Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Onderzoeksartikel

De oorzakelijke effecten van plasmametabolieten op achillespeesbeschadiging: een Mendeliaanse randomisatiestudie

269 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/69807

⸱

27 maart 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Orthopaedic Centre Hand-Foot Surgery, People's Hospital of Ningxia Hui Autonomous Region, Ningxia Medical University, 2Ningxia Yinchuan Energy College, Nursing College, 3General Surgery Department, People's Hospital of Ningxia Hui Autonomous Region, Ningxia Medical University

In dit artikel

Samenvatting

Hier presenteren we een gecombineerd Mendeliaans randomisatie- en experimenteel validatieprotocol om causale metabolieten bij achillespeesbeschadiging te identificeren, waarbij 19 plasmametabolieten met causale verbanden met achillespeesletsel worden geïdentificeerd en de therapeutische toepassing van 5,6-dihydrothymine en hydroxyasparagine worden aangetoond bij het bevorderen van weefselherstel en het verminderen van ontstekingen.

Samenvatting

Om de causale effecten van plasmametabolieten op de progressie en het herstel van achillespeesletsel (ATI) te onderzoeken, werd Mendeliaanse randomisatie (MR) toegepast met een twee-steekproefbenadering met genetische gegevens uit twee grote datasets. ATI-gegevens werden afkomstig van het IEU-OpenGWAS-project (ebi-a-GCST90018895), terwijl plasmametabolietgegevens 1.400 metabolieten omvatten. Significante instrumentele variabelen (IV's) voor metabolieten werden geïdentificeerd, en vijf MR-methoden—IVW, MR-Egger, gewogen mediaan, eenvoudige modus en gewogen modus—werden toegepast om causale relaties te beoordelen. Er werd een omgekeerde MR-analyse uitgevoerd om de impact van ATI op metabolietniveaus te onderzoeken. Weefselherstel en de expressie van IL-6, TNF-α, VEGFA en TGF-β1 in het achillespeesweefsel van de muis werden op dag 7 na de behandeling beoordeeld met 5,6-dihydrothymine (Dih) en hydroxyasparagine (Hyd) met behulp van H&E-kleuring en Western blot. MR-analyse identificeerde 19 metabolieten met significante causale associaties met ATI. Hiervan zijn 12 metabolieten, waaronder Dih (IVW: OR = 1,197, 95% BI: 1,074-1,334; P = 0,001) en Pregnanediol-3-glucuronide (IVW: OR = 1,098, 95% BI: 1,023-1,177; P = 0,001), positief geassocieerd met de progressie van ATI. Ter vergelijking: 7 metabolieten, zoals Hyd (IVW: OR = 0,789, 95% BI: 0,707-0,880; P < 0,001), werden gekoppeld aan het herstel van ATI. Reverse MR-analyse toonde geen significante oorzakelijke effecten van ATI op metabolietniveaus, wat wijst op een unidirectionele relatie. Röntgen- en H&E-analyses toonden aan dat de behandeling van Dih en Hyd de genezing van de achillespees aanzienlijk verbeterde op een dosisafhankelijke manier. Bovendien verminderden de behandeling van Dih en Hyd aanzienlijk de expressie van IL-6 en TNF-α (P < 0,05) terwijl de VEGFA- en TGF-β-niveaus toenamen (P < 0,05), wat wijst op een vermindering van ontsteking en bevordering van weefselherstel. Deze studie identificeerde mogelijke causale verbanden tussen specifieke plasmametabolieten en ATI-uitkomsten. Deze bevindingen kunnen toekomstige therapeutische strategieën informeren en het nut van MR benadrukken bij het onderzoeken van associaties tussen metabolieten en ziekte.

Inleiding

Achillespeesblessure (ATI) is een veelvoorkomende en invaliderende musculoskeletale aandoening, vooral bij atleten en fysiek actieve personen 1,2. De achillespees, de grootste en sterkste pees in het menselijk lichaam, speelt een cruciale rol in de voortbeweging, waarbij krachten van de kuitspieren naar de hiel worden overgedragen tijdens activiteiten zoals wandelen, hardlopen en springen 3,4,5,6. De beperkte bloedtoevoer en de hoge mechanische belasting maken het bijzonder kwetsbaar voor overbelasting en blessures 2,7. ATI uit zich in verschillende vormen, variërend van milde tendinopathie tot volledige ruptuur, wat aanzienlijke pijn, verminderde mobiliteit en langdurige revalidatieveroorzaakt 8,9. Ondanks vooruitgang in de behandeling leidt ATI vaak tot aanhoudende pijn, verminderde mobiliteit en verlengde hersteltijden, met een verhoogd risico op chronische complicaties en hernieuwd letsel 5,10,11,12.

