren. Daarna werd de grijswaardeverhouding tussen het doeleiwit en de interne controle berekend voor relatieve kwantificatie. De gebruikte normalisatieformule was:

Relatieve expressie van doeleiwit = (grijze waarde van doelband −lokale achtergrond) / (grijze waarde van interne controle −lokale achtergrond)

Immunohistochemie
Immunohistochemische kleuring werd uitgevoerd op femursecties. Slices werden permeabiliseerd met 0,1% Triton X-100 gedurende 10 minuten, gevolgd door blokkeren gedurende 30 minuten. Primaire antilichamen werden 's nachts geïncubeerd bij 4 °C, en secundaire antilichamen werden 1 uur bij kamertemperatuur geïncubeerd. Na de kleuring werden duidelijke positieve signalen met een lage achtergrond en zonder niet-specifieke kleuring waargenomen onder een lichtmicroscoop. De slides werden gemonteerd met een anti-fade medium dat DAPI bevatte, dat kernen blauw kleurde. De expressie van CD34+, TPO, EPO en GM-CSF werd vervolgens geëvalueerd. Immunohistochemische beelden werden geanalyseerd met digitale pathologiesoftware (Versie 2.1.0). Voorafgaand aan de analyse werden beelden gecontroleerd als vrij van overbelichting of signaaldegradatie. De analyseprocedure32omvatte:

Modelselectie: Een vooraf getraind beenmergsegmentatiemodel (U-Net-gebaseerd) werd gebruikt om automatisch weefselgebieden33 te identificeren.
Drempelinstelling: Positieve signaaldrempels werden gedefinieerd op basis van de negatieve controlegroep. Gebieden met chromogene intensiteit die het achtergrondgemiddelde met drie standaardafwijkingen overschrijden, werden als positief geclassificeerd.
ROI-definitie: De software verdeelde elk veld automatisch in 500 × 500 μm rasterregio's en berekende het aantal positieve cellen per oppervlakte-eenheid (positieve celaantal/veldoppervlak).
Data Export: Een statistisch rapport van positieve celdichtheid werd automatisch gegenereerd.

Statistische analyse
Statistische analyse werd uitgevoerd met SPSS-software (versie 22.0). De gegevens werden uitgedrukt als x̄ ± s. Voorafgaand aan intergroepvergelijkingen werd normaliteit beoordeeld met de Shapiro-Wilk-test, en homogeniteit van varianties werd geëvalueerd met de Levene-test. Als zowel de normale verdeling (p > 0,05) als variantiehomogeniteit (p > 0,05) werden bevestigd, werd eenrichtings-ANOVA gebruikt voor groepsvergelijkingen. Post-hoc meervoudige vergelijkingen werden uitgevoerd met behulp van de Least Significant Difference (LSD)-methode; om Type I-fouten te controleren, werden alle post hoc P-waarden aangepast met behulp van de Bonferroni-correctie, waarbij p < 0,05 als statistisch significant werd beschouwd.

Als de gegevens niet voldeden aan de aannames van normaliteit of homogeniteit van variantie (p ≤0,05 in beide tests), werd de Kruskal-Wallis-test toegepast, gevolgd door Dunns test voor post hoc-analyse met Bonferroni-correctie. Alle statistische grafieken en visualisaties zijn gegenereerd met GraphPad Prism (Versie 9.0). Het significantieniveau werd vastgesteld op α = 0,05. Alle gerapporteerde p-waarden waren aangepaste waarden. Uitschieters werden geïdentificeerd met behulp van de Grubbs-test (α = 0,05) en alleen uitgesloten als ze duidelijk aan experimentele fouten toe te schrijven waren. Alle resterende gegevens werden meegenomen in de eindanalyse. De resultaten worden gepresenteerd als x̄ ± s.

