Method Article

Ontwikkeling en validatie van een methodologie voor het opstellen van zwaarlijvige rattenmodellen met typische vette alvleesklier

DOI:

10.3791/69553

⸱

November 11th, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Key Laboratory of Acupuncture and Medicine Research of Ministry of Education, Nanjing University of Chinese Medicine, 2Department of Acupuncture and Moxibustion, Yangzhou TCM Hospital Affiliated to Nanjing University of Chinese Medicine, 3Department of Specialty Medicine, Ohio University, 4Research Department, Swiss University of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Deze studie biedt een reproduceerbare en gestandaardiseerde methode om zwaarlijvige rattenmodellen vast te stellen die eenvoudige obesitas vertonen, vaak gekenmerkt door vette alvleesklier. Het bevat ook gedetailleerde protocollen voor bemonstering van pancreasweefsel en immunohistochemie.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Obesitas is uitgegroeid tot een overheersende wereldwijde gezondheidsepidemie, waarbij bijna de helft van de wereldbevolking nu wordt geclassificeerd als overgewicht of obesitas. Een belangrijk pathologisch kenmerk bij zwaarlijvige personen is ectopische lipideafzetting in niet-vetweefsels, waaronder de alvleesklier - een aandoening die pancreassteatose of vette pancreas wordt genoemd. In door vetrijke voeding (HFD) geïnduceerde knaagdiermodellen gaat pancreassteatose consequent vooraf aan leversteatose, wat de bijzondere gevoeligheid van de alvleesklier voor lipidenaccumulatie onderstreept. Deze vroege betrokkenheid positioneert de alvleesklier als een cruciaal orgaan voor het begrijpen van metabole ontregeling bij obesitas. Hoewel door voeding geïnduceerde zwaarlijvige (DIO) ratten de kernaspecten van de progressie van ziekten bij de mens samenvatten, blijven goed gekarakteriseerde diermodellen die dit pancreasfenotype betrouwbaar vertonen schaars in de literatuur.

Een belangrijke methodologische overweging bij het modelleren van menselijke obesitas is de timing van de introductie van HFD. Veel bestaande modellen initiëren HFD tijdens de speenperiode, wat verstorende ontwikkelingsmetabole programmeringseffecten kan introduceren die niet volledig overeenkomen met menselijke obesitas, die zich voornamelijk na de ontwikkeling ontwikkelt. Daarentegen stelt de huidige studie een gestandaardiseerd protocol vast waarin HFD na het spenen wordt geïntroduceerd. Deze benadering bootst nauwkeuriger het gemeenschappelijke menselijke traject van obesitas na op volwassen leeftijd, vermijdt metabole aanpassingen in het vroege leven en resulteert in een meer fysiologisch relevante progressie naar pancreassteatose.

Dit onderzoek biedt een gedetailleerd en reproduceerbaar kader voor het genereren van een rattenmodel van obesitas dat wordt gekenmerkt door prominente pathologie van de vette pancreas. De methodologie omvat een acclimatisatiefase van 1 week, een HFD-inductieperiode van 14 weken die begint na het spenen en systematische weefseloogst. Er worden twee weefselverwerkingsroutes beschreven: snap-freezing voor moleculaire analyses (bijv. Western blotting) en paraformaldehydeperfusie-fixatie voor morfologische evaluaties (bijv. IHC, H&E). Dit model biedt een robuust platform voor mechanistisch onderzoek naar obesitas-geassocieerde metabole disfunctie van de pancreas.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Eenvoudige obesitas wordt gedefinieerd als obesitas die onafhankelijk bestaat zonder andere comorbiditeiten, voornamelijk toegeschreven aan energieonbalans als gevolg van een ongezonde levensstijl, zoals onjuiste voedingspatronen en onvoldoende lichaamsbeweging1. Obesitas draagt aanzienlijk bij aan de stijgende incidentie van niet-overdraagbare ziekten onder jongere bevolkingsgroepen, gekenmerkt door hoge prevalentiecijfers, vroeg begin en multisysteemcomplicaties, waardoor het wordt gepositioneerd als een kritieke wereldwijde uitdaging voor de volksgezondheid2. Vette alvleesklier is een aandoening die wordt gekenmerkt door ectopische lipideafzetting in dit niet-vette orgaan tijdens metabole ontregeling. Vette alvleesklier weerspiegelt een kritische wisselwerking tussen vetweefsel en pancreaspathofysiologie. Overmatige ophoping van pancreasvet verdringt normale acinaire en eilandjesweefsels, waardoor dubbele functionele beperkingen in zowel exocriene als endocriene capaciteiten worden veroorzaakt 3,4. Dit pathologische proces verstoort de α/β-celverhoudingen, bevordert β-celdedifferentiatie met daaropvolgend verlies van insulinesecretoire functie5 en bemiddelt directe lipotoxische schade aan β-cellen6. Tegelijkertijd verergeren proliferatie van α-cellen en ontregelde insulineafgifte de glykemische instabiliteit, waardoor de progressie naar diabetes mellitus type 2 (T2DM) en de bijbehorende complicaties worden versneld7.

Onderzoek naar de pathogenese van de vette pancreas onthult nieuwe mechanismen die ten grondslag liggen aan de progressie van metabole ziekten8. Terwijl eerder onderzoek naar obesitas de nadruk legde op leversteatose, identificeert opkomend bewijs de afzetting van lipiden van de alvleesklier als een eerdere gebeurtenis bij metabole ontregeling9. Deze paradigmaverschuiving maakt de constructie mogelijk van een model voor dubbele orgaanpathologie voor eenvoudige obesitas, waarbij pancreas- en leversteatose10 worden geïntegreerd. Het bestuderen van hun overspraak kan kritieke routes in het hele ziektespectrum ophelderen, variërend van lipidenmetabolismestoornis, obesitas, insulineresistentie en diabetes, en nieuwe inzichten bieden in ziektemechanismen11. In het pathologische proces van de alvleesklier is de eerste manifestatie een significante afzetting van pancreasvet, vergezeld van een substantiële uitzetting van adipocyten van de alvleesklier. Dit wordt voornamelijk waargenomen in het ventrale aspect van de hoofd-, nek- en lichaamsregio's van de pancreas, en bevindt zich voornamelijk in de interstitiële gebieden tussen acinaire en eilandjescellen. Tegelijkertijd is er sprake van chronische laaggradige ontsteking van de alvleesklier, terwijl zowel de endocriene als de exocriene functies in dit stadium grotendeels intact blijven 12,13. Uitgebreide vetinfiltratie schaadt de β-celfunctie van de alvleesklier verder door lipotoxiciteit en onderdrukt de insulineactiviteit. Tijdens deze fase worden acinaire cellen geleidelijk vervangen door adipocyten, waardoor wordt bijgedragen aan de ontwikkeling van T2DM14,15. Hoewel diabetes mellitus geen onafhankelijke risicofactor is voor alvleesklierkanker, vertonen patiënten met een voorgeschiedenis van acute pancreatitis en diabetes een significant verhoogd risico op het ontwikkelen van alvleesklierkanker16.