Recente studies hebben de cruciale rol van plasmametabolieten in het genezingsproces van ATI13,14 benadrukt. Deze metabolieten, betrokken bij verschillende biochemische routes, worden verondersteld belangrijke factoren te beïnvloeden zoals ontsteking, weefselherstel en peesgezondheid15. Specifieke aminozuren en lipiden zijn bijvoorbeeld essentieel voor collageensynthese en het beheersen van oxidatieve stress, die beide cruciaal zijn in peespathologie16,17. Bloedplaatjesrijk plasma (PRP), rijk aan groeifactoren zoals PDGF, TGF-β, VEGF en IGF, heeft potentieel getoond in het bevorderen van peesgenezing, hoewel de effectiviteit bij de behandeling van chronische achillespeestendinopathie nogsteeds ter discussie staat. In de afgelopen jaren hebben high-throughput omics-technologieën, zoals metabolomics en proteomics, ongekende kansen geboden om het moleculaire landschap van complexe omstandigheden zoals ATI18,19 te verkennen. Geavanceerde metabolomische technologieën hebben de identificatie van biomarkers die gekoppeld zijn aan ATI-uitkomsten vergemakkelijkt, wat inzicht geeft in hoe specifieke metabolieten de voortgang en het herstel van blessures beïnvloeden.

Metabolietprofilering en de analyse van metabole routes zijn krachtige methoden geworden voor het identificeren van biomarkers en routes die samenhangen met letsel20,21. Mendeliaanse randomisatie (MR) is een robuuste causale inferentiemethode die genetische varianten gebruikt als instrumentele variabelen (IV's) om confounding-biases aan te pakken die vaak voorkomen in traditionele epidemiologische studies 22,23,24,25,26,27. MR is vooral nuttig voor het bestuderen van causale relaties tussen blootstellingen, zoals plasmametabolieten, en uitkomsten zoals ATI. In tegenstelling tot conventionele observationele studies, die gevoelig zijn voor confounding en omgekeerde causaliteit, gebruikt MR genetische varianten als IV's om sterkere causale inferenties te bieden. Een dieper begrip van hoe plasmametabolieten de gezondheid van pezen beïnvloeden is essentieel om therapeutische strategieën te bevorderen en de herstelresultaten te verbeteren.

Voortbouwend op deze vooruitgang onderzoekt de huidige studie de causale rol van plasmametabolieten in ATI met behulp van MR. Genetische variaties die geassocieerd zijn met metabolietniveaus werden geanalyseerd om specifieke metabolieten te identificeren die verband houden met ATI-progressie en herstel. Daarnaast werden kandidaatmetabolieten, zoals 5,6-dihydrothymine (Dih) en hydroxyasparagine (Hyd), experimenteel gevalideerd in diermodellen om hun effecten op het verloop en genezingsproces van ATI te verduidelijken.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Ethische goedkeuring en toestemming om deel te nemen

Alle dierproevenontwerpen werden strikt uitgevoerd volgens de Laboratoriummaatregelen voor Dierenbeheer van de provincie Ningxia en goedgekeurd door de Ethische Commissie van het Volksziekenhuis van de Autonome Regio Ningxia Hui, Ningxia Medische Universiteit.

Studieontwerp

Deze studie onderzocht de causale relaties tussen 1.400 plasmametabolieten en ATI met behulp van een MR-methode met twee steekproeven. Om de geldigheid van IV's in causale inferentie te waarborgen, moeten drie cruciale aannames worden vervuld: (1) de genetische variatie is direct geassocieerd met de blootstelling van belang; (2) de genetische variatie niet wordt verstoord door mogelijke verwarrende factoren tussen de blootstelling en het resultaat; en (3) de genetische variatie beïnvloedt het resultaat uitsluitend via de blootstelling en niet via alternatieve routes.

Bronnen van GWAS-gegevens voor ATI

De gegevens voor de Genome-Wide Association Study (GWAS) op ATI zijn afkomstig uit het IEU-OpenGWAS-project (https://gwas.mrcieu.ac.uk/), waarbij specifiek gebruik werd gemaakt van de dataset ebi-a-GCST90018895. De GWAS-analyse omvatte 357.658 personen van Europese afkomst, bestaande uit 7.746 gevallen en 349.912 controles. Na kwaliteitscontroleprocedures werden in totaal 19.072.056 single-nucleotide polymorfismen (SNP's) geïdentificeerd. Kwaliteitscontroleprocedures omvatten het verwijderen van SNP's met een lichte allelfrequentie<0,01, Hardy-Weinberg evenwicht P<1×10-⁶ en genotype roepfrequentie <0,95. De populatiestratificatie werd beoordeeld met behulp van principal component analyse, en de genomische inflatiefactor (λ) werd berekend om systematische bias te evalueren.