Methodologie van netwerkfarmacologie
Deze studie maakte gebruik van een netwerkfarmacologische benadering om de mogelijke mechanismen te onderzoeken waarmee JPSXD de door chemotherapie veroorzaakte myelosuppressie verlicht. Ten eerste werden de chemische bestanddelen van JPSXD en hun bijbehorende doelwitten opgehaald uit de Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform (TCMSP, https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.php). De screeningscriteria waren als volgt vastgesteld: orale biobeschikbaarheid (OB) ≥30% en geneesmiddelgelijkheid (DL) ≥0,18. Voor verbindingen die niet in de TCMSP-database zijn opgenomen, werd doelvoorspelling uitgevoerd met behulp van het SwissTargetPrediction-platform (https://www.swisstargetprediction.ch/).

Om te waarborgen dat de geselecteerde verbindingen de belangrijkste bioactieve bestanddelen van JPSXD omvatten, werd verwezen naar de Farmacopee van de Volksrepubliek China34. Specifiek identificeerden we markerverbindingen zoals ginsenosiden, astragaloside IV, icariïne en salvianolzuur door de Identificatie- en Assay-secties van elk kruid te bekijken. Deze verbindingen, die vaak worden gebruikt als kwaliteitscontrolemarkers35, hebben gedefinieerde chemische structuren en kwantitatieve eisen. Voor nauwkeurigheid hebben we de Algemene Kennisgevingen en Appendices van de Farmacopee gekruist om naamgevingsconventies en analysemethoden te bevestigen (bijv. high-performance vloeistofchromatografie, HPLC). Analyse bevestigde dat de screeningscriteria (OB ≥30%, DL ≥0,18) effectief de kernverbindingen van de formule36 vastlegden, waaronder belangrijke farmacopeale bestanddelen zoals ginsenosiden Rg1 en Rb1 (van Panax ginseng), astragaloside IV (van Astragalus membranaceus) en icariïne (van Epimedium brevicornum), wat aangeeft dat de geselecteerde verbindingen representatief zijn en de primaire werkzame bestanddelen omvatten die verantwoordelijk zijn voor de qi- en bloedtonificatie van JPSXD effecten.

Vervolgens werden gendoelen die met myelosuppressie geassocieerd worden opgehaald uit de GeneCards-database (https://www.genecards.org/), en werden de resultaten in een spreadsheet gedownload. Genen met een relevantiescore ≥44 werden geselecteerd voor verdere analyse. De intersectie van geneesmiddeldoelwitten en ziektegerelateerde genen werd weergegeven met behulp van een Venn-diagram, en de overlappende genen werden geïmporteerd in de STRING-database (https://string-db.org/). Het organisme werd op mens gezet, en interactiebronnen waren beperkt tot Experimenten en Databases met een minimaal vereiste interactiescore > 0,7. Het resulterende eiwit-eiwitinteractie (PPI) netwerk werd vervolgens geanalyseerd op topologische kenmerken om kerndoelen te identificeren en gevisualiseerd met behulp van Cytoscape 3.10.2.

Op basis van de geïdentificeerde kerndoelen werden Gene Ontology (GO) en Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) verrijkingsanalyses uitgevoerd met behulp van de DAVID-database (https://david.ncifcrf.gov/). De parameters werden vastgesteld als: Aantal ≥5, EASE-score ≥0,05 en p-waarde < 0,01. Verrijkingsresultaten werden gevisualiseerd via het Microbiological Letter-platform (http://www.bioinfo-cloud.org/). Padanalyse verduidelijkte verder de belangrijkste signaalroutes en regulerende markers, waardoor de mogelijke mechanismen werden onthuld waarmee JPSXD door chemotherapie geïnduceerde myelosuppressie vermindert.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Netwerkfarmacologieanalyse
Identificatie van werkzame verbindingen en doelwitten
We identificeerden eerst de primaire markerverbindingen van elk kruid in JPSXD op basis van de literatuur omeen volledige selectiete waarborgen 34. Specifiek hebben we, door de farmacopeale vermeldingen voor relevante kruiden (bijv. Panax ginseng, Astragalus membranaceus, Angelica sinensis) te raadplegen, een lijst samengesteld van de officië...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Te midden van de toenemende wereldwijde incidentie van kanker wordt de medische gemeenschap geconfronteerd met dubbele uitdagingen: niet alleen de behandeling van kanker zelf, maar ook het beheer van bijbehorende bijwerkingen, waarvan myelosuppressie een bijzonder veelvoorkomende en ernstige bijwerking is43. Deze studie onderzocht systematisch de rol en mogelijke mechanismen van JPSXD bij het verlichten van door CTX geïnduceerde myelosuppressie bij muizen, waarbij...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs verklaren dat zij geen belangenconflicten hebben.

