Therapeutische effecten van Gualou Guizhi Antispasmodische Granules op spasticiteit en PANoptose in een ratmodel van ruggenmergletsel

Samenvatting

Deze studie evalueert de effecten van Gualou Guizhi Antispasmodic Granules (GLGZ) op spasticiteit veroorzaakt door ruggenmergletsel (SCI) met behulp van gedrags-, biomechanische, beeldvormings- en histologische methoden en onderzoekt PANoptose-gerelateerde mechanismen.

Samenvatting

Spierspasticiteit na een ruggenmergletsel (SCI) heeft een ernstige invloed op de kwaliteit van leven, met beperkte effectieve behandelingen. Gualou Guizhi Antispasmodic Granules (GLGZ), een in het ziekenhuis ontwikkelde traditionele Chinese medicijnformulering (TCM), kan spasmen verlichten. Deze studie had als doel de effectiviteit van GLGZ bij SCI-geïnduceerde spasticiteit en de associatie met PANoptose (een nieuw geprogrammeerde celdood met apoptose, necroptose en pyroptose) te beoordelen.

Mannelijke Sprague-Dawley-ratten van 180-200 g werden gebruikt. SCI werd opgewekt via de Allen weight-drop methode. De succesvolle modelratten werden willekeurig toegewezen aan een modelgroep of een van de GLGZ-dosisgroepen: hoog, gemiddeld of laag. Schijnratten ondergingen een laminectomie zonder ruggenmergletsel. De interventies duurden 4 weken. Na de interventie werd de motorische functie van ledematen geëvalueerd met behulp van de Basso-Beattie-Bresnahan (BBB) schaal. De stijfheid van de femorale spier werd beoordeeld met behulp van ultrageluids-shear wave elastografie (SWE), terwijl de integriteit van het ruggenmerg werd vastgesteld met magnetische resonantiebeeldvorming (MRI). Hematoxyline-eosine (HE), Nissl en Luxol snelle blauwe kleuring werden uitgevoerd om histopathologische veranderingen te observeren. Multiplexe immunofluorescentiekleuring werd gebruikt om apoptose-geassocieerd speck-achtig eiwit te labelen met een CARD (ASC, groen), Caspase-8 (oranje) en receptor-interagerende serine/threonine-eiwitkinase 3 (RIPK3, geel) om PANoptosis te beoordelen.

GLGZ verbeterde de BBB-scores dosisafhankelijk per dosis: nep (21,00 ± 0,00), model (5,8 ± 1,1), hoge dosis (10,6 ± 1,3), middelmatige dosis (8,5 ± 1,2), lage dosis (7,1 ± 1,0). SWE toonde verminderde spierstijfheid: model (6,68 ± 0,74 m/s), hoge dosis (2,19 ± 0,36 m/s, P < 0,001), middelmatige dosis (3,04 ± 0,45 m/s, P = 0,002), lage dosis (4,08 ± 0,65 m/s, P = 0,031) versus model. In vergelijking met de modelgroep (3,65 ± 1,03 mm²) verminderde GLGZ dosisafhankelijk de grootte van de ruggenmergleesie in alle doseringsgroepen (alle P < 0,05), (1,33 ± 0,79 mm² in hoge doses, 1,94 ± 0,67 mm² in middeldosering, 2,50 ± 0,79 mm² in lage dosisgroep. Histologie toonde aan dat GLGZ geconserveerde neuronen en myelineherstel bevorderde. GLGZ-dosisafhankelijke verminderde ASC-, Caspase-8- en RIPK3-expressie.

Inleiding

Spierspasme is een veelvoorkomende complicatie van ruggenmergletsel (SCI) en heeft een ernstige invloed op de kwaliteit van leven van patiënten. Het pathologische proces omvat onder andere initiële mechanische beschadiging, secundaire ontsteking, oxidatieve stress, apoptose en verstoorde zenuwregeneratie. Huidige behandelingen (chirurgische decompressie, farmacotherapie, revalidatie) hebben beperkte effectiviteit, waarbij langdurige medicatie bijwerkingen veroorzaakt zoals medicijnresistentie³. Daarom is het onderzoeken van nieuwe mechanismen en behande....

Protocol

Diermodellering
Deze studie werd goedgekeurd door de ethische commissie van het Tweede Geaffilieerde Ziekenhuis van de Fujian Universiteit voor Traditionele Chinese Geneeskunde (Goedkeuringsnummer FJPSPH-IAEC2024114) en uitgevoerd in overeenstemming met de richtlijnen voor dierenwelzijn. Mannelijke Sprague-Dawley-ratten van 180-200 g werden onder gecontroleerde omstandigheden gehuisvest bij 22-26°C en 40-70% luchtvochtigheid. SCI werd opgeroepen door de Allen weight-drop methode¹⁰: 3-4% isoflurane inhalatie-anesthesie, middenlijnincisie bij T10, blootstelling van T9-T11 segmenten, laminectom....

Resultaten

BBB-score
De BBB-score van de schijngroep was 21,00 ± 0,00, significant hoger dan die van het model (5,8 ± 1,1, P < 0,001). GLGZ-dosisafhankelijke verhoogde BBB-scores: hoge dosis (10,6 ± 1,3, P < 0,001), middelmatige dosis (8,5 ± 1,2, P = 0,003), lage dosis (7,1 ± 1,0, P = 0,028) versus model (Figuur 1).

Schuifgolf-elastografie-analyse van rectus femoris stijfheid
Schuifgolfelastografie (SW.......

Discussie

Deze studie evalueerde systematisch de verbeterende effecten van GLGZ op spierspasticiteit bij ratten met SCI en onderzocht de relatie met neuroprotectie en PANoptose. De resultaten gaven aan dat GLGZ de BBB-scores kon verbeteren en spierstijfheid bij SCI-ratten op dosisafhankelijke wijze kon verminderen. De studie vond ook dat het werkingsmechanisme van GLGZ mogelijk verband houdt met neuroprotectie, myelineherstel en remming van PANoptosis. Momenteel verlichten klinische farmacologisch.......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
Anhydrous ethanol	240403A1		Dehydratie
Anhydrous ethanol	241101A1		Kleuren
Antifluorescente verzwakte filmcoatingagent (met DAPI)	MA0221		Immunofluorescencekleuring
ASC Antilichaam	Bs-6741R		PANoptoseanalyse (1:300)
Caspase-8 Antilichaam	13423-1-AP		PANoptoseanalyse (1:400)
Fluorescentiemicroscoop	NIKON		ECLIPSECi-L
Volautomatische digitale glazen diascanner	GCell-60		Diascanner
Hematoxyline-Eosinekit	R23718		Hematoxyline-Eosine (HE) Kleuring
Beeldanalysesoftware	NIH		ImageJ 1.53k
Luxol Fast Blue	R23193		Luxol Fast Blue-Cresyl Violet Kleuring
MRI-scanner	Bruker		7.0T
Meervoudige fluorescentiekleuringskit	240522		Immunofluorescencekleuring
Myeloïde kleuringskit	G3245		Myeloïde kleuring
Neutrale  balsem	MB9899		Montage na kleuring
Nissl kleuringskit	R23093		Nisslkleuring
RIPK3 Antilichaam	Bs-3551R		PANoptoseanalyse (1:400)
SPSS 22.0			statistisch analysesoftware
Sprague-Dawley-ratten	Hangyi Biotechnology bedrijf in Fuzhou
Wijnsteenzuur, natriumtripolyfosfaat	10019418		Kleuren
Ultrasoundsysteem	SIEMENS Acuson		Lineaire array sonde (18L6)
XYleen	240904A2		Kleuren