GWAS-gegevensbronnen voor plasmametabolieten

De Exposure Factors-dataset bevat GWAS-gegevens voor 1.400 plasmametabolieten, bestaande uit 1.091 metabolietniveaus en 309 metabolietverhoudingen, zoals gecatalogiseerd in de GWAS-database (https://www.ebi.ac.uk/gwas/studies/GCST90199621-90201020). MR-analyses waren beperkt tot personen van Europese afkomst. Gedetailleerde informatie over de dataset is te vinden in Aanvullende Materiaal, Tabel S1.

Selectie van IV's

Bij de identificatie van IV's werd de drempel voor statistische significantie van plasmametaboliet-geassocieerde 19.072.056 SNP's vastgesteld op P < 1 × 10-5. Om de onafhankelijkheid van de analyses te waarborgen, werden SNP's geaggregeerd met behulp van drempels van r2 = 0,001 en kilobase (kb) = 10.000, waarbij 19.037.213 SNP's met r2 > 0,001 en kb < 10.000 werden uitgesloten om potentiële effecten van Linkage Disequilibrium (LD) te elimineren. SNP's met F-statistische waarden < 10 werden uitgesloten van verdere analyses vanwege hun hoge heterogeniteit, terwijl 34.843 SNP's die aan de criteria voldeden als geldige IV's werden behouden.

Dieren en experimenteel ontwerp

Alle dierproeven werden uitgevoerd in strikte overeenstemming met de Laboratoriummaatregelen voor het beheer van dieren van de provincie Ningxia en goedgekeurd door de ethische commissie van het Volksziekenhuis van de Autonome Regio Ningxia Hui, Ningxia Medische Universiteit. Mannelijke BALB/c-muizen (8 weken oud, SPF-kwaliteit) werden gekocht bij Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd. (Beijing, China). De muizen werden een week lang geacklimatiseerd in een gecontroleerde omgeving (temperatuur 23 ± 1°C, luchtvochtigheid 60 ± 10%), met vrije toegang tot standaard voedsel en water, en een 12 uur licht/12 uur donkercyclus. Na de acclimatie werd een model voor een murien peesblessure opgesteld. Na een longitudinale huidincisie werd de linker achillespees blootgelegd en werd een gestandaardiseerde transversale transsectie met volledige dikte uitgevoerd in het midden van de pees met behulp van een microchirurgische schaar. De pees werd onmiddellijk gerepareerd met 6-0 niet-absorberbare hechtingen onder een stereomicroscoop. Direct na de operatie werd röntgenbeeldvorming uitgevoerd om de succesvolle vestiging van het ATI-muismodel te verifiëren. Tegelijkertijd werden röntgenbeelden voor de controlegroep gemaakt onder identieke anesthesieomstandigheden om te dienen als een blancocontrole-28. Alle procedures werden uitgevoerd onder algehele anesthesie, geïnduceerd door intraperitoneale injectie van pentobarbital natrium (50 mg·kg-1), en postoperatieve analgesie werd buprenorfine (0,05 mg·kg-1, subcutaan) elke 12 uur voor 48 uuren 29 uur toegediend. Na succesvolle inductie van het model werden muizen willekeurig toegewezen aan de volgende groepen: controle-, model- en behandelingsgroepen die Dih kregen bij lage (10 mg·kg-1, LD-Hyd), middelhoge (30 mg·kg-1, MD-Hyd) en hoge (50 mg·kg-1, HD-Hyd) doses. Berekening van steekproefgrootte: Op basis van voorlopige gegevens die een verbetering van 40% in genezingsscores bij metabolietbehandeling (SD = 15%) aantoonden, werd vastgesteld dat n = 6 muizen per groep 80% kracht zouden leveren om dit verschil te detecteren bij α = 0,05 (tweezijdig). Randomisatie werd uitgevoerd met behulp van computergegenereerde willekeurige nummers door een onderzoeker die blind was voor groepstoewijzing. Experimentele procedures en uitkomstbeoordelingen werden uitgevoerd door onderzoekers die blind waren voor de groepstoewijzingen30.