Dankbetuigingen

Dit onderzoek werd financieel ondersteund door het Integrative Western and Traditional Chinese Medicine Focus-DCA Mode Intervention for Preventing Postoperative Infections in Elderly Patients with Gastrointestinal Malignancies project, met projectnummer A2023053, gefinancierd door de Hunan Provincial Administration of Traditional Chinese Medicine.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
4% Paraformaldehyde (PFA)Sigma-AldrichP6148
AKT (pan) Rabbit mAbCell Signaling Technology#4691
Automatische Microplate WasherBioTek (Agilent)ELx405
BC-2800vet Auto Hematology AnalyzerMindrayBC-2800vet
Cryostat MicrotomeThermo Fisher ScientificCryoStar NX50
Cyclophosphamide InjectieBaxter Oncology GmbHN/A (Batch: HJ20160467)
E100 MicroscoopNikonE100
EGFR Antilichaam (A-10)Santa Cruz Biotechnologysc-373746
Inbedding MachineLeicaEG1150
EPO (Muis) ELISA KitR&D SystemsMEP00B
GAPDH Rabbit Polyclonal AntilichaamProteintech10494-1-AP
GM-CSF (Muis) ELISA KitR&D SystemsMMC00B
Goat Anti-Rabbit IgG HRP-geconjugeerdJackson ImmunoResearch111-035-003
H&E Kleuring KitSigma-AldrichHT10
High-Speed Gekoelde CentrifugeThermo Fisher ScientificSorvall ST 16R
High-Throughput WeefselmolenServicebioKZ-II
Immunohistochemie PenVector LaboratoriesH-4000
JAK2 Rabbit mAbAbcamab108596
Jianpi Shengxue Decoctie (JPSXD)Apotheek van Hunan Cancer HospitalAangepaste formulering
Microplate ReaderBioTek (Agilent)Synergy H1
Normale SalineBaxter2B1324X
Roterende MicrotomeLeicaRM2016
Weefsel ProcessorLeicaASP300S
TPO (Muis) ELISA KitR&D SystemsMTP00B
Vortex MixerServicebioMX-F