Macroscopische anatomische analyses kwantificeren de ernst van pancreassteatose en infiltratiepatronen, terwijl IHC-evaluaties op microscopisch niveau de acinaire celmorfologie, nucleaire positionering, vacuolisatiefrequentie en cellulaire populatiedynamiek karakteriseren17. Deze multimodale benadering, die zich uitstrekt van grove anatomische observatie tot IHC met cellulaire resolutie, maakt een uitgebreide stadiëring van pancreaspathologie tijdens ziekteprogressie mogelijk. De huidige studie beschrijft een gestandaardiseerd protocol dat een acclimatisatie van 1 week, een inductie van obesitas van 14 weken bij volwassen ratten en geoptimaliseerde verwerking van pancreasweefsel voor morfologische analyse omvat, waardoor een robuust kader wordt gecreëerd voor het onderzoeken van steatose-geassocieerde metabole stoornissen.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De procedure voor de behandeling van dieren werd goedgekeurd door de Animal Ethics Committee van de Nanjing University of Traditional Chinese Medicine (202006A016) en voldeed aan de ARRIVE (Animal Research: Reporting of In Vivo Experiments) richtlijnen, ethische richtlijnen, richtlijnen voor de werking van de Animals (Scientific Procedures) Act 1986 en bijbehorende richtlijnen, EU-richtlijn 2010/63 voor de bescherming van dieren die voor wetenschappelijke doeleinden worden gebruikt. Alle proefdieren werden voorafgaand aan de dissectie verdoofd in overeenstemming met de goedgekeurde anesthesieprocedures voor knaagdieren. De procedure was georganiseerd in drie verschillende componenten.

1. Stel een zwaarlijvig rattenmodel op

  1. Proefdieren en groepen
    1. Selecteer mannelijke Sprague-Dawley (SD) ratten van 4 weken (80-120 g) uit een stam die gevoelig is voor een vetrijk dieet (HFD).
    2. Acclimatiseer alle ratten een week lang aan een onderhoudsdieet en verdeel ze vervolgens willekeurig in twee groepen: de controlegroep en de modelgroep.
    3. Vervang het onderhoudsdieet door HFD voor de modelgroep na een week, terwijl de controlegroep op het oorspronkelijke dieet blijft. Houd beide groepen gedurende 14 weken op hun dieet. De HFD-samenstelling wordt gedetailleerd beschreven in tabel 1 en de standaard onderhoudsvoerformulering staat in tabel 2.
  2. Voedingsomstandigheden en experimentele parameters
    1. Omgevingsparameters: temperatuur 22 ± 2 °C, luchtvochtigheid 50 ± 10%, 12 uur licht/donkercyclus en vrije toegang tot water en voedsel.
  3. Monitoring indicatoren
    1. Registreer wekelijks het lichaamsgewicht en de voedselinname op een vast tijdstip.
      OPMERKING: Door het 's avonds te doen, kunt u stress minimaliseren en aansluiten bij dag-/nachtactieve activiteitspatronen18.
    2. Plot een groeicurve voor het lichaamsgewicht met behulp van de geregistreerde gegevens.
    3. Definieer succesvolle obesitasmodellering als wanneer het lichaamsgewicht meer dan 20% van de leeftijdsgematchte controlegroep bedraagt.
IngrediëntInhoud (g/kg)Belangrijke voedingsstoffen voorzien
Gewoon diervoeder in poedervorm365Basisvoedingsvoorziening van koolhydraten, Plantaardige eiwitten, Vetten, Vitaminecomplexen, Mineralen, enz
Reuzel310Verzadigde vetzuren, Onverzadigde vetzuren
Caseïne250Essentiële aminozuren
Cholesterol10Cholesterol
Mengsel van cellulose en mineralen60Vezels, calcium, fosfor, natrium, enz
DL-Methionine Methionine/Methionine Aminozuren3Essentiële aminozuren
Gist1B-vitamines, β-glucaan, enz
NaCl1NaCl

Tabel 1: Speciale HFD-formulering voor het vaststellen van DIO in rattenmodellen. De tabel geeft een overzicht van de specifieke samenstelling van de HFD die in dit onderzoek is gebruikt voor de modelgroep, die werd toegediend vanaf het einde van de acclimatiseringsperiode tot aan de weefselverzameling.

IngrediëntTevredenEenheid
Vocht12.196%
Ruw eiwit (CP%)18.272%
Verteerbare energie (DE)3.186Ml/kg
Metaboliseerbare energie (ME)2.939Ml/kg
Netto energie (NE)2.228Ml/kg
Ether Extract (EE%)4.417%
Ruwe celstof (CF%)3.677%
Calcium (Ca%)0.991%
Totaal fosfor0.681%
(Totaal P%)
Niet-fytaat fosfor0.19%
Zout0.407%
Lysine1.118%
Verteerbare lysine0.813%
Methionine0.53%
Threonine0.779%
Tryptofaan0.221%
Koper (Cu)22.06mg/kg
IJzer (Fe)173.69mg/kg
Mangaan (Mn)102.1176mg/kg
Zink (Zn)60.3687mg/kg

Tabel 2: Standaard onderhoudsvoerformule bij ratten. De tabel geeft de samenstelling weer van het standaard onderhoudsvoer, dat gedurende de gehele duur van het onderzoek aan alle ratten werd verstrekt en aan de controlegroep gedurende de gehele duur van het onderzoek.