Hematoxyline- en eosinekleuring (HE)

Op dag 7 na de behandeling werden muizen geëuthanaseerd onder diepe anesthesie, geïnduceerd door intraperitoneale injectie van pentobarbital natrium (100 mg·kg-1), waarbij volledige reflexverlies werd gegarandeerd vóór de weefselverzameling volgens de regel. Het beschadigde achillespeesweefsel, inclusief een klein deel van het omliggende zachte weefsel, werd zorgvuldig geoogst en verwerkt. Een stuk huid van 15 mm2 , gecentreerd op de achillespees, werd verwijderd. De huidmonsters werden gefixeerd in 4% paraformaldehydeoplossing bij kamertemperatuur gedurende 48 uur, gevolgd door dehydratie, paraffine-inbedding en het doorsnijden van 5 μm. Structurele kenmerken van de wondhuid, granulatieweefselvorming en ontstekingscelinfiltratie werden geëvalueerd met H&E-kleuring. Voor histologische evaluatie werden secties gedeparaffiniseerd in xyleen (2 × 10 min), gerehydrateerd met gegradueerd ethanol (100%, 95%, 85% en 75%, 5 minuten elk) en afgespoeld in gedestilleerd water. De preparaten werden 5 minuten gekleurd met Harris-hematoxyline, 5 minuten afgespoeld in stromend kraanwater, 10 seconden gedifferentieerd in 1% zuur alcohol, en 30 seconden geblauwd in 0,2% ammoniakwater. Na het wassen werden de delen 2 minuten lang tegengekleurd met 0,5% eosine, gevolgd door uitdroging, schoonmaken en monteren. Betrouwbaarheid van histologische beoordeling: Om meetnauwkeurigheid te waarborgen, werd 20% van de willekeurig geselecteerde steekproeven onafhankelijk gescoord door twee geblindeerde waarnemers. De betrouwbaarheid tussen beoordelaars werd beoordeeld met behulp van de intraclass correlatiecoëfficiënt (ICC). De ICC voor collageenorganisatie was 0,89 (95% BI: 0,81-0,94), voor weefseldegeneratie 0,92 (95% BI: 0,86-0,96) en voor inflammatoire celinfiltratie 0,87 (95% BI: 0,78-0,93), wat wijst op uitstekende betrouwbaarheid. De betrouwbaarheid binnen de beoordelaar werd beoordeeld door één waarnemer 15% van de steekproeven na een interval van twee weken opnieuw te laten scoren, wat resulteerde in ICC-waarden > 0,85 voor alle parameters31.

Western blot-analyse

De eiwitexpressie werd geanalyseerd met Western blot. Eiwitkwantificatie werd uitgevoerd met behulp van de BCA-eiwitconcentratie-assaykit. Gelijke hoeveelheden eiwit werden gescheiden door 10% natriumdodecylsulfaat-polyacrylamide gelelektroforese (SDS-PAGE) en overgebracht naar een nitrocellulosemembraan. Het membraan werd 1 uur geblokkeerd met 5% magere melk in Tris-gepufferde zoutoplossing met 0,1% Tween-20 bij kamertemperatuur. Membranen werden 's nachts geïncubeerd bij 4°C met primaire antilichamen voor VEGFA (1:1000, ab46154), TGF-β1 (1:1000, 21898-1-AP), IL-6 (1:1000, 26404-1-AP) en TNF-α (1:1000, 17590-1-AP). Na drie washes met PBS werden de membranen 90 minuten bij kamertemperatuur geïncubeerd met secundaire antilichamen (1:5000). Eiwitbanden werden gevisualiseerd met behulp van de ECL chemiluminescence substraatkit (zie Materiaaltabel voor details) volgens het protocol van de fabrikant en geanalyseerd met ImageJ-software (versie 1.8; Nationale Instituten voor Gezondheid). GAPDH (10494-1-AP) werd gebruikt als laadregeling.

Statistische analyse

Statistische analyses werden uitgevoerd met behulp van R Studio-software. De TwoSampleMR- en ieugwasr R-pakketten werden gebruikt om blootstellingsgegevens te extraheren en geldige IV's te screenen, waaronder klontering (r² < 0,001, venstergrootte = 10.000 kb), allelharmonisatie en F-statistische berekening (F = β²_exposure/SE²_exposure). Voor MR- en reverse MR-analyses maakten we gebruik van de VariantAnnotation-, gwasglue- en TwoSampleMR-pakketten, die robuuste causale inferentie- en gevoeligheidstests mogelijk maakten. Er werd een MR-studie met twee monsters uitgevoerd om plasmametaboliet-gerelateerde eigenschappen te onderzoeken. Vijf verschillende analytische benaderingen werden toegepast: Inverse-Variantie Wegen (IVW), MR-Egger, Gewogen Median (WM), Eenvoudige Modus en Gewogen Modus. De primaire resultaten werden bepaald met de IVW-methode, met statistische significantie ingesteld op P < 0,01. De IVW-methode kent gewichten toe om de impact van variatie te minimaliseren en levert nauwkeurigere effectschattingen op. MR-Egger-regressie werd gebruikt om pleiotropie te evalueren (het fenomeen waarbij genen meerdere eigenschappen beïnvloeden), waarbij horizontale pleiotropie werd beoordeeld aan de hand van de P-waarde van het intercept (P > 0,05), en heterogeniteit werd getest met de IVW-methode gecombineerd met MR-Egger's Q-statistiek. Er werd geen significante heterogeniteit waargenomen toen P > 0,05. Meervoudige testcorrectie werd toegepast met de Benjamini-Hochberg false discovery rate (FDR) methode, waarbij FDR < 0,05 als significant werd beschouwd. Heterogeniteit werd gekwantificeerd met behulp van de Q-statistiek van Cochran en de I2-statistiek , waarbij I2 > 50% aanzienlijke heterogeniteit aangaf. Voor I2-waarden werden 95% betrouwbaarheidsintervallen berekend volgens de methode beschreven door Ioannidis et al. Gevoeligheidsanalyses werden uitgevoerd door elke SNP sequentieel te verwijderen om de invloed van individuele varianten op de algehele resultaten te evalueren.

