Het testen van de Fysiologische Belemmeringen voor virale transmissie in Bladluizen Met behulp van micro-injectie

Samenvatting

Bladluizen zijn effectief zenders van plantenvirussen. Bladluis micro-injectie van het virus, de procedure zullen wij tonen u vandaag, is een techniek waarmee onderzoekers van het virus te injecteren direct in de hemocoel van de bladluis, het omzeilen van de darm, een van de twee grootste barrières voor overdracht van het virus in een circulative manier. Dezelfde techniek wordt ook gebruikt om dsRNA injecteren RNAi.

Samenvatting

Aardappel loafroll virus (PLRV), uit de familie Luteoviridae infecteert nachtschadefamilie planten. Het wordt overgebracht door bladluizen, in de eerste plaats, de groene perzikluis. Wanneer een niet-geïnfecteerde bladluis voedt zich met een besmette plant hem contracten van het virus door de plant floëem. Eenmaal ingenomen, moet het virus uit het insect darm aan de hemolymfe (het insect bloed) en dan moeten door de speekselklier, om terug te worden doorgegeven aan een nieuwe fabriek. Een luis kan tot verschillende virussen bij het kauwend op een plant, echter slechts een klein deel zal door de darm en de speekselklier, de twee belangrijkste belemmeringen voor verzending naar meer planten te infecteren. In het lab gebruiken we physalis planten om PLRV transmissie te bestuderen. In deze host, zijn symptomen gekenmerkt door groeiachterstand en intraveneuze chlorose (geel worden van de bladeren tussen de nerven met de aders overgebleven groen). De video die we presenteren demonstreert een methode voor het uitvoeren van bladluis micro-injectie op insecten die geen vector PLVR virussen en test of de darm is virale transmissie te voorkomen. De video die we presenteren demonstreert een methode voor het uitvoeren van micro-injectie Bladluis op insecten die geen vector PLVR virussen en test of de darm of speekselklier is virale transmissie te voorkomen.

Protocol

1. Om te testen of een luis is in staat om vector een virus, voeden we de bladluizen op de geïnfecteerde weefsel voor 2 dagen.
2. Dan laten we het in een gezonde plant feed voor 5 dagen. De plant wordt dan gegast en na 3 weken zijn we op zoek naar symptomen.
3. Wanneer vinden we een bladluis die niet kan vector een virus, kunnen we beoordelen welke van de twee barrières is het stoppen van het virus met behulp van een micro-injectie procedure.
4. Het virus wordt direct geïnjecteerd in de hemocoel, waardoor het omzeilen van de darm transmissie barrière.

Ga naar Annual Reviews van Plant Biology voor meer informatie over dit protocol en de plant immuun voor insecten herbivorie.