2. Weefsel oogsten

  1. Preoperatieve voorbereiding
    1. Vastenbehandeling: 12 uur voedselbeperking vóór euthanasie om interferentie van de darminhoud met biochemische analyses te minimaliseren.
    2. Anesthesie: Isofluraan toedienen via inhalatie voor diepe anesthesie (inductieconcentratie 4%, onderhoudsconcentratie 1,5-2%). Het anesthesieapparaat was uitgerust met een verdamper voor isofluraan en de anesthesieconcentratie werd op 1,5-2 gehouden. Als referentie voor de bereiding bedroeg de fysische consumptie van vloeibaar isofluraan ongeveer 0,5 ml-0,8 ml per rat voor de gehele procedure.
    3. Bewaak de anesthesiediepte: Volg continu de ademhalingsfrequentie en hoornvliesreflexen. Zorg voor een aanhoudende anesthesietoestand tijdens de procedure om postmortale autolyse van de alvleesklier te voorkomen.
    4. Beheer onvoldoende anesthesie: Als de anesthesiediepte onvoldoende is of het bewustzijn terugkeert, dien dan onmiddellijk 20% urethaan intraperitoneaal toe voor aanvullende anesthesie (50 mg/kg) en controleer de vitale functies opnieuw voordat u verder gaat. Bereid een 20% urethaanoplossing voor door urethaanpoeder op te lossen in zoutoplossing.
      OPMERKING: Isofluraan-anesthesie is de methode die voldoet aan de ethische vereisten van het Experimental Animal Center van de Nanjing University of Chinese Medicine. Voor deze terminale procedure kan intraperitoneale injectie van 20% urethaan worden gebruikt als een acceptabel alternatief. Het bestaande bewijs suggereert echter dat isofluraan een hoger veiligheidsprofiel kan bieden dan ketamine bij knaagdieren19.
  2. Oogsten van vers weefsel
    1. Huiddesinfectie: Spuit 75% ethanol snel over het hele lichaam (1-2 s) om haarbesmetting van de buikorganen te voorkomen.
    2. Positiefixatie: Plaats de rat in rugligging op de dissectietafel en bevestig alle vier de ledematen stevig met grote koppennen.
    3. Pak de buikhuid vast met een tang in uw linkerhand en snijd de huid langs de middellijn (van xiphoid tot schaambeen) met een schaar in uw rechterhand. Ontleed botweg de onderhuidse fascia om het bindweefsel te scheiden en snijd de rectus abdominis-spier en het peritoneum langs dezelfde middellijn door.
    4. Identificatie van de alvleesklier: Verplaats de darm voorzichtig naar links om de maag, milt en twaalfvingerige darm zichtbaar te maken. De milt zit vast aan de staart van de alvleesklier en de maag bevindt zich dicht bij de alvleesklier.
    5. Snelle dissectie: til de milt voorzichtig op met een tang en isoleer de alvleesklier door de aanhechtingen aan de milt, maag en duodenale mesenterium geleidelijk door te snijden. Vanwege de fragiele textuur moet u direct klemmen van pancreaskarenchym vermijden en de pancreaskanalen/bloedvaten behouden om weefselscheuren te voorkomen.
    6. Weefselconservering: Spoel de ontlede alvleesklier snel af met ijskoude PBS (1× fosfaatgebufferde zoutoplossing, PH 7,4) of zoutoplossing om achtergebleven bloed te verwijderen. Breng de alvleesklier onmiddellijk over naar een vriesbuis van 2 ml, dompel deze binnen 30 s onder in vloeibare stikstof en bewaar deze langdurig bij -80 °C.
    7. Euthanasie en verwijdering van kadavers Na weefselafname worden alle experimentele ratten geëuthanaseerd door cervicale dislocatie. Volgens de voorschriften van het Experimental Animal Center van de Nanjing University of Chinese Medicine worden kadavers van dieren geclassificeerd als pathologisch biomedisch afval (afvalcode: 831-003-01). Sluit alle kadavers van dieren af in luchtdichte zakken volgens de voorschriften en bewaar ze uniform in de daarvoor bestemde vriezers. De universiteit zal een gecentraliseerde, milieuvriendelijke verwijdering uitvoeren. Kadavers mogen in geen geval willekeurig worden weggegooid.
      OPMERKING: Vermijd blootstelling bij kamertemperatuur om enzymatische afbraak van biomoleculen te voorkomen 20,21.
  3. Oogsten van perfusieweefsel (de overige stappen zijn hetzelfde)
    1. Stel het hart bloot: Til het huidweefsel van de rat op met uw linkerhand en open de borstholte met uw rechterhand om het hart volledig bloot te leggen.
    2. Bereid de linkerventrikel voor op perfusie: Maak een kleine incisie op de linkerventrikel (maat die overeenkomt met de diameter van de perfusienaald) en snijd in de rechteroorschelp om bloeduitstroom mogelijk te maken.
    3. Perfuse zoutoplossing: Steek de perfusienaald voorzichtig in de linker hartkamer en perfuseer langzaam 100 ml zoutoplossing met een debiet van 10 ml/min totdat de rechter atriale uitstroom helder wordt.
    4. Perfuse fixatief: Overschakelen naar 200 ml 4% paraformaldehyde fixatief, debiet: 5 ml/min. Doordrenk elke rat met 100 ml zoutoplossing, gevolgd door 200 ml 4% paraformaldehyde. In deze studie werd gebruik gemaakt van een commercieel bereide PFA-oplossing. Vanwege de instabiliteit van PFA in de oplossing, met een aanzienlijk variabiliteitspotentieel afhankelijk van de bereiding en versheid, moet de vloeibare oplossing worden beschermd tegen licht en worden bewaard bij 4 °C. Gebruik onmiddellijk een geopend aliquot om de werkzaamheid te garanderen. Indien bereid uit poeder, moet de oplossing onmiddellijk voor gebruik vers worden gemaakt.
      OPMERKING: Draag handschoenen, een veiligheidsbril en een laboratoriumjas; Uitvoeren in een zuurkast omdat paraformaldehyde giftig is. Volgens de voorschriften van het Experimental Animal Center van de Nanjing University of Chinese Medicine wordt paraformaldehyde-afval geclassificeerd als chemisch biomedisch afval (afvalcode: 831-004-01). Na gebruik moet het worden opgeslagen in een speciale afvalcontainer die is gelabeld met het biohazard-symbool. De gecentraliseerde verwijdering wordt uitgevoerd door de universiteit. Het mag in geen geval op ongepaste wijze worden weggegooid.
    5. Bevestig het succes van de perfusie: Controleer op stijfheid van de ledematen, wat wijst op effectieve fixatie.
    6. Plaats de alvleesklier in een centrifugebuis van 50 ml met 30 ml 4% paraformaldehydeoplossing. Fixeer de tissue door de tube 2-4 uur stil in het donker te bewaren.
    7. Breng de alvleesklier over naar een nieuwe centrifugebuis van 50 ml met 30 ml 70% ethanoloplossing. Houd de buis ongeveer 20-24 uur22 stil en beschermd tegen licht.
    8. Paraffine-inbedding: Veranker de weefsels in paraffinewas. Bewaar de ingebedde tissues bij 4 °C of -20 °C.
      OPMERKING: In deze studie werden paraffinesecties gebruikt. Bevroren secties zijn een geldig alternatief, maar de prestaties van antilichamen moeten vooraf worden geverifieerd voor het specifieke sectietype om optimale resultaten te garanderen.