Om de meetbetrouwbaarheid te beoordelen, werden test-hertestanalyses uitgevoerd op sleuteluitkomstmaten (WB-kwantificatie en histologische scoring) met behulp van de intraclass correlatiecoëfficiënten (ICC's). De ICC werd ingezet om de betrouwbaarheid tussen beoordelaars en intra-beoordelaars van Western Blot (WB) kwantificering en histologische scoring te beoordelen. De criteria werden als volgt geïnterpreteerd: onder 0,50 (slecht), tussen 0,50 en 0,75 (gematigd), tussen 0,75 en 0,90 (goed), en boven 0,90 (uitstekend)32. Drie onafhankelijke onderzoekers evalueerden blindelings dezelfde set monsters op twee tijdstippen met een week uit elkaar. ICC's voor de kwantificatie van Western blot van IL-6, TNF-α, VEGFA en TGF-β varieerden van 0,87 tot 0,93, wat wijst op uitstekende betrouwbaarheid. ICC's voor histologische scoring waren 0,85 voor collageenorganisatie en 0,82 voor neovascularisatiebeoordeling.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Causale relatie tussen 1.400 plasmametabolieten en ATI's

Er werd een uitgebreide MR-analyse uitgevoerd van 1.400 plasmametabolieten om hun oorzakelijke effecten op ATI te beoordelen. De primaire analyse maakte gebruik van de IVW-benadering, met strikte controles voor LD en potentiële confounders, om metabolieten te identificeren die een significante invloed hebben op de progressie en het herstel van ATI. Figuur 1 ...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Deze studie voerde een uitgebreide MR-analyse uit om de causale relaties tussen 1.400 plasmametabolieten en ATI te onderzoeken. Negentien plasmametabolieten werden geïdentificeerd als significant geassocieerd met ATI-progressie en genezing, waarbij Dih en Hyd belangrijke factoren waren die de ATI-uitkomsten beïnvloedden. Latere in vivo experimenten bevestigden de gunstige rol van deze metabolieten bij het bevorderen van peesgenezing. Behandeling met Dih en Hyd resulteerde in sig...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs verklaren geen concurrerende belangen.

Dankbetuigingen

Klinisch toepassingsonderzoek naar de beoordeling van de darmflora en stapsgebonden behandeling van chronische zweren bij diabetische voeten, Yinchuan Science and Technology Innovation Project (2024SF005). Toepassingsonderzoek naar de effecten van verschillende chirurgische methoden op de bloedtoevoer van peritendaal weefsel en biomechanische reparatie van acute gesloten achillespeesruptuur onder het Ningxia Key Research and Development Program (2019BEG3036).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
5,6-DihydrothymineReagens696-04-8Reagens
BCA Protein Assay KitReagensP0012Reagens
ECL Chemiluminescence Substrate KitReagensP0018SReagens
GAPDH AntibodyAntilichaam10494-1-APAntilichaam
Hematoxyline en Eosine Staining KitReagensG1120Reagens
HydroxyasparagineReagensH1126Reagens
IL-6 AntibodyAntilichaam26404-1-APAntilichaam
ImageJsoftwareversie 1.8software
Nitrocellulose MembraneVerbruiksartikelHATF08130Verbruiksartikel
ParaformaldehydeReagensP0099-3LReagens
RStudiosoftwareversie 4.5.2software
SDS-PAGE Gel Preparation KitReagensP0012ACReagens
Sodium PentobarbitalAnestheticum200-323-9Anestheticum
TGF-β1 AntibodyAntilichaam21898-1-APAntilichaam
TNF-α AntibodyAntilichaam17590-1-APAntilichaam
VEGFA AntibodyAntilichaamab46154Antilichaam
X-ray systeemInstrumentMX-20Instrument