Referenties

  1. Wang, D. H., et al. Validated herbal extracts for alleviating chemotherapy-induced myelosuppression: A systematic review and meta-analysis. Phytomedicine. 141, 156659(2025).
  2. Goldschmidt, J., et al. Burden of chemotherapy-induced myelosuppression among patients with ES-SCLC in US community oncology settings. Future Onco. 18 (35), 3881-3894 (2022).
  3. Jia, W., Li, X., Zhang, T., Wang, C., Zhen, M. Efficiently normalizing leukopoiesis by gadofullerene nanoparticles to ameliorate radiation-triggered myelosuppression. J Mater Chem. B. 11 (31), 7401-7409 (2023).
  4. Hart, L., et al. Burden of chemotherapy-induced myelosuppression among patients with extensive-stage small cell lung cancer: A retrospective study from community oncology practices. Cancer med. 12 (8), 10020-10030 (2023).
  5. Pan, L., Zhang, T., Cao, H., Sun, H., Liu, G. Ginsenoside Rg3 for Chemotherapy-Induced Myelosuppression: A Meta-Analysis and Systematic Review. Front Pharmacol. 11, 649(2020).
  6. Schneider, A., Kuhn, H. -G., Schäbitz, W. R. A role for G-CSF (granulocyte-colony stimulating factor) in the central nervous system. Cell Cycle. 4 (12), 1753-1757 (2005).
  7. Hart, C., Grassinger, J., Andreesen, R., Hennemann, B. EPO in combination with G-CSF improves mobilization effectiveness after chemotherapy with ifosfamide, epirubicin and etoposide and reduces costs during mobilization and transplantation of autologous hematopoietic progenitor cells. Bone Marrow Transpl. 43 (3), 197-206 (2008).
  8. Miao, K., Liu, W., Xu, J., Qian, Z., Zhang, Q. Harnessing the power of traditional Chinese medicine monomers and compound prescriptions to boost cancer immunotherapy. Front Immunol. 14, 1277243(2023).
  9. Li, S., et al. Tailoring traditional Chinese medicine in cancer therapy. Mol Cancer. 24 (1), 27(2025).
  10. Ma, L. X., Ai, P., Li, H., Vardy, J. The prophylactic use of Chinese herbal medicine for chemotherapy-induced leucopenia in oncology patients: a systematic review and meta-analysis of randomized clinical trials. Support Care Cancer. 23 (2), 561-579 (2015).
  11. Han, J., et al. Study of the Effects and Mechanisms of Ginsenoside Compound K on Myelosuppression. J Agr Food Chem. 67 (5), 1402-1408 (2019).
  12. Shang, L., et al. Mechanism of Sijunzi Decoction in the treatment of colorectal cancer based on network pharmacology and experimental validation. J Ethnopharmacol. 302, 115876(2023).
  13. Zhao, N., et al. Jianpi-Yangxue-Jiedu decoction improves the energy metabolism of psoriasis mice by regulating the electron transfer of oxidative phosphorylation. J Ethnopharmacol. 324, 117714(2024).
  14. Zhang, S., et al. Jianpi Huayu Jiedu Decoction prevents the progression of H. pylori and MNU-induced gastric precancerous lesions by inhibiting ferroptosis and remodeling linoleic acid metabolism. J Ethnopharmacol. 352, 120217(2025).
  15. Gao, B., Wang, R., Peng, Y., Li, X. Effects of a homogeneous polysaccharide from Sijunzi decoction on human intestinal microbes and short chain fatty acids in vitro. J Ethnopharmacol. 224, 465-473 (2018).
  16. Luo, X., et al. STAT3 as a critical target of Sijunzi Decoction in the treatment of gastric cancer: evidence from integrated network pharmacology and experimental validation. Front Mol Biosci. 12, 1683806(2025).
  17. Zhang, L., et al. Danggui buxue decoction attenuates doxorubicin-induced cardiotoxicity by inhibiting ZBP1-mediated PANoptosis in vivo and in vitro. Phytomedicine. 145, 157037(2025).
  18. Mei, Z. G., et al. Fermented Chinese formula Shuan-Tong-Ling attenuates ischemic stroke by inhibiting inflammation and apoptosis. Neural Regen Res. 12 (3), 425-432 (2017).
  19. Huang, Q., et al. Jian-Pi-Bu-Xue-Formula Alleviates Cyclophosphamide-Induced Myelosuppression via Up-Regulating NRF2/HO1/NQO1 Signaling. Front Pharmacol. 11, 1302(2020).