3. Immunohistochemie (IHC) kleuring van de alvleesklier

  1. Sectie- en montageprotocol
    1. Paraffinesecties: Snijd weefselsecties met een dikte van 6 μm met behulp van een microtoom en monteer ze op glasplaatjes.
    2. Drijfmethode: Laat de secties drijven op een weefselflotatiebad van 40 °C om rimpels glad te strijken.
    3. Weefselverzameling: Monteer secties op met lijm beklede objectglaasjes (2-3 per objectglaasje) en droog ze op een 80 °C glijverwarmer.
    4. Glaasjes drogen: Breng de dia's met gemonteerde secties na het snijden een nacht over naar een oven van 60 °C.
  2. Protocol voor deparaffinisatie en rehydratatie
    1. Plaats de dia's in een diarek en dompel ze achtereenvolgens als volgt onder: xyleen I, 7 min; xyleen II, 7 min; watervrije ethanol, 5 min; 90% ethanol, 5 min; 85% ethanol, 5 min; 75% ethanol, 5 min; gedestilleerd water, 5 min; PBS, 5 min (drie keer).
      OPMERKING: Voer xyleenstappen uit in een zuurkast met handschoenen en een veiligheidsbril. Gooi xyleenafval weg volgens het identieke protocol dat is gespecificeerd voor paraformaldehyde als stap 2.3.4.
  3. Protocol voor het ophalen van antigeen
    1. Bereiding van natriumcitraatoplossing: Bereid natriumcitraatbuffer (pH 6,0). We gebruikten een zelf bereide natriumcitraatbufferoplossing door een pakje van het poeder op te lossen in 1 L water.
    2. Magnetron achtereenvolgens: Plaats de dia's in een glazen kleurpot gevuld met natriumcitraatbufferoplossing om de dia's te bedekken en plaats de pot vervolgens in de magnetron. De monsters werden onderworpen aan een microgolfbehandeling in de volgende volgorde: middelhoog vuur (600 W) gedurende 8 minuten, gevolgd door 8 minuten staan zonder te verwarmen en ten slotte 7 minuten op laag vuur (300 W).
    3. Op natuurlijke wijze afkoelen tot kamertemperatuur: Laat de container op natuurlijke wijze afkoelen tot kamertemperatuur.
    4. PBS: Spoel de dia's in PBS gedurende 5 minuten gedurende twee keer.
  4. Incubatie van de oven
    1. H2O2: Breng 3% H2O2 aan op de weefselsecties gedurende 10 minuten om de endogene peroxidase-activiteit te blokkeren. Breng ongeveer 50 - 80 μL H2O2 aan op elk objectglaasje.
    2. PBS: Was de dia's drie keer 5 minuten in PBS.
    3. Strept-Avidin-Biotine-Peroxidase Complex (SABC): SABC druppelsgewijs op het weefsel aanbrengen en gedurende 30 minuten kleuren in een incubator van 37 °C. Breng ongeveer 50 - 80 μL SABC aan op elk objectglaasje.
    4. PBS: Was de dia's drie keer 5 minuten in PBS.
  5. Kleurweergave
    1. 3,3'-diaminobenzidine (DAB): Breng DAB-chromogene oplossing aan op de weefselsecties en controleer totdat er een bruingele verkleuring ontstaat. Kleur de secties ongeveer 1-5 minuten aan. Pas de kleuringsduur aan op basis van de weefselspecificiteit en de omgevingstemperatuur. Voor pancreasweefsel wordt een kleuringstijd van 2 minuten bij 22 °C aanbevolen.
    2. Spoelen: Spoel de dia's onmiddellijk af onder een zachte stroom gedestilleerd water om de reactie te stoppen.
    3. Onderdompelen: Dompel de dia's 5 minuten onder in gedestilleerd water om achtergebleven reagentia te verwijderen.
  6. Hematoxyline-kleuring
    1. Hematoxyline: Dompel de dia's 1 minuut onder in de hematoxyline. Hematoxyline-oplossing wordt bereid met zuiver water in een verhouding van 56 mg/ml.
    2. Spoelen: Spoel de dia's twee keer af in gedestilleerd water (5 s per spoelbeurt).
    3. Differentiatie zoutzuur-alcohol: Differentieer de objectglaasjes in de zoutzuur-alcoholdifferentiatieoplossing gedurende 1 s.
    4. Onderdompelen: Dompel de dia's 10 minuten onder in kraanwater om een stabiele blauwe nucleaire kleuring te ontwikkelen.
  7. Uitdroging: Dehydrateer de dia's achtereenvolgens door de volgende oplossingen: respectievelijk 70% ethanol, 80% ethanol, 90% ethanol, watervrije ethanol, xyleen I en xyleen II, gedurende 3 minuten in elke oplossing.
    OPMERKING: Voer xyleenstappen uit in een zuurkast met handschoenen en een veiligheidsbril.
  8. Afdichting
    1. Monteer de secties met neutrale balsem: Breng neutrale balsem aan op de dia met behulp van een rubberen boldruppelaar. Dek af met een dekglaasje. Vermijd het krachtig samendrukken van de bol om luchtbelvorming te voorkomen. Breng ongeveer 50 μL neutrale balsem aan op elk objectglaasje.
    2. Aan de lucht laten drogen: Plaats de dia's een nacht in een zuurkast om de neutrale hars volledig te laten drogen.