Referenties

  1. Kvist, M. Achilles tendon injuries in athletes. Sports Med. 18 (3), 173-201 (1994).
  2. Järvinen, T. A., et al. Achilles tendon injuries. Curr Opin Rheumatol. 13 (2), 150-155 (2001).
  3. Barfod, K. W. Achilles tendon rupture; assessment of nonoperative treatment. Dan Med J. 61 (4), B4837(2014).
  4. Buddecke, D. Jr Acute Achilles Tendon Ruptures. Clin Podiatr Med Surg. 38 (2), 201-226 (2021).
  5. Bullock, M., Pierson, Z. Achilles Tendon Rupture. Clin Podiatr Med Surg. 41 (3), 535-549 (2024).
  6. Oliva, F., et al. Influence of Exercise on Musculoskeletal Disorders Associated with Gut Microbiota: A Narrative Review. MLTJ. 13 (1), (2023).
  7. Caldwell, J. E., Vosseller, J. T. Maximizing Return to Sports After Achilles Tendon Rupture in Athletes. Foot Ankle Clin. 24 (3), (2019).
  8. King, C. M., Vartivarian, M. Achilles Tendon Rupture Repair: Simple to Complex. Clin Podiatr Med Surg. 40 (1), 75-96 (2023).
  9. Kraeutler, M. J., Purcell, J. M., Hunt, K. J. Chronic Achilles Tendon Ruptures. Foot Ankle Int. 38 (8), 921-929 (2017).
  10. Vascellari, A., et al. Orthobiologics Injection Therapies in the Treatment of Muscle and Tendon Disorders in Athletes: Fact or Fake. MLTJ. 14 (2), (2024).
  11. Winnicki, K., Ochała-Kłos, A., Rutowicz, B., Pękala, P. A., Tomaszewski, K. A. Functional anatomy, histology and biomechanics of the human Achilles tendon - A comprehensive review. Ann Anat. 229, 151461(2020).
  12. Strom, A. C., Casillas, M. M. Achilles tendon rehabilitation. Foot Ankle Clin. 14 (4), 773-782 (2009).
  13. Sun, J. Y., Li, C., Du, F. Y. Adenylate cyclase activates the cAMP signalling pathway to enhance platelet-rich plasma-treated Achilles tendon disease,a theoretical bioinformatics-based study. World Journal of Orthopedics. 15 (2), 192-200 (2024).
  14. Restuccia, G., Varchetta, G. E. Platelet rich plasma (PRP) in the surgical treatment of Haglund's syndrome: the use of PRP membranes as an intra-operative local adjuvant. medicinski glasnik. 21 (1), 196-202 (2024).
  15. Wang, K., Cheng, L., He, B. Therapeutic effects of asperosaponin VI in rabbit tendon disease. Regen Ther. 20, 1-8 (2022).
  16. Shen, H., Lane, R. A. Extracellular Vesicles From Primed Adipose-Derived Stem Cells Enhance Achilles Tendon Repair by Reducing Inflammation and Promoting Intrinsic Healing. Stem Cells. 41 (6), 617-627 (2023).
  17. Bisciotti, G. N., et al. Achilles Tendon Repair after Tenorraphy Imaging and the Doughnut Metaphor. Int J Environ Res Public Health. 20 (11), (2023).
  18. Roh, C. Metabolomics in Radiation-Induced Biological Dosimetry: A Mini-Review and a Polyamine Study. Biomolecules. 8 (2), (2018).
  19. Malinowska, J. M., et al. Derivation of metabolic point of departure using high-throughput in vitro metabolomics: investigating the importance of sampling time points on benchmark concentration values in the HepaRG cell line. Arch Toxicol. 97 (3), 721-735 (2023).
  20. He, L., et al. Causal Associations of Obesity With Achilles Tendinopathy: A Two-Sample Mendelian Randomization Study. Front Endocrinol (Lausanne). 13, 902142(2022).
  21. Koike, Y., et al. Genetic insights into ossification of the posterior longitudinal ligament of the spine. Elife. 12, (2023).
  22. Birney, E. Mendelian Randomization. Cold Spring Harb Perspect Med. 12 (4), (2022).
  23. Burgess, S., Thompson, S. G. Interpreting findings from Mendelian randomization using the MR-Egger method. Eur J Epidemiol. 32 (5), 377-389 (2017).
  24. Georgakis, M. K., Gill, D. Mendelian Randomization Studies in Stroke: Exploration of Risk Factors and Drug Targets With Human Genetic Data. Stroke. 52 (9), 2992-3003 (2021).
  25. Ho, J., Mak, C. C. H., Sharma, V., To, K., Khan, W. Mendelian Randomization Studies of Lifestyle-Related Risk Factors for Osteoarthritis: A PRISMA Review and Meta-Analysis. Int J Mol Sci. 23 (19), (2022).
  26. Larsson, S. C., Butterworth, A. S., Burgess, S. Mendelian randomization for cardiovascular diseases: principles and applications. Eur Heart J. 44 (47), 4913-4924 (2023).