  20. Yang, J., et al. Effect of Jianpi Shengxue Tablet on Iron Metabolism and Nutritional Status in Patients with Renal Anemia: A Prospective, Randomized, Open, Parallel Controlled and Multicenter Clinical Study. Curr Med Sci. 44 (3), 603-610 (2024).
  21. Hou, B., et al. Oral Chinese Herbal Medicine as an Adjuvant Treatment for Chemotherapy, or Radiotherapy, Induced Myelosuppression: A Systematic Review and Meta-Analysis of Randomized Controlled Trials. Evid-Based Compl Alt. 2017, 3432750(2017).
  22. Han, J. Y., et al. Ameliorating effects of compounds derived from Salvia miltiorrhiza root extract on microcirculatory disturbance and target organ injury by ischemia and reperfusion. Pharmacol Therapeut. 117 (2), 280-295 (2007).
  23. Liu, Y., et al. Integration of Network Pharmacology and Experimental Validation to Explore Jixueteng - Yinyanghuo Herb Pair Alleviate Cisplatin-Induced Myelosuppression. Integr Cancer Ther. 23, 15347354241237969(2024).
  24. Liu, Y., et al. Anti-Alzheimers molecular mechanism of icariin: insights from gut microbiota, metabolomics, and network pharmacology. J Transl Med. 21 (1), 277(2023).
  25. Zhang, H., et al. Bioinformatics and Network Pharmacology Identify the Therapeutic Role and Potential Mechanism of Melatonin in AD and Rosacea. Front Immunol. 12, 756550(2021).
  26. Qu, W., et al. Effect of Jianpi Shengxue Granule on Fertility and Early Embryo Development Toxicity of Rats. Chin J Integr Med. 37 (3), 356-359 (2017).
  27. Ouyang, X., et al. Induction of anaplastic lymphoma kinase (ALK) as a novel mechanism of EGFR inhibitor resistance in head and neck squamous cell carcinoma patient-derived models. Cancer Biol Ther. 19 (10), 921-933 (2018).
  28. Cinque, L., et al. Novel association of MEN1 gene mutations with parathyroid carcinoma. Oncol Lett. 14 (1), 23-30 (2017).
  29. Huyan, X. H., Lin, Y. P., Gao, T., Chen, R. Y., Fan, Y. M. Immunosuppressive effect of cyclophosphamide on white blood cells and lymphocyte subpopulations from peripheral blood of Balb/c mice. Int Immunopharmacol. 11 (9), 1293-1297 (2011).
  30. He, Y., et al. Mesenchymal stem cells empower T cells in the lymph nodes via MCP-1/PD-L1 axis. Cell Death Dis. 13 (4), 365(2022).
  31. Recordati, C., et al. Repeated oral administration of low doses of silver in mice: tissue distribution and effects on central nervous system. Part Fibre Toxicol. 18 (1), 23(2021).
  32. Ram, S., et al. Pixelwise H-score: A novel digital image analysis-based metric to quantify membrane biomarker expression from immunohistochemistry images. Plos One. 16 (9), e0245638(2021).
  33. Woo, B., et al. Automated anomaly-aware 3D segmentation of bones and cartilages in knee MR images from the Osteoarthritis Initiative. Med Image Anal. 93, 103089(2024).
  34. Chinese Pharmacopoeia Commission. Pharmacopeia of the People's Republic of China. , People's Medical Publishing House. Beijing, China. (2005).
  35. Chen, Y., et al. Quality Control of Glehniae Radix, the Root of Glehnia Littoralis Fr. Schmidt ex Miq. Along its Value Chains. Front Pharmacol. 12, 729554(2021).
  36. Ru, J., et al. TCMSP: a database of systems pharmacology for drug discovery from herbal medicines. J Cheminformatics. 6, 13(2014).
  37. Matsuura, S., et al. Negative effects of GM-CSF signaling in a murine model of t(8;21)-induced leukemia. Blood. 119 (13), 3155-3163 (2012).
  38. Tsiftsoglou, A. S. Erythropoietin (EPO) as a Key Regulator of Erythropoiesis, Bone Remodeling and Endothelial Transdifferentiation of Multipotent Mesenchymal Stem Cells (MSCs): Implications in Regenerative Medicine. Cells. 10 (8), 2140(2021).
  39. Yu, L., Wei, J., Liu, P. Attacking the PI3K/Akt/mTOR signaling pathway for targeted therapeutic treatment in human cancer. Semin Cancer Biol. 85, 69-94 (2021).