4. Western blotting (WB) analyse

  1. Ontbinding van weefsels
    1. Neem 200 mg pancreasweefsel van de rat, plaats het in een maalbuis van 2 ml met 1 ml lysisbuffer en 3 kleine stalen kogels. De lysisbuffer is samengesteld uit een complete proteaseremmercocktail en RIPA lysisbuffer. De mengverhouding is 1 tablet proteaseremmer: 50 ml RIPA lysisbuffer.
    2. Het slijpen werd uitgevoerd met behulp van een kogelmolen met de volgende parameters: frequentie: 30/s; Tijd: 30 s; 10-15 keer. Totdat er met het blote oog geen witte deeltjes meer zichtbaar zijn.
    3. Breng het bovenste eiwitsupernatans over in een microcentrifugebuis van 1,5 ml, neem geen schuim. Centrifugeer het met 16900 x g 30min, 4 °C.
      OPMERKING: Homogenaten voor Western blotting-analyse werden bereid uit de gehele alvleesklier.
  2. Eiwitkwantificering: Kwantificeer de eiwitconcentratie met behulp van de Pierce BCA Protein Assay Kit volgens de instructies van de fabrikant. De mengverhouding voor BCA-werkoplossing is Oplossing A: Oplossing B = 50:1.
  3. Eiwit elektroforese:
    1. Voeg de voorbereide pancreaseiwitmonsters (een volume van 6 μL werd in elke baan geladen) toe aan natriumdodecylsulfaat-polyacrylamidegel-Young PAGE, Bis-Tirs, 10 × 8, voor elektroforese.
    2. Draai op 70 V gedurende 0,5 uur en draai vervolgens 1 uur op 110 V met behulp van het Mini-PROTEAN Tetra-systeem. Verdun de MOPS-elektroforese Running Buffer-vloeistof 20×met zuiver water tot een concentratie van 1×.
  4. Membraan overdracht
    1. Verdun het transferconcentraat eBlot L2 5× tot 1× werkconcentratie met zuiver water. Deze 1× overdrachtsbuffer kan tot 3 keer worden hergebruikt. Verdun het balansconcentraat eBlot L2 5× tot 1× werkconcentratie met zuiver water.
    2. Knip een PVDF-membraan (Immobilon-P Transfer Membrane) op de juiste maat (bijv. 7,5 cm × 5,5 cm). De poriegrootte is 0,45 um.
    3. Giet ongeveer 30 ml methanol in een incubatiedoos met 90 × 60 × 32 mm. Dompel het PVDF-membraan 5 s onder in de methanol om het te activeren.
    4. Giet ongeveer 30 ml van de bereide 1x balansoplossing in een andere schone incubatiedoos. Verwijder de gel voorzichtig van de elektroforeseplaten en plaats deze in de balansoplossing.
    5. Breng het geactiveerde PVDF-membraan van de methanol over en plaats het ook in de incubatiebox met de balansoplossing. Zorg ervoor dat het membraan onder de gel ligt voor een goed contact. Laat beide in evenwicht komen.
    6. Volg de instructies van de fabrikant van het vloeiapparaat en plaats de transfer "sandwich" in deze volgorde van boven naar beneden: spons, gel, PVDF-membraan, spons. Zorg ervoor dat er geen luchtbellen tussen de lagen vast komen te zitten. Plaats de gemonteerde transferstapel op de juiste manier in de kamer van het vloeiapparaat. Sluit de voeding aan en laat de overdracht 15 minuten in de standaardmodus draaien.
  5. Blokkeren
    1. Bereid twee incubatieboxen voor, één met ongeveer 15 ml TBST (Tris-gebufferde zoutoplossing-Tween20) en de andere met ongeveer 15 ml 5% BSA-blokkerende oplossing.
    2. Bereiding van TBST-oplossing: Los een zakje Tris Buffered Saline Powder op in 2 L zuiver water en voeg vervolgens 2 ml Tween 20 toe.
    3. Plaats het PVDF-membraan in de TBST-oplossing en zorg ervoor dat de kant die in contact was met de gel naar boven wijst.
    4. Was het PVDF-membraan op een shaker op 40 tpm bij kamertemperatuur gedurende 3-5 minuten.
    5. Breng het PVDF-membraan over naar de blokkeerbuffer. Blokkeer het op een shaker bij 20 tpm, bij kamertemperatuur gedurende 1 uur.
  6. Incubatie van primaire antilichamen
    1. Was het PVDF-membraan in een incubatiebox met TBST, was het membraan drie keer gedurende 5 minuten op een shaker op 40 tpm op kamertemperatuur.
    2. Incubeer met primair antilichaam gedurende de nacht (14-18 uur) bij 4 °C (1:40000, Vinculin Polyklonaal antilichaam) in een andere antilichaamincubatiedoos op een shaker bij 20 tpm.
    3. Zorg ervoor dat het antilichaam wordt verdund met 5% BSA-blokkerende oplossing, bereid volgens de in de sectie gespecificeerde verhouding.
  7. Incubatie van secundaire antilichamen
    1. Plaats het PVDF-membraan in een incubatiebox met 15 ml TBST-oplossing. Was het membraan drie keer gedurende 5 minuten op een shaker op kamertemperatuur, roerend met 40 tpm.
    2. Bereid het secundaire antilichaam voor door Anti-konijn IgG, HRP-gekoppeld antilichaam te verdunnen bij 1:2000 in 5% BSA-blokkeerbuffer.
    3. Incubeer gedurende 1 uur bij kamertemperatuur op een shaker bij 20 rpm23.
    4. Was het PVDF-membraan drie keer met TBST-oplossing gedurende elk 5 minuten, volgens de hierboven beschreven methode.
  8. Opsporing
    1. Bereid de werkende substraatoplossing voor door AccuWest ECL Plus, Raegent A en AccuWest ECL Plus, Raegent B in een volumeverhouding van 1:1 direct in een incubatiedoos te mengen. Voer alle volgende stappen beschermd tegen licht uit.
    2. Incubeer het PVDF-membraan in de oplossing gedurende 5-10 s en detecteer vervolgens onmiddellijk immunoreactieve banden met behulp van verbeterde chemiluminescentie (ECL) reagentia - Vilber Fusion FX6 MINI. De typische belichtingstijd varieert van 5 tot 10 seconden.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

We beschrijven een reproduceerbaar protocol voor het opstellen van een eenvoudig obesitasmodel dat op betrouwbare wijze vette alvleesklier vertoont (Figuur 1). Het hele proces, van het voederen en verzamelen van dieren tot de daaropvolgende moleculaire validatie, is schematisch samengevat in Figuur 1. De wekelijkse gewichtsveranderingen van de modelgroep (n = 5) en de controlegroep (n = 5) werden geregistreerd en er was geen sig...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Als de primaire oorzaak van het metabool syndroom, vertegenwoordigt ongecompliceerde obesitas de eerste manifestatie van systemische ontregeling van het lipidenmetabolisme. Zonder interventie kan het zich ontwikkelen tot T2DM en ernstige diabetische complicaties, wat de noodzaak van vroege metabole correctie onderstreept30. Pancreassteatose (vette pancreas), een vroege marker van ectopische lipideafzetting bij obesitas, herdefinieert de pancreas als een niet-klass...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs hebben geen belangenconflicten te onthullen.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit werk werd ondersteund door het Project van Erfgenamen en Instructeurs voor de Academische Ervaring Erfenis van de Zevende Lichting van Nationale Gerenommeerde Traditionele Chinese Geneeskunde Experts; De National Natural Science Foundation of China, Young Scientists Fund Project [subsidienummer 82305376]; Project ter ondersteuning van jonge wetenschaps- en technologietalenten in de provincie Jiangsu in 2024 [subsidienummer JSTJ-2024-380].