  27. Sekula, P., Del Greco, M. F., Pattaro, C., Köttgen, A. Mendelian Randomization as an Approach to Assess Causality Using Observational Data. J Am Soc Nephrol. 27 (11), 3253-3265 (2016).
  28. Zhao, X., Wang, Q., Wang, W., Lu, S. Increased neutrophil extracellular traps caused by diet-induced obesity delay fracture healing. Faseb j. 38 (20), e70126(2024).
  29. Lin, K., et al. Exosomal miR-212-5p promotes tendon repair via targeting FOXO1 to activate PP1A/YAP1 signaling. Commun Biol. 8 (1), 1798(2025).
  30. Migliorini, F., et al. Management of transient bone osteoporosis: a systematic review. Br Med Bull. 147 (1), 79-89 (2023).
  31. Napoli, R., et al. Cross Cultural Adaptation and Multi Centric Validation of The Italian Version of The Tegner Activity Scale. Muscle Ligaments Tendons J. , (2023).
  32. Koo, T. K., Li, M. Y. A Guideline of Selecting and Reporting Intraclass Correlation Coefficients for Reliability Research. J Chiropr Med. 15 (2), 155-163 (2016).
  33. Hafez, A. E., Ismail, F. M., Abdelhakeem, M. A., Ragaee, S., Soliman, S. A. Musculoskeletal Ultrasound Changes in Chronic Plantar Fascia after Treatment with Platelet Rich Plasma Compared to Steroid. Muscle Ligaments Tendons J. 13 (01), 126(2023).
  34. Xiangyang, Y., et al. Sirtuin1 mitigation of calcium oxalate nephropathy via enhancing itaconate abundance through reduction of histone trimethylation. Clin Transl Med. 15 (8), (2025).
  35. Roland, K., et al. Ceramides in cardiovascular disease: emerging role as independent risk predictors and novel therapeutic targets. Cardiovasc Res. 121 (9), (2025).
  36. Kathryn, A. M., Bernard, D. K., Anna, N. Circulating ceramides as biomarkers of cardiovascular disease: Evidence from phenotypic and genomic studies. Atherosclerosis. 327 (0), (2021).
  37. Kuliś, S., Pietraszewski, P., Callegari, B. Characteristics of Post-Exercise Lower Limb Muscle Tremor Among Speed Skaters. Sensors (Basel). 25 (14), (2025).
  38. Tuniyazi, M., et al. Changes of microbial and metabolome of the equine hindgut during oligofructose-induced laminitis. BMC Vet Res. 17 (1), 11(2021).
  39. Dobritzsch, D., et al. β-Ureidopropionase deficiency due to novel and rare UPB1 mutations affecting pre-mRNA splicing and protein structural integrity and catalytic activity. Mol Genet Metab. 136 (3), 177-185 (2022).
  40. Nakajima, Y., et al. Dihydropyrimidinase deficiency in four East Asian patients due to novel and rare DPYS mutations affecting protein structural integrity and catalytic activity. Mol Genet Metab. 122 (4), 216-222 (2017).
  41. Hirano, M., et al. Mitochondrial neurogastrointestinal encephalomyopathy (MNGIE): Position paper on diagnosis, prognosis, and treatment by the MNGIE International Network. J Inherit Metab Dis. 44 (2), 376-387 (2021).
  42. Mukherjee, A., et al. Adipocytes reprogram cancer cell metabolism by diverting glucose towards glycerol-3-phosphate thereby promoting metastasis. Nat Metab. 5 (9), 1563-1577 (2023).
  43. Tighanimine, K., et al. A homoeostatic switch causing glycerol-3-phosphate and phosphoethanolamine accumulation triggers senescence by rewiring lipid metabolism. Nat Metab. 6 (2), 323-342 (2024).
  44. Blackwell, L. F., Cooke, D. G., Brown, S. The Use of Estrone-3-Glucuronide and Pregnanediol-3-Glucuronide Excretion Rates to Navigate the Continuum of Ovarian Activity. Front Public Health. 6, 153(2018).
  45. Chen, J., et al. Quantitation of serum pregnanediol-3-glucuronide level in different endocrine statuses by LC-MS/MS. J Pharm Biomed Anal. 184, 113171(2020).
  46. Usala, S. J., Alliende, M. E., Trindade, A. A. Algorithms with Area under the Curve for Daily Urinary Estrone-3-Glucuronide and Pregnanediol-3-Glucuronide to Signal the Transition to the Luteal Phase. Medicina (Kaunas). 58 (1), (2022).
  47. Feng, J., Huang, Z., Cui, C., Zhao, M., Feng, Y. Synthesis, taste characteristics and taste mechanism of N-lactoyl leucine from soy sauce using sensory analysis and UPLC-MS/MS. Food Chem. 454, 139670(2024).