  40. Alves, C. L., Ditzel, H. J. Drugging the PI3K/AKT/mTOR Pathway in ER+ Breast Cancer. Int J Mol Sci. 24 (5), 4522(2023).
  41. Guan, P., Cui, R., Wang, Q., Sun, Y. A 3D hydrogel loaded with exosomes derived from bone marrow stem cells promotes cartilage repair in rats by modulating immunological microenvironment. Nanfang Yike Daxue Xuebao. 42 (4), 528-537 (2022).
  42. Liu, Z., et al. Activating Angiogenesis and Immunoregulation to Propel Bone Regeneration via Deferoxamine-Laden Mg-Mediated Tantalum Oxide Nanoplatform. Acs Appl Mater Inter. 16 (19), 24384-24397 (2024).
  43. McCloskey, E. V., Guest, J. F., Kanis, J. A. The clinical and cost considerations of bisphosphonates in preventing bone complications in patients with metastatic breast cancer or multiple myeloma. Drugs. 61 (9), 1253-1274 (2001).
  44. Lin, L., et al. Characterization of Differences in Chemical Profiles and Antioxidant Activities of Schisandra chinensis and Schisandra sphenanthera Based on Multi-Technique Data Fusion. Molecules. 29 (20), 4865(2024).
  45. Dabeek, W. M., Marra, M. V. Dietary Quercetin and Kaempferol: Bioavailability and Potential Cardiovascular-Related Bioactivity in Humans. Nutrients. 11 (10), 2288(2019).
  46. Li, W., et al. Flavonoids from Glycyrrhiza pallidiflora hairy root cultures. Phytochemistry. 60 (4), 351-355 (2002).
  47. Nian, Q., Liu, R., Zeng, J. Unraveling the pathogenesis of myelosuppression and therapeutic potential of natural products. Phytomedicine. 132, 155810(2024).
  48. Kellogg, C., Equils, O. The role of the thymus in COVID-19 disease severity: implications for antibody treatment and immunization. Hum Vaccin Immunother. 17 (3), 638-643 (2020).
  49. Liu, X., et al. Critical role of niche S100A8 for acute myeloid leukemia progression and hematopoiesis regeneration. Blood Adv. 9 (24), 6575-6589 (2025).
  50. Jafari, M., Ghadami, E., Dadkhah, T., Akhavan-Niaki, H. PI3k/AKT signaling pathway: Erythropoiesis and beyond. J Cell Physiol. 234 (3), 2373-2385 (2018).
  51. Novoplansky, O., et al. Activation of the EGFR/PI3K/AKT pathway limits the efficacy of trametinib treatment in head and neck cancer. Mol Oncol. 17 (12), 2618-2636 (2023).
  52. Weidemann, A., Johnson, R. S. Nonrenal regulation of EPO synthesis. Kidney Int. 75 (7), 682-688 (2009).
  53. Pallard, C., et al. Thrombopoietin activates a STAT5-like factor in hematopoietic cells. Embo J. 14 (12), 2847-2856 (1995).
  54. Stasi, R., et al. Thrombopoietic agents. Blood Reviews. 24 (4-5), 179-190 (2010).
  55. He, K., et al. G-CSF/GM-CSF-induced hematopoietic dysregulation in the progression of solid tumors. FEBS Open Bio. 12 (7), 1268-1285 (2022).
  56. Patsoukis, N., et al. Immunometabolic Regulations Mediated by Coinhibitory Receptors and Their Impact on T Cell Immune Responses. Front Immunol. 8, 330(2017).
  57. Geraud, A., et al. Clinical Pharmacology and Interplay of Immune Checkpoint Agents: A Yin-Yang Balance. Annu Rev Pharmacol. 61, 85-112 (2020).
  58. Naveiras, O., et al. Bone-marrow adipocytes as negative regulators of the haematopoietic microenvironment. Nature. 460 (7252), 259-263 (2009).
  59. Ambrosi, T. H., et al. Adipocyte Accumulation in the Bone Marrow during Obesity and Aging Impairs Stem Cell-Based Hematopoietic and Bone Regeneration. Cell Stem Cell. 20 (6), 771-784 (2017).
  60. Zhang, L., et al. Qingjie Fuzheng Granule attenuates 5-fluorouracil-induced intestinal mucosal damage. Biomed Pharmacother. 118, 109223(2019).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Tags

Cyclofosfamide-myelosuppressienetwerkfarmacologieproteïne-interactienetwerkKEGG-verrijkinggen-ontologiePI3K-Akt-padJAK-STAT-padCD34-positieve cellenchemotherapie-geïnduceerde leukopenie

Dit artikel is gepubliceerd

Video binnenkort beschikbaar

Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.