De stroomschema's zijn geproduceerd met behulp van FigDraw, Biorender.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Materiaal
1.5 mL microcentrifugebuisjebiosharp bioengineering co. ltdBS-15-MWB
2ml vriesbuisLABSELECTCV-002-200-EXWB
2ml maalbuisWuhan Servicebio Technology Co., LtdHT-200-MWB
3% H2O2Booster Electronics Technology Co.,Ltd.20A23CIHC
4% paraformaldehydebiosharp bioengineering co. ltdBL539Aperfusie pancreas dissectie operatie
5% BSA-oplossingBiofroxx4240GR100IHC
50 mL centrifugebuisbiosharp bioengineering co. ltdBS-500-Mweefselbehoud
AccuWest ECL Plus, Reagens ANanjing Gene Easy Biotechnology Co., Ltd.Q201220WB
AccuWest ECL Plus, Reagens BNanjing Gene Easy Biotechnology Co., Ltd.Q201220WB
watervrij ethanolShanghai SCR-Biotech Co., Ltd.10009257IHC
Anti-konijn IgG, HRP-gekoppeld antilichaamCell Signaling Technology.Inc,7074WB
cOmplete Protease Inhibitor CocktailHoffmann-La Roche Ltd82256300WB
dekglasCITOTEST LABWARE MANUFACTURING Co., LTD10212450CIHC
DAB chromogeen oplossingBooster Electronics Technology Co.,Ltd.AR2017-1IHC
pincetShenzhen RWD Life Science Co., Ltd.SP0007-Mdissectie van SD-rat
glasplatenCITOTEST LABWARE MANUFACTURING Co., LTD188105IHC
glaskleuringspotShanghai Beyotime Biotechnology Co., Ltd.FG010IHC
HematoxilineShanghai Beyotime Biotechnology Co., Ltd.ST2067-20gIHC
hoogvetdieetSuzhou Shuangshi Laboratory Animal Feed Technology Co., Ltd.Table1voederen van proefdieren
zoutzuur alcoholShanghai Beyotime Biotechnology Co., Ltd.C0163MIHC
isofluraanShenzhen RWD Life Science Co., Ltd.R510-22-10geanesthetiseerde ratten
methanolBiofroxx67-56-1WB
MOPS Loop Buffer vloeistof 20×Nanjing Genscript Biotechnology Co., Ltd.C36842504WB
neutrale balsemBeijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd.G8590IHC
Neutrale harsShanghai SCR-Biotech Co., Ltd.G8590IHC
PBS oplossingJiangsu Keygen Biotech Corp., LtdKGL2206-500weefselbehoud
Pierce BCA Protein Assay KitThermo Fisher Scientific Inc, Waltham, USA.ZB382867
Pierce BCA Protein Assay KitThermo Fisher Scientific Inc, Waltham, USAZB382867WB
Protease Inhibitor CocktailHoffmann-La Roche Ltd82256300
PVDF-membraan (Immobilon-P Transfer Membraan, Millipore, 0000380346)Merck Millipore0000380346WB
RIPA lysis bufferbiosharp bioengineering co. ltdBL504A, 70096436WB
SABCBooster Electronics Technology Co.,Ltd.20C03AIHC
zoutoplossingSHANXI SHENGAO ANIMAL PHARMACEUTICAL CO.,LTD.270071460weefselbehoud
SD mannelijke rattenJiangsu GemPharmatech Co., Ltd.D000017ratten
natriumcitraatMerck Life ScienceS1804IHC
standaard onderhoudsvoerSuzhou Shuangshi Laboratory Animal Feed Technology Co., Ltd.Table2voederen van proefdieren
de balansconcentraat eBlot L2 5×Nanjing Genscript Biotechnology Co., Ltd.C97212410WB
het overdrachtconcentraat eBlot L2 5×Nanjing Genscript Biotechnology Co., Ltd.C97211504WB
Tris Buffered Saline, Poederbiosharp bioengineering co. ltdBL602AWB
Tween 20BiofroxxEZ681A3EA8WB
urethaanSigma-Aldrich Co., Ltd.U2500-100Ggeanesthetiseerde ratten
Vinculin Polyclonal antilichaamProteintech Group, Inc,26520-1-APWB
xyleenNanjing Reagent CorporationC0430530223IHC
Young PAGE, Bis-Tirs, 10×8Nanjing Genscript Biotechnology Co., Ltd.C33152505WB
Apparatuur
anesthesieapparaatShenzhen RWD Life Science Co., Ltd.Model R5805geanesthetiseerde ratten
balmolenRetsch Technology GmbH - MicrotracMM400WB
CentrifugesEppendorf SE5418RWB
gecomputeriseerde biologische weefseldrogerZhejiang Jinhua Kedi Instrument Co.SC2013-G-KITIHC
verbeterde chemiluminescentie (ECL) reagentiaVILBER BIO IMAGING00170961WB
microtoomThermo Fisher Scientific Inc, Waltham, USA.HM325IHC
microgolfovenShanghai Boxun Industry Co., Ltd.97000IHC
Mini-PROTEAN Tetra SystemBio-Rad Laboratories, Inc.1658004WB
ovenShanghai Jinghong Scientific Co., Ltd.DNP-9082IHC
zuiver waterSichuan UPT Ultra-Pure Technology Co., Ltd.ULUP-TEZIHC