  48. Fernandes Silva, L., Hokkanen, J., Vangipurapu, J., Oravilahti, A., Laakso, M. Metabolites as Risk Factors for Diabetic Retinopathy in Patients With Type 2 Diabetes: A 12-Year Follow-up Study. J Clin Endocrinol Metab. 109 (1), 100-106 (2023).
  49. Ito, T., Tono, M., Kitaura, Y., Hemmi, H., Yoshimura, T. Urinary l-erythro-β-hydroxyasparagine-a novel serine racemase inhibitor and substrate of the Zn2+-dependent d-serine dehydratase. Biosci Rep. 41 (4), (2021).
  50. Xia, Y., et al. N(γ) -Hydroxyasparagine: A Multifunctional Unnatural Amino Acid That is a Good P1 Substrate of Asparaginyl Peptide Ligases. Angew Chem Int Ed Engl. 60 (41), 22207-22211 (2021).
  51. Schmidt, C., et al. Lactoyl leucine and isoleucine are bioavailable alternatives for canonical amino acids in cell culture media. Biotechnol Bioeng. 118 (9), 3395-3408 (2021).
  52. Castro, B. M., Prieto, M., Silva, L. C. Ceramide: a simple sphingolipid with unique biophysical properties. Prog Lipid Res. 54, 53-67 (2014).
  53. Cogolludo, A., Villamor, E., Perez-Vizcaino, F., Moreno, L. Ceramide and Regulation of Vascular Tone. Int J Mol Sci. 20 (2), (2019).
  54. Zhang, J., Wei, L., Tan, H., Pang, W. Gut microbiota and postpartum depression: a Mendelian randomization study. Front Psychiatry. 15, 1282742(2024).
  55. Liu, Y., et al. The risk of Alzheimer's disease and cognitive impairment characteristics in eight mental disorders: A UK Biobank observational study and Mendelian randomization analysis. Alzheimers Dement. 20 (7), 4841-4853 (2024).
  56. Chi, J., et al. Causal effects for neurodegenerative diseases on the risk of myocardial infarction: a two-sample Mendelian randomization study. Aging (Albany NY). 16 (11), 9944-9958 (2024).
  57. Tan, Z., Hong, J., Sun, A., Ding, M., Shen, J. Causal effects of circulating lipids and lipid-lowering drugs on the risk of urinary stones: a Mendelian randomization study. Front Endocrinol (Lausanne). 14, 1301163(2023).
  58. Kitsios, G. D., Thaler, D. E., Kent, D. M. Potentially large yet uncertain benefits: a meta-analysis of patent foramen ovale closure trials. Stroke. 44 (9), 2640-2643 (2013).
  59. Sung, C. W., et al. Prediction of high-risk emergency department revisits from a machine-learning algorithm: a proof-of-concept study. BMJ Health Care Inform. 31 (1), (2024).
  60. Lidi, L., Jennifer, H., Daniel, J. L., Hui, B. S. Advances of stem cell based-therapeutic approaches for tendon repair. J Orthop Translat. 9 (0), (2018).
  61. Daibang, N., Yiqin, Z., Wang, W., Jianying, Z., James, H. -C. W. Mechanical Overloading Induced-Activation of mTOR Signaling in Tendon Stem/Progenitor Cells Contributes to Tendinopathy Development. Front Cell Dev Biol. 9 (0), (2021).
  62. Mathieu, M., et al. Trigonelline is an NAD(+) precursor that improves muscle function during ageing and is reduced in human sarcopenia. Nat Metab. 6 (3), (2024).
  63. Yoshida, M., Funasaki, H. Optimal Platelet Concentration for The Therapeutic Effect of Autologous Neutrophil-Reduced Platelet Rich Plasma in A Rat Model of Achilles Tendinopathy. Muscles, Ligaments & Tendons Journal (MLTJ). 10 (4), (2020).
  64. Kuan-Ju, C., Li-Cheng, C., Yi-No, K., Chiehfeng, C. Autologous Stem Cell Therapy for Chronic Lower Extremity Wounds: A Meta-Analysis of Randomized Controlled Trials. Cells. 10 (12), (2021).
  65. Gupta, S., Paliczak, A., Delgado, D. Evidence-based indications of platelet-rich plasma therapy. Expert Rev Hematol. 14 (1), 97-108 (2021).
  66. Impellizzeri, F. M., Bizzini, M. Systematic review and meta-analysis: A primer. International Journal of Sports Physical Therapy. 7 (5), 493-503 (2012).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Meer artikelen verkennen

Weefselherstelgenetische gegevensinstrumentele variabelenWestern blotontstekingsmarkerspeesweefsel van muizencausale verbanden
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.