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wang, G., et al. Comparative effectiveness of massage combined with lifestyle intervention and lifestyle intervention alone for simple obesity: a systematic review and meta-analysis. Medicine. 104 (2), e41074(2025).
  2. World Obesity Federation. World Obesity Atlas 2024. , World Obesity Federation. London. (2024).
  3. Kromrey, M. L., et al. Pancreatic steatosis is associated with impaired exocrine pancreatic function. Invest Radiol. 54 (7), 403(2019).
  4. Miyake, H., et al. Association of fatty pancreas with pancreatic endocrine and exocrine function. PLoS One. 13 (12), e0209448(2018).
  5. López-Bermudo, L., et al. Contribution of liver and pancreatic islet crosstalk to β-cell function/dysfunction in the presence of fatty liver. Front Endocrinol (Lausanne). 13, 892672(2022).
  6. Vilas-Boas, E. A., Almeida, D. C., Roma, L. P., Ortis, F., Carpinelli, A. R. Lipotoxicity and β-cell failure in type 2 diabetes: oxidative stress linked to NADPH oxidase and ER stress. Cells. 10 (12), 3328(2021).
  7. Martínez, M. S., et al. The role of the α cell in the pathogenesis of diabetes: a world beyond the mirror. Int J Mol Sci. 22 (17), 9504(2021).
  8. Catanzaro, R., Cuffari, B., Italia, A., Marotta, F. Exploring the metabolic syndrome: nonalcoholic fatty pancreas disease. World J Gastroenterol. 22 (34), 7660-7675 (2016).
  9. Pinnick, K. E., et al. Pancreatic ectopic fat is characterized by adipocyte infiltration and altered lipid composition. Obesity. 16 (3), 522-530 (2008).
  10. Wang, Y. D., et al. New insight of obesity-associated NAFLD: dysregulated "crosstalk" between multi-organ and the liver. Genes Dis. 10 (3), 799-812 (2023).
  11. Savage, D. B., Petersen, K. F., Shulman, G. I. Disordered lipid metabolism and the pathogenesis of insulin resistance. Physiol Rev. 87 (2), 507-520 (2007).
  12. Shah, N., Rocha, J. P., Bhutiani, N., Omer, E. Nonalcoholic fatty pancreas disease. Nutr Clin Pract. 34 (S1), S49-S56 (2019).
  13. Chang, M. L. Fatty pancreas-centered metabolic basis of pancreatic adenocarcinoma: from obesity, diabetes and pancreatitis to oncogenesis. Biomedicines. 10 (3), 692(2022).
  14. Ou, H. Y., Wang, C. Y., Yang, Y. C., Chen, M. F., Chang, C. J. The association between nonalcoholic fatty pancreas disease and diabetes. PLoS One. 8 (5), e62561(2013).
  15. Yu, T. Y., Wang, C. Y. Impact of non-alcoholic fatty pancreas disease on glucose metabolism. J Diabetes Investig. 8 (6), 735-747 (2017).
  16. Petrov, M. S. Post-pancreatitis diabetes mellitus and excess intra-pancreatic fat deposition as harbingers of pancreatic cancer. World J Gastroenterol. 27 (17), 1936-1942 (2021).
  17. Mihoc, T., et al. Pancreatic morphology, immunology, and the pathogenesis of acute pancreatitis. Biomedicines. 12 (11), 2627(2024).
  18. Robinson-Junker, A. L., O'Hara, B. F., Gaskill, B. N. Out like a light? the effects of a diurnal husbandry schedule on mouse sleep and behavior. J Am Assoc Lab Anim Sci. 57 (2), 124-133 (2018).
  19. Virgilio, T., et al. Impact of prolonged isoflurane or ketamine-xylazine anesthesia with or without buprenorphine and oxygen on mouse vitals and immune responses. Lab Anim. 54, 1-8 (2025).
  20. Oh, S., Ahn, B., Lee, B. J., Nam, S. Y. Effect of humidity on postmortem changes in rats. J Vet Sci. 25 (3), e24(2024).
  21. Wu, C. T., et al. SARS-CoV-2 infects human pancreatic β cells and elicits β cell impairment. Cell Metab. 33 (8), 1565-1576.e5 (2021).
  22. Tremblay, C., Moullé, V., Zarrouki, B., Ghislain, J., Poitout, V. Immunofluorescent staining of pancreatic sections. protocols.io. , (2022).
  23. Liu, Y., et al. Electroacupuncture at ST25 mediated glial cells pruning of pancreatic TRPV1 neural synapse responds to neuropathy-associated beta cell dysfunction. Chin Med. 20 (1), 65(2025).
  24. Lu, M., et al. Electroacupuncture stimulation regulates adipose lipolysis via catecholamine signaling mediated by NLRP3 suppression in obese rats. Front Endocrinol. 12, 773127(2022).
  25. Lu, M., et al. Remodelling the inguinal adipose sensory system to switch on the furnace: electroacupuncture stimulation induces brown adipose thermogenesis. Diabetes Obes Metab. 26 (4), 1430-1442 (2024).
  26. Otsuka, N., Shimizu, K., Taniai, M., Tokushige, K. Risk factors for fatty pancreas and effects of fatty infiltration on pancreatic cancer. Front Physiol. 14, 1243983(2023).
  27. Zhang, X., Cui, Y., Fang, L., Li, F. Chronic high-fat diets induce oxide injuries and fibrogenesis of pancreatic cells in rats. Pancreas. 37 (3), e31(2008).
  28. Liu, Y., et al. Electroacupuncture at ST25 mediated glial cells pruning of pancreatic TRPV1 neural synapse responds to neuropathy-associated beta cell dysfunction. Chin Med. 20 (1), 65(2025).
  29. Liu, Y., et al. Neurophysiological mechanisms of electroacupuncture in regulating pancreatic function and adipose tissue expansion. World J Diabetes. 16 (5), 101354(2025).
  30. Jirawat, N., Srisuk, A. Obesity, metabolic syndrome, and cardiovascular disease: pathophysiological connections. Sci Acad J. 7 (1), 1-12 (2024).
  31. Fan, Y. H., et al. Inter-organ metabolic interaction networks in non-alcoholic fatty liver disease. Front Endocrinol. 15, 1494560(2025).
  32. Wang, Y. D., et al. New insight of obesity-associated NAFLD: dysregulated "crosstalk" between multi-organ and the liver. Genes Dis. 10 (3), 799-812 (2023).
  33. Zhang, X., Ji, X., Wang, Q., Li, J. Z. New insight into inter-organ crosstalk contributing to the pathogenesis of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). Protein Cell. 9 (2), 164-177 (2018).
  34. Zhang, C. L., Wang, J. J., Li, J. N., Yang, Y. Nonalcoholic fatty pancreas disease: an emerging clinical challenge. World J Clin Cases. 9 (23), 6624-6638 (2021).
  35. Corte, C. D., et al. Nonalcoholic fatty pancreas disease and nonalcoholic fatty liver disease: more than ectopic fat. Clin Endocrinol. 83 (5), 656-662 (2015).
  36. Saloman, J. L., et al. Animal models: challenges and opportunities to determine optimal experimental models of pancreatitis and pancreatic cancer. Pancreas. 48 (6), 759(2019).
  37. Hariri, N., Thibault, L. High-fat diet-induced obesity in animal models. Nutr Res Rev. 23 (2), 270-299 (2010).
  38. Lee, H. -Y., Min, K. -J. Dietary restriction and lipid metabolism: unveiling pathways to extended healthspan. Nutrients. 16 (24), 4424(2024).
  39. Rosini, T. C., Ramos da Silva, A. S., de Moraes, C. Diet-induced obesity: rodent model for the study of obesity-related disorders. Rev Assoc Med Bras (Engl Ed). 58 (3), 383-387 (2012).
  40. Uc, A., et al. Chronic pancreatitis in the 21st century - research challenges and opportunities: summary of a national institute of diabetes and digestive and kidney diseases workshop. Pancreas. 45 (10), 1365(2016).
  41. Fisher, W. E., et al. Standard operating procedures for biospecimen collection, processing, and storage: from the consortium for the study of chronic pancreatitis, diabetes, and pancreatic cancer. Pancreas. 47 (10), 1213(2018).
  42. Alexander, J., Chang, G. Q., Dourmashkin, J. T., Leibowitz, S. F. Distinct phenotypes of obesity-prone AKR/J, DBA2J and C57BL/6J mice compared to control strains. Int J Obes (Lond). 30 (1), 50-59 (2006).
  43. Nishikawa, S., Yasoshima, A., Doi, K., Nakayama, H., Uetsuka, K. Involvement of sex, strain and age factors in high-fat diet-induced obesity in C57BL/6J and BALB/cA mice. Exp Anim. 56 (4), 263-272 (2007).
  44. Levin, B. E., Dunn-Meynell, A. A., Balkan, B., Keesey, R. E. Selective breeding for diet-induced obesity and resistance in Sprague-Dawley rats. Am J Physiol. 273 (2 Pt 2), R725-R730 (1997).
  45. Kautzky-Willer, A., Harreiter, J., Pacini, G. Sex and gender differences in risk, pathophysiology and complications of type 2 diabetes mellitus. Endocr Rev. 37 (3), 278-316 (2016).
  46. Lee, M. J., Wu, Y., Fried, S. K. Adipose tissue heterogeneity: implication of depot differences in adipose tissue for obesity complications. Mol Aspects Med. 34 (1), 1-11 (2013).
  47. Geer, E. B., Shen, W. Gender differences in insulin resistance, body composition, and energy balance. Gender Med. 6 Suppl 1 (Suppl 1), 60-75 (2009).
  48. Nadal-Casellas, A., Proenza, A. M., Lladó, I., Gianotti, M. Sex-dependent differences in rat hepatic lipid accumulation and insulin sensitivity in response to diet-induced obesity. Biochem Cell Biol. 90 (2), 164-172 (2012).
  49. Stubbins, R. E., Holcomb, V. B., Hong, J., Núñez, N. P. Estrogen modulates abdominal adiposity and protects female mice from obesity and impaired glucose tolerance. Eur J Nutr. 51 (7), 861-870 (2012).
  50. Liu, Y., et al. Neuromechanical dimorphism of hypoglycemic effect of electroacupuncture. Neuroendocrinology. 113 (7), 679-691 (2023).
  51. Xu, T. C., Liu, Y., Yu, Z., Xu, B. Gut-targeted therapies for type 2 diabetes mellitus: a review. World J Clin Cases. 12 (1), 1-8 (2024).
  52. Xu, T., et al. Hypoglycemic effect of electroacupuncture at ST25 through neural regulation of the pancreatic intrinsic nervous system. Mol Neurobiol. 59 (1), 703-716 (2022).
  53. Feng, X., et al. Ferroptosis enhanced diabetic renal tubular injury via HIF-1α/HO-1 pathway in db/db mice. Front Endocrinol (Lausanne). 12, 626390(2021).
  54. Fang, X., et al. Beinaglutide shows significantly beneficial effects in diabetes/obesity-induced nonalcoholic steatohepatitis in ob/ob mouse model. Life Sci. 270, 118966(2021).
  55. Mao, T., et al. Semaglutide alters gut microbiota and improves NAFLD in db/db mice. Biochem Biophys Res Commun. 710, 149882(2024).
  56. Zeng, Z., et al. Bacillus amyloliquefaciens SC06 alleviates the obesity of ob/ob mice and improves their intestinal microbiota and bile acid metabolism. Food Funct. 13 (9), 5381-5395 (2022).
  57. Suriano, F., et al. Novel insights into the genetically obese (ob/ob) and diabetic (db/db) mice: two sides of the same coin. Microbiome. 9 (1), 147(2021).
  58. Owada, Y., et al. Novel non-alcoholic steatohepatitis model with histopathological and insulin-resistant features. Pathol Int. 68 (1), 12-22 (2018).
  59. Flessa, C. M., et al. Genetic and diet-induced animal models for non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) research. Int J Mol Sci. 23 (24), 15791(2022).
  60. Liu, Y., et al. Electroacupuncture at ST25 mediated glial cells pruning of pancreatic TRPV1 neural synapse responds to neuropathy-associated beta cell dysfunction. Chin Med. 20 (1), 65(2025).
  61. Xu, T., et al. Hypoglycemic effect of electroacupuncture at ST25 through neural regulation of the pancreatic intrinsic nervous system. Mol Neurobiol. 59 (1), 703-716 (2022).
  62. Vimaleswaran, K. S., et al. Causal relationship between obesity and vitamin D status: bi-directional Mendelian randomization analysis of multiple cohorts. PLoS Med. 10 (2), e1001383(2013).
  63. Alvheim, A. R., et al. Dietary linoleic acid elevates endogenous 2-AG and anandamide and induces obesity. Obesity (Silver Spring). 20 (10), 1984-1994 (2012).
  64. Hintze, K. J., Benninghoff, A. D., Cho, C. E., Ward, R. E. Modeling the Western diet for preclinical investigations. Adv Nutr. 9 (3), 263-271 (2018).
  65. D, L. Obesity due to a high-fat diet in the rat and mouse. Nutr Dieta Eur Rev Nutr Diet. 9 (1), 27-42 (1967).
  66. Lemonnier, D., Tremolieres, J. Experimental obesity induced by high-fat diets. Probl Actuels Endocrinol Nutr. 7, 77-85 (1963).
  67. Samuel, V. T., et al. Mechanism of hepatic insulin resistance in non-alcoholic fatty liver disease. J Biol Chem. 279 (31), 32345-32353 (2004).
  68. Hu, S., et al. Dietary fat, but not protein or carbohydrate, regulates energy intake and causes adiposity in mice. Cell Metab. 28 (3), 415-431.e4 (2018).
  69. Goh, S. K., et al. Perfusion-decellularized pancreas as a natural 3D scaffold for pancreatic tissue and whole organ engineering. Biomaterials. 34 (28), 6760-6772 (2013).
  70. Levin, B. E. Factors promoting and ameliorating the development of obesity. Physiol Behav. 86 (5), 633-639 (2005).
  71. Yuan, C. X., et al. Electroacupuncture alleviates diabetic peripheral neuropathy through modulating mitochondrial biogenesis and suppressing oxidative stress. World J Diabetes. 16 (2), 93130(2025).
  72. Liu, Y., et al. Neuromechanical dimorphism of hypoglycemic effect of electroacupuncture. Neuroendocrinology. 113 (7), 679-691 (2023).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Obese Rat ModelsFatty PancreasPancreatic SteatosisHigh Fat DietDiet Induced ObesityLipid DepositionTissue HarvestingWestern BlottingParaformaldehyde FixationMetabolic Dysfunction

Related Articles